Хр панкреатит мкб: Ошибка 404. Файл не найден

Содержание

Госпитализация — Городская клиническая больница №3 им. Б. И. Альперовича

ПОЛОЖЕНИЕ

о порядке  госпитализации в ОГАУЗ «Городская клиническая больница №3 им.Б.И.Альперовича»

Приказ о взаимодействии при обращении за медицинской помощью жителей из других субъектов РФ

            Положение о порядке  госпитализации разработано с целью повышения экономической эффективности работы отделений ОГАУЗ «Городская клиническая больница №3 им. Б.И. Альперовича«, качества оказываемой медицинской помощи, упорядочения потока больных между амбулаторным и госпитальным звеном, предотвращения разногласий в вопросах обоснованности госпитализации, возникших между СМО и ЛПУ при проведении экспертизы качества лечения.

Госпитализация  пациентов в  профильные отделения круглосуточного  стационара ОГАУЗ «Городская клиническая больница №3 им. Б.И. Альперовича» для оказания специализированной  медицинской помощи  в плановом и экстренном порядке осуществляется в соответствии с   нормативными актами:

  • со статьями 34, 35 и 37 Федерального закона от 21 ноября 2011 г. № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации»;
  • с Федеральным законом от 29.11.2010 № 326-ФЗ «Об обязательном медицинском страховании в Российской Федерации»;
  • областной Программой государственных гарантий бесплатного оказания гражданам медицинской помощи на территории Томской области на 2017 год и на плановый период 2018 и 2019 годов, утвержденной постановлением Администрации Томской области от 30.12.2016 № 424а.

Порядок госпитализации:

  1. Направление на плановую госпитализацию осуществляют медицинские учреждения, врачи общей практики при условии предварительного обязательного обследования пациента в соответствии с профилем госпитализации. При отсутствии направления на плановую госпитализацию у Иногороднего пациента, пожелавшего получить медицинскую помощь в ОГАУЗ «ГКБ №3», заведующий приемным отделением связывается с заведующими терапевтическим отделением поликлинического отделения №1 ОГАУЗ «ГКБ №3» с целью оформления направления на плановую госпитализацию по форме 057/г — 04, по тел. 8 (3822) 41-98-46
  2. Перевод пациентов  из других ЛПУ г. Томска и Томской области подлежит согласованию  с заместителем главного врача по медицинской части или с заведующим профильного отделения.
  3.          ОГАУЗ «Городская клиническая больница №3 им. Б.И.Альперовича» осуществляет плановую госпитализацию пациентов в будние дни с 9.00 до 14.00 часов,  ЛОР отделение с 9.00 до 10.00 в будние дни
  4. Для плановой госпитализации необходимы следующие документы:
  • паспорт;
  • полис обязательного медицинского страхования/ полис добровольного медицинского страхования в случае госпитализации по ДМС;
  • направление формы №057/у-04, выданное  медицинской организацией —  фондодержателем/ направление из страховой компании, согласованное менеджером ДМС в случае госпитализации по ДМС;
  • выписка из амбулаторной карты/  медицинской карты стационарного больного предыдущих госпитализаций, при наличии (форма № 027/у), в том числе результаты диагностических исследований.
  1. Плановая госпитализация лиц призывного  возраста для экспертной оценки состояния здоровья осуществляется в профильные отделения по направлению военкомата Томской области и направлению из поликлиники по месту прикрепления гражданина по форме № 057/у-04. Дополнительные обследования, необходимые для верификации диагноза и отсутствующие в ОГАУЗ «Городская клиническая больница №3 им. Б.И.Альперовича», выполняются на догоспитальном этапе.
  2. При отсутствии необходимых  данных обследований у пациентов, направленных на плановую госпитализацию в ОГАУЗ «Городская клиническая больница №3 им. Б.И. Альперовича»,пациенту может быть отказано в госпитализации либо перенесен срок госпитализации с целью дообследования.
  3. Для населения, прикрепленного к ОГАУЗ «Городская клиническая больница №3 им. Б.И.Альперовича», возможно проведение дообследования в условиях круглосуточного стационарного лечения.
  1. Экстренная госпитализация осуществляется: в ЛОР,  инфекционное отделения – круглосуточно, в остальные отделения – по графику дежурств по скорой помощи, утвержденному начальником Департамента здравоохранения Томской области.

Перечень исследований для плановой госпитализация указан в приложениях.

терапевтическое (приложение №1)

инфекционное отделение (приложение №2)

хирургическое отделение (приложение №3)

гнойная хирургия (приложение №4)

гастроэнтерологическое отделение (приложение №5)

пульмонологическое отделение (приложение №6)

урологическое отделение (приложение №7)

неврологическое отделение (приложение№8)

ЛОР отделение (приложение №9)

Согласно Областной Программы государственных гарантий бесплатного оказания гражданам Российской Федерации медицинской помощи на территории Томской области на 2017 год и на плановый период 2018 и 2019 годов, утвержденной постановлением Администрации Томской области от 30.12.2016 №424а,  оказание медицинской помощи в стационарных условиях в плановой форме осуществляется в срок не более 30 дней с момента выдачи лечащим врачом направления на госпитализацию (при условии обращения пациента за госпитализацией в рекомендуемые лечащим врачом сроки).

Как плановая, так и экстренная госпитализация осуществляется на основании перечня показаний к госпитализации.

Хирургическое отделение

             Плановая госпитализация

  1. Неущемленные грыжи всех локализаций
  2. ЖКБ. Хронический холецистит вне обострения.
  3. Осложнения и проявления желчнокаменной болезни, не требующие экстренной госпитализации  (холедохолитиаз без механической желтухи, желчные свищи и т.д.)
  4. Доброкачественные стриктуры желчных протоков.
  5. Заболевания поджелудочной железы

—                   кисты

—                   опухоли

—                   панкреатические свищи

—                   хр. панкреатит

  1. Заболевания пищевода, желудка, ДПК, требующие хирургического лечения или инвазивной диагностики
  2. Постгастрорезекционные синдромы
  3. Заболевания печени:

—                   опухоли доброкачественные и злокачественные

—                   паразитарные заболевания

—                   кисты печени

—                   цирроз печени (для оперативного лечения)

—                   неуточненные

  1. Зоб узловой и диффузный токсический
  2. Варикозное расширение вен нижних конечностей
  3. Доброкачественные образования молочной железы
  4. Доброкачественные образования мягких тканей
  5. Доброкачественные опухоли селезенки и надпочечников
  6. Заболевания толстой и тонкой кишки
  7. Доброкачественные заболевания мягких тканей забрюшинного пространства
    1. Полипы желудочно – кишечного тракта, на полипэктомию

Экстренная госпитализация:

  1. Острый аппендицит.
  2. Ущемленные грыжи всех локализаций.
  3. Острый панкреатит, осложненные кисты поджелудочной железы, панкреонекроз.
  4. Хронический панкреатит в ст. обострения (при наличии осложнений, выраженного болевого синдрома)
  5. Острая кишечная непроходимость различной этиологии.
  6. Язвенная болезнь желудка и ДПК, осложненная

—                   перфорацией

—                   кровотечением

—                   декомпенсированным стенозом

  1. Желудочное кровотечение неязвенного генеза (с-м Мейлори – Вейса, опухоль, кровотечение из ВРВП, геморрагический гастрит и т.д.)
  2. Желчнокаменная болезнь, осложненная:

—                   острым холециститом

—                   обострение хронического холецистита (с выраженным болевым синдромом)

—                   стриктурой протоков

—                   механической желтухой

—                   холангитом

  1. Механическая желтуха любого генеза.
  2. Перфорация пищевода
  3. Проникающие ранения грудной и брюшной полости
  4. Тупая травма живота с повреждениями внутренних органов (печень, селезенка, желудок, ДПК, кишечник).
  5. Острые тромбозы и эмболии сосудов н/конечностей (артерий, вен), критическая ишемия нижних конечностей на фоне облитерирующего атеросклероза и сахарного диабета, осложненная аневризма аорты при отсутствии показаний к оперативному лечению или невозможности перевода для оперативного лечения в специализированное отделение сосудистой хирургии.
  6. Острая мезентериальная ишемия
  7. Стриктуры пищевода различной этиологии (при необходимости экстренной гастроеюнстомии).
  8. Органические стриктуры выходного отдела желудка при наличии признаков декомпенсированного стеноза и необходимости в экстренной и срочной гастроэнтеростомии
  9. Осложненное течение очаговых поражений печени (паразитарных, опухолевых и др.)
  10. Обоснованные клинической картиной, данными лабораторных, инструментальных исследований на вышеуказанные заболевания с целью динамического наблюдения, проведения дополнительных, в том числе, инвазивных, диагностических процедур, определения дальнейшей тактики лечения

 

Гнойная хирургия

Плановая госпитализация:

  1. Эпителиально – копчиковая киста без нагноения.
  2. Гнойные свищи брюшной стенки и брюшной полости.
  3. Наружные кишечные свищи
  4. Инфицированные трофические язвы конечностей любой этиологии (артериальные, венозные, нейротрофические).
  5. Хронические гнойные остеомиелиты.
  6. Хронический геморрой.
  7. Сухая гангрена пальцев любой этиологии.
  8. Хронические гнойные заболевания мягких тканей..
  9. Киста урахуса.
  10. Рубцовые контрактуры, любой этиологии.
  11. Синдром диабетической стопы.

            Экстренная госпитализация:

  1. Сепсис (с хирургическим источником инъекции)
  2.  Рожистое воспаление туловища, конечностей, буллезно – некротические, осложненные формы.
  3. Инфицированные раны, осложненные лимфангиитом, лимфаденитом
  4. Глубокие и осложненные формы панариция.
  5. Острые гнойные заболевания мягких тканей (абсцесс, флегмона).
  6. Острые гнойно – деструктивные заболевания внутренних органов брюшной полости и забрюшинного пространства

— острый деструктивный аппендицит

— острый гнойный парапроктит

— острый перитонит (фибринозный, гнойный, каловый)

  1. Острый гнойный плеврит, эмпиема плевры.
  2. Острый медиастинит.
  3. Острый геморрой и его осложнения.
  4. Острое кишечное кровотечение
  5. Гангрена конечностей любой этиологии
  6. Острый гнойный тромбофлебит
  7. Острые гнойные артриты, синовииты.
  8. Злокачественные новообразования внутренних органов, осложненные нагноением, перитонитом.
  9. Паразитарные заболевания внутренних органов, осложненные нагноением, перитонитом.
  10. Острый и хронический остеомиелит, осложненный абсцессом, флегмоной окружающих тканей.
  11. Острый гнойный мастит.
  12. Инфицированные ожоги туловища, конечностей (2-4 ст.) любой этиологии.
  13. Отморожение конечностей 2-4 ст.
  14. Послеоперационные гнойные осложнения.
  15. Любые заболевания, требующие экстренной госпитализации в хирургическое отделение у больных с наружными кишечными свищами.

 

Урологическое отделение

Плановая госпитализация:

  1. Новообразование (c-r) МПС
  2. Хр. пиелонефрит и его осложнения
  3. МКБ
  4. Гидронефрозы различной этиологии
  5. Структуры уретры
  6. Варикозное расширение вен семенного канатика
  7. Аденома простаты (оперативное лечение)
  8. Гидроцеле
  9. Заболевания полового члена
  10. Аномалии развития МПС (мочеполовой системы)
  11. Лейкоплакия мочевого пузыря.
  12. Кисты почки, семенного канатика, придатка яичка.
  13. Мочеполовые свищи.
  14. Обследование призывников от РВК.
  15. Другие нозологические формы, требующие стационарного обследования и лечения.

Экстренная госпитализация:

  1. МКБ (почечные колики при камнях различной локализации)
  2. Почечная колика некупирующаяся различной этиологии
  3. Травмы МПС
  4. Гематурия (исключая гломерулонефриты)
  5. О. пиелонефрит (включая осложнения)
  6. Хр. пиелонефрит в фазе обострения при неэффективности амбулаторного лечения.
  7. О. геморрагический цистит
  8. О. орхоэпидидимит (неспецифической этиологии)
  9. О. задержка мочи – различной этиологии
  10. Абсцесс простаты.
  11. Перекрут яичка.
  12. Парафимоз невправимый.
  13. Гнойные заболевания мошонки, полового члена.

 

ЛОР – отделение    

Плановая госпитализация:

  1. Заболевания носа и придаточных пазух:
  2. Острые и хр. риносинуситы (гайморит, этмоидит, фронтит, сфеноидит)
  3. Вазомоторный ринит
  4. Деформация носовой перегородки.
  5. Дистрофические процессы в полости носа и придаточных пазух носа (озена)
    1. 5.  Доброкачественные опухоли наружного носа, полости носа и придаточных пазух            носа.
  1. Спаечные процессы в полости носа.
  2. Косметические операции наружного носа
  3. Болезни слезного аппарата.
  1.  Заболевания глотки:
  2. Хронический тонзиллит и аденоиды
  3. Доброкачественные опухоли глотки
  4. Атрофические заболевания слизистой глотки. 
  1. 4.   Заболевания, вызывающие храп (гипертрофия язычка и небных дужек)
  1. Заболевания гортани:
    1. 1.   Острый ларингит
    2. 2.   Хр. ларингит
    3. 3.   Парезы и параличи гортани.
    4. 4.   Хр. стенозы гортани и трахеи.
    5. 5.   Атрофические процессы слизистой гортани
    6. 6.   Склерома дыхательных путей
    7. 7.   Доброкачественные опухоли гортани.
  2. Заболевания уха:
  3. Острый наружный отит.
  4. Острый средний отит (с расстройством слуха).
  5. Хр. средний отит (эпи, мезотимпанит)
  1.        4.   Адгезивный отит
  2. 6.   Доброкачественные опухоли наружного и среднего уха.
  3. 7.   Аномалии развития наружного и среднего уха.
  4.        8.   Острая и хр. нейросенсорная тугоухость.

Экстренная госпитализация:

  1. .         Заболевания носа:
    1. Фурункул носа c осложнениями.
    2. Абсцесс носовой перегородки.
    3. Острые, гнойные риносинуситы. (осложненное течение)
    4. Риногенные орбитальные осложнения.
    5. Продолжающиеся носовые кровотечения различной этиологии.
    6. Риногенные внутричерепные осложнения (гнойный менингит, внутримозговые абсцессы).
    7. Травмы носа и придаточных пазух, сопровождающиеся кровотечениями, грубыми деформациями лицевого скелета и расстройствами дыхательной функции.
  1.  Заболевания глотки:
  2. Проникающие ранения глотки
  3. Флегмоны, абсцессы глотки
  4. Заболевания гортани:
  1. Острые флегмонозные заболевания гортани
  2.  Острые стенозы гортани различной этиологии
  1. Травмы гортани (ушибы, ранения)
  2. Заболевания уха:
    1. Острый гнойный средний отит (осложненное течение)
    2. Фурункул наружного слухового прохода
    3. Хр. средний отит, обострение
    4. Отогенные внутричерепные осложнения (отогенный сепсис, менингит, абсцесс головного мозга и мозжечка)
    5. Травмы наружного и среднего уха с признаками разможжения тканей, с потерей слуха, вестибулярными дисфункциями
    6. Болезнь Меньера и другие вестибулярные дисфункции.(приступный период
  3. Инородное тело пищевода крупных размеров.

 

Пульмонологическое отделение

Плановая госпитализация:

  1. Хронический обструктивный бронхит в стадии обострения
  2. Бронхиальная астма в стадии обострения, для уточнения диагноза, выявления степени тяжести (призывники из военкомата), подбор базисной терапии
  3. ХОБЛ в стадии обострения (легкое, среднетяжелое течение)
  4. Плеврит неуточненного генеза для верификации его причины, лечения.
  5. Пневмония легкой и средней тяжести без эффекта от лечения на амбулаторном этапе
  6. Диссеминированный процесс в легких (после исключения сепсиса, туберкулеза, онкопатологии) – идиопатический фиброзирующий альвеолит (ИФА)
  7. Острый бронхит затяжного течения (диф. DS с ХОБЛ, БА)
  8. Муковисцидоз.
  9. Патология легких и плевры, лечение и обследование которой невозможно на других этапах лечения.

            Экстренная госпитализация:

1.      Внебольничные и госпитальные пневмонии средней и тяжелой степени, осложненные ОДН, ИТШ, полиорганной недостаточностью (у лиц до 60 лет)

  1. Внебольничные и госпитальные пневмонии легкого течения у пациентов старше 60 лет, имеющих сопутствующую соматическую патологию (сахарный диабет, ИБС, поражения печени, почек, бронхиальная астма, недостаточность кровообращения и т.д.)
  2. Рак легкого, осложненный параканкрозной пневмонией, плевритом.
  3. Экссудативный плеврит неуточненный с уровнем выпота выше V ребра с ОДН.
  4. ХОБ и ХОБЛ тяжелой степени с наличием дыхательной недостаточности III – IV ст. (гипоксическая кома) в стадии обострения, с декомпенсацией хр. легочного сердца (НК II В + III ст.)
  5. Бронхиальная астма среднетяжелая, тяжелая в стадии обострения (астматический статус).
  6.  Кровотечение из дыхательных путей неуточненное.

 

Неврологическое отделение

            Плановая госпитализация:

  1. Последствия воспалительных заболеваний ЦНС (менингитов, энцефалитов).
  2. Сосудистые заболеваяния ЦНС и их последствия (ОНМК, ХИМ, ДЭ) в стадии субкомпенсации.
  3.  Последствия ЧМТ (гипертензионный, эписиндромы) и  последствия спинальных травм (парезы, нарушения ФТО) в стадии субкомпенсации.
  4. Демиелинизирующие заболевания ЦНС (рассеянный склероз, дебют, обострение хронического процесса).
  5. Экстрапирамидные и др. двигательные нарушения, впервые выявленные на амбулаторном этапе, либо в стадии декомпенсации (Б.Паркинсона, тремор, дистонии, хорея).
  6. Поражение отдельных нервов, корешков и сплетений в острый период, подострый период травматических повреждений.
  7. Острые полиневриты.
  8. Дегенеративные заболевания позвоночника в стадии обострения, при отсутствии эффекта от лечения  на  догоспитальном этапе.
  9. Экспертные случаи, требующие стационарного обследования (по направлениям перед МСЭ, военкоматы).
  10. Другая патология, лечение и диагностика которой  невозможна на  других этапах лечения.
  11. Боковой амиотрофический склероз.
  12. Эпилепсия в межприступный период

Экстренная госпитализация:

  1. Гипертензионный синдром неуточненного генеза
  2. Эпистатус , некупируемые судорожные приступы
  3. Острые невриты и полиневриты
  4. Некупируемый выраженный болевой синдром при дегенеративных заболеваниях позвоночника.
  5. Острая  вестибулярная дисфункция при исключении острой ЛОР-патологии.
  6. Хроническая ишемия головного мозга в стадии декомпенсации
  7. Миастенический криз

 

Терапевтическое отделение

             Плановая госпитализация:

  1. ИБС стенокардия напряжения ФК II — III ст.
  2. Кардиомиопатия
  3. Гипертоническая болезнь
  4. Хр. недостаточность мозгового кровообращения
  5. Последствия перенесенных ОНМК
  6. Анемия различного генеза
  7. Сахарный диабет I тип в стадии компенсации, субкомпенсации
  8. Сахарный диабет II тип в стадии компенсации, субкомпенсации.
  9. Ревматические болезни сердца.
  10. Деформирующий остеоартроз.

Экстренная госпитализация:

  1. Гипертензионный синдром неясного генеза
  2. ГБ

—   осложненная кризом, не купирующимся на догоспитальном этапе; с выраженными проявлениями гипертонической энцефалопатии;

—   осложнения АГ, требующие интенсивной терапии и постоянного врачебного наблюдения: ОКС, отек легких, МИ, субарахноидальное кровоизлияние, остро возникшие нарушения зрения и др.;

—   злокачественная АГ.

  1. ИБС стенокардия напряжения ФК II – III, НК II Б – III, осложнения: отек легких, ТЭЛА.
  2. Острый миокардит, перикардит.
  3. Кардиомиопатия НК III, осложнения: отек легких, ТЭЛА.
  4. Анемия средней, тяжелой степени  тяжести неясного генеза
  5. Сахарный диабет I тип в стадии декомпенсации, кетоацидоз., гипергликемия
  6. Сахарный диабет II тип в стадии декомпенсации кетоацидоз, гипергликемия
  7. Ревматические болезни сердца с НК II Б – III, осложнения: отек легких, ТЭЛА
  8. Острый тубулоинтерстициальный нефрит, осложнения: ОПН
  9. Аллергическая реакция средней, тяжелой степени тяести в виде отека Квинке, анафилактического шока
  10. Воздействие внешних причин (утопления, электротравма)
  11. Асфиксия (повешение)
  12. Кома неясного генеза
    1. Острое отравление неуточненным спиртом.
    2. Острое отравление неуточненным веществом.
    3. Язвенная болезнь желудка (некупированный болевой синдром)
    4. Язвенная болезнь ДПК (некупированный болевой синдром)
    1. Цирроз печени невирусной этиологии в стадии декомпенсации с выраженной портальной гипертензией: варикозное расширение вен пищевода без угрозы кровотечения, рефрактерный асцит. Печеночная энцефалопатия III—IVct.
    2. Хронический гепатит невирусной этиологии (токсический, лекарственный) высокой степени активности.
    1. Шок   (геморрагический,   травматический,   септический,   анафилактический, кардиогенный).

19.Язвенный колит в фазе обострения, тяжелой степени тяжести

 

Гастроэнтерологическое отделение

Плановая госпитализация:

  1. Хр. описторхоз, на дегельминтизацию.
  2. Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь, осложненная эрозивно – язвенным эзофагитом.
  3. Язвенная болезнь желудка, обострение
  4. Язвенная болезнь луковицы ДПК, обострение
  5. Особые формы гастритов (ригидный, гигантный, полипозный, эрозивный)
  6. Болезнь Крона, обострение
  7. Неспецифический язвенный колит, фаза обострения
  8. Хр. неинфекционный гастроэнтерит и колит, обострение
  9. Сосудистые болезни кишечника
  10. Дивертикулярная болезнь кишечника с осложнениями.
  11. Гепатиты (не вирусной этиологии), активная фаза.
  12. Фиброз и цирроз печени (не вирусной этиологии) активная фаза
  13. Хр. некалькулезный холецистит, обострение
  14. Хр. холангит, обострение.
  15. Дискинезии сфинктера Одди (состояние после холецистэктомии) с осложнением
  16. Хр. панкреатит, обострение.
  17. Болезнь оперированного желудка, обострение или декомпенсация.
  18.  Целиакия
  19. Скользящая грыжа пищеводного отверстия диафрагмы
  20. Жировая дегенерация печени
  21. Синдром Жильбера
  22. Язва пищевода
  23. Псевдомембранозный колит
  24. Синдром короткой кишки
  25. Спаечная болезнь вне обострения

 

Инфекционное отделение

Плановая госпитализация:

  1. Болезнь Лайма – хр. инфекция (манифестная форма. непрерывное или рецидивирующее течение).
  2. Острый вирусный гепатит, без выраженных  клинических симптомов.
  3. Хронический вирусный гепатит (В, С, В + С, В+Д).
  4. Хр. вирусный гепатит с исходом в фиброз и цирроз печени.
  5. Хронический описторхоз.

Экстренная госпитализация:

  1. Острый сальмонеллез.
  2. Острый шигеллез (дизентерия).
  3. Острые энтероколиты инфекционные (уточненной, не уточненной этиологии).
  4. Пищевые токсикоинфекции.
  5. Кишечный иерсиниоз.
  6. Экстраинтестинальный иерсиниоз (псевдотуберкулез).
  7. Дифтерия.
  8. Менингококковая инфекция.
  9. Корь.
  10. Первичные менингиты неуточненной этиологии.
  11. Энтеровирусная инфекция.
  12. Острый тонзиллит
  13. Острые распираторные заболевания с явлениями менингизма. Грипп средней и тяжелой степени
  14. Паротитная инфекция, осложненная менингитом и по эпидпоказаниям.
  15. Герпетическая инфекция, генерализованные и осложненные формы.
  16. Болезнь Лайма (ранняя локализованная и диссеминированная инфекция, острое течение).
  17. Острый эрлихиоз.
  18. Острый клещевой вирусный энцефалит.
  19. Острый вирусный гепатит.
  20. Хронический вирусный гепатит, высокой степени активности (с выраженными симптомами интоксикации, высокими показателями печеночных проб).
  21. Цирроз печени вирусный с явлениями печеночно-клеточной недостаточности  и отечно-асцитическим синдромом.
  22. Острый инфекционный мононуклеоз.
  23. Описторхоз, острая фаза.

Показания для госпитализации в отделение анестезиологии и реанимации:

  1. Тяжелая механическая травма с массивной кровопотерей.
  2. Состояние после обширных оперативных вмешательств.
    1. Состояние после операций у больных с тяжелой сопутствующей патологией, реально угрожающей жизни пациента.
    2. Осложнения   во   время   операции   и   анестезии,   требующие   интенсивного наблюдения и лечения в послеоперационном периоде.
    3. Тяжелые   формы   метаболических   нарушений   (диабетический   кетоацидоз, тяжелые электролитные нарушения и т.п.)
    4. Тяжелые нарушения сердечно — сосудистой системы ( гипертонический криз, тяжелые нарушения ритма сердца, острый инфаркт миокарда, развившийся во время госпитализации до решения вопроса о переводе в специализированный кардиологический стационар).
    5. Острая дыхательная  недостаточность  (астматический  статус,  пневмония с клиническим проявлением дыхательной недостаточности и т.п.)
  3. Коматозные состояния.
  4. Острое   нарушение   мозгового   кровообращения   (с   нарушением   сознания,

дыхания и кровообращения).- до решения вопроса о переводе в сосудистый центр

11. Выраженная эндо — и экзогенная интоксикация (сепсис, панкреатит, тяжелые

отравления).

Приложение №1

Перечень исследований, необходимых для плановой госпитализации в терапевтическое отделение

обязательных:

  1. общий (клинический) анализ крови развернутый (давностью не более 1 месяц)
  2. анализ мочи общий (давностью не более 1 месяц)
  3. кал на яйца глистов (давностью не более 1 месяца)
  4. анализ крови биохимический (общий  белок, АСТ, АЛТ, мочевина, креатинин, билирубин, глюкоза, липидный спектр) — давностью не более 1 месяца
  5. ЭКГ((давностью не более 1 месяц)
  6. флюорография  органов грудной клетки (в течение года)
  7. осмотр глазного дна (давностью не более месяца)
  8. анализ крови на сифилис (давностью 6 месяцев)
  9. Анализ крови на ВИЧ (давностью 6 месяцев)

10. HbsAg, НСV (1 месяц)

дополнительных:

  1. консультация невролога (для больных с цереброваскулярной болезнью) — 1 месяц
  2. исследование уровня факторов свертывания крови (МНО, фибриноген, АЧТВ) — давностью не более 1 месяца
  3. Консультация кардиолога (для больных перенесших ОИМ, ИБС- давностью не более месяца)
  4. УЗИ сердца давностью до 6 месяцев

Перечень дополнительных исследований определяется заведующим отделением на догоспитальном этапе

Зав. отделением                              Е.А.Моторина

                                                                                             Приложение №3

Перечень исследований, необходимых для плановой госпитализации в хирургическое отделение

обязательных:

  1. общий (клинический) анализ крови развернутый (давностью не более 2 недель)
  2. анализ мочи общий (давностью не более 2 недель)
  3. кал на яйца глистов
  4. анализ крови биохимический (общий белок, АСТ, АЛТ, мочевина, креатинин, билирубин, глюкоза, МНО, фибриноген) давностью не более 2 недель
  5. исследование крови на сифилис (1 месяц)
  6. ЭКГ с описанием (лицам старше 45 лет, давностью не более 2 недель)
  7. флюорография органов грудной клетки (в течение года)

    для больных, поступающих на оперативное лечение:

  1. исследование уровня тромбоцитов в крови (давностью не более 2 недель)
  2. HbsAg, НСV (1 месяц)
  3. Анализ крови на ВИЧ (1 месяц)
  4. консультация терапевта (старше 45 лет) – 1 месяц
  5. спирография (с вентральными грыжами и ожирением II—III ст.) – 1 месяц
  6.  группа крови резус фактор
  7. Осмотр гинеколога (женщинам), осмотр уролога (мужчины старше 60 лет для оперативного лечения паховых грыж)

дополнительных:

1.При заболеваниях гепатобилиарной системы:

  • УЗИ органов брюшной полости
  • ЭГДС

2.При заболеваниях желудка и кишечника:

  • ЭГДС
  • КФС
  • Rн-графия ЖКТ
  • ирригоскопия

3.При заболеваниях сосудов:

  • реовазография
  • доплерография сосудов
  • консультация ангиохирурга
  • консультация эндокринолога при диабетической ангиопатии)

Перечень дополнительных исследований определяется заведующим отделением на догоспитальном этапе

Зав. отделением                         М.Е.Марьина

Приложение №4

Перечень исследований, необходимых для плановой госпитализации в отделение гнойной хирургии

обязательных:

  1. общий (клинический) анализ крови развернутый (давностью не более 2 недель)
    1. 2.  анализ мочи общий (давностью не более 2 недель)
      1. анализ крови биохимический (об. белок, АСТ, АЛТ, мочевина, креатинин, билирубин, глюкоза, МНО, фибриноген) давностью не более 2 недель
      2. кал на яйца глистов (1 месяц)
      3. исследование крови на сифилис (1 месяц)
      4. ЭКГ с описанием (лицам старше 45 лет) — давностью не более 2 недель
      5. флюорография органов грудной клетки (1 месяц)
      1. общий (клинический) анализ крови развернутый (давностью не более 2 недель)
      2. анализ мочи общий (давностью не более 2 недель)
    2. 6. ЭКГ с описанием (лицам старше 45 лет, давностью — 1 месяц)
      1. флюорография органов грудной клетки (в течение года)
      • ректороманоскопия
      • кал на дисбактериоз
      • ПТИ, тромбоциты, ВСК
      1. общий (клинический) анализ крови развернутый (давностью не более 2 недель)
      2. анализ мочи общий (давностью не более 2 недель)
      3. копроовоскопическое исследование (давностью не более 2 недель)
      4. ЭКГ с описанием (лицам старше 45 лет) — давностью не более 2 недель
      5. флюорография органов грудной клетки (в течение года)
      • анализ крови биохимический (общий  белок, АСТ, АЛТ, мочевина, креатинин, билирубин, глюкоза, ПТИ, фибриноген) — давностью не более 2 недель
        • УЗИ органов брюшной полости
        • ЭГДС по показаниям
        1. общий (клинический) анализ крови развернутый (давностью не более 2 недель)
        2. анализ мочи общий (давностью не более 2 недель)
        3. кал на я/гл (давностью 1 мес)
        4. анализ крови биохимический (глюкоза, СРБ, серомукоиды) — давностью не более 2 недель
        5. ЭКГ с описанием (лицам старше 45 лет, давностью — 2 недели)
        6. рентгенография или флюорография органов грудной клетки (в течение месяца)
        7. спирография с пробой с бета-2-агонистом (1 месяц)
        8. анализ мокроты общий (2 недели)
        • УЗИ мочеполовых органов
        • экскреторная урография
        1. 1.  общий (клинический) анализ крови развернутый (давностью не более 1 месяца)
          1. анализ мочи общий (давностью не более 1 месяца)
          2. кал на я/гл (давностью 1 месяц)
          3. ЭКГ с описанием (лицам старше 45 лет, давностью не более 1месяца)
          4. флюорография органов грудной клетки (в течение года)
          5. анализ крови биохимический (об. белок, АСТ, АЛТ, мочевина, креатинин, билирубин, глюкоза, МНО, фибриноген) давностью не более 1 месяца
  2.      3. анализ крови биохимический (общий  белок, АСТ, АЛТ, мочевина, билирубин, глюкоза) давностью не более 2 недель
    1. кал на яйца глистов (1 месяц)

     для больных, поступающих на оперативное лечение:

  1. исследование уровня тромбоцитов в крови (давностью не более 2 недель)
  2. HbsAg, НСV (1 месяц)
  3. Анализ крови на ВИЧ (1 месяц)
  4. консультация терапевта (лицам старше 45 лет, давностью — 1 месяц)

дополнительных:

1.При заболеваниях гепатобилиарной системы:

  • УЗИ органов брюшной полости
  • ЭГДС

2.При заболеваниях кишечника:

  • КФС
  • ирригоскопия

3.При заболеваниях сосудов:

  • реовазография
  • доплерография сосудов
  • консультация ангиохирурга
  • консультация эндокринолога (при диабетическом поражении)

4.При заболеваниях опорно-двигательного аппарата:

  • рентгенография заинтересованных сегментов конечностей

Перечень дополнительных исследований определяется заведующим отделением на догоспитальном этапе

Зав. отделением                                     А.В. Помыткин

Приложение №5

Перечень исследований, необходимых для плановой госпитализации в гастроэнтерологическое отделение

обязательных:

дополнительных:

1.При заболеваниях печени и поджелудочной железы:

  • УЗИ органов брюшной полости
  • дуоденальное зондирование
  • маркеры вирусных гепатитов
  • анализ крови биохимический (тимоловая , холестерин, амилаза, щелочная фосфатаза)
  • дуоденальное зондирование
  • маркеры вирусных гепатитов (ВГВ, C, Д)
  • ПЦР (HVB, HVC)
  • сцинтиграфия печени или эластография печени

2.При заболеваниях желудка и кишечника:

Перечень дополнительных исследований определяется заведующим отделением на догоспитальном этапе

Зав. отделением                                  М.Ю. Кречмер

Приложение №2

Перечень исследований, необходимых для плановой госпитализации в инфекционное отделение

обязательных:

дополнительных:

При заболеваниях печени и желчного пузыря:

Перечень дополнительных исследований определяется заведующим отделением на догоспитальном этапе

Зав. отделением                         О.М. Виноградова

В.Л.Якимов

Приложение №6

Перечень исследований, необходимых для плановой госпитализации в пульмонологическое отделение

обязательных:

дополнительных:

  1. фибробронхоскопия
  2. СКТ ОГК при подозрении на новообразование легкого

Перечень дополнительных исследований определяется заведующим отделением на догоспитальном этапе

Зав.отделением                               И.В.Березко

Приложение №7

Перечень исследований, необходимых для плановой госпитализации в урологическое отделение

обязательных:

1. общий (клинический) анализ крови развернутый (давностью не более 2 недель)

  1. анализ мочи общий (давностью не более 2 недель)
  2. кал на я/гл (1 мес)
  3. анализ крови биохимический (общий  белок, АСТ, АЛТ, мочевина, креатинин, билирубин, глюкоза, МНО, фибриноген) давностью не более 2 недель
  4. ЭКГ с описанием (лицам старше 45 лет, давностью не более 2 недель)
  5. флюорография органов грудной клетки (в течение года)
  6. исследование крови на сифилис  (давностью 1 месяц)

    для больных, поступающих на оперативное лечение:

  1. исследование уровня тромбоцитов в крови (2 недели)
  2. HbsAg, HCV  (давностью 1 мес)
  3. Анализ крови на ВИЧ (давностью 1 месяц)
  4. Консультация терапевта (старше 45 лет) – 1 месяц

дополнительных:

Перечень дополнительных исследований определяется заведующим отделением на догоспитальном этапе

Зав. отделением                                   А.Н.Антипкин

Приложение №8

Перечень исследований, необходимых для плановой госпитализации в  неврологическое отделение

обязательных:

дополнительных:

1. При заболеваниях опорно-двигательного аппарата:

  • рентгенограммы позвоночника в 2-х проекциях давностью не более 6 месяцев

2. При сосудистых заболеваниях:

  • осмотр глазного дна (давностью не более 1 месяц)
  • рентгенография черепа в 2-х проекциях ( при  отсутствии КТ, МРТ ) (давностью не более 1 месяц)
  • консультация терапевта (лицам старше 45 лет) (давностью не более 1 месяц)
  • эхоэнцефалография не позднее 3-х месяцев ( при отсутствии КТ, МРТ)

3. Последствия ЧМТ, эпилепсии

  • осмотр глазного дна ( не позднее 1 месяца )
  • рентгенография черепа в 2-х проекциях (при отсутствии  КТ , МРТ)
  • эхоэнцефалография не позднее 3-х месяцев
  • электроэнцефалография не позднее 3-х месяцев

Перечень дополнительных исследований определяется заведующим отделением на догоспитальном этапе

Зав. отделением                              Н.Н.Гамалеева

Приложение №9

Перечень исследований, необходимых для плановой госпитализации в ЛОР отделение

обязательных:

1. общий (клинический) анализ крови развернутый (давностью не более 2 недель)

  1. анализ мочи общий (давностью не более 2 недель)
  2. кал на я/гл (давностью 1 месяц)
  3. флюорография органов грудной клетки (в течение года)

    для больных, поступающих на оперативное лечение:

  1. исследование уровня тромбоцитов в крови (2 недели)
  2. анализ крови биохимический (общий белок, АСТ, АЛТ, мочевина, креатинин, билирубин, глюкоза, МНО, фибриноген) давностью не более 2 недель (при общей анестезии)
  3.  HbsAg, HCV  (давностью 1 мес)
  4. Анализ крови на ВИЧ (давностью 1 месяц)
  5. ЭКГ с описанием (давностью не более 2 недель)
  6. консультация терапевта (давностью 2 нед)
  7. анализ крови на сифилис (1 мес)
  8. Группа крови и резус фактор

дополнительных:

1. Хронические заболевания полости носа и придаточных пазух носа:

  • Рентгенография придаточных пазух носа/ КТ придаточных пазух

2. Хронические заболевания среднего уха:

  • рентгенография височных костей по Шуллеру и Майеру/ КТ височных костей

3.Рубцовые стенозы гортани и трахеи:

  • томография гортани

4.Нейросенсорная тугоухость:

  • рентгенография височных костей по Стенверсу
  • консультация невролога

5.Постожоговые стенозы пищевода:

  • рентгенография ЖКТ с контрастированием пищевода
  • ЭГДС

Перечень дополнительных исследований определяется заведующим отделением на догоспитальном

Зав. отделением                                А.С.Просекин

Классификации

В настоящее время единая и универсальная классификация ХП отсутствует. В тоже время, при обсуждении хирургических аспектов лечения больных ХП, наметилась отчетливая тенденция избегать классификаций ХП, указывая лишь осложнения заболевания, которые требуют хирургического лечения.

Для статистической обработки данных в масштабах страны необходимо использовать Международную классификацию болезней и причин смерти 10-го пересмотра (МКБ-10) (табл. 3), в которой представлен перечень патологических состояний, встречающихся при ХП (параграфы К.86, К.90).

Таблица 3

Международная классификация болезней и причин смерти (мкб-10) Параграфы к.86 и к.90.

К.86.0 Алкогольный хронический панкреатит

К.86.1 Другие формы хронического панкреатита (инфекционный, непрерывно-рецидивирующий, возвратный)

К.86.2 Киста поджелудочной железы

К.86.3 Псевдокисты поджелудочной железы

К.86.8 Другие уточненные заболевания поджелудочной железы (атрофия, литиаз, фиброз, цирроз, панкреатический инфантилизм, некроз)

К.90.1 Панкреатическая стеаторрея

Хирурги, занимающиеся лечением больных ХП, должны знать наиболее распространенные классификации ХП, используемые в мире: Марсельско-Римская (1988 г.) [35, 36] и клиническая (табл. 4) [27].

Марсельско-Римская международная классификация (1988)

1. Хронический кальцифицирующий ХП. Характеризуется образованием белковых пробок или камней в протоках ПЖ. Встречается в 49-95%, имеет два подварианта – с твердыми правильными кристаллами, обычно связанный с алкоголизмом и нарушением питания, и мягкими рентгеннегативными камнями – обычно при наследственном хроническом панкреатите.

2. Хронический обструктивный ХП (выявляется обструкция панкреатического протока или большого сосочка двенадцатиперстной кишки камнем, опухолью, при стриктуре соска и т.д.).

3. Хронический фиброзно-индуративный, или воспалительный хронический панкреатит. Гистологически характеризуется наличием мононуклеарно-клеточной инфильтрации и сопутствующим фиброзом паренхимы поджелудочной железы.

4. Хронические кисты и псевдокисты ПЖ (кистозный ХП).

Таблица 4

Клиническая классификация хронического панкреатита (m. Buchler с соавт., 2009)

Тип хронического панкреатита

Признаки

А

болевой синдром, повторные приступы или острый панкреатит в анамнезе, нет осложнений* панкреатита, стеаторреи или диабета.

В

болевой синдром, есть осложнения панкреатита, нет нарушения функции ПЖ – стеаторреи, диабета

С

С1

С2

С3

болевой синдром, есть осложнения ХП или без них, присутствуют нарушения функции железы (стеаторея, диабет)

стеаторея или диабет

стеаторея и диабет

стеаторея (диабет) и осложнения ХП

*осложнения панкреатита: калькулез, кальциноз, желтуха, дуоденостаз, стриктуры ПП, расширение ПП, кисты, свищи, спленомегалия, регионарная портальная гипертензия, асцит

Рекомендации

Формулируя диагноз у больного ХП, подлежащего лечению в хирургической клинике, необходимо использовать код в соответствии с классификацией МКБ-10, а также указывать осложнения, требующие хирургической коррекции (уровень доказательности С)

%d0%bf%d0%b0%d0%bd%d0%ba%d1%80%d0%b5%d0%b0%d1%82%d0%b8%d1%82 — со всех языков на все языки

Все языкиРусскийАнглийскийИспанский────────Айнский языкАканАлбанскийАлтайскийАрабскийАрагонскийАрмянскийАрумынскийАстурийскийАфрикаансБагобоБаскскийБашкирскийБелорусскийБолгарскийБурятскийВаллийскийВарайскийВенгерскийВепсскийВерхнелужицкийВьетнамскийГаитянскийГреческийГрузинскийГуараниГэльскийДатскийДолганскийДревнерусский языкИвритИдишИнгушскийИндонезийскийИнупиакИрландскийИсландскийИтальянскийЙорубаКазахскийКарачаевскийКаталанскийКвеньяКечуаКиргизскийКитайскийКлингонскийКомиКомиКорейскийКриКрымскотатарскийКумыкскийКурдскийКхмерскийЛатинскийЛатышскийЛингалаЛитовскийЛюксембургскийМайяМакедонскийМалайскийМаньчжурскийМаориМарийскийМикенскийМокшанскийМонгольскийНауатльНемецкийНидерландскийНогайскийНорвежскийОрокскийОсетинскийОсманскийПалиПапьяментоПенджабскийПерсидскийПольскийПортугальскийРумынский, МолдавскийСанскритСеверносаамскийСербскийСефардскийСилезскийСловацкийСловенскийСуахилиТагальскийТаджикскийТайскийТатарскийТвиТибетскийТофаларскийТувинскийТурецкийТуркменскийУдмуртскийУзбекскийУйгурскийУкраинскийУрдуУрумскийФарерскийФинскийФранцузскийХиндиХорватскийЦерковнославянский (Старославянский)ЧеркесскийЧерокиЧеченскийЧешскийЧувашскийШайенскогоШведскийШорскийШумерскийЭвенкийскийЭльзасскийЭрзянскийЭсперантоЭстонскийЮпийскийЯкутскийЯпонский

 

Все языкиРусскийАнглийскийИспанский────────АймараАйнский языкАлбанскийАлтайскийАрабскийАрмянскийАфрикаансБаскскийБашкирскийБелорусскийБолгарскийВенгерскийВепсскийВодскийВьетнамскийГаитянскийГалисийскийГреческийГрузинскийДатскийДревнерусский языкИвритИдишИжорскийИнгушскийИндонезийскийИрландскийИсландскийИтальянскийЙорубаКазахскийКарачаевскийКаталанскийКвеньяКечуаКитайскийКлингонскийКорейскийКрымскотатарскийКумыкскийКурдскийКхмерскийЛатинскийЛатышскийЛингалаЛитовскийЛожбанМайяМакедонскийМалайскийМальтийскийМаориМарийскийМокшанскийМонгольскийНемецкийНидерландскийНорвежскийОсетинскийПалиПапьяментоПенджабскийПерсидскийПольскийПортугальскийПуштуРумынский, МолдавскийСербскийСловацкийСловенскийСуахилиТагальскийТаджикскийТайскийТамильскийТатарскийТурецкийТуркменскийУдмуртскийУзбекскийУйгурскийУкраинскийУрдуУрумскийФарерскийФинскийФранцузскийХиндиХорватскийЦерковнославянский (Старославянский)ЧаморроЧерокиЧеченскийЧешскийЧувашскийШведскийШорскийЭвенкийскийЭльзасскийЭрзянскийЭсперантоЭстонскийЯкутскийЯпонский

Перечень противопоказаний к донорству


п/п

Наименование заболеваний и состояний

Срок действия противопоказания

1

Заболевания и состояния, при которых сдача крови и ее компонентов противопоказана:

 

1.1

СПИД, носительство ВИЧ-инфекции

постоянно

1.2

сифилис (врожденный и приобретенный)

постоянно

1.3

вирусные гепатиты, положительный результат исследования на вирус гепатита В, вирус гепатита С

постоянно

1.4

туберкулез (все формы)

постоянно

1.5

бруцеллез

постоянно

1.6

сыпной тиф

постоянно

1.7

туляремия

постоянно

1.8

лепра

постоянно

1.9

паразитарные заболевания:

 

1.9.1

эхинококкоз

постоянно

1.9.2

токсоплазмоз

постоянно

1.9.3

трипаносомоз

постоянно

1.9.4

филяриатоз

постоянно

1.9.5

ришта

постоянно

1.9.6

лейшманиоз

постоянно

1.10

злокачественные новообразования

постоянно

1.11

болезни крови

постоянно

1.12

органические заболевания центральной нервной системы

постоянно

1.13

полное отсутствие слуха и речи

постоянно

1.14

психические заболевания

постоянно

1.15

наркомания, алкоголизм

постоянно

1.16

заболевания сердечно-сосудистой системы:

 

1.16.1

артериальная гипертензия II, III степени, риск больше 2

постоянно

1.16.2

ишемическая болезнь сердца

постоянно

1.16.3

облитерирующий эндартериит

постоянно

1.16.4

неспецифический аортоартериит

постоянно

1.16.5

рецидивирующий тромбофлебит

постоянно

1.16.6

варикозная болезнь III степени

постоянно

1.16.7

заболевания мышцы и клапанов сердца, в том числе и пролапсы клапанов сердца

постоянно

1.16.8

нарушения ритма и проводимости различной этиологии

постоянно

1.17

заболевания органов дыхания:

 

1.17.1

бронхиальная астма

постоянно

1.17.2

бронхоэктатическая болезнь

постоянно

1.17.3

эмфизема легких

постоянно

1.17.4

диффузный пневмосклероз в стадии декомпенсации

постоянно

1.17.5

саркоидоз

постоянно

1.18

заболевания органов пищеварения:

 

1.18.1

язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки

постоянно

1.18.2

хронический панкреатит

постоянно

1.19

заболевания печени и желчных путей:

 

1.19.1

хронические гепатиты, в том числе токсической природы и неясной этиологии

постоянно

1.19.2

цирроз печени

постоянно

1.19.3

калькулезный холецистит с повторяющимися приступами

постоянно

1.20

заболевания почек и мочевыводящих путей:

 

1.20.1

хронические поражения почек (пиелонефрит, гломерулонефрит)

постоянно

1.20.2

мочекаменная болезнь

постоянно

1.21

диффузные заболевания соединительной ткани

постоянно

1.22

лучевая болезнь

постоянно

1.23

заболевания эндокринной системы:

 

1.23.1

сахарный диабет

постоянно

1.23.2

заболевания щитовидной железы с нарушением функций (гипо- и гипертиреоз, аутоиммунный тиреоидит)

постоянно

1.23.3

ожирение III степени

постоянно

1.24

заболевания ЛОР-органов:

 

1.24.1

озена

постоянно

1.24.2

прочие острые и хронические тяжелые гнойно-воспалительные заболевания

постоянно

1.25

заболевания глаз:

 

1.25.1

хронический увеит (ирит, иридоциклит, хориоретинит)

постоянно

1.25.2

высокая миопия (6 диоптрий и более)

постоянно

1.25.3

трахома

постоянно

1.26

заболевания кожи:

 

1.26.1

распространенные заболевания воспалительного и инфекционного характера (пиодермия, фурункулез, сикоз)

постоянно

1.26.2

псориаз, эритродермия, экземы, красная волчанка, пузырчатые дерматозы

постоянно

1.26.3

грибковые поражения кожи (микроспория, трихофития, фавус, эпидермофития) и внутренних органов (глубокие микозы)

постоянно

1.27

остеомиелит острый и хронический

постоянно

1.28

оперативные вмешательства по поводу удаления органа (желудок, почка, селезенка, яичники, щитовидная железа и другое) и трансплантации органов и тканей

постоянно

1.29

вес тела менее 55 кг (при любом росте)

постоянно

2

Заболевания и состояния, при которых сдача крови и ее компонентов противопоказана временно:

 

2.1

факторы заражения инфекционными и паразитарными заболеваниями, передающимися через кровь:

 

2.1.1

переливания крови и ее компонентов

6 месяцев

2.1.2

оперативные вмешательства, в том числе аборты

6 месяцев после дня оперативного медицинского вмешательства

2.1.3

нанесение татуировки или лечение иглоукалыванием

1 год после окончания процедур

2.1.4

пребывание в заграничных командировках длительностью более 2 месяцев

6 месяцев

2.1.5

пребывание в эндемичных по малярии странах тропического и субтропического климата (Азия, Африка, Южная и Центральная Америка) более 3 месяцев

3 года

2.1.6

контакт с больными гепатитами:

 

2.1.6.1

гепатит А

3 месяца

2.1.6.2

гепатиты В и С

1 год

2.2

перенесенные заболевания:

 

2.2.1

малярия в анамнезе при отсутствии симптомов и отрицательных результатов иммунологических тестов

2 года

2.2.2

брюшной тиф после выздоровления и полного клинического обследования при отсутствии выраженных функциональных расстройств

1 год

2.2.3

грипп, острая респираторная вирусная инфекция

2 недели после выздоровления

2.2.4

ангина

1 месяц после выздоровления

2.2.5

пневмония

6 месяцев после выздоровления

2.2.6

экстракция зуба

7 дней

2.2.7

острые или хронические воспалительные процессы в стадии обострения независимо от локализации

1 месяц после купирования острого периода

2.2.8

нейроциркуляторная дистония

1 месяц

2.2.9

аллергические заболевания в стадии обострения

2 месяца после купирования острого периода

2.2.10

анемии железодефицитные

1 месяц после окончания лечения

2.2.11

черепно-мозговые травмы:

 

2.2.11.1

легкой степени

3 месяца

2.2.11.2

средней степени

6 месяцев

2.2.11.3

тяжелой степени

12 месяцев

2.2.12

переломы:

 

2.2.12.1

мелких костей

1 месяц

2.2.12.2

трубчатых костей

6 месяцев

2.3

период беременности и лактации

1 год после родов, 3 месяца после окончания лактации

2.4

период менструации

5 дней после окончания менструации

2.5

прививки:

 

2.5.1

прививка убитыми вакцинами, анатоксинами (гепатит В, столбняк, дифтерия, коклюш, паратиф, холера, грипп)

10 дней

2.5.2

прививка живыми вакцинами (бруцеллез, чума, туляремия, ветряная оспа, краснуха, полиомиелит перорально), введение противостолбнячной сыворотки (при отсутствии выраженных воспалительных явлений на месте инъекции)

1 месяц

2.5.3

прививка вакциной против бешенства

2 недели

2.6

прием лекарственных средств:

 

2.6.1

антибиотики

10 дней после окончания приема

2.6.2

салицилаты

5 дней после окончания приема

2.7

прием алкоголя

48 часов

2.8

изменения биохимических показателей крови:

 

2.8.1

диспротеинемия

1 месяц

2.8.2

повторное повышение аланинаминотрансферазы (далее – АЛТ) или первичное увеличение АЛТ более чем в 2 раза

3 месяца

2.9

3-кратная перестановка в течение года исследований на ВИЧ, гепатиты В и С, сифилис

6 месяцев

границ | Ориентация на функцию микроРНК при остром панкреатите

Введение

Острый панкреатит (ОП) представляет собой тип стерильного воспаления поджелудочной железы, инициированного дисфункцией экзокринной части поджелудочной железы, которая нарушает баланс между защитными ферментами и сигналами стресса (Lankisch et al., 2015). У большинства пациентов заболевание протекает легко и самокупируется, но примерно в 20–30% случаев в конечном итоге развивается тяжелое течение с высокой смертностью, несмотря на лечение (Bakker et al., 2014). Как быстро развивающееся состояние, тяжесть ОП может быстро меняться в течение очень короткого промежутка времени (Mentula and Leppaniemi, 2014). Текущее лечение ОП обычно состоит из комбинированного лечения нутритивной поддержкой, анальгетиками и ингибиторами протеазы; к сожалению, эти методы лечения обладают ограниченной эффективностью из-за отсутствия направленности (Tenner et al., 2013; Yokoe et al., 2015). Поэтому актуален поиск новых методов диагностики и лечения ОП.

Открытие микроРНК (миРНК) положило начало совершенно новому процессу мышления в отношении диагностики и лечения ОП.miRNA представляет собой одноцепочечную некодирующую РНК, которая контролирует экспрессию большинства генов посредством либо расщепления, либо репрессии трансляции (Iorio and Croce, 2009). Появляются доказательства того, что измененная экспрессия миРНК может приводить к изменению ключевых физиологических функций, которые участвуют в инфильтрации воспаления и осложнении многих заболеваний, включая ОП (Hu et al., 2015; Kusnierz-Cabala et al., 2015; Maltby et al. ., 2016). Поэтому мы суммируем взаимосвязанные отношения между miRNA и AP, чтобы предложить возможный диагностический и терапевтический инструмент для лечения этого заболевания в этом мини-обзоре.

Экспрессия микроРНК в поджелудочной железе

Многие miRNAs часто эволюционно консервативны, и их экспрессия ограничена определенными стадиями развития или определенными типами клеток или тканей (Sood et al., 2006). Следовательно, способность определять экспрессию miRNA в экзокринной части поджелудочной железы окажется полезной для понимания предполагаемой роли, которую miRNA играет в AP. Шафранска и др. сообщили, что экспрессия миР-216 и миР-217 была идентифицирована как характеристика ткани поджелудочной железы человека (Szafranska et al., 2007), которые почти исключительно экспрессируются в поджелудочной железе крыс (Wang et al., 2017). Поскольку нормальная поджелудочная железа состоит примерно на 90% из ацинарных клеток, легко предположить, что миР-216 (включая высоко гомологичные миР-216a и миР-216b) и миР-217 обогащены ацинарными клетками и играют ключевую роль в экзокринной функции поджелудочной железы. функции (Meher et al., 2015; Rouse et al., 2017). Более того, Конг и соавт. количественно оценили относительную концентрацию миР-216а в тканях поджелудочной железы, взятых у здоровых крыс, и обнаружили, что она в 128 раз выше, чем в почках, которые имели следующую по величине концентрацию, что указывает на то, что миР-216а может способствовать отличию заболеваний поджелудочной железы от других тканей. заболеваний (Конг и др., 2010). Диксит и др. определили, что миР-148a-3p, миР-375-3p, миР-217-5p и миР-200a-3p являются наиболее распространенными миРНК в базальном состоянии, тогда как миР-421-3p, миР-24-5p и миР -29a-5p в наименьшей степени экспрессируются в ацинарных клетках поджелудочной железы мышей (Dixit et al., 2016). Кроме того, Let-7b и miR-495 и их гены-мишени контролируют транскрипционную сеть, которая управляет дифференцировкой ацинарных клеток поджелудочной железы, что критично для обеспечения ацинарного гомеостаза (Prevot et al., 2013). Из-за этих корреляций miRNAs в регуляции физиологических процессов в поджелудочной железе понимание модуляции экспрессии miRNAs при AP имеет решающее значение.

Аберрантные уровни экспрессии микроРНК при остром панкреатите

Ранняя диагностика тяжести ОП может выявить потенциальный риск тяжелого острого панкреатита (ТОП) как можно раньше и обеспечить высокую клиническую ценность для улучшения прогноза пациента (Lee et al., 2013). В настоящее время панкреатические биомаркеры амилаза и липаза обычно используются для раннего прогнозирования ОП, но их применение в клинической практике часто ограничено из-за их собственных ограничений (Treacy et al., 2001; Huang et al., 2016). Накопленные данные показали, что аномальная экспрессия миРНК, связанная с патогенезом ОП, может служить кандидатным биомаркером для диагностики и прогноза этого заболевания (Kong et al., 2010; An et al., 2014; Dixit et al., 2016; Zhang et al. ., 2017). Паттерны аберрантной экспрессии микроРНК у животных моделей и у пациентов с ОП перечислены в таблице 1.

Таблица 1 . Аберрантные уровни экспрессии микроРНК при остром панкреатите.

Животные

Основываясь на всестороннем анализе профилей экспрессии миРНК, миР-21-3p была значительно сверхэкспрессирована в ацинарных клетках поджелудочной железы мышей, подвергшихся воздействию различных токсикантов поджелудочной железы (Dixit et al., 2016). За исключением тканевой специфичности, miRNAs могут стабильно экспрессироваться в кровотоке (Lawrie et al., 2008; Arroyo et al., 2011). Сообщалось, что уровни в плазме миР-216a, миР-216b и миР-217, обогащенных экзокринной поджелудочной железой, значительно повышались после индукции ОП или экзокринного повреждения поджелудочной железы (EPIJ) у грызунов и собак (Endo et al., 2013; Goodwin et al., 2014; Usborne et al., 2014; Calvano et al., 2016; Rouse et al., 2017; Wang et al., 2017). Смит и др. считали, что miR-216a-5p, miR-375-3p, miR-148a-3p, miR-216b-5p и miR-141-3p продолжали повышаться в сыворотке крыс или собак дольше, чем амилаза или липаза, и имели большой динамический диапазон (Смит и др., 2016). После инъекции церуеина у мышей наблюдалась обратная связь между уровнями miR-122 и эритропоэтина (ЭПО) в плазме (Rivkin et al., 2016). Более того, используя модель крыс AP, Blenkiron et al. обнаружили, что экспрессия miRNAs: miR-375, miR-217, miR-148a, miR-216a, miR-122, miR-214 и miR-138 увеличивалась в мезентериальной лимфатической жидкости с положительной корреляцией с тяжестью ОП (Blenkiron и др., 2014). Таким образом, в настоящее время накапливается все больше экспериментальных данных об АП.Однако эти обнаруженные многочисленные miRNA у животных AP нуждаются в дальнейшей проверке и исследовании в клинических условиях.

пациентов

Сообщалось, что у человека уровни miR-92b, miR-10a и miR-7 в сыворотке снижались во время ОП, что давало значение площади под кривой (AUC) 0,69 (Liu et al., 2014). Исследование Kusnierz-Cabala et al. показали высокую распространенность miR-126-5p, miR-148a-3p, miR-216a-5p, miR-551b-5p и miR-375 в сыворотке пациентов с SAP, а также miR-216a-5p, miR-551b. -5p и миР-375 у пациентов с легким острым панкреатитом (MAP).Кроме того, анализ кривой рабочих характеристик приемника (ROC) показал, что miR-126-p и miR-551b-5p могут использоваться в качестве потенциальных маркеров для прогнозирования тяжести ОП с хорошей AUC (чувствительность = 60,0%, специфичность = 87,1%; и чувствительность = 69,2%, специфичность = 72,6%; Kusnierz-Cabala et al., 2015). Во время индуцированного гипертриглицеридемией ОП (HTAP) An et al. наблюдали значительное повышение концентрации в сыворотке следующих микроРНК: miR24-3p, miR-361-5p, miR-1246 и miR-222-3p; miR-181a-5p постоянно подавлялись.AUC для всех пяти перекрывающихся микроРНК составляла 0,889 (чувствительность = 100%, специфичность = 83,3%), 0,722 (чувствительность = 85%, специфичность = 90%), 0,917 (чувствительность = 98%, специфичность = 92%), 0,833 (чувствительность = 92%). = 100%, специфичность = 83,3%) и 0,972 (чувствительность = 100%, специфичность = 83,3%) последовательно. Эти результаты показали, что экспрессия этих miRNAs, особенно miR-181a-5p, может быть использована для точной оценки прогрессирования HTAP. Более того, miR-181a-5p имеет положительную корреляцию с Ca 2+ , но отрицательную корреляцию с триглицеридами (TG), общим холестерином (TC) и уровнем глюкозы в крови натощак (FBG) (An et al., 2014). Таким образом, как показано в таблице 1, эти клинические исследования показывают, что потенциальные биомаркеры миРНК AP включают miR-92b, miR-126-5p, miR24-3p, miR-181a-5p и т. д.

Благодаря специфичности и чувствительности miRNA в регуляции процесса AP она лучше, чем обычные биомаркеры с плохой тканевой и клеточной специфичностью (Beuvink et al., 2007; Tombol et al., 2009). Хотя общепризнанно, что РНК легко расщепляется, когда ее выделяют из образцов тканей, богатых РНКазой, таких как поджелудочная железа, Kim et al.считали, что деградация РНК из-за длительного хранения при комнатной температуре не влияет на прогностическую способность тканеспецифического предиктора количественной обратной транскрипции miRNA полимеразной цепной реакции (QRTPCR) (Kim et al., 2011). Кроме того, некоторые miRNAs способны противостоять различным суровым условиям, таким как многократное замораживание и оттаивание или сильнокислая или щелочная среда с экстремальным pH (Machado et al., 2015). По сравнению с другими биомаркерами экспрессия микроРНК стабильна в жидкостях организма, особенно в кровотоке, что вызывает интерес к использованию микроРНК в качестве биомаркеров на основе сыворотки и/или плазмы для диагностики ОП и стратификации пациентов (Mitchell et al., 2008; Конг и др., 2010 г.; Лю и др., 2014). Однако различные miRNAs аномально представлены при болезненном состоянии AP; таким образом, необходимо создать подробный профиль микроРНК, который также относится к другим диагностическим методам, чтобы избежать неправильной интерпретации.

микроРНК, регулирующая экспрессию генов, связанных с острым панкреатитром

Недавно было обнаружено, что некоторые miRNAs регулируют экспрессию генов-мишеней при осложненном AP, и подробный механизм показан на рисунке 1.

Рисунок 1 .Возможные механизмы миРНК, регулирующие экспрессию мишени при осложненном ОП.

Апоптоз/некроз

Апоптоз и некроз — два основных паттерна гибели ацинарных клеток поджелудочной железы при ОП, и они могут взаимозаменяться друг другом при соответствующих условиях (Bhatia, 2004; Mareninova et al., 2006). Апоптоз поддерживает целостность мембраны, не стимулируя иммунную систему, в то время как некротические клетки высвобождают связанные с повреждением молекулы молекулярного паттерна (DAMP), которые запускают воспалительный каскад (Bhatia, 2004).

Данные in vivo и in vitro моделей острого отечного панкреатита (ООП) показали, что уровни экспрессии миР-22 и миР-135a значительно увеличились по сравнению с нормальной группой, которые играют защитную роль при ООП посредством проапоптозную активность в ацинарных клетках поджелудочной железы путем ингибирования экспрессии их генов-мишеней, ErbB3 и Ptk2, соответственно (Qin et al., 2014). Фосфорилированный тирозином ErbB3 проявляет более высокое сродство к фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат-3-киназы (PI3K), поэтому активированный ErbB3 приводит к сильной активации сигнального пути PI3K/серин/треонинкиназа (Akt), что может привести к резистентности к апоптозу. Солтофф и др., 1994; Рой и др., 2010). Активация PI3K/Akt также необходима для активации интрапанкреатического трипсиногена (Fischer et al., 2007). Ген Ptk2 кодирует белок фокальной адгезионной киназы (FAK), и активация этого гена может быть ранним важным этапом гибели клеток (Alisi et al., 2012). Многие исследования продемонстрировали, что генетическая абляция Ptk2 и снижение уровня белка FAK могут способствовать апоптозу, индуцирующему лекарственные средства, за счет заметного повышения активности каспазы 9 и каспазы 3 (Yuan et al., 2010; Xie et al., 2011; Ши и др., 2012). Данные исследования Fu et al. продемонстрировали, что скорость апоптоза и экспрессия TNFRSF1A были явно повышены после повышения экспрессии miR-29a в клетках AR42J, обработанных рекомбинантным крысиным TNF-α (Fu et al., 2016). TNFRSF1A, как ген-мишень miR-29a, кодирует белок рецептора 1 фактора некроза опухоли (TNFR1), который является основным сигнальным рецептором для TNF-α (Borghini et al., 2011). Комбинация TNF-α с TNFR1 немедленно активирует ядерный фактор-каппа B (NF-kB) и последующий апоптоз (Wajant et al., 2003).

Скорость некроза ацинарных клеток поджелудочной железы и последующее воспаление коррелируют со смертностью пациентов с острым некротическим панкреатитом (ОНП) (Xu et al., 2015). Все больше исследований продемонстрировали функцию miRNAs при некрозе ацинарных клеток поджелудочной железы, что указывает на то, что miRNA может быть потенциальной мишенью для разработки лекарств против AP (Ma et al., 2015; Hu et al., 2016). Повышенная экспрессия miR-19b в клетках AR42J крыс ANP или обработанных 3-сульфатом динатриевой соли тауролитохолевой кислоты (TLC-S) может способствовать клеточному некрозу; в противном случае удаление miR-19b может снизить скорость некроза (Hu et al., 2016). Ма и др. сообщают, что миР-21 сверхэкспрессируется в мышиной модели AP; Ингибирование миР-21 защищает от AP, индуцированного церулином или L-аргинином, и эффективно снижает тяжесть заболевания. Кроме того, подавление экспрессии miR-21 защищает от TNF-индуцированного SIRS. МиР-21 способствует индуцированному TNF-α некроптозу, патологическому состоянию, включающему зависимый от взаимодействующего с рецептором белок 3 (RIP3) регулируемый некроз (Ma et al., 2015). RIP3 является компонентом некросомы, который может быть непосредственно расщеплен и инактивирован каспазой 8 для негативной регуляции некроптоза, вызванного TNF-α (Kaiser et al., 2011). Таким образом, miRNAs критически вовлечены в процессы апоптоза и/или некроза AP.

Аутофагия

Аутофагия — форма запрограммированной гибели клеток в эволюционном процессе, и основная ее функция — лизосомальное самопереваривание собственных компонентов клетки в ответ на внешние раздражители (Jones et al., 2013; Vernon, Tang, 2013). Многие исследования показали, что аутофагия участвует в прогрессировании ОП, но ее роль в течении ОП до сих пор остается спорной.В предыдущих исследованиях сообщалось, что селективная аутофагия играет цитопротекторную роль, устраняя избыточную активацию зимогена и уменьшая гибель клеток поджелудочной железы, индуцированную трипсином в начале ОП (Grasso et al., 2011). Другая противоположная точка зрения заключается в том, что аутофагия способствует образованию ацинарных клеточных вакуолей и активации трипсиногена как основного механизма, лежащего в основе патогенеза ОП (Gukovsky et al., 2012).

miRNA сохраняет процесс аутофагии посредством регуляции экспрессии генов, связанных с аутофагией.Используя модель ацинарной клеточной аутофагии in vitro , Gao et al. определили, что экспрессия miR-148b-3p с пониженной экспрессией может быть модератором в процессе аутофагии, а 10 связанных с аутофагией генов среди мишеней miR-148b-3p были идентифицированы с помощью технологии интеллектуального анализа данных: Sqstm1, Cdc37, Tlr4, Atg12, Hspa5, Hspb6, Pik3c3. , Atf3, Irf1 и Bag3. Эти гены-мишени косвенно влияют на регуляцию аутофагии, вмешиваясь в ключевые гены, связанные с аутофагическим сигнальным путем (Gao et al., 2016). Однако необходимы дальнейшие исследования, чтобы подтвердить регуляторные эффекты и механизм miR-148b-3p и ее генов-мишеней на процесс аутофагии.В недавних исследованиях сообщалось, что у мышей с индуцированным L-аргинином AP повреждение ткани поджелудочной железы у мышей с использованием аденовирусного вектора miR-141 намного меньше, чем при лечении обычным физиологическим раствором, как и аутофагосомные и аутолизосомные процессы в тканях поджелудочной железы. Механически miR-141 противодействует экспрессии высокоподвижного белка группы box-1 (HMGB1) и дополнительно снижает уровень нижестоящего белка Beclin-1, что приводит к блокированию процесса образования аутофагосом, предполагая, что miR-141 может ингибировать аутофагию через HMGB1. /Путь беклина-1 (Zhu et al., 2016). HMGB1 является консервативным ядерным белком, который играет роль, зависящую от субклеточной локализации, в регуляции аутофагии (Tang et al., 2012). Цитозольный HMGB1 представляет собой новый Beclin-1-связывающий белок, индуцирующий аутофагию (Tang et al., 2010). Внеклеточный HMGB1 сочетается со специфичным рецептором конечного продукта гликозилирования (AGER/RAGE) для ускорения образования основных аутофагических комплексов каталитической субъединицы беклин-1-фосфатидилинозитол-3-киназы типа 3 (PIK3C3) (Kang et al., 2010; Yu et al. ., 2016). Эти находки показывают, что miRNA, по-видимому, является многообещающим кандидатом для изучения механизмов AP, стимулируемых аутофагией, и генной терапии AP (Zhu et al., 2016).

Путь обратной связи TGF-β

Трансформирующий фактор роста-β (TGF-β) представляет собой многофункциональный цитокин, участвующий в различных биологических процессах, включая клеточный апоптоз и регуляцию иммунной системы (Mikami et al., 2006). Сообщалось, что TGF-β и его рецепторы активируются у пациентов с ОП (Friess et al., 1998; Уилди и др., 2007). Экспрессия miR-216a увеличивается дозозависимым образом в клетках AR42J после стимуляции TGF-β. Между тем, ингибитор TGF-β SB431542 может снижать экспрессию miR-216a в ткани поджелудочной железы и сыворотке в мышиной модели AP, индуцированного церулеаном. TGF-β усугубляет AP посредством повышающей регуляции miR-216a, которая нацелена на PTEN и Smad7 (Zhang et al., 2015). PTEN является супрессором сигнального пути PI3K/Akt, связанного с клеточным апоптозом (Blanco-Aparicio et al., 2007). Smad7 блокирует путь передачи сигналов TGF-β через петлю отрицательной обратной связи, а также действует как посредник перекрестных помех между передачей сигналов TGF-β и др. (Yan and Chen, 2011).Следовательно, сигнальный путь TGF-β/miR-216a регулирует множественные биологические процессы при AP.

Сигнальный путь NF-κB

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) принадлежат к семейству стволовых клеток и широко используются в качестве средства доставки экзогенных генов в поврежденные ткани для терапевтической стратегии на основе клеток (Si et al., 2011). МиР-9 является ключевым паракринным молекулярным компонентом мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (СКМ), и его активация может ингибировать воспалительный ответ, индуцированный липополисахаридом (ЛПС) в полиморфноядерных нейтрофилах человека (ПЯН) и мононуклеарных клетках периферической крови. (PBMC) (Bazzoni et al., 2009). Цянь и др. обнаружили, что СККМ, модифицированные миР-9 (при-миР-9-СККМ), значительно снижают повреждение поджелудочной железы и активность амилазы и липазы в сыворотке у крыс с АП. При этом также наблюдается снижение выброса факторов воспаления и усиленная регенерация некротизированных тканей поджелудочной железы. Эти результаты показывают, что миР-9 может быть противовоспалительным фактором, участвующим в прогрессировании ОП. СККМ доставляют миР-9 в поврежденную поджелудочную железу или РВМС, что может ослаблять нацеливание САП на ген NF-kB1/p50 (Qian et al., 2017).

При ОП поврежденные клетки поджелудочной железы высвобождают провоспалительные медиаторы для стимуляции макрофагов в поджелудочной железе, брюшине и других тканях (Gutierrez et al., 2008). Активированные макрофаги выделяют различные воспалительные цитокины, что приводит к распространению воспаления (Jaffray et al., 2000; Ni et al., 2014). Следовательно, терапия на клеточном уровне, нацеленная на макрофаги, может привести к ценному прорыву в лечении ОП. Было обнаружено, что межклеточная коммуникация играет существенную роль в активации ассоциированных с панкреатитом макрофагов (Lundberg et al., 2000). miRNA считается медиатором межклеточной коммуникации, который транспортируется в клетки-реципиенты для регуляции их функций (Chevillet et al., 2014). Недавно результаты исследования Zhao et al. показали, что активированные клетки AR42J усиливают активацию NF-κB в макрофагах за счет секреции экзосом, несущих дифференциально экспрессируемые микроРНК (Zhao et al., 2016). Эти исследования показывают, что миРНК, по-видимому, регулирует воспалительные реакции, стимулируемые NF-κB, при ОП.

микроРНК как потенциальное терапевтическое средство

микроРНК играют ключевую роль в регуляции экспрессии генов; таким образом, манипулирование функцией miRNA in vitro и in vivo является потенциальной терапией на генетическом уровне для модуляции патогенеза заболевания.Открытие ингибиторов миРНК (например, анти-миРНК и губок миРНК) или энхансеров (миметиков) взаимодействует с миРНК, увеличивая или ингибируя трансляцию мРНК, нацеленных на миРНК, тем самым изменяя уровни экспрессии белка и значительно продвигая вперед разработку новых лекарств (Ebert и др., 2007; Леннокс и Белке, 2011; Робб и др., 2017). В настоящее время основным ограничением использования микроРНК в качестве терапии является вероятность нежелательных побочных эффектов из-за их биологических свойств, при которых отдельные микроРНК модулируют несколько нижестоящих мишеней, а вмешательство в работу отдельных микроРНК может оказывать широкое воздействие на несколько клеточных путей одновременно и потенциально может компенсировать желаемые терапевтические эффекты, особенно при использовании системной доставки лекарств (Baker, 2010).Следовательно, в будущих исследованиях требуется персонализированная терапия микроРНК для поддержания других функций без нарушений и оптимизации систем доставки лекарств.

Заключение

В этом мини-обзоре мы обсудили многообещающую роль miRNAs в разработке более эффективных методов лечения AP помимо действия в качестве потенциальных диагностических инструментов. Хотя было обнаружено, что некоторые микроРНК демонстрируют прямую или косвенную связь с прогрессированием ОП, исследования по применению миРНК в лечении ОП остаются на стадии разработки.Эти фундаментальные исследования могут предоставить большое количество ценной информации для клинического продвижения применения миРНК для диагностики и дальнейшего развития лечения ОП.

Вклад авторов

HX, XT, SX, JQ, HS, JL и DS написали рукопись.

Финансирование

Эта работа финансировалась Национальным фондом естественных наук Китая (№ 81373875) и Ключевым проектом, поддерживаемым организацией Clinical Ability Construction в провинции Ляонин (№LNCCC-A03-2015).

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Ссылки

Алиси А., Арсиелло М., Петрини С., Конти Б., Миссале Г. и Бальсано К. (2012). Киназа фокальной адгезии (FAK) опосредует индукцию проонкогенных и фиброгенных фенотипов в клетках, инфицированных вирусом гепатита С (HCV). PLoS ONE 7:e44147. doi: 10.1371/journal.pone.0044147

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ан, Ф., Чжан, К., Ся, М., Цзян, Л., Лу, Г., Хуан, М., и др. (2014). От умеренно тяжелой до тяжелой гипертриглицеридемии, индуцированной острым панкреатитом: циркулирующие микроРНК играют роль потенциальных биомаркеров. PLoS ONE 9:e111058. doi: 10.1371/journal.pone.0111058

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Арройо, Дж.D., Chevillet, J.R., Kroh, E.M., Ruf, I.K., Pritchard, C.C., Gibson, D.F., et al. (2011). Комплексы Argonaute2 несут популяцию циркулирующих микроРНК, не зависящую от везикул в плазме человека. Проц. Натл. акад. науч. США 108, 5003–5008. doi: 10.1073/pnas.101

08

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Bakker, O.J., van Brunschot, S., van Santvoort, H.C., Besselink, M.G., Bollen, T.L., Boermeester, M.A., et al. (2014). Раннее кормление через назоэнтеральный зонд по сравнению с кормлением по требованию при остром панкреатите. Н. англ. Дж. Мед. 371, 1983–1993 гг. дои: 10.1056/NEJMoa1404393

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Баццони Ф., Россато М., Фаббри М., Гаудиози Д., Мироло М., Мори Л. и др. (2009). Индукция и регуляторная функция миР-9 в моноцитах и ​​нейтрофилах человека, подвергающихся воздействию провоспалительных сигналов. Проц. Натл. акад. науч. США 106, 5282–5287. doi: 10.1073/pnas.0810

  • 6

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Беувинк, И., Kolb, F.A., Budach, W., Garnier, A., Lange, J., Natt, F., et al. (2007). Новый подход к микрочипам выявляет новые тканеспецифические сигнатуры известных и предсказанных микроРНК млекопитающих. Рез. нуклеиновых кислот. 35:e52. doi: 10.1093/нар/gkl1118

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Бленкирон, К., Аскелунд, К.Дж., Шанбхаг, С.Т., Чакраборти, М., Петров, М.С., Делахант, Б., и соавт. (2014). МикроРНК в брыжеечной лимфе и плазме при остром панкреатите. Энн. Surg. 260, 341–347. doi: 10.1097/SLA.0000000000000447

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Borghini, S., Fiore, M., Di Duca, M., Caroli, F., Finetti, M., Santamaria, G., et al. (2011). Гены-кандидаты у пациентов с аутовоспалительным синдромом, напоминающим периодический синдром, ассоциированный с рецептором фактора некроза опухоли, без мутаций в гене TNFRSF1A. J. Ревматол. 38, 1378–1384. doi: 10.3899/jrheum.101260

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Кальвано, Дж., Эдвардс Г., Хиксон К., Берр Х., Мангипуди Р. и Тирменштейн М. (2016). Сывороточные микроРНК-217 и -375 как биомаркеры острого повреждения поджелудочной железы у крыс. Токсикология 368–369, 1–9. doi: 10.1016/j.tox.2016.08.009

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Chevillet, J.R., Kang, Q., Ruf, I.K., Briggs, H.A., Vojtech, L.N., Hughes, S.M., et al. (2014). Количественный и стехиометрический анализ содержания микроРНК экзосом. Проц.Натл. акад. науч. США 111, 14888–14893. doi: 10.1073/pnas.1408301111

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Диксит А.К., Сарвер А.Е., Юань З., Джордж Дж., Барласс У., Чима Х. и др. (2016). Комплексный анализ сигнатуры микроРНК ацинусов поджелудочной железы мыши: сверхэкспрессия миР-21-3p при остром панкреатите. утра. Дж. Физиол. Гастроинтест. Физиол печени. 311, G974–G980. doi: 10.1152/jpgi.00191.2016

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Эндо, К., Венг Х., Кито Н., Фукусима Ю. и Иваи Н. (2013). МиР-216a и миР-216b как маркеры острого фазированного повреждения поджелудочной железы. Биомед. Рез. 34, 179–188. doi: 10.2220/biomedres.34.179

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Фишер Л., Гуковская А. С., Пеннингер Дж. М., Маренинова О. А., Фрисс Х., Гуковский И. и соавт. (2007). Фосфатидилинозитол-3-киназа способствует индуцированным желчными кислотами ответам Ca(2+) в ацинарных клетках поджелудочной железы. утра.Дж. Физиол. Гастроинтест. Физиол печени. 292, G875–G886. doi: 10.1152/jpgi.00558.2005

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Friess, H., Lu, Z., Riesle, E., Uhl, W., Brundler, A.M., Horvath, L., et al. (1998). Повышенная экспрессия TGF-бета и их рецепторов при остром панкреатите человека. Энн. Surg. 227, 95–104. дои: 10.1097/00000658-199801000-00014

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Фу, В., Qin, T., Chen, L., Liu, C.J., Zhang, X., Wang, Y.Z., et al. (2016). Активация миР-29a в клетках AR42J способствует апоптозу посредством нацеливания на ген TNFRSF1A. Мир Дж. Гастроэнтерол. 22, 4881–4890. дои: 10.3748/wjg.v22.i20.4881

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гао, Б., Ван, Д., Сунь, В., Мэн, X., Чжан, В., и Сюэ, Д. (2016). Дифференциально экспрессируемая идентификация микроРНК и анализ функции гена-мишени в индуцированной голоданием аутофагии ацинарных клеток поджелудочной железы AR42J. Мол. Мед. 14, 590–598. doi: 10.3892/mmr.2016.5240

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гудвин Д., Розенцвейг Б., Чжан Дж., Сюй Л., Стюарт С., Томпсон К. и др. (2014). Оценка миР-216a и миР-217 в качестве потенциальных биомаркеров острого повреждения поджелудочной железы у крыс и мышей. Биомаркеры 19, 517–529. дои: 10.3109/1354750X.2014.944217

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Грассо, Д., Ropolo, A., Lo Re, A., Boggio, V., Molejon, M.I., Iovanna, J.L., et al. (2011). Зимофагия, новый селективный путь аутофагии, опосредованный VMP1-USP9x-p62, предотвращает гибель клеток поджелудочной железы. Дж. Биол. хим. 286, 8308–8324. doi: 10.1074/jbc.M110.197301

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гуковский И., Пандол С.Дж., Маренинова О.А., Шалбуева Н., Цзя В. и Гуковская А.С. (2012). Нарушение аутофагии и органелларной дисфункции при панкреатите. Дж. Гастроэнтерол. Гепатол. 27(Прил. 2), 27–32. doi: 10.1111/j.1440-1746.2011.07004.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гутьеррес, П. Т., Фолч-Пюи, Э., Бульбена, О., и Клоза, Д. (2008). Окисленные липиды, присутствующие в асцитической жидкости, нарушают регуляцию макрофагов при остром панкреатите, способствуя обострению воспалительной реакции. Гут 57, 642–648. doi: 10.1136/gut.2007.127472

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ху, Л.Х., Джи, Дж. Т. и Ли, З. С. (2015). Потенциальное применение микроРНК в качестве диагностических и терапевтических средств при хроническом панкреатите. Дж. Сотовый. Мол. Мед. 19, 2049–2057. doi: 10.1111/jcmm.12603

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Hu, M.X., Zhang, H.W., Fu, Q., Qin, T., Liu, C.J., Wang, Y.Z., et al. (2016). Функциональная роль микроРНК-19b в некрозе ацинарных клеток при остром некротическом панкреатите. J. Huazhong Univ. науч. Технол. Мед.науч. 36, 221–225. doi: 10.1007/s11596-016-1570-2

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Хуанг, Дж., Цюй, Х.П., Чжэн, Ю.Ф., Сонг, X.В., Ли, Л., Сюй, З.В., и др. (2016). Пересмотренные Атлантские критерии 2012 г. изменили классификацию, оценку тяжести и лечение острого панкреатита. Гепатобилиарная поджелудочная железа. Дис. Междунар. 15, 310–315. doi: 10.1016/S1499-3872(15)60040-6

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Джафрей, К., Мендес, К., Денхэм, В., Картер, Г., и Норман, Дж. (2000). Специфические ферменты поджелудочной железы активируют макрофаги для производства фактора некроза опухоли-альфа: роль ядерного фактора каппа-В и ингибирующих белков каппа-В. Дж. Гастроинтест. Surg. 4, 370–377; обсуждение: 377–378. doi: 10.1016/S1091-255X(00)80015-3

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Kaiser, W.J., Upton, J.W., Long, A.B., Livingston-Rosanoff, D., Daley-Bauer, L.P., Hakem, R., et al.(2011). RIP3 опосредует эмбриональную летальность у мышей с дефицитом каспазы-8. Природа 471, 368–372. doi: 10.1038/nature09857

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Канг, Р., Ливси, К.М., Зех, Х.Дж., Лозе, М.Т., и Танг, Д. (2010). HMGB1: новый беклин-1-связывающий белок, активный в аутофагии. Аутофагия 6, 1209–1211. дои: 10.4161/авто.6.8.13651

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ким, Дж., Чой, Н.Э., О, С.Дж., Парк, С.Дж., и Ким, Х.К. (2011). Комбинированная экспрессия miR-122a, miR-1 и miR-200b может дифференцировать образцы деградированной РНК из печени, поджелудочной железы и желудка. Патол. Междунар. 61, 67–72. doi: 10.1111/j.1440-1827.2010.02615.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Kong, X.Y., Du, Y.Q., Li, L., Liu, J.Q., Wang, G.K., Zhu, J.Q., et al. (2010). Плазменная миР-216a как потенциальный маркер повреждения поджелудочной железы в крысиной модели острого панкреатита. Мир Дж. Гастроэнтерол. 16, 4599–4604. дои: 10.3748/wjg.v16.i36.4599

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Кузнеж-Кабала, Б., Новак, Э., Спорек, М., Ковалик, А., Кузневски, М., Энгуита, Ф.Дж., и соавт. (2015). Сывороточные уровни уникальной миР-551-5p и специфичной для эндотелия миР-126a-5p позволяют различать пациентов на ранней стадии острого панкреатита. Панкреатология 15, 344–351. doi: 10.1016/j.pan.2015.05.475

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Лори, К.H., Gal, S., Dunlop, H.M., Pushkaran, B., Liggins, A.P., Pulford, K., et al. (2008). Выявление повышенных уровней опухолеассоциированных микроРНК в сыворотке крови больных диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомой. руб. Дж. Гематол. 141, 672–675. doi: 10.1111/j.1365-2141.2008.07077.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Лю, П., Ся, Л., Чжан, В.Л., Ке, Х.Дж., Су, Т., Дэн, Л.Б., и др. (2014). Идентификация сывороточных микроРНК в качестве диагностических и прогностических биомаркеров острого панкреатита. Панкреатология 14, 159–166. doi: 10.1016/j.pan.2014.03.019

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Лундберг, А. Х., Юбэнкс, Дж. В. III, Генри, Дж., Сабек, О., Котб, М., Габер, Л., и соавт. (2000). Трипсин стимулирует продукцию цитокинов перитонеальными макрофагами in vitro и in vivo . Поджелудочная железа 21, 41–51. дои: 10.1097/00006676-200007000-00050

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    млн лет, Х., Conklin, D.J., Li, F., Dai, Z., Hua, X., Li, Y., et al. (2015). Онкогенная микроРНК miR-21 способствует регулируемому некрозу у мышей. Нац. коммун. 6, 7151. doi: 10.1038/ncomms8151

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Мачадо, М. Т., Навега, С., Диас, Ф., де Соуза, М. Дж., Тейшейра, А. Л., и Медейрос, Р. (2015). микроРНК для идентификации фракций периферической крови: происхождение, пути и судебно-медицинская значимость. Науки о жизни. 143, 98–104.doi: 10.1016/j.lfs.2015.10.029

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Малтби, С., Планк, М., Тай, Х.Л., Коллисон, А., и Фостер, П.С. (2016). Ориентация на функцию микроРНК при респираторных заболеваниях: мини-обзор. Перед. Физиол. 7:21. doi: 10.3389/fphys.2016.00021

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Маренинова О.А., Сун К.Ф., Хонг П., Лугеа А., Пандол С.Дж., Гуковский И. и соавт. (2006).Гибель клеток при панкреатите: каспазы защищают от некротизирующего панкреатита. Дж. Биол. хим. 281, 3370–3381. doi: 10.1074/jbc.M511276200

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Мехер, С., Мишра, Т.С., Сасмал, П.К., Рат, С., Шарма, Р., Раут, Б., и др. (2015). Роль биомаркеров в диагностике и прогностической оценке острого панкреатита. Дж. Биомарк. 2015:519534. дои: 10.1155/2015/519534

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ментула, П.и Леппаниеми, А. (2014). Документ с изложением позиции: своевременные вмешательства при тяжелом остром панкреатите имеют решающее значение для выживания. World J. Emerg. Surg. 9:15. дои: 10.1186/1749-7922-9-15

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Миками Ф., Лим Дж. Х., Исинага Х., Ха У. Х., Гу Х., Кога Т. и др. (2006). Сигнальный путь трансформирующего фактора роста-бета-Smad3/4 действует как положительный регулятор индукции TLR2 бактериями посредством двойного механизма, включающего функциональное взаимодействие с NF-kappaB и MAPK-фосфатазой 1-зависимой отрицательной перекрестной помехой с p38 MAPK. Дж. Биол. хим. 281, 22397–22408. doi: 10.1074/jbc.M602124200

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Митчелл П.С., Паркин Р.К., Крох Э.М., Фриц Б.Р., Вайман С.К., Погосова-Агаджанян Э.Л. и др. (2008). Циркулирующие микроРНК как стабильные маркеры на основе крови для обнаружения рака. Проц. Натл. акад. науч. США 105, 10513–10518. doi: 10.1073/pnas.0804549105

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ni, Q., Zhang, W., Sun, K., Yin, C., An, J. и Shang, D. (2014). Влияние эмодина in vitro на молекулу межклеточной адгезии перитонеальных макрофагов-3 в крысиной модели тяжелого острого панкреатита/синдрома системной воспалительной реакции. Биомед. 2, 63–68. doi: 10.3892/br.2013.178

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Prevot, P.P., Augereau, C., Simion, A., Van den Steen, G., Dauguet, N., Lemaigre, F.P., et al. (2013). Let-7b и миР-495 стимулируют дифференцировку и предотвращают метаплазию ацинарных клеток поджелудочной железы путем подавления HNF6. Гастроэнтерология 145, 668–678.e663. doi: 10.1053/j.gastro.2013.05.016

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Qian, D., Wei, G., Xu, C., He, Z., Hua, J., Li, J., et al. (2017). Мезенхимальные стволовые клетки костного мозга (СКМСК) репарируют острый некротический панкреатит путем секреции микроРНК-9 для нацеливания на ген NF-kappaB1/p50 у крыс. науч. Rep. 7, 581. doi: 10.1038/s41598-017-00629-3

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Цинь Т., Fu, Q., Pan, Y.F., Liu, C.J., Wang, Y.Z., Hu, M.X., et al. (2014). Экспрессия миР-22 и миР-135a при остром панкреатите. J. Huazhong Univ. науч. Технол. Мед. науч. 34, 225–233. doi: 10.1007/s11596-014-1263-7

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ривкин М., Симерзин А., Зорде-Хвалевский Э., Чай С., Юваль Дж. Б., Розенберг Н. и др. (2016). Вызванная воспалением экспрессия и секреция микроРНК 122 приводит к снижению уровня эритропоэтина почечного происхождения в крови и анемии. Гастроэнтерология 151, 999–1010.e1013. doi: 10.1053/j.gastro.2016.07.031

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Роуз Р., Розенцвейг Б., Ши К., Кнаптон А., Стюарт С., Сюй Л. и др. (2017). Биомаркеры микроРНК повреждения поджелудочной железы на собачьей модели. Экспл. Токсикол. Патол. 69, 33–43. doi: 10.1016/j.etp.2016.11.001

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Рой, С.К., Шривастава, Р.К. и Шанкар С. (2010). Ингибирование путей PI3K/AKT и MAPK/ERK вызывает активацию фактора транскрипции FOXO, что приводит к остановке клеточного цикла и апоптозу при раке поджелудочной железы. Дж. Мол. Сигнал. 5:10. дои: 10.1186/1750-2187-5-10

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ши, Х., Лю, Х., и Чжао, Г. (2012). Влияние трансфекции малой интерферирующей РНК на экспрессию мРНК FAK и DLC1 в OVCAR-3. Мол. биол. Респ. 39, 9299–9306.doi: 10.1007/s11033-012-1724-7

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Si, Y.L., Zhao, Y.L., Hao, HJ, Fu, X.B., and Han, W.D. (2011). МСК: биологические характеристики, клиническое применение и нерешенные проблемы. Сопротивление старению. Ред. 10, 93–103. doi: 10.1016/j.arr.2010.08.005

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Smith, A., Calley, J., Mathur, S., Qian, H.R., Wu, H., Farmen, M., et al.(2016). Атлас тела микроРНК крысы; Оценка содержания микроРНК в органах крыс посредством глубокого секвенирования и характеристики микроРНК, обогащенных поджелудочной железой, как биомаркеров панкреатической токсичности у крыс и собак. BMC Genomics 17:694. doi: 10.1186/s12864-016-2956-z

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Soltoff, S.P., Carraway, K.L.III, Prigent, S.A., Gullick, W.G., and Cantley, L.C. (1994). ErbB3 участвует в активации фосфатидилинозитол-3-киназы эпидермальным фактором роста. Мол. Клетка. биол. 14, 3550–3558. doi: 10.1128/MCB.14.6.3550

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Суд П., Крек А., Заволан М., Мачино Г. и Раевски Н. (2006). Специфические для типа клеток сигнатуры микроРНК при экспрессии мРНК-мишени. Проц. Натл. акад. науч. США 103, 2746–2751. doi: 10.1073/pnas.0511045103

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Шафранска, А. Э., Дэвисон, Т.С., Джон Дж., Кэннон Т., Сипос Б., Магнуж А. и др. (2007). Изменения экспрессии микроРНК связаны с онкогенезом и неопухолевыми процессами при аденокарциноме протоков поджелудочной железы. Онкоген 26, 4442–4452. doi: 10.1038/sj.onc.1210228

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Танг Д., Канг Р., Койн С.Б., Зех Х.Дж. и Лотце М.Т. (2012). PAMP и DAMP: нулевые сигналы, которые стимулируют аутофагию и иммунитет. Иммунол. Ред. 249, 158–175.doi: 10.1111/j.1600-065X.2012.01146.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Тан, Д., Канг, Р., Ливси, К.М., Чех, К.В., Фаркас, А., Логран, П., и соавт. (2010). Эндогенный HMGB1 регулирует аутофагию. J. Cell Biol. 190, 881–892. doi: 10.1083/jcb.2008

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Теннер, С., Бейли, Дж., ДеВитт, Дж., и Веге, С.С. (2013). Рекомендации Американского колледжа гастроэнтерологов: лечение острого панкреатита. утра. Дж. Гастроэнтерол. 108, 14:00–14:15; 1416. doi: 10.1038/ajg.2013.218

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Tombol, Z., Szabo, P.M., Molnar, V., Wiener, Z., Tolgyesi, G., Horanyi, J., et al. (2009). Интегративное молекулярно-биоинформатическое исследование опухолей коры надпочечников человека: микроРНК, прогнозирование тканеспецифических мишеней и анализ путей. Эндокр. Относ. Рак 16, 895–906. DOI: 10.1677/ERC-09-0096

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Трейси, Дж., Williams, A., Bais, R., Willson, K., Worthley, C., Reece, J., et al. (2001). Оценка амилазы и липазы в диагностике острого панкреатита. ANZ J. Surg. 71, 577–582. doi: 10.1046/j.1445-2197.2001.02220.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Usborne, A.L., Smith, A.T., Engle, S.K., Watson, D.E., Sullivan, J.M., and Walgren, J.L. (2014). Биомаркеры экзокринного повреждения поджелудочной железы на двух моделях острого панкреатита у крыс. Токсикол.Патол. 42, 195–203. дои: 10.1177/0192623313512030

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Wang, J., Huang, W., Thibault, S., Brown, T.P., Bobrowski, W., Gukasyan, H.J., et al. (2017). Оценка миР-216a и миР-217 в качестве потенциальных биомаркеров острой экзокринной токсичности поджелудочной железы у крыс. Токсикол. Патол. 45, 321–334. дои: 10.1177/0192623316678090

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Вилди, С., Kleeff, J., Mayerle, J., Zimmermann, A., Bottinger, E.P., Wakefield, L., et al. (2007). Подавление передачи сигналов трансформирующего фактора роста бета прерывает индуцированный церулеином панкреатит и устраняет ограниченную стимуляцию при высоких концентрациях церулеина. Гут 56, 685–692. doi: 10.1136/gut.2006.105833

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Се П., Кондети В.К., Лин С., Харуна Ю., Рапариа К. и Канвар Ю.С. (2011). Роль антигена внеклеточного матрикса почечного тубуло-интерстициального нефрита (TINag) в выживании клеток с использованием передачи сигналов интегрина (альфа)vbeta3/киназы фокальной адгезии (FAK)/фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K)/протеинкиназы B-серина/треонинкиназы (AKT) путь. Дж. Биол. хим. 286, 34131–34146. doi: 10.1074/jbc.M111.241778

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сюй, М., Ван, К. Н., Ву, К., и Ван, К. П. (2015). Дитиокарбамат пирролидина ингибирует экспрессию ядерного фактора kappaB и толл-подобного рецептора 4 у крыс с острым некротизирующим панкреатитом. Кишечник Печень 9, 411–416. дои: 10.5009/gnl14050

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Йокоэ, М., Takada, T., Mayumi, T., Yoshida, M., Isaji, S., Wada, K., et al. (2015). Японские рекомендации по лечению острого панкреатита: Японские рекомендации 2015 г. J. Hepatobiliary Pancreat. науч. 22, 405–432. doi: 10.1002/jhbp.259

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Yu, C., Yu, X., Zhu, H.W., Li, X., Huang, L.H., Li, Z.Q., et al. (2016). Характер экспрессии HMGB1 и его связь с аутофагией при остром некротическом панкреатите. Мол. Мед. Респ. 14, 5507–5513. doi: 10.3892/ммр.2016.5945

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Юань, З., Чжэн, К., Фань, Дж., Ай, К. Х., Чен, Дж., и Хуан, X. Ю. (2010). Экспрессия и прогностическое значение киназы фокальной адгезии при гепатоцеллюлярной карциноме. J. Рак Res. клин. Онкол. 136, 1489–1496. doi: 10.1007/s00432-010-0806-y

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Чжан, Дж., Нин, X., Цуй, В., Би М., Чжан Д. и Чжан Дж. (2015). Трансформирующий фактор роста (TGF)-бета-индуцированная микроРНК-216a способствует острому панкреатиту через Akt и TGF-бета-путь у мышей. Цифр. Дис. науч. 60, 127–135. doi: 10.1007/s10620-014-3261-9

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Zhang, X.X., Deng, L.H., Chen, W.W., Shi, N., Jin, T., Lin, Z.Q., et al. (2017). Циркулирующая микроРНК 216 как маркер раннего выявления тяжелого острого панкреатита. утра. Дж. Мед. науч. 353, 178–186. doi: 10.1016/j.amjms.2016.12.007

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Чжао Ю., Ван Х. и Лу М. (2016). Ацинарные клетки поджелудочной железы используют микроРНК в качестве медиаторов межклеточной коммуникации для участия в регуляции активации макрофагов, ассоциированной с панкреатитом. Медиаторы воспаления. 2016:6340457. дои: 10.1155/2016/6340457

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Чжу, Х., Huang, L., Zhu, S., Li, X., Li, Z., Yu, C., et al. (2016). Регуляция аутофагии путем системного приема микроРНК-141 для мишени HMGB1 при остром панкреатите, индуцированном L-аргинином , in vivo . Панкреатология 16, 337–346. doi: 10.1016/j.pan.2016.03.004

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Дефицит протеинтирозинфосфатазы Т-клеток поджелудочной железы облегчает течение острого панкреатита, вызванного церулеином | Cell Communication and Signaling

  • Baron TH, Morgan DE: Острый некротизирующий панкреатит.N Engl J Med. 1999, 340: 1412-1417. 10.1056/NEJM1993401807.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Джа Р.К., Ма К., Ша Х., Палихе М.: Острый панкреатит: обзор литературы. Медицинский научный монит. 2009, 15: RA147-RA156.

    ПабМед Google ученый

  • Whitcomb DC: Клиническая практика. Острый панкреатит. N Engl J Med. 2006, 354: 2142-2150. 10.1056/NEJMcp054958.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Pandol SJ, Saluja AK, Imrie CW, Banks PA: Острый панкреатит: скамья у постели больного. Гастроэнтерология. 2007, 132: 1127-1151. 10.1053/ж.гастро.2007.01.055.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Saluja AK, Donovan EA, Yamanaka K, Yamaguchi Y, Hofbauer B, Steer ML: Индуцированная церулином активация трипсиногена in vitro в ацинусах поджелудочной железы крыс опосредована катепсином B.Гастроэнтерология. 1997, 113: 304-310. 10.1016/С0016-5085(97)70108-2.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Биалек Р., Виллемер С., Арнольд Р., Адлер Г. Доказательства внутриклеточной активации сериновых протеаз при остром церулеин-индуцированном панкреатите у крыс. Scand J Гастроэнтерол. 1991, 26: 190-196. 10.3109/0036552910

    30.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Нарусэ С.: Молекулярная патофизиология панкреатита.Интерн Мед. 2003, 42: 288-289. 10.2169/внутренняя медицина.42.288.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Лерх М.М., Горелик Ф.С.: Модели острого и хронического панкреатита. Гастроэнтерология. 2013, 144: 1180-1193. 10.1053/j.gastro.2012.12.043.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Jensen RT, Wank SA, Rowley WH, Sato S, Gardner JD: Взаимодействие CCK с ацинарными клетками поджелудочной железы.Trends Pharmacol Sci. 1989, 10: 418-423. 10.1016/0165-6147(89)

    -2.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Sato S, Stark HA, Martinez J, Beaven MA, Jensen RT, Gardner JD: Оккупация рецепторов, мобилизация кальция и высвобождение амилазы в ацинусах поджелудочной железы: эффект CCK-JMV-180. Am J Physiol. 1989, 257: G202-G209.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Willemer S, Elsasser HP, Adler G: Панкреатит, вызванный гормонами.Евро Surg Res. 1992, 24 (Приложение 1): 29-39.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Гуковский И., Гуковская А.С., Блинман Т.А., Занинович В., Пандол С.Дж.: Ранняя активация NF-kappaB связана с гормон-индуцированным панкреатитом. Am J Physiol. 1998, 275: G1402-G1414.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Ким Х. Церулеиновый панкреатит: окислительный стресс, воспаление и апоптоз.Кишечник Печень. 2008, 2: 74-80. 10.5009/гл.2008.2.2.74.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Лутц М.П., ​​Сутор С.Л., Абрахам Р.Т., Миллер Л.Дж.: Роль стимулированного холецистокинином фосфорилирования белка тирозина в регулируемой секреции ацинарными клетками поджелудочной железы. Дж. Биол. Хим. 1993, 268: 11119-11124.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Ривард Н., Лебель Д., Лейн Дж., Мориссет Дж. Регуляция активности тирозинкиназы и фосфатазы поджелудочной железы с помощью холецистокинина и соматостатина.Am J Physiol. 1994, 266: G1130-G1138.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Сармьенто Н., Санчес-Бернал С., Айра М., Перес Н., Эрнандес-Эрнандес А., Кальво Дж.Дж., Санчес-Ягуе Дж.: Изменения в экспрессии и динамике SHP-1 и SHP-2 во время индуцированного церулином острого панкреатит у крыс. Биохим Биофиз Акта. 2008, 1782: 271-279. 10.1016/j.bbadis.2008.01.005.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Sarmiento N, Sanchez-Bernal C, Perez N, Sardina JL, Mangas A, Calvo JJ, Sanchez-Yague J: Rolipram и SP600125 подавляют раннее увеличение экспрессии PTP1B во время индуцированного церулином панкреатита у крыс.Поджелудочная железа. 2010, 39: 639-645. 10.1097/MPA.0b013e3181c314b3.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Тиганис Т., Беннетт А.М.: Функция протеинтирозинфосфатазы: перспектива субстрата. Биохим Дж. 2007, 402: 1-15. 10.1042/BJ20061548.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Tiganis T, Bennett AM, Ravichandran KS, Tonks NK: Рецептор эпидермального фактора роста и адапторный белок p52Shc являются специфическими субстратами протеинтирозинфосфатазы Т-клеток.Мол Селл Биол. 1998, 18: 1622-1634.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Ibarra-Sanchez MJ, Simoncic PD, Nestel FR, Duplay P, Lapp WS, Tremblay ML: Т-клеточный протеинтирозинфосфатаза. Семин Иммунол. 2000, 12: 379-386. 10.1006/смим.2000.0220.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Lam MH, Michell BJ, Fodero-Tavoletti MT, Kemp BE, Tonks NK, Tiganis T: Клеточный стресс регулирует ядерно-цитоплазматическое распределение протеинтирозинфосфатазы TCPTP.Дж. Биол. Хим. 2001, 276: 37700-37707. 10.1074/jbc.M105128200.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Galic S, Klingler-Hoffmann M, Fodero-Tavoletti MT, Puryer MA, Meng TC, Tonks NK, Tiganis T: Регуляция передачи сигналов рецептора инсулина протеинтирозинфосфатазой TCPTP. Мол Селл Биол. 2003, 23: 2096-2108. 10.1128/МКВ.23.6.2096-2108.2003.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Persson C, Savenhed C, Bourdeau A, Tremblay ML, Markova B, Bohmer FD, Haj FG, Neel BG, Elson A, Heldin CH, Rönnstrand L, Ostman A, Hellberg C: сайт-селективная регуляция тромбоцитов. Фосфорилирование тирозина рецептора бета-производного фактора роста с помощью Т-клеточного белка тирозинфосфатазы.Мол Селл Биол. 2004, 24: 2190-2201. 10.1128/МКБ.24.5.2190-2201.2004.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • van Vliet C, Bukczynska PE, Puryer MA, Sadek CM, Shields BJ, Tremblay ML, Tiganis T: Селективная регуляция индуцированной фактором некроза опухоли передачи сигналов Erk с помощью киназ семейства Src и протеинтирозинфосфатазы Т-клеток. Нат Иммунол. 2005, 6: 253-260. 10.1038/ni1169.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Simoncic PD, Lee-Loy A, Barber DL, Tremblay ML, McGlade CJ: Протеин-тирозинфосфатаза Т-клеток является негативным регулятором киназ семейства janus 1 и 3.Карр Биол. 2002, 12: 446-453. 10.1016/S0960-9822(02)00697-8.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Фукусима А., Лох К., Галич С., Фам Б., Шилдс Б., Виде Ф., Тремблей М.Л., Ватт М.Дж., Андрикопулос С., Тиганис Т.: Т-клеточный протеинтирозинфосфатаза ослабляет сигнал STAT3 и инсулина в печени для регуляции глюконеогенез. Диабет. 2010, 59: 1906-1914. 10.2337/db09-1365.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • тен Хоев Дж., де Хесус Ибарра-Санчес М., Фу Ю., Чжу В., Тремблей М., Дэвид М., Шуай К.: Идентификация ядерной протеинтирозинфосфатазы Stat1.Мол Селл Биол. 2002, 22: 5662-5668. 10.1128/МКБ.22.16.5662-5668.2002.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Lu X, Chen J, Sasmono RT, Hsi ED, Sarosiek KA, Tiganis T, Lossos IS: T-клеточный протеинтирозинфосфатаза, отчетливо экспрессируемый в активированных B-клетках диффузных крупноклеточных B-клеточных лимфомах. ядерная фосфатаза STAT6. Мол Селл Биол. 2007, 27: 2166-2179. 10.1128/МКБ.01234-06.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Шилдс Б.Дж., Виде Ф., Гурзов Э.Н., Ви К., Хаузер С., Чжу Х.Дж., Моллой Т.Дж., О’Тул С.А., Дейли Р.Дж., Сазерленд Р.Л., Митчелл К.А., Маклин К.А., Тиганис Т.: TCPTP регулирует SFK и STAT3 передачи сигналов и теряется при тройном негативном раке молочной железы.Мол Селл Биол. 2013, 33: 557-570. 10.1128/МКБ.01016-12.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Лох К., Фукусима А., Чжан Х., Галич С., Бриггс Д., Энриори П.Дж., Саймондс С., Виде Ф., Райхенбах А., Хаузер С., Симс Н.А., Бенс К.К., Чжан С., Чжан З.И., Кан Б.Б., Нил BG, Эндрюс З.Б., Коули М.А., Тиганис Т.: Повышенный гипоталамический TCPTP при ожирении способствует клеточной резистентности к лептину. Клеточный метаб. 2012, 14: 684-699.

    Артикул Google ученый

  • You-Ten KE, Muise ES, Itie A, Michaliszyn E, Wagner J, Jothy S, Lapp WS, Tremblay ML: Нарушение микроокружения костного мозга и иммунной функции у мышей с дефицитом тирозинфосфатазы Т-клеток. J Эксперт Мед. 1997, 186: 683-693. 10.1084/джем.186.5.683.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Heinonen KM, Nestel FP, Newell EW, Charette G, Seemayer TA, Tremblay ML, Lapp WS: Делеция протеинтирозинфосфатазы Т-клеток приводит к прогрессирующему системному воспалительному заболеванию.Кровь. 2004, 103: 3457-3464. 10.1182/кровь-2003-09-3153.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Wiede F, Shields BJ, Chew SH, Kyparissoudis K, van Vliet C, Galic S, Tremblay ML, Russell SM, Godfrey DI, Tiganis T: Т-клеточный протеинтирозинфосфатаза ослабляет передачу сигналов Т-клеток для поддержания толерантности у мышей. Джей Клин Инвест. 2011, 121: 4758-4774. 10.1172/JCI59492.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Loh K, Merry TL, Galic S, Wu BJ, Watt MJ, Zhang S, Zhang ZY, Neel BG, Tiganis T: Дефицит Т-клеточной протеинтирозинфосфатазы (TCPTP) в мышцах не влияет на передачу сигналов инсулина и гомеостаз глюкозы у мышей.Диабетология. 2012, 55: 468-478. 10.1007/с00125-011-2386-з.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Беттайеб А., Лю С., Си Й., Нагата Н., Мацуо К., Мацуо И., Чахед С., Бакке Дж., Кейлхак Х., Тиганис Т., Хай Ф.Г.: Дифференциальная регуляция стресса эндоплазматического ретикулума протеинтирозинфосфатазой 1B и T клеточный протеинтирозинфосфатаза. Дж. Биол. Хим. 2011, 286: 9225-9235. 10.1074/jbc.M110.186148.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Espino-Paisan L, de la Calle H, Fernandez-Arquero M, Figueredo MA, de la Concha EG, Urcelay E, Santiago JL: Полиморфизм гена PTPN2 связан с более ранним началом диабета 1 типа.Иммуногенетика. 2011, 63: 255-258. 10.1007/s00251-010-0500-х.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Moore F, Colli ML, Cnop M, Esteve MI, Cardozo AK, Cunha DA, Bugliani M, Marchetti P, Eizirik DL: PTPN2, ген-кандидат для диабета 1 типа, модулирует интерферон-гамма-индуцированную бета-индуцированную поджелудочную железу. клеточный апоптоз. Диабет. 2009, 58: 1283-1291. 10.2337/db08-1510.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Сантин И., Мур Ф., Колли М.Л., Гурзов Е.Н., Марселли Л., Маркетти П., Эйзирик Д.Л.: PTPN2, ген-кандидат диабета 1 типа, модулирует апоптоз бета-клеток поджелудочной железы посредством регуляции белка Bim, содержащего только Bh4 .Диабет. 2011, 60: 3279-3288. 10.2337/db11-0758.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Wittel UA, Wiech T, Chakraborty S, Boss B, Lauch R, Batra SK, Hopt UT: Индуцированный таурохолатом панкреатит: модель тяжелого некротизирующего панкреатита у мышей. Поджелудочная железа. 2008, 36: е9-е21. 10.1097/МПА.0b013e3181575103.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Переда Дж., Перес С., Эскобар Дж., Ардуини А., Асенси М., Сервиддио Г., Сабатер Л., Апариси Л., Састре Дж.: У крыс с ожирением наблюдается высокий уровень некроза жира и изопростана при остром панкреатите, вызванном таурохолатом.ПЛОС Один. 2012, 7: e44383-10.1371/journal.pone.0044383.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Gu G, Dubauskaite J, Melton DA: Прямые доказательства происхождения поджелудочной железы: клетки NGN3+ являются предшественниками островков и отличаются от предшественников протоков. Разработка. 2002, 129: 2447-2457.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Норман Дж. Роль цитокинов в патогенезе острого панкреатита.Am J Surg. 1998, 175: 76-83. 10.1016/С0002-9610(97)00240-7.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Переда Дж., Сабатер Л., Апариси Л., Эскобар Дж., Сандовал Дж., Вина Дж., Лопес-Родас Г., Састре Дж.: Взаимодействие между цитокинами и окислительным стрессом при остром панкреатите. Курр Мед Хим. 2006, 13: 2775-2787. 10.2174/092986706778522011.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Leser HG, Gross V, Scheibenbogen C, Heinisch A, Salm R, Lausen M, Ruckauer K, Andreesen R, Farthmann EH, Scholmerich J: Повышение концентрации интерлейкина-6 в сыворотке предшествует острофазовому ответу и отражает тяжесть течения острый панкреатит.Гастроэнтерология. 1991, 101: 782-785.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Shigekawa M, Hikita H, Kodama T, Shimizu S, Li W, Uemura A, Miyagi T, Hosui A, Kanto T, Hiramatsu N, Tatsumi T, Takeda K, Akira S, Takehara T: STAT3 для поджелудочной железы защищает мышей против индуцированного церулеином панкреатита посредством индукции PAP1. Ам Джей Патол. 2012, 181: 2105-2113. 10.1016/j.ajpath.2012.08.038.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Schindler C, Levy DE, Decker T: Передача сигналов JAK-STAT: от интерферонов до цитокинов.Дж. Биол. Хим. 2007, 282: 20059-20063. 10.1074/jbc.R700016200.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Schafer C, Williams JA: Киназы стресса и белки теплового шока в поджелудочной железе: возможные роли в нормальной функции и заболевании. J Гастроэнтерол. 2000, 35: 1-9.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Baumann B, Wagner M, Aleksic T, von Wichert G, Weber CK, Adler G, Wirth T: конститутивной активации IKK2 в ацинарных клетках достаточно, чтобы вызвать панкреатит in vivo.Джей Клин Инвест. 2007, 117: 1502-1513. 10.1172/JCI30876.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Chen X, Ji B, Han B, Ernst SA, Simeone D, Logsdon CD: активация NF-kappaB в поджелудочной железе вызывает панкреатическую и системную воспалительную реакцию. Гастроэнтерология. 2002, 122: 448-457. 10.1053/гаст.2002.31060.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Vaquero E, Gukovsky I, Zaninovic V, Gukovskaya AS, Pandol SJ: Локализованная активация NF-kappaB поджелудочной железы и воспалительная реакция при панкреатите, вызванном таурохолатом.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2001, 280: G1197-G1208.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Bonizzi G, Karin M: Два пути активации NF-kappaB и их роль во врожденном и адаптивном иммунитете. Тренды Иммунол. 2004, 25: 280-288. 10.1016/j.it.2004.03.008.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Yang F, Tang E, Guan K, Wang CY: IKK бета играет важную роль в фосфорилировании RelA/p65 на серине 536, индуцированном липополисахаридом.Дж Иммунол. 2003, 170: 5630-5635.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Schroder M, Kaufman RJ: Реакция развернутого белка млекопитающих. Анну Рев Биохим. 2005, 74: 739-789. 10.1146/annurev.biochem.73.011303.074134.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Кауфман Р.Дж., Шойнер Д., Шредер М., Шен Х., Ли К., Лю С.И., Арнольд С.М.: Реакция развернутого белка при восприятии и дифференциации питательных веществ.Nat Rev Mol Cell Biol. 2002, 3: 411-421. 10.1038/nrm829.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Рон Д., Уолтер П.: Интеграция сигнала в реакцию развернутого белка эндоплазматического ретикулума. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007, 8: 519-529. 10.1038/nrm2199.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Lugea A, Tischler D, Nguyen J, Gong J, Gukovsky I, French SW, Gorelick FS, Pandol SJ: Ответ адаптивного развернутого белка ослабляет вызванное алкоголем повреждение поджелудочной железы.Гастроэнтерология. 2011, 140: 987-997. 10.1053/ж.гастро.2010.11.038.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Эйзирик Д.Л., Кардозо А.К., Кноп М.: Роль стресса эндоплазматического ретикулума при сахарном диабете. Endocr Rev. 2008, 29: 42-61. 10.1210/er.2007-0015.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Fischer U, Janicke RU, Schulze-Osthoff K: Много сокращений, чтобы разрушить: всестороннее обновление субстратов каспазы.Смерть клеток 2003, 10: 76-100. 10.1038/sj.cdd.4401160.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Dahmer MK: Каспазы-2, -3 и -7 участвуют в индуцированном тапсигаргином апоптозе клеток нейробластомы SH-SY5Y. J Neurosci Res. 2005, 80: 576-583. 10.1002/jnr.20471.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Ji B, Chen XQ, Misek DE, Kuick R, Hanash S, Ernst S, Najarian R, Logsdon CD: Экспрессия генов поджелудочной железы во время инициации острого панкреатита: идентификация EGR-1 как ключевого регулятора.Физиол Геномика. 2003, 14: 59-72.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • David M, Chen HE, Goelz S, Larner AC, Neel BG: Дифференциальная регуляция альфа/бета-интерферон-стимулированного пути Jak/Stat с помощью домена Sh3, содержащего тирозинфосфатазу SHPTP1. Мол Селл Биол. 1995, 15: 7050-7058.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Yin T, Shen R, Feng GS, Yang YC: Молекулярная характеристика специфических взаимодействий между фосфатазой SHP-2 и тирозинкиназами JAK.Дж. Биол. Хим. 1997, 272: 1032-1037. 10.1074/jbc.272.2.1032.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Myers MP, Andersen JN, Cheng A, Tremblay ML, Horvath CM, Parisien JP, Salmeen A, Barford D, Tonks NK: TYK2 и JAK2 являются субстратами протеинтирозинфосфатазы 1B. Дж. Биол. Хим. 2001, 276: 47771-47774.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Bae GS, Kim MS, Jeong J, Lee HY, Park KC, Koo BS, Kim BJ, Kim TH, Lee SH, Hwang SY, Shin YK, Song HJ, Park SJ: Пиперин уменьшает выраженность церулеин- индуцированный острый панкреатит путем ингибирования активации митоген-активируемых протеинкиназ.Biochem Biophys Res Commun. 2011, 410: 382-388. 10.1016/j.bbrc.2011.05.136.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Zhang XP, Zhang L, Chen LJ, Cheng QH, Wang JM, Cai W, Shen HP, Cai J: Влияние дексаметазона на медиаторы воспаления и экспрессию NF-kappaB во многих органах крыс с тяжелым острым панкреатитом. Мир J Гастроэнтерол. 2007, 13: 548-556.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Akira S, Nishio Y, Inoue M, Wang XJ, Wei S, Matsusaka T, Yoshida K, Sudo T, Naruto M, Kishimoto T: Молекулярное клонирование APRF, нового IFN-стимулированного гена, связанного с фактором 3 p91 фактор транскрипции, участвующий в сигнальном пути, опосредованном gp130.Клетка. 1994, 77: 63-71. 10.1016/0092-8674(94)-6.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Wagner AC, Metzler W, Hofken T, Weber H, Goke B: киназа p38 map экспрессируется в поджелудочной железе и немедленно активируется после гиперстимуляции церулеином. пищеварение. 1999, 60: 41-47. 10.1159/000007587.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Hofken T, Keller N, Fleischer F, Goke B, Wagner AC: Карткиназные фосфатазы (MKP) являются ранними чувствительными генами во время индукции панкреатита с гиперстимуляцией церулеина.Biochem Biophys Res Commun. 2000, 276: 680-685. 10.1006/bbrc.2000.3530.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Tapia JA, Ferris HA, Jensen RT, Garcia LJ: Холецистокинин активирует PYK2/CAKbeta с помощью фосфолипазы C-зависимого механизма и его ассоциации с митоген-активируемым сигнальным путем протеинкиназы в ацинарных клетках поджелудочной железы. Дж. Биол. Хим. 1999, 274: 31261-31271. 10.1074/jbc.274.44.31261.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Minutoli L, Altavilla D, Marini H, Passaniti M, Bitto A, Seminara P, Venuti FS, Famulari C, Macri A, Versaci A, Squadrito F: Защитное действие SP600125, нового ингибитора c-jun N- терминальная киназа (JNK) и внеклеточно-регулируемая киназа (ERK1/2) в экспериментальной модели церулеин-индуцированного панкреатита.Жизнь наук. 2004, 75: 2853-2866. 10.1016/j.lfs.2004.03.040.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Iida K, Li Y, McGrath BC, Frank A, Cavener DR: PERK eIF2 альфа-киназа необходима для регуляции жизнеспособности экзокринной поджелудочной железы у мышей. BMC клеточная биология. 2007, 8: 38-10.1186/1471-2121-8-38.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Wiede F, Chew SH, van Vliet C, Poulton IJ, Kyparissoudis K, Sasmono T, Loh K, Tremblay ML, Godfrey DI, Sims NA, Tiganis T: Различия в развитии костей, зависящие от напряжения, миелоидная гиперплазия, заболеваемость и смертность у мышей с дефицитом ptpn2.ПЛОС Один. 2012, 7: e36703-10.1371/journal.pone.0036703.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Wiede F, La Gruta NL, Tiganis T: PTPN2 ослабляет пролиферацию, вызванную лимфопенией Т-клеток. Нац коммун. 2014, 5: 3073-

    ПабМед Статья Google ученый

  • HNF1A — новый онкоген, который регулирует свойства стволовых клеток рака поджелудочной железы человека

    Основные баллы:

    1) Несоответствие используемых клеточных линий:

    В исследовании используются несколько клеточных линий (т.е. NY5, NY8, NY15, NY90). Хотя полезно иметь несколько клеточных линий, во многих случаях кажется, что они выбираются случайным образом и главным образом для подтверждения гипотезы авторов. Это значительно ослабляет исследование. Некоторые примеры этого включают:

    A) На фигуре 2A видно, что экспрессия HNF1A практически отсутствует в NY8 или NY15, и, что удивительно, на фигуре 2B они затем проводят нокдауны в тех клеточных линиях, которые в предыдущем Вестерн-блоттинге выглядели практически без экспрессии. Если NY8 не имеет экспрессии HNF1A, то как они статистически количественно оценили эффект нокдауна?

    B) Используя миРНК против HNF1A (рис. 2C), авторы показали, что истощение HNF1A сильно ослабляет рост первичных клеток PDA NY5, NY8 и NY15 и оказывает более скромный эффект на NY90.Популяция P2 также снижается после истощения HNF1A в этих линиях (рис. 3A), но статистических данных, подтверждающих это, нет. Авторы предполагают, что базальные уровни HNF1A могут предсказывать зависимость, но неясно, имеет ли линия NY90 более низкие уровни белка HNF1A, чем другие линии. Кроме того, может показаться, что корреляция уровней HNF1A конкретно в популяции P2 с зависимостью будет более соответствовать предложенной авторами модели, согласно которой HNF1A выполняет специфические функции в этой субпопуляции клеток.Эти вопросы можно прояснить, связав реакцию на нокдаун HNF1A и экспрессию в популяции P2, а также добавив в анализ дополнительные строки.

    Мы согласны с тем, что уровни HNF1A в использованных клеточных линиях могли быть запутанными в исходной заявке, и мы изменили конфигурацию рисунков, а также добавили многочисленные дополнительные новые вестерн-блоты, чтобы продемонстрировать данные экспрессии более надежным способом. Мы сосредоточили наши исследования на 3 первичных линиях PDA человека с низким пассажем (NY5, NY8, NY15) и использовали их на протяжении всей рукописи для обеспечения согласованности.Кроме того, на протяжении всей рукописи был добавлен количественный анализ вестерн-блотов, чтобы помочь с интерпретацией, включая тот факт, что белок HNF1A повышен в субпопуляции P2 (EPCAM+/CD44+) и что экспрессия HNF1A тесно связана с экспрессией маркера PCSC.

    C) На рисунке 4 авторы снова используют линию NY8, которая практически не показывает экспрессии HNF1A, но это линия, которую они ранее (на рисунке 3E) использовали для поддержки экспериментов по нокдауну и уменьшения образования опухолевых сфер.Как они объясняют это несоответствие?

    Мы включили четкие данные вестерн-блоттинга (рис. 2А) и экспрессии мРНК (рис. 2 — дополнение к рисунку 1А), которые демонстрируют экспрессию HNF1A в клетках NY8. Кроме того, мы продемонстрировали, что как нокдаун (рис. 3C-E), так и сверхэкспрессия HNF1A (рис. 4B и 4E) в значительной степени коррелируют с образованием опухолесферы.

    D) На Рисунке 1 — приложение к рисунку 1 они используют NY8 для Рисунка 1 — дополнение к рисунку 1C, но затем NY15 для Рисунка 1 — дополнение к рисунку 1D.Точно так же для Рисунка 1 — приложение к рисунку 2 они используют NY15 для Рисунка 1 — дополнение к рисунку 2D, а затем непонятно, что они использовали для Рисунка 1 — дополнение к рисунку 2E.

    Эти несоответствия затрудняют понимание рукописи. Чтобы решить эту проблему, авторам необходимо предоставить согласованные данные по клеточным линиям для каждого проведенного ими анализа. Если конкретная клеточная линия не подходит, им необходимо объяснить обоснование выбора именно этой линии. Кроме того, важно, чтобы они обеспечивали статистический анализ каждого выполненного анализа.

    Как указано выше, мы оптимизировали использование согласованных первичных клеточных линий PDA на протяжении всей рукописи. Кроме того, мы предоставили статистический анализ для каждого анализа, проведенного на протяжении всей рукописи.

    2) HNF1A как маркер РСК в сравнении с онкогеном

    Из данных ясно, что HNF1A способствует росту клеток PDAC и, таким образом, вероятно, является важным онкогеном. Однако менее ясно, действительно ли это маркер CSC или просто онкоген, способствующий росту.На рисунке 1C не видно большого обогащения HNF1A в клетках NY8, и фактически коэкспрессия CD44 оказывается ниже во фракции P2.

    На протяжении всей рукописи мы предоставляем четкие данные о том, что HNF1A активируется в клетках NY8 в популяции P2 и что эта популяция обладает функциональностью CSC, включая самообновление, экспрессию маркеров раковых стволовых клеток, образование сфер и повышенную инициацию опухоли. В дополнение к дифференциально экспрессируемой мРНК HNF1A, количественно определенной на рисунке 1C, было добавлено количественное определение уровней белка HNF1A из отсортированных NY5, NY8 и NY15, чтобы прояснить связь экспрессии HNF1A и субпопуляции P2.Клетки в субпопуляции P2 экспрессируют средние уровни EPCAM и CD44 по сравнению с P1 и P3 (рис. 1 — дополнение к рисунку 1B), и поэтому мы повторно описали клетки P2 как «CD44 Med / EPCAM Med ». ».

    На рисунке 1D фракция DPP, которая, как они утверждают, является мишенью HNF1A, не выглядит особенно обогащенной в популяции P2 в линии NY5. В том же духе, на рисунке 1 — дополнение к рисунку 1, по-видимому, не наблюдается какого-либо обогащения HNF1A во фракции стволовых клеток в клетках NY5.

    Для решения проблем, связанных с экспрессией DPP4, дополнительной известной мишени транскрипции HNF1A, мы включили количественные вестерн-блоты, чтобы подтвердить, что DPP4 наиболее сильно экспрессируется в субпопуляции P2 (рис. 1 — дополнение к рисунку 1B), подобно HNF1A и CDh27. .

    Не может ли уменьшение опухолевых сфер на рис. 3Е быть просто следствием более низкой скорости пролиферации, как показано на рис. 2? Это, по-видимому, не поддерживает функцию стволовых клеток в такой степени, как функцию пролиферации.

    Образование опухолевидных сфер является хорошо зарекомендовавшим себя показателем функции РСК in vitro. На рисунках 1C и 1D мы показываем, что субпопуляции клеток PDA P1 и P3, у которых снижена экспрессия HNF1A, также заметно снижены в своей способности образовывать опухолевые сферы без каких-либо дополнительных нарушений (т.е. нокдауна HNF1A). Кроме того, экспрессия HNF1A повышена в опухолевых сферах (рис. 1 — дополнение к рисунку 2). На рисунках 3 и 4 мы демонстрируем, что изменение экспрессии HNF1A в клетках PDA приводит к увеличению или уменьшению активности формирования опухолевых сфер способом, который соответствует уровням экспрессии HNF1A.В совокупности эти данные подтверждают тесную связь между уровнями HNF1A и образованием опухолевых сфер. Наконец, рисунок 6 и рисунок 6 — дополнение к рисунку 2 демонстрируют, что OCT4 является механистической связью между HNF1A и образованием сфер, и что важно, что нокдаун OCT4 не влияет на клеточный цикл или апоптоз в клетках PDA (рисунок 6 — дополнение к рисунку 2).

    На рисунке 4C авторы снова переключаются на клетки NY15 по неясным причинам, но более серьезная проблема с рисунком 4, однако, заключается в том, что на самом деле это не аргумент в пользу функции CSC, а в основном аргумент в пользу того, что HNF1A действует как классический онкоген. это приводит к большему образованию колоний (рис. 4F и 4G) и взаимодействует с KRAS (рис. 4H и 4I).

    Обновленный рисунок 4 теперь содержит гиперэкспрессию HNF1A в трех основных моделях PDA (NY8, NY15 и NY53) по всему рисунку. Цель использования этих клеток, которая состояла в том, чтобы проверить, может ли сверхэкспрессия HNF1A дополнительно способствовать экспрессии маркера CSC и образованию опухолевых сфер в клетках PDA с различными эндогенными уровнями HNF1A, теперь четко указана в результатах. Результаты показывают, что сверхэкспрессия HNF1A увеличивает как экспрессию маркера CSC, так и образование опухолевых сфер, что согласуется с данными нокдауна на рисунке 3.

    Мы согласны с рецензентом в том, что HNF1A способен действовать как онкоген, и выбрали это предлагаемое обозначение во всей пересмотренной рукописи, включая заголовок. Тем не менее, наши данные также подтверждают, что часть его онкогенной активности осуществляется за счет регуляции функции PCSC, как и другие онкогены, которые мы и другие идентифицировали, такие как NOTCH (Abel et al., 2014), BMI1 (Proctor et al., 2013) , c-MET (Li et al., 2011a; Li et al., 2011b) и NRAS (Li et al., 2013).

    В том же духе, на рис. 5 авторы используют мышиные ксенотрансплантаты, чтобы доказать, что HNF1A является маркером CSC с исследованиями нокдауна.Но анализы, которые они провели на рис. 5A-C, на самом деле просто доказывают, что это онкоген. Чтобы показать функцию стволовых клеток, им потребуется провести серию трансплантаций и анализ предельных разведений.

    Мы согласны с рецензентом в том, что анализ предельных разведений является ценным методом оценки функции РСК. Из-за временных ограничений, наложенных на пересмотр, этот анализ был невозможен. Однако, чтобы признать эти опасения, мы приняли формулировку, что HNF1A действует как онкоген, который регулирует свойства PSCS.В подтверждение последнего утверждения мы демонстрируем повышенную экспрессию HNF1A в популяции РСК, способную к самообновлению и образованию разнообразного потомства, наблюдаемую в исходном образце опухоли (рис. 1 и рис. 1 — дополнение к рисунку 1), повышенную экспрессию HNF1A в условия формирования опухолевой сферы (рис. 1 — дополнение к рисунку 2), способность HNF1A регулировать экспрессию маркеров РСК (рис. 3 и 4 и соответствующие дополнения к рисунку) и усиление роста опухоли (рис. 5 и рис. 5 — дополнение к рисунку 1). ).В пересмотренной рукописи мы также предоставляем новые данные (рис. 6; рис. 6 — дополнения к рисунку 1 и 2), что HNF1A связан с белком стволовых клеток OCT4 в качестве критического нижестоящего медиатора функции HNF1A посредством его прямого взаимодействия с его дистальным промотором. .

    Мы пришли к выводу, что HNF1A присоединяется к группе онкобелков, которые регулируют активность раковых стволовых клеток (например, c-MET, NOTCH, BMI1 и т. д.).

    Я не уверен, что именно должны показать данные на рис. 5C, поскольку опухоли subq не очень значимы с физиологической точки зрения, но именно здесь они показывают истощение популяции EPCAM/CD44/CD24 – почему это не было сделано в опухоли поджелудочной железы вместо этого?

    Ранее мы показали, что анализы, оценивающие функцию PCSC, аналогичны в экспериментах по ортотопической и подкожной имплантации «голова к голове» (Li et al., 2007; Li et al., 2011a), демонстрируя, что подкожная модель столь же эффективна, как и ортотопическая модель в определении функции PCSC. В соответствии с нашими предыдущими выводами, как ортотопические, так и подкожные анализы опухоли дали аналогичные результаты в отношении роста опухоли в этом исследовании. Кроме того, ортотопические опухоли были помечены GFP-люциферазой, что предотвратило использование проточной цитометрии для количественного определения PCSC. Немеченые клетки использовали для моделей подкожной опухоли, что позволяло окрашивать PCSC.Результаты этих двух экспериментов дополняют друг друга.

    Кроме того, на рис. 5D, по-видимому, не наблюдается значительного нокдауна в HNF1A#2, так почему тогда они видят это количественное определение в клетках NY5 на рис. 5E?

    Мы предоставили более четкое репрезентативное изображение на рисунке 5D, чтобы продемонстрировать, что кшРНК #2 HNF1A обеспечивает значительный эффект нокдауна, а совокупные результаты на рисунке 5E показывают эффективность нокдауна HNF1A в истощении популяции CSC in vivo (p<0.001 для обеих кшРНК).

    На рис. 6D авторы представляют данные о том, что нокдаун либо HNF1A, либо OCT4 уменьшает опухолесферу, но в соответствии с теми же линиями, которые отмечались ранее, эти клетки просто более больны и/или не пролиферируют? Это особенно верно для нокдауна OCT4 — как это влияет на рост или апоптоз? Фотография, показанная на рисунке 6G, предполагает, что клетки с нокдауном OCT4 не очень здоровы. Одним из способов решения этой проблемы является использование индуцируемых кшРНК и/или спасения кДНК, чтобы показать, что вы можете различить эффекты ингибирования роста по сравнению с просто больными клетками.

    Мы добавили новые данные, чтобы показать, что клетки PDA реагируют на нокдаун OCT4 в анализах опухолевой сферы (рис. 6E и 6I) и не показали значительных изменений в клеточном цикле (окрашивание йодидом пропидия) или апоптозе (окрашивание аннексином V) после нокдауна. OCT4 (рис. 6 — дополняет рис. 2А и 2В). Эти данные указывают на то, что нокдаун OCT4 не предотвращает образование туморосферы за счет гибели клеток или цитостаза в клетках PDA. Кроме того, OCT4 является хорошо зарекомендовавшим себя регулятором стволовых клеток (Okita et al., 2007; Takahashi and Yamanaka, 2006), и было показано, что он также играет роль в раковых стволовых клетках (Lu et al., 2013; Kumar et al., 2012; Nishi et al., 2013). Наши данные согласуются с канонической ролью OCT4 как ключевого регулятора стволовости как в нормальных клетках, так и в раковых.

    3) HNF1A/OCT4

    Важно показать данные ChIP-PCR HNF1A на промоторе OCT4 (упомянутом в обсуждении) и предоставить некоторые дополнительные сведения о предполагаемых элементах, участвующих в регуляции.Было бы желательно показать анализ промотора-репортера в этом локусе, чтобы продемонстрировать, что это действительно важно для его функции.

    Мы признательны за этот комментарий и фактически провели несколько дополнительных экспериментов, подтверждающих, что HNF1A связывается с промотором OCT4. Используя ChIP-PCR, мы смогли продемонстрировать обогащение промотора OCT4 LTR (Malakootian et al., 2017) (рис. 6 — дополнение к рисунку 1C), ранее упомянутое в обсуждении. Кроме того, мы смогли продемонстрировать, что этот регион функционирует как HNF1A-чувствительный промотор в анализах промотор-репортер (рис. 6 — дополнение к рисунку 1D).Эти данные подтверждают прямое регуляторное взаимодействие между HNF1A и промотором OCT4 LTR.

    4) Вопросы биоинформатики

    Более подробное описание методов ChIP-seq (описание экспериментов, повторы, количество пиков, соответствие повторов и т. д.) и анализ результатов этих экспериментов.

    Мы добавили дополнительные сведения о Bru-seq/ChIP-seq в раздел «Результаты, материалы и методы».

    Кроме того, было бы полезно более подробное описание объединенных результатов RNA-Seq и ChIP-seq, включая анализ мотивов промоторов генов, экспрессия которых была нарушена при нокдауне HNF1A (обогащен ли мотив OCT4? Есть ли другие кандидаты? Цели OCT4 также обогащены среди дерегулируемых генов?).

    Мы использовали анализ сверхпредставления, чтобы найти сайты связывания TF в промоторах HNF1A-чувствительных генов (полные результаты см. на рисунке 7D и в дополнительном файле 2). POU5F1 (OCT4) был предсказанным TF с наиболее высоким рейтингом для генов, репрессированных HNF1A. Мишени OCT4 действительно были обнаружены среди репрессированных HNF1A генов (теперь включенных в результаты).

    Более подробное изучение возможной роли удаленных регуляторных участков посредством анализа данных ENCODE для энхансерной активности также важно для подтверждения регуляторной роли генов-мишеней.

    Используя данные энхансера ENCODE из 6 объединенных клеточных линий, мы исследовали перекрытие пиков ChIP-seq с идентифицированными энхансерными областями. Для генов, связанных с HNF1A, представленных на рисунке 7B, мы указали долю генов с перекрывающимися пиками энхансера. Мы также добавили список объединенных областей энхансера и список пиков, указывающих на перекрытие или неперекрытие, в дополнительный файл 2. 72,7% генов, связанных с HNF1A, имели пики, перекрывающиеся по крайней мере в одной из этих предполагаемых областей энхансера, что позволяет предположить, что HNF1A имеет значительное взаимодействие с регулирующими регионами.

    Относительно анализа ассоциации с прогнозом: были ли эти анализы скорректированы для множественного тестирования?

    В представленном исходном анализе не применялась корректировка значения p перед выбором значимых генов. В процессе пересмотра этого вопроса мы решили использовать модель Cox PH для выживания, поскольку экспрессия генов является непрерывной переменной и, таким образом, хорошо подходит, вместо модели медианной стратификации, которую мы использовали ранее. Мы представляем пересмотренный анализ, показывающий как FDR 0.1 и 0,25 в качестве порогов отбора генов (рис. 7, рис. 7 — дополнение к рисунку 1). Тесты перестановки при разных порогах согласуются, что позволяет предположить, что порог выбора не является критическим.

    Были ли сигнатуры лучше, чем отдельные гены?

    Мы добавили дополнительный анализ набора данных TCGA. Тесты перестановки показали, что гены, активированные HNF1A, были значительно связаны с более плохими результатами по сравнению со случайно выбранными генами (вставки, рисунок 7E и рисунок 7 – рисунок 1A, дополнение; см. Материалы и методы для получения дополнительной информации).Эти данные дополнительно подтверждают онкогенную роль HNF1A в ОАП как прямого регулятора набора генов, связанных с плохой выживаемостью пациентов.

    Можно ли проверить данные в серии ICGC? Это актуальные вопросы, которые должны быть легко решены.

    Как и было предложено, мы применили наш анализ выживаемости к набору данных ICGC (когорта PACA-AU). Для активированных/связанных генов HNF1A таким образом было идентифицировано 7 перекрывающихся генов с использованием анализов как TCGA, так и ICGC.Результат ICGC контрастирует с результатом TCGA в том, что гены, связанные с повышенной выживаемостью, также были идентифицированы, тогда как в результате TCGA такие гены не были обнаружены (отклик автора, изображение 1). Вероятным источником этого несоответствия являются общие разногласия между моделями выживания с одним геном. При p < 0,01 (высокая значимость) очень немногие фоновые гены перекрываются между двумя наборами данных (ответ автора, изображение 2).

    Возможно, основное различие между наборами данных ICGC и TCGA заключается в относительно высоких требованиях к клеточности опухоли для образцов ICGC (не менее 40%) (Waddell et al., 2015; Бейли и др., 2016). Напротив, TCGA также использовал образцы с низкой клеточностью опухоли (Network, 2017), что является общим признаком PDA. Хотя неясно, объясняет ли это несоответствие между наборами данных критерий выбора выборки, мы, тем не менее, считаем, что использование более репрезентативной коллекции образцов TCGA оправдывает нашу зависимость от набора данных в нашем исследовании. Мы открыты для альтернативных решений, если рецензент не согласен.

    Сравнение соответствия фоновых генов TCGA и ICGC.

    Перекрытие всех генов слева, «UP» относится к генам повышенной выживаемости, «DN» относится к генам пониженной выживаемости.

    https://doi.org/10.7554/eLife.33947.035

    Могут ли авторы уточнить, коррелирует ли экспрессия OCT4 с экспрессией HNF1A в клеточных линиях PDA и в опухолях, и является ли OCT4 обогащенным в популяции P2?

    Используя анализ qRT-PCR для количественного определения уровней мРНК HNF1A и POU5F1 (OCT4) в 22 первичных клеточных линиях PDA, а также в клетках HPNE и HPDE, мы обнаружили значительную положительную корреляцию (r=0.5189, p = 0,0094, фигура 6C) между уровнями мРНК обоих генов. Кроме того, мы также обнаружили положительную корреляцию (r = 0,4064, p = 8,9×10 -8 , изображение ответа автора 3) между уровнями мРНК HNF1A и POU5F1 в данных о пациентах из TCGA. Однако мы не наблюдали значительной связи между мРНК POU5F1 и какой-либо из субпопуляций PDA (ответ автора, изображение 3). Это предполагает, что факторы, отличные от HNF1A, модулируют уровни мРНК POU5F1 в разных субпопуляциях PDA.

    https://дои.org/10.7554/eLife.33947.042

    Повышенная чувствительность к инсулину и сниженная функция бета-клеток поджелудочной железы у мышей Ercc1d/- с дефицитом репарации ДНК Ген репарации ДНК

    Ercc1 приводил к подавлению соматотропной оси.

    Ercc1 d/− у мышей наблюдались измененный энергетический обмен и повышенная чувствительность к инсулину.

    Площадь бета-клеток была уменьшена у мышей Ercc1 d/− .

    Бета-клетки мышей Ercc1 d/− показали снижение функции и выживаемости.

    Резюме

    История вопроса

    Диабет 2 типа (СД2) представляет собой возрастное заболевание, характеризующееся гипергликемией из-за резистентности к инсулину и снижением функции бета-клеток. Накопление повреждений ДНК было связано с СД2, но неясно, играет ли повреждение ДНК роль в патогенезе заболевания.Здесь мы использовали мышей с дефицитом гена эксцизионной репарации ДНК Ercc1 для изучения влияния накопления стойких эндогенных повреждений ДНК на энергетический обмен, гомеостаз глюкозы и функцию бета-клеток.

    Методы

    ERCC1-XPF представляет собой эндонуклеазу, необходимую для множественных путей репарации ДНК, и сниженная экспрессия ERCC1-XPF вызывает ускоренное накопление нерепарированных эндогенных повреждений ДНК и ускоренное старение у людей и мышей. В этом исследовании энергетический обмен, метаболизм глюкозы, функцию бета-клеток и чувствительность к инсулину изучали у мышей Ercc1 d/− , моделирующих человеческий прогероидный синдром.

    Результаты

    Ercc1 d/− у мышей наблюдалось подавление соматотропной оси и изменение энергетического метаболизма. Чувствительность к инсулину повышалась, тогда как уровни инсулина в плазме снижались у мышей Ercc1 d/− . Голодание вызывало гипогликемию у мышей Ercc1 d/− , что было результатом повышенного удаления глюкозы. У мышей Ercc1 d/− наблюдается значительно уменьшенная площадь бета-клеток даже по сравнению с контрольными мышами аналогичного веса.Стимулированная глюкозой секреция инсулина in vivo была снижена у мышей Ercc1 d/− . Островки, выделенные от мышей Ercc1 d/− , показали повышенные маркеры повреждения ДНК, снижение стимулированной глюкозой секреции инсулина и повышенную восприимчивость к апоптозу.

    Заключение

    Накопление спонтанных повреждений ДНК запускает адаптивный ответ, приводящий к повышению чувствительности к инсулину. Однако потеря репарации ДНК отрицательно влияет на выживаемость и функцию бета-клеток у мышей Ercc1 d/− .

    Собели

    FBP1

    FBP1

    Фруктоза-1,6-Biphosphatase 1

    G6PC

    глюкоза-6-фосфатаза

    G6PT

    G6PT

    Transporter 61122

    IGF1

    Insulin, как фактор роста

    PTTG

    гипофиз преобразование гена преобразования

    pygl pygl

    гликоген фосфорилаза

    RER

    респираторное обменное отношение

    RES

    Реакционноспособный кислород.

    TC-NER

    Ключевые слова

    ДНК Ремонт

    Энергетический метаболизм

    Гомеостаз глюкозы

    Функция бета-клеток

    Генотоксический стресс

    Соматотропная ось

    Рекомендуемые статьиСсылки на статьи (0)

    Автор © 2021 The(s).Опубликовано Elsevier Inc.

    Рекомендованные статьи

    Ссылки на статьи

    Макрофаг, обитающий в островках, находится в состоянии воспаления и ощущает микробные продукты в крови | Журнал экспериментальной медицины

    Мы выделили 3-недельные островковые макрофаги (CD45 + F4/80 + MHC-II + ), используя стратегию селекции, показанную на рис. S1 A. Обратите внимание, что 85–95% CD45 + Клетки в островках 3-недельных мышей NOD представляют собой макрофаги; остальные клетки в основном представляют собой Т-клетки CD3ε + (см. также Melli et al., 2009). (Предыдущая работа показала, что островки в возрасте 3 недель или ранее содержали В-клетки, нейтрофилы и пДК [Diana et al., 2013; Diana and Lehuen, 2014]. Однако наш экспериментальный анализ не воспроизвел эти результаты [рис. S2 и S3]. ].)

    Мы сравнили макрофаги, выделенные из NOD, NOD. Rag1 -/- и островки поджелудочной железы мышей B6.g7 для профилей экспрессии их генов с помощью секвенирования РНК (RNASeq) и экспрессии маркеров клеточной поверхности.Экспертиза НОД. Rag1 -/- Мыши и B6.g7 установили свои основные признаки независимо от аутоиммунного воспаления. Все мыши, использованные в этом исследовании, содержались в усовершенствованном барьерном учреждении, свободном от патогенов, развивались нормально и не имели никаких признаков инфекций.

    . .S1, В и С). Предварительный анализ данных об островковых макрофагах с использованием инструмента My GeneSet Immunological Genome Project (ImmGen) показал, что легочные и кишечные макрофаги наиболее близки к макрофагам островков (Heng et al., 2008). Мы выбрали макрофаги легких, чтобы определить как общие, так и уникальные сигнатуры экспрессии генов островковых макрофагов по сравнению с другими тканевыми макрофагами. (В ImmGen есть два аннотированных макрофага легких: «легкие CD11b + макрофаги», то есть CD11b hi CD11c + MHC-II + CD103 neg CD24 neg, и the macrophageg neg это CD11c + MHC-II отрицательный CD11b отрицательный CD103 отрицательный SiglecF + .Наш предварительный анализ показал высокое сходство между островковыми макрофагами и «легочными макрофагами CD11b + », что побудило нас изучить эту популяцию.) ДК XCR1 + представляют другую линию фагоцитов, которая имеет большое значение для инициации диабета ( Феррис и др., 2014). Отсутствие/недостаток этих ДК в островках в 3-недельном окне затрудняло их анализ, поэтому вместо этого мы изолировали их от PLN на основе их экспрессии XCR1. Эта комбинация тканей и типов клеток позволила нам задать несколько вопросов о транскрипционном профиле и биологии островковых макрофагов.

    Транскрипты с максимальной экспрессией в 3-недельных островковых макрофагах показали сходные значения (рис. 1, A-C). Гены домашнего хозяйства, такие как регуляторы транскрипции и гены клеточной структуры (т.е. Actb , Fosb и Hspa5 ), экспрессировались сравнительно (рис. 1А и таблица S1). Большинство канонических миелоидных генов были сопоставимо транскрибированы как в островковых макрофагах, так и в PLN DCs (Fig. 1B; Gautier et al., 2012).В эту группу были включены гены представления антигена MHC-II h3-Aa , h3-Ab1 , h3-Eb1 и Cd74 . Островковые макрофаги изначально не экспрессируют на своей поверхности одинаково высокие уровни MHC-II (Calderon et al., 2015). В возрасте 2 недель они имеют различные уровни MHC-II на своей поверхности. Однако к 4-недельному возрасту экспрессия MHC-II становится стабильно высокой (рис. S1D). В отличие от DC, высокая экспрессия генов MHC-II не является основным условием для всех резидентных в тканях макрофагов.Микроглия, большие перитонеальные макрофаги и альвеолярные макрофаги экспрессируют низкие уровни генов MHC-II и главного регулятора Ciita (на рис. S1E показаны данные ImmGen).

    Три дополнительных класса генов, являющихся неотъемлемой частью инициации адаптивного иммунного ответа, были высоко экспрессированы в островковых макрофагах: (1) костимулирующие молекулы, (2) молекулы распознавания образов (TLR) и (3) хемокины (рис. 1, D– ГРАММ). (1) Наиболее заметными костимулирующими генами были активирующие лиганды Cd86 и Pvr (CD155) и ингибирующие лиганды Lgals9 (галектин-9) и Cd274 (PD-L1; рис.1 Д). (2) Большинство генов TLR и адаптер белков были выражены на высоких уровнях, в том числе TLR1 , TLR2 , TLR3 , TLR4 , TLR6 , TLR7 , TLR8 , TLR9 , TLR12 и Tlr13 , что позволяет островковым макрофагам ощущать различные микробные паттерны (Fig. 1E; Kawai and Akira, 2011; Oldenburg et al., 2012; Koblansky et al., 2013). Напротив, XCR1 + DCs имели пониженную или отсутствующую экспрессию большинства TLR, за исключением Tlr3 , Tlr9 и Tlr11 .(3) экспрессия хемокина состояла из генов, способных привлекать миелоидные клетки ( CCL3 , CXCL14 ), макрофаги ( CCL9 , CXCL14 ), нейтрофилы ( CXCL1 , CXCL2 ), NK-клетки ( CCL3 ), NKT-клетки ( CXCL16 ), Т-клетки ( CCL4 , CXCL9 , CXCL10 , CXCL16 ) и регуляторные Т-клетки ( CXCL9 ; ИНЖИРАНИЕ. 1 F; MATLOUBIAN et al., 2000 ; Курт и др., 2001; Дюфур и др., 2002; Чжао и др., 2003 г.; Кастеллино и др., 2006 г.; Ямада и др., 2012; Гриффит и др., 2014). Наконец, Islet MacroОфаги экспрессировали хемокиновые рецепторы, найденные в воспалительных лейкоцитах ( CCR2 , CCR5 ), развивающиеся лейкоциты ( CXCR4 ), барьерные макрофаги ( CCR2 , CCR5 , CCRLL2 , CX3CR1 , CX3CR1 , CX3CR1 , CX3CR1 , CX3CR1 , CX3CR1 , CXCR1 ) и микроглия ( Cx3cr1 ), но комбинированный паттерн экспрессии которых больше всего напоминает барьерные макрофаги (рис.1 г; Готье и др., 2012 г.; Гриффит и др., 2014).

    Несколько миелоидных генов по-разному экспрессировались в островковых макрофагах по сравнению с PLN DCs. Среди них были Atf3 , Rasgef1b и Rgs1 (рис. 1Б). Atf3 находится ниже передачи сигналов TLR4 и действует как негативный регулятор экспрессии транскриптов цитокинов после обработки LPS (Gilchrist et al., 2006). Rasgef1b кодирует фактор обмена гуанин-нуклеотид, индуцируемый передачей сигналов TLR и, как полагают, активирующий Ras-подобные белки (Andrade et al., 2010). Rgs1 кодирует регулятор связанной с G-белком передачи сигналов, который противодействует передаче сигналов рецептора хемокинов (Reif and Cyster, 2000; Moratz et al., 2004). Полногеномные ассоциативные исследования связывают Rgs1 с глютеновой болезнью и диабетом типа 1, но его точная функция в аутоиммунитете плохо определена (Smyth et al., 2008). Все три из этих генов ( Atf3 , Rasgef1b и Rgs1 ) также высоко экспрессируются в макрофагах легких и кишечника (Heng et al., 2008).

    В целях проверки мы идентифицировали несколько рецепторов клеточной поверхности, используя систему классификации Panther (Mi et al., 2013, 2016). Таким образом, CD44, CD53, CD83 и TLR-7 были идентифицированы и подтверждены с помощью проточной цитометрии, как показано на рис. S1 F.

    .

    Идентификация и анализ взаимодействия молекулярных маркеров при аденокарциноме протоков поджелудочной железы с помощью интегрированного биоинформатического анализа и экспериментов по молекулярной докингу

    Введение

    Аденокарцинома протоков поджелудочной железы (PDAC) является одним из наиболее распространенных видов рака в мире и первичной опухолью поджелудочной железы [1] .PDAC занимает 15-е место в мире по заболеваемости и 4-е место по смертности [2]. Несмотря на новые разработки в мультимодальной терапии, ее общая 5-летняя выживаемость остается менее 8% [3]. Лечение PDAC обычно включает хирургическое вмешательство, лучевую терапию, химиотерапию и иммунотерапию [4]. Тем не менее, PDAC остается распространенным и злокачественным из-за рецидивов и метастазов и, в конечном итоге, является основной причиной смерти, связанной с PDAC [5]. Следовательно, существует насущная необходимость в разработке новых диагностических стратегий и терапевтических средств для улучшения прогноза у пациентов с PDAC.

    Молекулярные механизмы онкогенеза и развития PDAC остаются неточными. Поэтому важно идентифицировать новые гены и пути, которые связаны с онкогенезом PDAC и прогнозом пациента, что может не только помочь осветить основные задействованные молекулярные механизмы, но также раскрыть новые диагностические маркеры и терапевтические мишени. Oji et al [6] продемонстрировали, что избыточная экспрессия WT1 связана с прогнозом у пациентов с PDAC. В предыдущем исследовании сообщалось, что сигнальный путь фосфоинозитид-3-киназы связан с развитием PDAC [7].Профилирование экспрессии с помощью высокопроизводительного секвенирования может быстро выявить генную экспрессию на глобальной основе и особенно полезно для идентификации дифференциально экспрессируемых генов (DEG) [8]. С помощью микрочипов было создано огромное количество данных, и большая часть таких данных депонирована и сохранена в общедоступных базах данных. Предыдущие исследования, касающиеся профилирования экспрессии генов PDAC, диагностировали сотни DEG [9].

    Целью данного исследования было определение узловых генов и путей в PDAC с использованием методов биоинформатики.Наше исследование вносит предсказуемые биомаркеры для раннего выявления и прогноза, а также эффективные лекарственные мишени для лечения PDAC.

    Материалы и методы

    Данные секвенирования

    Профилирование экспрессии PDAC с помощью набора данных высокопроизводительного секвенирования в этом исследовании было загружено из базы данных GEO (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gds/) [10]. DEG учитывались 1 независимым набором данных PDAC, GSE133684 [11] с 284 PDAC и 117 нормальными образцами. Профилирование экспрессии GSE133684 по данным высокопроизводительного секвенирования было основано на платформе GPL20795 HiSeq X Ten (Homo sapiens)..

    Идентификация DEG

    Пакет Limma языка R использовался для нормализации и преобразования необработанных данных в профили выражений [12]. Пакет limma языка R использовался для DEG между PDAC и нормальными контрольными образцами [12]. Значение P было скорректировано по методу Бенджамини-Хохберга [13]. Скорректированное значение P <0,05 и |log2-кратное изменение (FC) | >1 считались пороговыми значениями для идентификации ДЭГ. Пакет ggplot2 и пакет gplots языка R использовались для создания графика вулкана и тепловой карты.Идентифицированные ДЭГ были сохранены для дальнейшего биоинформатического анализа.

    Анализ GO и анализ обогащения путей DEG

    Репозиторий GO (http://geneontology.org/) [14] состоит из большого набора аннотационных терминов и обычно используется для аннотирования генов и определения отличительных биологических аспектов для профилирование экспрессии по данным высокопроизводительного секвенирования. База данных REACTOME (https://reactome.org/) [15] содержит данные об известных генах и их биохимических функциях и используется для идентификации функциональных и метаболических путей.Выполняя анализ обогащения GO и REACTOME на функциональном уровне, мы можем лучше понять роль этих DEG в индукции и развитии PDAC. ToppGene (ToppFun) (https://toppgene.cchmc.org/enrichment.jsp) [16] — это онлайн-ресурс, добавляющий инструменты для функциональной аннотации и биоинформатического анализа. И категории GO, и анализ обогащения пути REACTOME были реализованы с использованием ToppGene для информирования о функциях этих DEG. Считалось, что P<0,05 указывает на статистически значимое различие.

    Построение сети белок-белкового взаимодействия (PPI) и модульный анализ

    Для построения сети PPI белков, кодируемых по ДЭГ. Затем было применено программное обеспечение Cytoscape (версия 3.8.1) [18] для выполнения сетевого анализа ассоциаций взаимодействия белков и анализа корреляции взаимодействия белков-кандидатов, кодируемых DEG в PDAC. Затем был применен плагин Network Analyzer Cytoscape для расчета степени узла [19], центральности по промежуточности [20], центральности по стрессу [21], центральности по близости [22].Наконец, модуль PEWCC1 (http://apps.cytoscape.org/apps/PEWCC1) [23] для Cytoscape использовался для сбора важных модулей в сетевом комплексе PPI.

    Построение регуляторной сети miRNA-DEG ​​

    База данных miRNet (https://www.mirnet.ca/) [24] представляет собой базу данных, содержащую miRNAs, вовлеченные в различные заболевания. МикроРНК, связанные с PDAC, искали в базе данных miRNet. Путем получения пересечения miRNAs и DEG были выбраны регуляторные отношения miRNA-DEG.Наконец, регуляторная сеть miRNA-DEG ​​была построена с использованием программного обеспечения Cytoscape.

    Построение регуляторной сети TF-DEG

    База данных NetworkAnalyst (https://www.networkanalyst.ca/) [25] представляет собой базу данных, содержащую ТФ, вовлеченные в различные заболевания. TF, связанные с PDAC, были найдены в базе данных TF. Путем получения пересечения TF и ​​DEG были выбраны регуляторные отношения TF-DEG. Наконец, регуляторная сеть TFs-DEG была построена с использованием программного обеспечения Cytoscape.

    Валидация генов-концентраторов

    После того, как гены-концентраторы идентифицированы из профиля экспрессии с помощью набора данных высокопроизводительного секвенирования, UALCAN (http://ualcan.path.uab.edu/analysis.html) [26] был использован для проверки выбранных гены-концентраторы с пониженной регуляцией. UALCAN — это онлайн-инструмент для анализа экспрессии генов между PDAC и нормальными данными из Атласа генома рака (TCGA). Он добавляет такие данные, как экспрессия генов, стадирование опухоли и период выживания для PDAC. cBioPortal — это онлайн-платформа (http://www.cbioportal.org) [27] для анализа изменения генов узловых генов из TCGA. Атлас белков человека представляет собой онлайн-базу данных (HPA, www.proteinatlas.org) [28] для анализа экспрессии белков между PDAC и нормальными данными TCGA. TIMER — это онлайн-платформа (https://cistrome.shinyapps.io/timer/) [29] для анализа иммунного инфильтрата из TCGA. Чтобы изучить диагностические биомаркеры PDAC, мы использовали вышеуказанные гены-концентраторы в качестве кандидатов, чтобы найти их диагностическую ценность на основе обобщенной линейной модели (GLM) [30]. pROC в R использовался для анализа кривой рабочих характеристик приемника (ROC) [30].Короче говоря, половина образцов (PDAC = 142, контрольные = 59) были бесцельно распределены в качестве обучающего набора, а оставшиеся данные использовались в качестве тестового набора, который использовался для настройки модели. Анализ кривой ROC был протестирован для расчета специфичности и чувствительности модели прогнозирования GLM. Площадь под кривой (AUC) рассчитывали для определения диагностической эффективности классификатора.

    Анализ ОТ-ПЦР

    TRI Reagent® (Sigma, США) использовали для выделения тотальной РНК из культур клеток PDAC (CRL-2549™) и нормальных (CRL-2989™) в соответствии с протоколом производителя.Набор кДНК для обратной транскрипции (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и случайные праймеры использовали для синтеза кДНК. Количественную ПЦР в реальном времени (qRT-PCR) проводили на системе ПЦР в реальном времени 7 Flex (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). Руководство по реакции включало программу денатурации (5 мин при 95°С), за которой следовала программа амплификации и количественного определения в течение 40 циклов (15 с при 95°С и 45 с при 65°С). Каждый образец был испытан в трехкратной повторности. В таблице 1 представлены последовательности праймеров узловых генов.Уровень экспрессии определяли как отношение между генами-концентраторами и β-актином внутреннего контроля в том же образце мРНК и определяли методом сравнительной КТ [31]. Уровни экспрессии CCNB1, FHL2, HLA-DPA1 и TUBB1 определяли методом 2 ΔΔCt.

    Таблица 1

    Последовательности праймеров для количественной ОТ-ПЦР

    Эксперимент по молекулярному докингу

    Модуль SYBYL-X 2.0 perpetual software использовался для Surflex-Docking сконструированных молекул.Молекулы были нарисованы с помощью программного обеспечения ChemDraw, импортированы и сохранены в формате sdf. формате с помощью бесплатного программного обеспечения openbabel. Белковые структуры CyclinB1 (CCNB1), его сокристаллизованного белка с кодом PDB 4Y72, 5H0V и четырех с половиной доменов LIM 2 (FHL2), его ЯМР-структура белков 2D8Z и 2EHE была получена из банка данных белков [32-34]. Вместе с силовым полем TRIPOS заряды GasteigerHuckel (GH) были добавлены ко всем разработанным производным для процесса оптимизации структуры. Кроме того, минимизация энергии была проведена с использованием алгоритма MMFF94s и MMFF94.Обработку белка проводили после включения белка. Сокристаллизованный лиганд и все молекулы воды удаляли из кристаллической структуры; добавляли больше атомов водорода и устанавливали боковую цепь. Для минимизации конструкции использовалось силовое поле TRIPOS. Эффективность взаимодействия соединений с рецептором выражали по шкале Surflex-Dock в единицах ккал/моль. Взаимодействие между белком и лигандом наилучшим образом включалось в молекулярную область.Визуализация взаимодействия лиганда с рецептором осуществляется с помощью визуализатора Discovery Studio.

    Результаты

    Идентификация DEG

    Мы проанализировали DEG GSE133684 с помощью пакета limma. Мы использовали p□<□0,05 и |logFC|□≥□1 в качестве критериев отсечки. Мы проверили 463 DEG, в том числе 232 гена с повышающей регуляцией и 231 ген с пониженной регуляцией в образцах PDAC по сравнению с нормальными контрольными образцами, и они перечислены в таблице 2. Мы идентифицировали все DEG, которые были показаны на приведенной выше карте вулкана, в соответствии со значением | logFC | показано на рис.1, а затем отобразил DEG на тепловой карте, показан на рис. 2.

    Таблица 2

    Статистические показатели для ключевых дифференциально экспрессируемых генов (DEG)

    Рис. 1.

    Вулканический график дифференциально экспрессируемых генов. Были отобраны гены со значительным изменением более чем в два раза. Зеленая точка представляет значимые гены, регулируемые вверх, а красная точка представляет значимые гены, регулируемые вниз.

    Рис. 2.

    Тепловая карта дифференциально экспрессируемых генов. Легенда в левом верхнем углу указывает на логарифмическое изменение генов.(A1 – A114 = нормальные контрольные образцы; B1 – B284 = образцы PDAC)

    Анализ GO и анализ обогащения пути DEG

    Чтобы обозначить функцию DEG и идентифицировать важные пути-кандидаты, анализ функционального обогащения GO и обогащение пути REACTOME были проведены анализы. Результаты анализа категорий GO, включая биологические процессы (BP), клеточные компоненты (CC) и молекулярные функции (MF), перечислены в таблице 3. Во-первых, повышающие регуляцию гены были аннотированы категорией BP, включая организацию везикул и секрецию, тогда как гены с подавленной регуляцией были аннотированы терминами GO, включая активацию лимфоцитов и регуляцию гибели клеток.Во-вторых, гены с положительной регуляцией были аннотированы терминами GO категории CC, а именно секреторный везикул и вся мембрана, тогда как гены с пониженной регуляцией были аннотированы терминами GO, включая клеточную поверхность и внутренний компонент плазматической мембраны.

    Таблица 3

    Обогащенные термины GO для дифференциально экспрессируемых генов, регулируемых вверх и вниз гены были аннотированы терминами GO, включая трансферазную активность, перенос фосфорсодержащих групп и связывание лекарств.Как показано в таблице 4, значительно обогащенные REACTOME пути повышающих генов с P<0,05 включали гемостаз и клеточный цикл, тогда как понижающие регулируемые гены с P<0,05 представляли собой адаптивную иммунную систему и трансмембранный транспорт малых молекул.

    Таблица 4

    Обогащенные термины путей дифференциально экспрессируемых генов, регулируемых вверх и вниз

    Построение сети белок-белкового взаимодействия (PPI) и модульный анализ

    6188 узлов и 13153 ребра были построены с помощью программы Cytoscape (рис.3А). Были получены узловые DEG со степенью узла, центральностью промежуточности, центральностью стресса и центральностью близости, которые перечислены в таблице 5. Среди них CCNB1 и FHL2 были основными генами с повышающей регуляцией, тогда как HLA-DPA1 и TUBB1 были основными генами с понижающей регуляцией. Затем были проверены два значимых модуля, которые соответствовали критериям отсечки, а именно баллы PEWCC1> 3 и количество узлов> 5 (рис. 3B и рис. 3C). В этих модулях были идентифицированы гены FGB, FGA, FGG, EEF1A1, RPL13A, ITGA4, RPL27A, RPL23A и ​​RPL10.GO-анализ этих генов показал, что они связаны с организацией пузырьков, регуляцией гибели клеток и активацией лимфоцитов. Кроме того, анализ обогащения REACTOME показал, что эти гены в основном участвуют в гемостазе, врожденной иммунной системе, заболеваниях и адаптивной иммунной системе.

    Таблица 5

    Таблица топологии для генов с повышающей и понижающей регуляцией.

    Рис. 3. Сеть

    PPI и наиболее значимые модули ДЭГ. (A) Сеть PPI DEG была построена с помощью Cytoscape (B) Наиболее значимый модуль был получен из сети PPI с 16 узлами и 44 ребрами для повышающих генов (C) Наиболее значимый модуль был получен из сети PPI с 6 узлами и 20 ребер для повышающих генов.Гены, регулируемые вверх, отмечены зеленым цветом; гены с подавленной регуляцией отмечены красным

    Построение регуляторной сети miRNA-DEG ​​

    Регуляторная сеть miRNA-DEG ​​и предполагаемые мишени представлены на рис. 4A. Примечательно, что MAP1B нацелен на 202 микроРНК, включая hsa-mir-4461; CCNB1 нацелен на 94 микроРНК, включая hsa-mir-3928-3p; AHNAK нацелен на 256 микроРНК, включая hsa-mir-2682-5p; KMT2D нацелился на 209 микроРНК, включая hsa-mir-1202, и 20 лучших перечислены в таблице 6. В общей сложности 257 из 463 DEG содержались в регуляторной сети miRNA-DEG.

    Таблица 6

    miRNA – ген-мишень и TF – взаимодействие гена-мишени

    Рис. 4.

    (A) Ген-мишень – регуляторная сеть miRNA между генами-мишенями и miRNAs (B) Ген-мишень – регуляторная сеть TF между генами-мишенями и TF. Гены, регулируемые вверх, отмечены зеленым цветом; гены с подавленной регуляцией отмечены красным; Ромбовидные узлы синего цвета представляют ключевые микроРНК; треугольные узлы серого цвета представляют ключевые TF

    Построение регуляторной сети TF-DEG

    Регулирующая сеть TF-DEG и прогнозируемые цели представлены на рис.4Б. Примечательно, что EZh3 нацелен на 45 TF, включая SOX2; TPM1 нацелен на 40 TF, включая MYC; AHNAK нацелен на 58 TF, включая KLF4, TXNIP нацелен на 51 TF, включая TP63, и 20 лучших перечислены в таблице 6. В общей сложности 259 из 463 DEG содержались в регуляторной сети TF-DEG.

    Проверка генов-концентраторов

    Все гены-концентраторы были проверены в данных TCGA. Гены-концентраторы вносят вклад в период выживания у пациентов с PDAC, мы проанализировали общую выживаемость (ОВ) для каждого гена-концентратора с помощью UALCAN (рис.5). Результаты показали, что высокий уровень экспрессии мРНК CCNB1 и FHL2 был связан с худшей ОВ у пациентов с PDAC, тогда как низкий уровень экспрессии HLA-DPA1 и уровень мРНК TUBB1 был связан с худшей ОВ у пациентов с PDAC. Как показано на рис. 6, экспрессия генов-концентраторов CCNB1 и FHL2 с повышенной экспрессией при PDAC была значительно повышена по сравнению с нормой, в то время как экспрессия генов-концентраторов HLA-DPA1 и TUBB1 с пониженной регуляцией при PDAC была значительно снижена по сравнению с нормой.Экспрессию каждого хаб-гена у пациентов с PDAC анализировали в соответствии с индивидуальной стадией рака. Как показано на рис. 7, экспрессия CCNB1 и FHL2 была выше у пациентов со всеми отдельными стадиями рака, чем в норме, что показало, что эти повышающие гены-концентраторы могут быть положительно связаны с прогрессией опухоли, тогда как экспрессия HLA- DPA1 и TUBB1 были ниже у пациентов со всеми отдельными стадиями рака, чем в норме, что показало, что эти гены-концентраторы с пониженной регуляцией могут быть положительно связаны с прогрессированием опухоли.Мы использовали инструмент cBioportal для изучения специфической мутации генов-концентраторов в наборе данных PDAC с 184 образцами. Согласно OncoPrint, процент изменений в генах CCNB1, FHL2, HLA-DPA1 и TUBB1 при раке легкого колеблется от 0% до 2,3% в отдельных генах (CCNB1, 0%; FHL2, 0,6%; HLA-DPA1, 2,3%; TUBB1). , 2,3%) и показано на рис. 8. Кроме того, мы использовали «HPA» для изучения уровней экспрессии белков CCNB1 и FHL2 и обнаружили, что уровни экспрессии белков этих узловых генов заметно повышались в PDAC. по сравнению с нормальными тканями, тогда как уровни экспрессии белков HLA-DPA1 и TUBB1, и наблюдали, что уровни экспрессии белков этих узловых генов были заметно снижены в PDAC по сравнению с нормальными тканями (фиг.9). Связь уровня экспрессии CCNB1, FHL2, HLA-DPA1 и TUBB1 с обилием иммунной инфильтрации при PDAC оценивали с использованием базы данных TIMER. Экспрессия CCNB1 и FHL2 отрицательно коррелировала со степенью инфильтрации В-клеток, CD8+ Т-клеток, макрофагов, нейтрофилов и дендритных клеток, тогда как HLA-DPA1 и TUBB1 положительно коррелировали со степенью инфильтрации В-клеток, CD8+ Т-клеток, макрофагов, нейтрофилов. , и дендритные клетки и показано на рис. 10. Поскольку эти 4 гена заметно экспрессируются в PDAC, мы провели анализ кривой ROC, чтобы оценить их чувствительность и специфичность для диагностики PDAC.Как показано на рис. 11, CCNB1, FHL2, HLA-DPA1 и TUBB1 достигли значения AUC> 0,70, демонстрируя, что эти гены обладают высокой чувствительностью и специфичностью для диагностики PDAC. Результаты показали, что CCNB1, FHL2, HLA-DPA1 и TUBB1 можно использовать в качестве биомаркеров для диагностики PDAC.

    Рис. 5.

    Анализ общей выживаемости узловых генов. Анализ общей выживаемости проводили с использованием онлайн-платформы UALCAN. Красная линия обозначает – высокая экспрессия; Размытая линия означает – низкая экспрессия. A) CCNB1 B) FHL2 C) HLA-DPA1 D) TUBB1

    Рис.6.

    диаграммы (анализ экспрессии) генов-концентраторов были получены с использованием платформы UALCAN. A) CCNB1 B) FHL2 C) HLA-DPA1 D) TUBB1

    Рис. 7. Диаграммы

    (анализ клинической стадии) узловых генов были получены с использованием платформы UALCAN. A) CCNB1 B) FHL2 C) HLA-DPA1 D) TUBB1

    Рис. 8.

    Анализы мутаций узловых генов были произведены с использованием онлайн-платформы CbioPortal. A) CCNB1 B) FHL2 C) HLA-DPA1 D) TUBB1

    Рис. 9.

    Иммуногистохимический (IHC) анализ узловых генов был произведен с использованием онлайн-платформы атласа белков человека (HPA).A) CCNB1 B) FHL2 C) HLA-DPA1 D) TUBB1

    Рис. 10.

    Диаграмма рассеяния для иммунной инфильтрации узловых генов. A) CCNB1 B) FHL2 C) HLA-DPA1 D) TUBB1

    Рис. 11. ROC-кривая

    подтвердила чувствительность и специфичность хаб-генов в качестве прогностического биомаркера для прогноза PDAC. A) CCNB1 B) FHL2 C) HLA-DPA1 D) TUBB1

    Анализ ОТ-ПЦР

    Далее, для проверки результатов предыдущего биоинформатического анализа, были определены уровни экспрессии генов CCNB1, FHL2, HLA-DPA1 и TUBB1. выявляется с помощью ОТ-ПЦР.Как показано на фиг. 12, уровни экспрессии мРНК CCNB1 и FHL2 значительно повышались в PDAC по сравнению с нормой, а уровни мРНК HLA-DPA1 и TUBB1 регулировались вниз по сравнению с нормой, что согласуется с результатами биоинформатического анализа.

    Рис. 12.

    Валидация узловых генов с помощью ОТ-ПЦР. A) CCNB1 B) FHL2 C) HLA-DPA1 D) TUBB1

    Эксперимент по молекулярной стыковке

    Моделирование стыковки было выполнено в настоящем исследовании для определения конформации активного центра и значительных взаимодействий, которые ответственны за стабильность комплекса с рецептором лиганда.Были сконструированы новые молекулы, содержащие алкилирующую группу и пуриновое гетероциклическое кольцо, и проведены исследования докинга с использованием программного обеспечения для разработки лекарств Sybyl X 2.1. Молекулы, содержащие алкилирующую группу, сконструированы за счет неспецифического алкилирования физиологически важных группировок, а пуриновое гетероциклическое кольцо встраивается за счет структурного сходства пуриновых производных и конкурирует за синтез белков. Белки, которые сверхэкспрессированы в аденокарциноме протоков поджелудочной железы, отбираются для исследования докинга.Два белка каждого сверхэкспрессированного циклина B1 (CCNB1), его сокристаллизованный белок с кодом PDB 4Y72, 5H0V и четыре с половиной домена LIM 2 (FHL2) структуры ЯМР белков 2D8Z и 2EHE были выбраны для стыковки. Исследование сконструированных молекул было проведено для идентификации потенциальной молекулы. Большинство сконструированных молекул получили С-показатель выше 5 и являются активными, имея с-показатель выше 5, и считаются активными. чем 8 соответственно.Немногие из разработанных молекул IM 11 и PU 42 показали хорошие показатели связывания 7,83 и 8,57, а молекулы IM 13, TZ 23, TZ 27, TZ 37, PU 41, PU 43 и PU 49 имеют хорошие показатели связывания 8,013, 8,523, 8,235, 8,800, 10,338, 10,891 и 9,411 с кодом CCNB1 PDB 1H0V и 4Y72 соответственно и показаны на рис. 13. Молекулы IM 09, IM 10, IM и 18 показали хорошую оценку связывания 7,14, 7,75 и 7,80, а молекулы IM 8 и TZ 24 с оценкой связывания 6,24 и 6,32 с FHL2 кода PDB 2D8Z и 2EQQ соответственно, значения представлены в таблице 7.Молекула IM 8 имеет наивысшую оценку связывания, ее взаимодействие с белком 1H0V, а водородные связи и другие связывающие взаимодействия с аминокислотами изображены в 3D и 2D на рис. 14 и 15.

    Таблица 7.

    Результаты докинга сконструированных молекул на CCNB1 и FHL2

    Рис. 13.

    Структуры спроектированных молекул

    Рис. 14.

    3D Связывание молекулы IM 8 с 1H0V

    Рис. 15.

    2D Связывание молекулы IM 8 с 1H0V

    Обсуждение

    3 PDAC, PDAC по-прежнему оставался заболеванием с высокими показателями распространенности и летальности.С хирургическим вмешательством в качестве основного, другими видами лечения, включая лучевую терапию, химиотерапию, таргетную терапию и генную терапию в качестве дополнения к ограниченным лечебным мероприятиям PDAC, 5-летняя выживаемость по-прежнему составляла менее 8% [35]. Таким образом, крайне необходимы ранняя диагностика и эффективное лечение PDAC, что может быть достигнуто путем идентификации DEG между PDAC и нормальным контролем, а также с учетом лежащего в основе молекулярного механизма. Микрочип и секвенирование с высокой пропускной способностью позволяют проводить скрининг огромного количества генов в геноме человека для дальнейшего функционального анализа и могут широко использоваться для скрининга биомаркеров для ранней диагностики и уникальных терапевтических целей.Следовательно, они могут помочь в диагностике PDAC на ранних стадиях и продвижении таргетного лечения, тем самым улучшая прогноз.

    В текущем исследовании комплексные методы биоинформатики систематически применялись для выявления новых биомаркеров, которые играют роль в развитии PDAC. Данные, извлеченные из набора данных GEO, содержали 31 пару образцов рака легких и нормальных образцов. Всего с помощью биоинформатического анализа было идентифицировано в общей сложности 232 положительно регулируемых и 231 отрицательно регулируемых гена в PDAC по сравнению с нормальными контрольными образцами, что указывает на частоту и прогрессирование PDAC.Результаты DEG могут предоставить потенциальные биомаркеры для диагностики PDAC. DAP (белок, ассоциированный со смертью) [36], KRT8 [37], IGFBP2 [38], KRT19 [39], CD44 [40], AHNAK (нуклеопротеин AHNAK) [41] и BTG1 [42] являются заметными факторами в PDAC. прогресс. Wang et al [43] сообщили, что KIF2C индуцирует пролиферацию, миграцию и инвазию у пациентов с раком желудка через сигнальный путь MAPK, но этот ген может быть связан с развитием PDAC. Экспрессия DBN1 была значительно увеличена при раке молочной железы [44], но этот ген может быть ответственным за развитие PDAC.Сообщалось, что MAP1B способствует прогрессированию рака легкого [45], но этот ген может быть ключевым для прогрессирования PDAC. Понижающая регуляция BNIP3L необходима для развития рака молочной железы и яичников [46], но эта понижающая регуляция гена может быть связана с прогрессированием PDAC. Йен и др. [47] сообщили, что ITGA4 экспрессируется при раке ротовой полости, но этот ген может быть новым биомаркером для PDAC. Томшич и др. [48] ​​показали, что мутация в SRRM2 связана с прогрессированием карциномы щитовидной железы, но изменение этого гена может быть ключевым фактором развития PDAC.Недавние исследования показали, что снижение регуляции IL7R связано с прогрессированием плоскоклеточного рака пищевода [49], но этот ген может быть вовлечен в патогенез PDAC. Lee и коллеги [50] обнаружили, что сниженная экспрессия HLA-DRA является ключевым фактором развития колоректального рака, но этот ген может быть связан с прогрессированием PDAC. Лю и др. [51] сообщили, что отсутствие SESN3 связано с развитием гепатоцеллюлярной карциномы, но этот ген может быть связан с прогрессированием PDAC.

    Затем для исследования взаимодействия этих ДЭГ использовали анализы путей GO и REACTOME. Все больше данных показывают, что LAPTM4B [52], CEACAM6 [53], SERPINE2 [54] и VNN1 [55], SPHK1 [56], HRG (богатый гистидином гликопротеин) [57], VEGFC (фактор роста эндотелия сосудов C) [58] , ANXA3 [59], APOA2 [60], LCN2 [61], TIMP1 [62], CD63 [63], CD151 [64], MAL2 [65], ARNTL2 [66], PKD2 [67], E2F1 [68] , MMP1 [69], CCR7 [70], NOTCh3 [71], BTLA (связанный с B- и T-лимфоцитами) [72], TFRC (рецептор трансферрина) [73], CD4 [74], ATM (ATM серин/треонинкиназа) [75], LEF1 [76], CSF1R [77], CTSB (катепсин B) [78], DUSP2 [79] и NR4A1 [80] тесно связаны с прогрессированием PDAC.PTGER3 [81] и MAGI2 [82] связаны с ангиогенезом, химиорезистентностью, пролиферацией и миграцией клеток при раке яичников, но эти гены могут быть ответственны за рост PDAC. Hoagland et al [83] продемонстрировали, что экспрессия HP (гаптоглобина) ответственна за прогрессирование рака легкого, но этот ген может быть вовлечен в прогрессирование PDAC. Было показано, что FGA (альфа-цепь фибриногена) является геном предрасположенности к раку легкого посредством активации сигнального пути интегрин-AKT [84], но этот ген может быть ответственным за прогрессирование PDAC.Repetto и коллеги [85] исследовали важность FGB (цепь бета-фибриногена) в патогенезе карциномы желудка, но этот ген может быть ответственным за прогрессирование PDAC. Было показано, что PLA2G4A [86], FGG (гамма-цепь фибриногена) [87] и TYMS (тимидилатсинтетаза) [88] активируются при раке, но эти гены могут быть ответственны за прогрессирование PDAC. RAB32 [89], SEPTIN4 [90], TPM2 [91], ACOT7 [92], PRTFDC1 [93], CABLES1 [94], HLA-DMB [95], PTPRC (протеинтирозинфосфатазный рецептор типа C) [96], CD5 [97], CD6 [97], MS4A1 [98], CD22 [99], CD27 [100], MRC2 [101], CLEC2D [102], EEF1A1 [103] и APOB (аполипопротеин B) [104] играли преобладающую роль в прогрессировании рака, но эти гены могут быть связаны с развитием PDAC.Юнг и др. [105] обнаружили, что SMPD1 стимулирует лекарственную устойчивость при колоректальном раке, но этот ген может быть связан с развитием PDAC. Лю и др. [106], Ян и др. [107], Сонг и др. [108], Сихрист и др. [109], Чжу и др. [110], Ву и др. [111], Ван и др. [112], Йи и др. [ 113], Lan et al [114] и Appert-Collin et al [115] показали, что PADI4, MAOB (моноаминоксидаза B), TRPC6, BCL11A, CXCR5, TCF7, POU2F2, SLC4A1, STK17B и LRP1 связаны с инвазией раковых клеток. , но эти гены могут быть ответственны за прогрессирование PDAC.Kairouz et al [116], Diez-Bello et al [117], Xue et al [118], Abo-Elfadl et al [119], Li et al [120] and Zhao et al [121] сообщили, что GRB14, TRPC6 , ZFPM2, TNFRSF13B, ADAM19 и PIK3IP1 усиливают пролиферацию раковых клеток, но этот ген может быть вовлечен в развитие PDAC. Лейте и др. [122], Фэн и др. [123], Ван и др. [124], Чжун и др. [125], Йокояма-Машима и др. [126], Го и др. [127], Лоусон и др. [128] и Wang et al [129] продемонстрировали, что низкие уровни HLA-DPA1, FGL2, CBLB (протоонкоген B Cbl), NCKAP1L, DYRK2, OGT (O-связанная N-ацетилглюкозамин (GlcNAc) трансфераза), CAMK1D и RNF213 связаны с прогрессированием рака, но эти гены могут иметь важное значение для прогрессирования PDAC.Полиморфные гены, такие как RORA (родственный RAR орфанный рецептор А) [130], IGF2R [131] и ZBTB20 [132], способствуют прогрессированию рака, но эти гены могут иметь решающее значение для прогрессирования PDAC. Хоуп и др. [133] определили, что VCAN (versican) играет центральную роль в инфильтрации иммунных клеток при раке, но этот ген может быть связан с инфильтрацией иммунных клеток при PDAC.

    Построение сети PPI и модулей DEG может быть полезным для понимания взаимосвязи развития PDAC.Bai и др. [134] сообщили, что CCNB1 играет положительную роль в пролиферации раковых клеток, но этот ген может быть вовлечен в развитие PDAC. FHL2 [135] и RPL10 [136] связаны с прогрессированием PDAC. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы прояснить лежащие в основе биологические механизмы новых биомаркеров HLA-DPA1, TUBB1, RPL13A, RPL27A и RPL23A на PDAC.

    Регуляторная сеть miRNA-DEG ​​и регуляторная сеть TF-DEG были сконструированы для изучения молекулярного механизма PDAC.Гены EZh3 [137], KMT2D [138], TXNIP (тиоредоксин-взаимодействующий белок) [139], TP63 [140], SOX2 [141], MYC [142] и KLF4 [143] связаны с PDAC. TPM1 [144] и hsa-mir-1202 [145] связаны с риском рака, но эти гены и микроРНК могут быть ответственны за прогрессирование PDAC. Hsa-mir-4461, hsa-mir-3928-3p и hsa-mir-2682-5p можно рассматривать как новые биомаркеры прогрессирования PDAC.

    В заключение, мы стремимся идентифицировать DEG с помощью биоинформатического анализа, чтобы найти потенциальные биомаркеры, которые могут быть вовлечены в продвижение PDAC.Исследование вносит ряд полезных DEG для будущих исследований молекулярных механизмов и биомаркеров PDAC. А приложение интеллектуального анализа данных и интеграции доступно для прогнозирования продвижения PDAC. Тем не менее, дальнейшие молекулярно-биологические анализы рекомендуются для подтверждения функции DEG в PDAC.

    Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


    Настройка браузера на прием файлов cookie

    Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

    • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
    • Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
    • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
    • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
    • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

    Почему этому сайту требуются файлы cookie?

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


    Что сохраняется в файле cookie?

    Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

    Как правило, в файле cookie может храниться только та информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, если вы не решите ввести его.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.