Ифа на хеликобактер пилори: Helicobacter pylori, IgA (количественно)

Содержание

Хеликобактер пилори суммарные антитела (IgM, IgА, IgG) к антигену CagA

Описание

Хеликобактер пилори (H. pylori) — спиралевидная или палочковидная бактерия, она поселяется на слизистых оболочках желудка и двенадцатиперстной кишки человека, приводит к повреждению слизистых и вызывает воспалительные заболевания.

Заражение происходит от больного человека или носителя инфекции. Хеликобактер пилори передается фекально-оральным или орально-оральным путем при нарушении правил гигиены, через воду, пищу, загрязненные предметы, часты семейные случаи инфицирования. Хеликобактер пилори имеет большую распространенность во всем мире.

Хеликобактер пилори может приводить к развитию гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциируется с повышенным риском развития рака желудка.

Как можно установить инфицирование Хеликобактер пилори

Методы лабораторной диагностики делятся на прямые и косвенные.

Прямые – методы определения самого возбудителя или его частиц. Хеликобактер пилори может быть обнаружен на слизистых оболочках желудка или двенадцатиперстной кишки:

  • методом микроскопии (при проведении гистологического или цитологического исследования),
  • методом культурального исследования (бактериального посева),
  • методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяются участки генетического материала – ДНК бактерии в пробе (при исследовании биоптата слизистых жедудка и двенадцатиперстной кишки, в пробах кала).

Косвенные — методы исследования антител (иммуноглобулинов). Антитела к антигенам (белкам) микроорганизма вырабатываются в ответ на проникновение возбудителя в организм и отражают реакцию организма на инфекцию. Наиболее распространенным методом определения антител является иммуноферментный анализ (ИФА).

Что показывает анализ на суммарные антитела (IgA, IgM, IgG) к антигену CagA Хеликобактер пилори

Иммуноглобулины характеризуют течение инфекции. По мере формирования иммунного ответа к инфекции антитела разных классов сменяют друг друга. Сначала на проникновение чужеродного микроорганизма начитают вырабатываться специфичные к данному возбудителю иммуноглобулины класса М (IgM), позже специфичные иммуноглобулины классов A (IgA) и G (IgG).

Иммуноглобулины класса М при инфицировании Хеликобактер пилори обнаруживаются в крови первыми, через 5-7 дней от проникновения возбудителя в организм, через 1-2 недели появляются иммуноглобулины класса A, через 3-4 недели антитела класса G. Пока развивается заболевание, уровни антител нарастают, а после выздоровления, снижаются.

Суммарные антитела (IgA, IgM, IgG) определяются весь период заболевания Хеликобактер пилори и длительно сохраняются после выздоровления.

Определение антител является вспомогательным методом диагностики Хеликобактер пилори. Положительный анализ на суммарные антитела может говорить о перенесенной инфекции или о текущей в данный момент. Антитела определяют для наблюдения за динамикой процесса, осуществления контроля за лечением.

Для подтверждения диагноза, в случае обнаружения положительных IgA, IgM, IgG  к антигену CagA Хеликобактер пилори, может быть проведено исследование гастробиоптата или кала на выявление Хеликобактер пилори методом ПЦР-анализа.

Кому показано исследование иммуноглобулинов IgA, IgM, IgG к Хеликобактер пилори 

  • Пациентам с заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки.
  • Членам семей пациентов, инфицированных Хеликобактер пилори.

Результат анализа 

Исследование антител являются методом косвенной диагностики инфекции, зависит от состояния иммунной системы человека и особенностей возбудителя. Положительные результаты исследований антител требуют подтверждения прямыми методами диагностики.

Полученный результат анализа обязательно должен интерпретировать лечащий врач с учетом всех данных о состоянии здоровья пациента, комплекса проведенных  инструментальных и лабораторных исследований.

Сдать анализ Антитела к Хеликобактер (Helicobacter pylori) класса IgA

Helicobacter pylori (хеликобактер пилори), IgA, – это специфические иммуноглобулины (иммунные антитела) класса А к бактериям Helicobacter pylori. Тест на Helicobacter pylori, IgA , – лабораторное исследование сыворотки крови методом иммуноферментного анализа, которое проводится в целях выявления инфекции, вызванной Helicobacter pylori, в стенке желудка и двенадцатиперстной кишки на основании титра IgА к этому виду возбудителя. Антитела класса IgA к Helicobacter pylori вырабатываются через 2-3 недели после инфицирования и сохраняются в крови в течение длительного времени. Снижение титра антител IgA говорит о переходе заболевания в латентную фазу, а повышение – об активизации процесса. Иммуноглобулины класса A отвечают за местный иммунитет, и их количество прямо пропорционально степени тяжести воспаления. У небольшой части инфицированных Helicobacter pylori антитела IgA не определяются.

html:

Cимптомы гастрита, дуоденита и/или язвенной болезни желудка или двенадцатиперстной кишки: боли, тяжести в верхних отделах живота после еды, тошноте, изжоге, неприятном и/или кислом привкусе во рту и/или запахе изо рта, отрыжке кислым.

Оценка тяжести воспалительного/инфекционного процесса, который вызван хеликобактер пилори.

Оценка адекватности терапевтических мероприятий или их окончательных результатов.

Проведение профилактических осмотров лиц с повышенным риском заболеть гастритом и/или язвенной болезнью желудка в целях принятия мер по предупреждению заболевания

html:Специальная подготовка не требуется.

Забор крови для исследования производят не ранее чем через 2 часа после приема пищи.

Перед исследованием (за 1 час) желательно исключить факторы, влияющие на результаты лабораторного исследования: физическое и эмоциональное напряжение, курение.

Рекомендуется за 1-2 дня до предполагаемого исследования не употреблять жирную пищу и алкоголь.

При приеме лекарственных препаратов следует проконсультироваться с врачом по поводу целесообразности проведения исследования на фоне приема препаратов или возможности отмены приема препарата. Длительность отмены препарата определена периодом выведения препарата из крови (в среднем, рекомендуют выждать 4-5 периодов полувыведения препарата, указанного в аннотации).

Если отменить прием лекарств нельзя, необходимо проинформировать об этом лабораторию.

Детей до 5 лет перед забором крови обязательно поить кипяченой водой (порциями, до 150-200 ml, на протяжении 30 минут)

Внимание!

В соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах защиты здоровья граждан в Российской Федерации» интерпретация результатов исследований, установление диагноза, назначение лечения, должны производиться врачом соответствующей специализации.

Телефон отделения: +7 (495) 695-56-95

Анализ крови на хеликобактер пилори — цены от 267 руб. в Краснодаре, 62 адреса

Стоимость анализа крови на Н. pylori в Краснодаре

Цены: от 267р. до 1000р.

62 адреса, 124 цены, средняя цена 643р.

Клиника высоких технологий WMT на Постовой

ул. Постовая, д. 33

ул. Постовая, д. 33

Anti-Хеликобактер (IgG к Helicobacter pylori)

470 р.

Anti-Helicobacter pylori (IgA, количественно)

588 р.

показать еще 2 цены

Клиника Екатерининская на Герцена

ул. Герцена, д. 265/2

ул. Герцена, д. 265/2

Helicobacter pylori IgG

510 р.

Helicobacter pylori CagA сум (IgG, IgM, IgA)

510 р.
Сити-Клиник на Бабушкина

ул. Бабушкина, д. 37

ул. Бабушкина, д. 37

Anti-Хеликобактер (IgG к Helicobacter pylori)

508 р.
Евромед на Калинина 201

ул. Калинина, д. 201

ул. Калинина, д. 201

Антитела к Helicobacter pylori, IgG

450 р.
Life на Восточно-Кругликовской

ул. Восточно-Кругликовская, д. 30

ул. Восточно-Кругликовская, д. 30

Anti-Хеликобактер (IgG к Helicobacter pylori)

510 р.

Helicobacter pylori, IgA (количественно)

650 р.

показать еще 1 цену

Клиника Екатерининская на Кубанской Набережной

Кубанская наб., д. 37/1

Кубанская наб., д. 37/1

Helicobacter pylori IgG

510 р.

Helicobacter pylori CagA сум (IgG, IgM, IgA)

510 р.
Еввро ЛПС на Уральской

ул. Уральская, д. 13

ул. Уральская, д. 13

Антитела к хеликобактеру (Helicobacter pylori) , IgG

420 р.

Антитела к хеликобактеру (Helicobacter pylori) , IgA

550 р.

показать еще 1 цену

Клиника Евроонко на Северной

ул. Северная, д. 315

ул. Северная, д. 315

KRSE. 10. 9. 25. 2 Определение anti-Helicobacter pylori IgG в сыворотке крови

980 р.

KRSE. 10. 9. 25. 1 Определение anti-Helicobacter pylori IgA в сыворотке крови

980 р.
Евромед на КИМ

ул. КИМ, д. 143

ул. КИМ, д. 143

Антитела к Helicobacter pylori, IgG

450 р.
Евромед на Памяти Чернобыльцев

ул. Памяти Чернобыльцев, д. 1

ул. Памяти Чернобыльцев, д. 1

Антитела к Helicobacter pylori, IgG

450 р.
Евромед на Федора Лузана

ул. Федора Лузана, д. 19

ул. Федора Лузана, д. 19

Антитела к Helicobacter pylori, IgG

450 р.
Гемотест на Тюляева

ул. Тюляева, д. 11

ул. Тюляева, д. 11

Хеликобактер пилори IgG (кол)

630 р.

Хеликобактер пилори IgА (кол)

870 р.

показать еще 1 цену

Гемотест на проспекте Чекистов

пр-т Чекистов, д. 12/1

пр-т Чекистов, д. 12/1

Хеликобактер пилори IgG (кол)

630 р.

Хеликобактер пилори IgА (кол)

870 р.

показать еще 1 цену

Гемотест на Ставропольской

ул. Ставропольская, д. 159

ул. Ставропольская, д. 159

Хеликобактер пилори IgG (кол)

630 р.

Хеликобактер пилори IgА (кол)

870 р.

показать еще 1 цену

Гемотест на 1-го Мая

ул. 1-го Мая, д. 262, лит. А2

ул. 1-го Мая, д. 262, лит. А2

Хеликобактер пилори IgG (кол)

630 р.

Хеликобактер пилори IgА (кол)

870 р.

показать еще 1 цену

Здоровье и Долголетие на Александра Покрышкина

ул. Александра Покрышкина, д. 4/6

ул. Александра Покрышкина, д. 4/6

Антитела к Helicobacter pylori, IgG

520 р.

Антитела к Helicobacter pylori, IgA

650 р.

показать еще 1 цену

Амадеус на Баварской

ул. Баварская, д. 8

ул. Баварская, д. 8

Определение хеликобактер пилори (Helikobacter pylori)

1000 р.
Клиника Екатерининская на Кондратенко

ул. Кондратенко, д. 4

ул. Кондратенко, д. 4

Helicobacter pylori IgG

510 р.

Helicobacter pylori CagA сум (IgG, IgM, IgA)

510 р.
Клиника Екатерининская на Одесской

ул. Одесская, д. 48/1

ул. Одесская, д. 48/1

Helicobacter pylori IgG

510 р.

Helicobacter pylori CagA сум (IgG, IgM, IgA)

510 р.
Клиника Солнечная на Ставропольской

ул. Ставропольская, д. 210, лит. Д

ул. Ставропольская, д. 210, лит. Д

Антитела к Helicobacter pylori, IgG

550 р.

Антитела к Helicobacter pylori, IgA

580 р.

показать еще 1 цену

Евромед на Кутузова

ул. Кутузова, д. 50

ул. Кутузова, д. 50

Антитела к Helicobacter pylori, IgG

450 р.
Клиника Ближе на Красной

ул. Красная, д. 155/2

ул. Красная, д. 155/2

Антитела к хеликобактеру (Helicobacter pylori) , IgG

450 р.
Шале Сантэ на Красных Партизан

ул. Красных Партизан, д. 238

ул. Красных Партизан, д. 238

Антитела к хеликобактеру (Helicobacter pylori) , IgG

450 р.

Антитела к хеликобактеру (Helicobacter pylori) , IgA

550 р.

показать еще 1 цену

Маммэ в Карасунском проезде

Карасунский пр-д, д. 15/2

Карасунский пр-д, д. 15/2

Антитела к хеликобактеру (Helicobacter pylori) , IgG

440 р.

Антитела к хеликобактеру (Helicobacter pylori) , IgM

550 р.
На Здоровье на Тургенева

ул. Тургенева, д. 150/1

ул. Тургенева, д. 150/1

Anti-Хеликобактер (IgG к Helicobakter pylori) Накануне проведения исследования необходимо исключить физические нагрузки и курение, женщинам не в дни менструального цикла. Биоматериал следует сдавать утром с 8 до 10 утра натощак. Между последним приёмом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8 часов. Можно пить воду

500 р.

Helicobacter pylori, IgA (количественно) Накануне проведения исследования необходимо исключить физические нагрузки и курение, женщинам не в дни менструального цикла. Биоматериал следует сдавать утром с 8 до 10 утра натощак. Между последним приёмом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8 часов. Можно пить воду

500 р.
Краснодарская бальнеолечебница на Герцена

ул. Герцена, д. 267

ул. Герцена, д. 267

Helicobacter pylori, IgG (количественно)

460 р.
В надежных руках на Тургенева

ул. Тургенева, д. 62

ул. Тургенева, д. 62

Антитела к Helicobacter pylori, Ig G

550 р.
Клиника Городская на Российской

ул. Российская, д. 267/3, корп. 1

ул. Российская, д. 267/3, корп. 1

Helicobacter pylori, IgG (количественно)

500 р.

Helicobacter pylori, IgA (количественно)

620 р.
На Здоровье на 70 лет Октября

ул. 70 лет Октября, д. 32/1

ул. 70 лет Октября, д. 32/1

Anti-Хеликобактер (IgG к Helicobakter pylori) Накануне проведения исследования необходимо исключить физические нагрузки и курение, женщинам не в дни менструального цикла. Биоматериал следует сдавать утром с 8 до 10 утра натощак. Между последним приёмом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8 часов. Можно пить воду

500 р.

Helicobacter pylori, IgA (количественно) Накануне проведения исследования необходимо исключить физические нагрузки и курение, женщинам не в дни менструального цикла. Биоматериал следует сдавать утром с 8 до 10 утра натощак. Между последним приёмом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8 часов. Можно пить воду

500 р.
ЭкспрессМедСервис на Ставропольской

ул. Ставропольская, д. 96/1

ул. Ставропольская, д. 96/1

Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) , антигенный тест (Helicobacter pylori. One Step Rapid Immunосhromotographic Assay)

760 р.

Aнтитела класса IgA к Helicobacter рylori (Anti-Helicobacter pylori IgA)

620 р.

показать еще 1 цену

Сравнительный анализ чувствительности методов лабораторной диагностики (ИФА и ПЦР) инфекции Helicobacter pylori Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

ВЕСТНИК КАЗНМУ, №2-2012

271

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ (ИФА И ПЦР)

ИНФЕКЦИИ HELICOBACTER PYLORI

К.А. Абылкасымова Региональный диагностический центр, г. Алматы

HELICOBACTER PYLORI ¥КСАСТАНДЫРУ YШIН ИФА ЭДЮШН ЖЭНЕ ПТР ЭДЮШН СЕЗ1МТАЛДЫЛЫГЫН САЛЫСТЫРМАЛЫ ТАЛДАУ

К. салдарынан терiс нЭтиже де бердк

Comparative analysis of sensitivity of IFA method and polymerase chain reaction method for identification of Helicobacter pylori

K.A. Abylkasymova

The sensitivity of polymerase chain reaction (PCR) method at determination of Helicobacter pylori DNA in bioptates of anthral part of stomach appeared to be higher in comparison with determination of antibodies of IgG class to HP by solid phase IFA method.

At the same time, in some cases at presence of positive result of IFA-test, PCR-method gave a negative result that may be explained by errors admitted at material take.

В настоящее время считается, что около 50-70% населения земного шара инфицировано бактерией Helicobacter pylori (HP) [1,2,3.]. В развивающихся странах уровень инфицированности HP среди населения выше, в частности, в странах СНГ, в т.ч. в Казахстане, он достигает 80-90% [4,5].

Helicobacter pylori – это небольших размеров спиралевидная бактерия, обладающая высокой степенью подвижности. Она была впервые обнаружена в слизистой оболочке желудка собак в 1874 г. G.Bottcher. Далее Kreinitz (1906 г.) зафиксировал наличие спиралевидных бактерий в слизистой оболочке желудка человека при аутопсии, он же привел и первые эпидемиологические данные – у 40% людей в слизистой оболочке желудка имеются «спирохеты».

В 2005 году австралийские ученые J.R. Warren и B.J. Marschall были удостоены Нобелевской премии за выдающийся вклад в гастроэнтерологию: они впервые описали

неидентифицированные спиралевидные бактерии в биоптатах желудка и доказали их связь с антральным гастритом и пептическими язвами (1983 г.). В 1984 г. B.J. Marschall и S. Goodwin впервые получили культуру спиралевидных бактерий и назвали их Campylobacter piloridis, которые в 1989 г. были окончательно идентифицированы и получили название Helicobacter pylori. Но ради исторической справедливости надо сказать, что еще в 1913 г. датский ученый J. Fibiger впервые получил экспериментальную модель рака желудка на мышах при кормлении их питательной смесью, содержащей бактерии. Этим бактериям он дал название «Spiroptera carcinoma» [6]. За серию этих работ в 1927 г. он был удостоен Нобелевской премии. Через 80 лет – в 1994 г. Международное агентство по изучению рака (IARK) признает бактерию Helicobacter pylori канцерогеном первого порядка, т.е. патогеном, имеющим безусловную связь с возникновением рака желудка. До исследований Warren и Marschall считалось, что в кислой среде желудка микроорганизмы существовать не могут. Но НР синтезирует фермент уреазу, которая расщепляет мочевину желудочного сока на аммиак и бикарбонат, образуя тем самым активную щелочную среду, которая формирует защитную оболочку вокруг бактерии. Дополнительный фактор, обеспечивающий выживание бактерии – ее высокая подвижность, позволяющая ей быстро внедряться в слизистую оболочку желудка, где она затем закрепляется благодаря сродству к антигенам эпителиальных клеток, расположенных на поверхности стенок желудка (Lewis-B-antigen), концентрация которых максимальна у людей с IV группой крови. НР синтезирует цитокины, которые вместе с аммиаком оказывают повреждающее действие на слизистую оболочку желудка (СОЖ) и двенадцатиперстной кишки (ДПК) и ведут к возникновению в них хронического воспалительного процесса. При этом происходит значительное снижение секреции желудочного сока.

Последствия жизнедеятельности бактерии зависят от места ее преимущественной локализации. Если бактерии локализованы в области перехода желудка в двенадцатиперстную кишку, то возникает гастрит с повышенным кислотообразованием, что предотвращает дальнейшее распространение инфекции, но способствует возникновению язвы двенадцатиперстной кишки. Локализация НР в других отделах желудка приводит к снижению кислотности желудочного содержимого и к быстрому размножению бактерий, что вызывает атрофический гастрит и, в

конечном итоге, может привести к раку желудка. Многочисленные исследования подтверждают тот факт, что смертность от рака желудка находится в прямой зависимости от степени заражения СОЖ Helicobacter pylori [7]. Первичное инфицирование происходит, как правило, в раннем детском возрасте при контакте с НР-инфицированными лицами в детском саду или в семье.

В настоящее время установлено, что 90% гастритов и практически 100% случаев язвы двенадцатиперстной кишки и 70% язвы желудка вызваны Helicobacter pylori [8,9]. В связи с широкой распространенностью инфекции, патогенетической ролью в возникновении заболеваний гастродуоденальной зоны, онкогенным потенциалом весьма актуальной остается проблема своевременной диагностики инфекции Helicobacter pylori.

Основные методы диагностики НР можно разделить на инвазивные и неинвазивные. К инвазивным относятся методы, требующие эзофагогастродуоденоскопии, т.к. материалом для исследования служат биоптаты СОЖ и ДПК.

Неинвазивными являются методы, не требующие эндоскопического обследования, например, серологические методы. Но назвать их неинвазивными можно условно, т.к. они требуют такой «инвазивной» процедуры как забор крови. Целью нашего исследования явилось сравнение чувствительности метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) определения ДНК Helicobacter pylori в биоптатах антрального отдела желудка (инвазивный молекулярно-генетический метод) и твердофазного ИФА – метода определения антител класса JgG к Helicobacter pylori (неинвазивный серологический метод). Нами было обследовано 52 больных с хроническими заболеваниями верхних отделов пищеварительного тракта в возрасте от 18 до 46 лет. В 92,8% случаев были выявлены органические заболевания гастродуоденальной зоны, у 7,2% изменения носили функциональный характер. У 36,1% больных были обнаружены эрозивно-язвенные изменения СОЖ и ДПК. В большинстве случаев патология СОЖ и ДПК носила сочетанный характер (гастродуодениты составили 83,4% от общего количества обследованных). У 46,2% больных также зафиксированы моторно-эвакуаторные нарушения верхних отделов пищеварительного тракта.

Всем обследуемым было проведено эндоскопическое обследование методом эзофагогастродуоденоскопии с прицельной биопсией слизистой оболочки антрального отдела желудка и последующим исследованием биоптатов на наличие ДНК Helicobacter pylori методом ПЦР («Амплисенс», Россия) и определение антител класса JgG в венозной крови методом твердофазного ИФА ( «Orgenics», Израиль). В результате проведенного исследования пилорический хеликобактериоз, по результатам ПЦР – метода, зафиксирован у 91,7% обследуемых, по данным же ИФА – метода инфицированность НР составила 78,6% от общего количества обследованных лиц.

Высокая специфичность метода полимеразной цепной реакции, за разработку которого Кэрри Мюллис (1983 г.) получил Нобелевскую премию, обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя, фрагмент ДНК, что исключает возможность ложноположительных результатов, как например, при серологических исследованиях в связи с перекрестно-реагирующими антигенами. Метод ПЦР -высокочувствительный метод, позволяющий обнаруживать даже единичные клетки бактерий в пробе. Чувствительность ПЦР – анализа составляет от 10 до 1000 клеток в пробе. Единственным недостатком метода можно считать необходимость проведения эндоскопического исследования, на которое соглашаются не все пациенты, и которое само по себе не исключает возможности инфицирования пациентов НР ятрогенным путем при недостаточной дезинфекции эндоскопов. В этом плане, иммуноферментный анализ – наиболее подходящий метод для эпидемиологических исследований и скрининга.

Нами были использованы тест-системы «Иммунокомб» фирмы «Orgenics» (Израиль) для проведения твердофазного ИФА с целью определения антител класса JgG к НР.enics» являются оригинальными разработками, позволяющими осуществлять быструю точную бесприборную диагностику инфекционных заболеваний.

ВЕСТНИК КАЗНМУ, №2-2012

272

Обращает на себя внимание тот факт, что у 4 обследуемых с отрицательными результатами ПЦР – теста, антитела к НР были обнаружены по результатам ИФА. Ложноотрицательные результаты ПЦР-анализа в данном случае могут быть связаны с тем, что на исследование попадают биоптаты, где нет НР. Так, известно, что НР колонизирует только эпителий желудочного типа, и если в биоптате преобладает кишечная метаплазия, НР обнаружена не будет. НР также не встречается в краях язвы желудка и ДПК. Под влиянием ингибиторов протонных помп, НР может смещаться из антральных отделов в тело желудка. Для избежания ложноотрицательных результатов можно рекомендовать множественную (5-7 биоптатов) биопсию [10]. Но для контроля эффективности эрадикации НР серологическая диагностика инфекции Helicobacter pylori неприемлема, т.к. наличие антител НР может носить следовой характер. Количественный ИФА также не может являться критерием эффективности лечения, т.к. известно, что через 6 месяцев после эрадикации возбудителя титр антител уменьшается как при успешном лечении, так и при персистировании инфекции. Таким образом, сравнительный анализ чувствительности ПЦР -метода и твердофазного ИФА для идентификации Helicobacter pylori подтвердил высокую диагностическую ценность обоих методов. Наличие ложноотрицательных результатов позволяет рекомендовать дополнительное назначение ПЦР – анализа при отрицательных результатах серологического исследования у больных с клинической симптоматикой.

ЛИТЕРАТУРА

1. Malfertheiner P., Michetti H., Price A. Helicobacter pylori. An. Atlas – L.: Sci. Press Ltd, 1966.- 48 p.

2. Warren J.R. Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis.- Lancet.- 1983.- i.- p.1273.

3. John Calam. Clinicians Guide to Helicobacter pylori.- L.: Chapman Hall.- 1966.- 182 p.

4. Чуков С.З., Морозов И.А., Пасечников И.Д. Клинико-морфологические и молекулярно-генетические сопоставления при патологии желудка, ассоциированной с Helicobacter pylori. -Росс. Журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии.-2001.-№2.-С.21-24.

5. Жангабылов А.К., Есназарова Г.С., Мамирова Т.Н., Курмангалиева С.С., Сулейменова А.С. Проблемы эпидемиологии, диагностики и лечения Helicobacter pylori при заболеваниях органов пищеварения в Центральной Азии (Казахстан).- Лабораторная диагностика.- 2006.-№5.- С. 4-6.

6. Баранская Е.К. История открытия Helicobacter pylori -Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии.-1999.-№4.-С.61-65.

7. Hauss R. Das Bacterium Helicobacter pylori.- Arzt – Zahnarzt Naturheil – verfahren (AZN).-2001.-№1.-S.30.

8. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А.Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника.- Триада Х.- М.-1998.-483 с.

9. H. pylori resistance and management strategies – World Congress of Gastroenterology.- Montreal.-2005.

10. Лапина Г.Л.Основные принципы лабораторной диагностики Helicobacter pylori – Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии.- 1999.-№2.-С.41-44.

ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ У ЖЕНЩИН С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ОРГАНОВ

МАЛОГО ТАЗА

С. Т-лимфоцитов сандарыныц азаюынан жэне фагоцитарлыК реакциясыныц взгеруiне байланысты.

ТYйiндi сездер кiшi жамбас мYшелерiнiц iciнiп ауыруы, иммунологиялык реактивтiк кврсеткш.

Immunological reactivity in the women presenting with Pelvic inflammatory disease

D.M. Nuradilova, S.B. Kalimoldayeva

Abstract The investigation among 112 women of reproductive age with Pelvic inflammatory disease discovered the classic sexually transmitted infections, as a major etiological factor (clamidiosis, mycoplasmosis, gardnerellosis, trichomoniasis, candidosis). For diagnostics of sexually transmitted infections may be used the complex of laboratory methods (IPHA, PCR, Cultural method). The results of complex immunological examination among 112 women of reproductive age with Pelvic inflammatory disease are represented in the article. The most valuable were the modifications of phagocytosis reaction and decrease the number of mature T-lymphocytes among women with Pelvic inflammatory disease. Key words pelvic inflammatory disease, immunological reactivity

Воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ) ввиду чрезвычайно широкого распространения и опасности для репродуктивного здоровья женщин представляют

значительную медико-социальную и экономическую проблему. В настоящее время ВЗОМТ определяют как группу самостоятельных нозологических заболеваний верхних отделов репродуктивного тракта, как изолированных, так и включающих в себя любую комбинацию кольпита, эндометрита, сальпингита, оофорита, тубоовариального абсцесса и тазового перитонита

[1,2]. Некоторые исследователи включают в перечень ВЗОМТ также параметрит, пиосальпинкс и даже экстрагенитальные проявления (перигепатит) [3,4].

К наиболее серьезным осложнениям ВЗОМТ, помимо тубоовариального абсцесса и пельвиоперитонита, относятся трубное бесплодие, привычное невынашивание беременности и внематочная беременность.

Отмеченный в последнее время во всем мире, в т.ч. и странах СНГ рост заболеваемости населения воспалительными заболеваниями репродуктивных органов связывают с возросшей миграцией населения, процессами урбанизации, изменением норм морали и проституцией [5,6,7,8]. Многие современные исследователи рассматривают ВЗОМТ как дебют большинства гинекологических заболеваний. Так, по мнению Серова В.Н. [9], хронический воспалительный процесс в половых органах способствует развитию эндометриоза, миомы матки, гиперпластических процессов, бесплодия, привычного невынашивания беременности, неопластических заболеваний шейки матки.

Как известно, в основе развития любого воспалительного процесса лежит взаимодействие этиологического фактора (микроорганизм) и иммунологической реактивности человека (макроорганизм).епасеае (в основном Е.соИ) и стафилококки, реже – бактероиды, клостридии, пептосрептококки и др. [10]. Согласно результатам последних исследований, при наличии хронического воспалительного процесса в различных отделах половой системы женщин основным этиологическим фактором являются возбудители инфекций, передаваемых половым путем (ИППП). Так, по данным некоторых авторов, у женщин с ВЗОМТ в 70% случаев были отмечены хламидийная и уреаплазменная инфекции, а в случае бесплодного брака в половых путях супругов практически всегда можно обнаружить хламидии и/или уреаплазмы [11].

Актуальной остается проблема урогенитального трихомониаза, который зачастую представляет собой смешанный протозойно-бактериально-грибковый процесс. Трихомонады способны фагоцитировать, но не всегда переваривать практически все возбудители инфекций, передаваемых половым путем. Таким образом, возникает их интратрихомонадная персистенция,

Выявление антител класса Ig G к Hеlicobacter pylori

Антитела являются маркёрами, подтверждающие инфицированность Хеликобактер пилори. 
Они начинают вырабатываться через 3 – 4 недели после инфицирования. Высокие титры антител к H.pylori сохраняются и некоторое время после ликвидации микроорганизма. 

Системный IgA ответ обычно менее выражен, но может указывать на более сильное местное воспаление. IgA формируются локально и не всегда определяются в сыворотке. Положительный результат на IgA хорошо коррелирует с активностью гастрита.

Увеличение титра IgG является индикатором текущей инфекции. Данные антитела могут персистировать много лет. Повышенный уровень IgG-антител считается маркером хронической  инфекции.

H.pylori на сегодняшний день – одна из широко распространённых инфекций на земле. К H.pylori-ассоциированным болезням относятся хронический гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки. Поражение слизистой оболочки желудка обусловлено прямым повреждением её микроорганизмом, а также вторичным повреждением слизистой оболочки желудка, двенадцатиперстной кишки и кардиальной части пищевода под действием факторов агрессии H.pylori.

Заражение происходит пищевым, фекально-оральным, бытовым путями. H.pylori обладает способностью к колонизации и персистированию в слизистой оболочке желудка. К патогенным факторам относятся ферменты (уреаза, фосфолипаза, протеаза и гамма-ГТ), жгутики, цитотоксин А (VacA), гемолизин (RibA), белки теплового шока и липополисахарид. Обсеменение слизистой оболочки желудка H.pylori сопровождается развитием поверхностного антрального гастрита и дуоденита, ведёт к повышению уровня гастрина и снижению выработки соматостатина с последующим усилением секреции соляной кислоты. Избыточное количество соляной кислоты, попадая в просвет двенадцатиперстной кишки, ведёт к прогрессированию дуоденита и развитию желудочной метаплазии, что создает условия для заселения H.pylori.

В дальнейшем, особенно при наличии дополнительных факторов риска (наследственная предрасположенность, I группа крови, курение, приём ульцерогенных лекарственных препаратов, частые стрессы, алиментарные погрешности), в участках метаплазированной слизистой оболочки формируется язвенный дефект.

В 1995 г. Международной ассоциацией по изучению рака (IARC) H.pylori признан абсолютным канцерогеном и определён как важнейшая причина злокачественных новообразований желудка у человека (MALToma – Mucosa Associated Lymphoid Tissue lymphoma, аденокарцинома). При проведении эпидемиологических исследований выявлена более частая инфицированность H.pylori у пациентов с неязвенной диспепсией и гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью (ГЭРБ), чем без них.

Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori)

Заболевания желудочно-кишечного тракта являются одними из самых распространённых. Причиной всему может быть инфекция, а именно бактерия – Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori)!

Такие симптомы как боль в животе, изжога, тошнота, быстрое насыщение после еды или отрыжка, можно диагностировать у каждого второго человека. Кто-то связывает это с неправильным питанием или стрессами, повышенной или пониженной кислотностью желудкаи другими факторами. Чаще прием таблеток, снижающих кислотность, не помогает или временно устраняет симптом и дискомфортные ощущения возобновляются после каждого приема пищи. Причиной всему может быть инфекция, а именно бактерия – Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori). Она прекрасно выживает в кислотной среде желудка в отличие от других бактерий и к тому же усиливает защитную секрецию аммиака, нейтрализующего кислую среду.

Открытие данного вида спиралевидных бактерий длиной около 3 мкм, стало настоящей сенсацией в медицине и оказало значительное влияние на лечение язвенной болезни желудка и гастритов. Как было выявлено – именно Хеликобактер и является причиной многих проблем, связанных с пищеварением.

Стоит отметить, что в 2005 году первооткрыватели медицинского значения бактерии Хеликобактер пилори – Робин Уоррен и Барри Маршалл были удостоены Нобелевской премии по медицине.Одними из самых эффективных способов диагностики наличия этой бактерии непосредственно в биоптате желудка можно считать молекулярно-генетический метод, а также бактериологический посев на Helicobacter pylori. Это позволит подобрать адекватную терапию для данного микроорганизма и выбрать наиболее подходящий способ для лечения гастрита и язвы желудка.

В лаборатории Explana используют сразу несколько методов лабораторной диагностики Helicobacter pylori:

 – Бактериологическое исследование на Helicobacter pylori 04-01-17

 – ПЦР исследование Helicobacter pylori 02-02-10

 – Генотипирование Helicobacter pylori cagA,cagE,cagH 02-02-05

 – ПЦР исследование на чувствительность Helicobacter pylori к кларитромицину 02-02-04

– Также можно заказать и комплексное исследование Helicobacter pylori, которое уже включает в себя вышеперечисленные молекулярно-генетических исследования

Номер комплекса: 09-01-51.

Мы проводим такие исследования как:

– Определение антител IgA к Helicobacter pylori 03-02-81

– Определение антител IgG к Helicobacter pylori 03-02-44

– Определение общих антител к гену Helicobacter pylori cag A 03-02-38

– Определение антигена Helicobacter pylori в кале 03-05-06

Анализы на Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) вы сможете сдать в одном из наших пунктов приема анализов.

Связанные исследования

900 р.

#02-02-10

Helicobacter pylori(хеликобактер пилори)

Helicobacter pylori (H. pylori) – спиралевидная бактерия, которая обитает на слизистой оболочке желудка, прикрепляясь к ворсинкам эпителия. H. Pylori является причиной 90% язв двенадцатиперстной кишки и 80% язв желудка. Значение обследования на H. Pylori значительно возрастает из-за строгой ко

770 р.

#03-02-81

IgA антитела к Helicobacter pylori

С данной инфекцией ассоциированы заболевания, такие как: язва двенадцатиперстной кишки и желудка, хронический гастрит, а также возможна бессимптомная форма инфекции.  

1750 р.

#02-02-04

Чувствительность H.pylori к кларитромицину

Определение чувствительности Helicobacter pylori к терапии кларитромицином методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией результатов в режиме реального времени. Данное исследование предназначено для выявления мутаций A2142G, A2143G и T2717C в геноме Helicobacter pylori, обеспечив

1090 р.

#03-05-06

Антиген Helicobacter pylori в кале, ИФА

Возбудитель хеликобактериоза – Helicobacter pylori – грамотрицательная палочка, чаще всего имеющая S-образную форму. Встречается у 87% больных язвенной болезнью и 75% больных острыми гастритами. После проникновения бактерий в желудок происходит их адгезия к клеткам желудочного эпители

Роль сероконверсии в подтверждении излечения от инфекции Helicobacter pylori | Гастроэнтерология | ДЖАМА

Контекст.—  Роль серологических тестов для подтверждения излечения инфекции Helicobacter pylori после антимикробной терапии не полностью определенный.

Цель.—  Определить полезность серологического тестирования для подтверждения излечения инфекции H pylori более чем через 1 год после терапии.

Дизайн.—  Проспективное исследование до и после вмешательства.

Учреждение.— Амбулаторная клиническая исследовательская лаборатория в академическом городском Ветеранах Медицинский центр дел.

Участники. —  Двадцать три здоровых мужчины и женщины с активной инфекцией H pylori , подтвержденной биопсией желудка, и положительными серологическими результатами H pylori .

Вмешательство.— 14-дневный курс висмута, тетрациклина и метронидазола.

Показатели основных результатов. —  Определение сывороточных антител IgG к H pylori на исходном уровне, через 1 месяц, 3 месяца и примерно через 18 месяцев после завершение терапии по сравнению с серийными образцами биопсии слизистой оболочки желудка с окрашиванием H pylori и для гистологического исследования в качестве эталона критерия.

Результаты.—  Пятнадцать (65%) из 23 субъектов были излечены от инфекции H pylori по оценке биопсии желудка с элиминацией гастрита; средний уровень антител снизился с 92.5 ЕД/мл на исходном уровне до неопределяемый уровень в 18 месяцев. Остальные 8 субъектов (35%) не вылечились. и в 18 месяцев у них был персистирующий гастрит; средний уровень антител снизился от 130,6 ЕД/мл в начале исследования до 89,7 ЕД/мл через 18 месяцев. Чувствительность и специфичность сероконверсии (от положительного к отрицательному результату теста) при обнаружении излечения инфекций H pylori составляли 60% и 100% соответственно.

Заключение.— Точно неопределяемый уровень антител после первого года терапии подтвердить излечение от инфекции H pylori у изначально серопозитивных здоровые субъекты, с разумной чувствительностью.

В 1994 г. консенсусная конференция Национального института здравоохранения рекомендовала что пациентов с язвенной болезнью, инфицированных Helicobacter pylori , следует лечить противомикробными препаратами. 1 ,2 Кроме того, за последние несколько лет более и более лиц, инфицированных H pylori без язвы лечатся. 3 -5

Если есть желание подтвердить излечение от H. pylori инфекцию сразу после терапии, уреазный дыхательный тест или биопсию желудка, полученные либо эндоскопически, либо неэндоскопически, 6 необходимы, поскольку тесты на антитела IgG в сыворотке крови H pylori остаются положительными в течение многих месяцев после излечения. 7 Однако уреазные дыхательные тесты и биопсия желудка требуют много времени и средств. и биопсия является инвазивной. Если подождать 6 месяцев после терапии и провести количественный серологический тест на парных образцах сыворотки, снижение на 20% и более в сыворотке IgG может быть информативным для излечения. 7 Пока чувствительность и специфичность этого парного количественного серологического подхода для подтверждения излечения составляет от 80% до 90%, 7 хранение сыворотки в течение длительного времени нецелесообразно.Кроме того, многие лаборатории не сообщают о количественных уровнях антител в сыворотке. но вместо этого сообщайте о результатах качественно как о «положительных» или «отрицательных».

Многие врачи заинтересованы в подтверждении излечения (или стойкости) инфекции H pylori только при рецидиве симптомов, которые может возникнуть через год и более после антимикробной терапии. Возможно, к тому времени достаточно прошло время, когда титры антител стали неопределяемыми у вылеченных людей, рендеринг сероконверсия (определяется в данном контексте как изменение положительного результата серологического теста на отрицательный) клинически полезный.В одном исследовании, однако, менее 50% субъектов, которые были вылечены (согласно оценке с помощью уреазного дыхательного теста) сероконверсия в течение второго года терапия. 8 Тем не менее, только 15 пациентов были следуют за 15 месяцев в этом исследовании. 8 К далее оценить роль поздних серологических тестов в подтверждении излечения, мы измерили H pylori сывороточных антител и получили желудочный образцы биопсии слизистой оболочки у 23 мужчин и женщин до и примерно 18 месяцев после завершения терапии висмутом, тетрациклином и метронидазолом.Использование окрашивания тканей H pylori в качестве критерия Стандарт, мы рассчитали чувствительность и специфичность сероконверсии H pylori для подтверждения излечения инфекции H pylori .

Двадцать три взрослых (10 мужчин и 13 женщин) без язвенной болезни в анамнезе. язва и отсутствие хронических симптомов верхних отделов желудочно-кишечного тракта. это проспективное исследование в 1993 и 1994 годах. Возраст участников варьировался от 25 до 85 лет (в среднем 48 лет, в среднем 49 лет).Тринадцать были афроамериканцами, 8 белых, 1 латиноамериканец и 1 американский индеец. У каждого был положительный исходный уровень Результат теста на сывороточные антитела H pylori (> 20 единиц оптической плотности на мл [Ед/мл]), используя иммунофлуоресцентный анализ для обнаружить антитела IgG к H pylori в сыворотке (FIAX набор для тестирования, Bio Whittaker, Walkerville, Md; чувствительность и специфичность, 99% и 97% соответственно 6 ). Каждый предмет также была исходная биопсия слизистой оболочки желудка, демонстрирующая организмов H pylori . 6 ,9 Исследования были одобрены институциональным наблюдательным советом. Информированное письменное согласие было полученное по каждому предмету.

После того, как базовые исследования подтвердили H pylori серопозитивности и активная инфекция при биопсии желудка, каждый субъект получал 2-недельную курс субсалицилата висмута (524 мг 4 раза в сутки), тетрациклина (500 мг 4 раза в сутки) и метронидазол (250 мг 4 раза в сутки). Один предмет нетерпим вместо тетрациклина получила амоксициллин (500 мг 4 раза в день).Нет антисекреторного была назначена терапия. Каждый субъект был опрошен по телефону на полпути. через этот 2-недельный курс для поощрения соблюдения и регистрации побочных эффектов. Они также были опрошены в конце 2-недельного курса терапии.

Один месяц, 3 месяца и примерно 18 месяцев (15-23 месяца) после после завершения терапии субъекты возвращались в лабораторию для повторного измерения H pylori сывороточных антител для биопсии слизистой оболочки тела желудка и для биопсии слизистой оболочки антрального отдела желудка (месяц только 3 и 18 месяц).Образцы биопсии слизистой оболочки желудка были получены путем модифицированный назогастральный зонд под рентгеноскопическим контролем, метод, который не требует внутривенной седации или эндоскопии. 6 ,9 Образцы биопсии были интерпретированы одним из нас (Э.Л.), которому не было предоставлено клиническая информация. Сообщалось о присутствии или отсутствии микроорганизмов H pylori , окрашиваемых с помощью окрашивания гематоксилином и эозином. 9 Если возникал вопрос о наличии H pylori , также выполнялось окрашивание по Гимзе. 10 Также оценивалось наличие или отсутствие хронического гастрита с использованием ранее описанных критериев 9 , а интенсивность гастрита оценивалась по степени тяжести. как отсутствие (оценка = 0), легкая (оценка = 1), умеренная (оценка = 2) или тяжелая (оценка = 3). Образцы сыворотки обрабатывались «в режиме реального времени» (т. е. анализировались в лаборатории). сразу после сбора, а не хранится). Сообщалось об уровнях антител как положительный (>20 ЕД/мл), пограничный (15-20 ЕД/мл) или отрицательный (неопределяемый, т.е. <15 ЕД/мл).Фактическая концентрация антител (Ед/мл) также регистрировалась. для положительных и пограничных результатов теста. Субъекты, чьи серологические результаты изменение с положительного на отрицательное считалось сероконверсией.

Лечение инфекции H pylori было диагностировано, когда образцы биопсии слизистой оболочки из тела желудка и антрального отдела больше не показали H. pylori организмов через 18 месяцев после терапии. Персистирующая инфекция была диагностирована, когда H pylori микроорганизмы все еще были видны в образцах биопсии желудка через 18 месяцев после терапии.

Данные анализировали с помощью Systat 6.0.1 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, 1996). Мы использовали знаковый ранговый тест Уилкоксона для сравнения средних показателей гастрита перед по сравнению с после терапии, и парные тесты t для сравнения среднего концентрации антител; потому что антитело H pylori уровни не были нормально распределены, использовался их квадратный корень. Двусторонние значения P менее 0,05 считались значимыми.

Инфекция Helicobacter pylori была вылечена в 15 субъектов (65%).У других 8 субъектов (35%) все еще была инфекция H pylori примерно через 18 месяцев после антимикробной терапии. Ни у одного из этих 8 субъектов не было элиминации инфекции H pylori в более ранних образцах биопсии, а затем произошло повторное инфицирование. Таким образом, инфекций H pylori у этих 8 субъектов были стойкий, не рецидивирующий.

В таблице 1 представлены средние значения (±SEM) исходные баллы тяжести гастрита (тело и, в некоторых случаях, антральный отдел), мес. 1 (тело), ​​3-й месяц (тело и антральный отдел) и 18-й месяц (тело и антральный отдел) в 2 группы испытуемых (вылеченные и не вылеченные).Лечение инфекции H pylori было связано со значительным снижением тяжести гастрита. баллов, при отсутствии гастрита в теле или антральном отделе желудка ни у одного из 15 субъектов через 18 месяцев (90 005 P 90 006 = 0,002 и 0,003 по сравнению с исходным уровнем соответственно). У 8 субъектов, у которых инфекция H pylori не была вылечили, тем не менее, средняя тяжесть гастрита снизилась на 50%. балл в теле желудка через 1 месяц ( P = 0,06 по сравнению с исходным уровнем). Однако к 3 мес и к 18 мес выраженность гастрита в желудочно-кишечном тракте тела у этих 8 субъектов с персистирующей инфекцией увеличились до исходных показателей ( Р =.06, месяц 3 против месяца 1; Р =.02, месяц 18 против месяца 1). Тяжесть антрального гастрита была одинаковой в исходном и на 18-м месяце у этих 8 субъектов, которые не вылечились от инфекции.

В таблице 2 представлены количественные уровни антител H pylori в сыворотке крови у каждого из 23 субъектов, делятся на излечившихся от инфекции и неизлечившихся, а также как средние уровни антител для 2 групп. В вылеченной группе есть не было изменений в уровне сывороточных антител через 1 месяц, после чего уровни снизились примерно 50% на 3 месяце ( P =.03, месяц 3 против месяца 1). Уровни антител в сыворотке через 18 месяцев были значительно ниже, чем в начале исследования. месяц 1 и месяц 3 ( P <0,005). Девять из 15 предметов у которых инфекция H pylori была вылечена, через 18 месяцев уровень антител к H pylori в сыворотке не определялся (т.е. 60% имели сероконверсия). У 6 оставшихся вылеченных субъектов наблюдалось значительное снижение уровня сывороточных антител H pylori через 18 месяцев ( Р <.01, месяц 18 по сравнению с исходным уровнем).

Статистически значимых изменений уровней антител к H. pylori в сыворотке крови у 8 субъектов, у которых гастрит, вызванный H. pylori , не был вылечен через 18 месяцев после терапии (субъекты 16-23, табл. 2). Ни один из этих 8 субъектов сероконверсии через 18 месяцев после терапии, хотя один (субъект 20) имел пограничный титр антител.

Helicobacter pylori сероконверсия от положительной до неопределяемого уровня (<15 ЕД/мл) через 18 месяцев имел чувствительность 60% для диагностики излечения инфекции H pylori и специфичности 100% (табл. 3).Если сыворотка порог отсечки антител повышался, чувствительность увеличивалась, но специфичность снижалась, а при пороговом значении 100 ЕД/мл чувствительность составляла 100%, но специфичность составлял всего 37,5%. Серология в более ранние сроки (т.е. в 1 месяц и 3 месяца) была нечувствительны при низких пороговых уровнях и неспецифичны при высоких пороговых уровнях.

Если пациент возвращается с рецидивирующими симптомами после попытки эрадикации инфекции H pylori разумно спросить, или не терапия была успешной.Если терапия была успешной, другие необходимо учитывать причины симптомов, а если терапия не проводилась успешно, повторное лечение может быть целесообразным. Во многом из творчества Катлера et al, 7 был сделан вывод, что серологические может быть чувствительным методом для обнаружения излечения от инфекции H pylori , но только после первых 6 месяцев после терапии и только если базовый (до терапии) образец сыворотки может быть сохранен, а затем отправлен лаборатории вместе с образцом после терапии.С помощью этой «парной сыворотки Образец», снижение уровня антител IgG на 20% или более имеет более чувствительность и специфичность обнаружения излечения более 80%. Однако такой подход не практично. Кроме того, многие лаборатории обычно не сообщают о количественных уровни антител, но вместо этого серологические результаты качественно сообщаются как «положительные». или «отрицательный». В последующем исследовании тех же субъектов Катлер и Прасад 8 сообщили, что только от 29% до 45% вылеченных пациентов (как оценивается с помощью уреазного дыхательного теста) сероконверсия с положительного на отрицательный тест результаты в течение второго года после терапии.Однако только 15 пациентов были после 15 месяцев. Кроме того, они не сообщали ни о каких пациентах с персистирующий гастрит после первого года, так что специфика сероконверсии не удалось определить.

Дизайн нашего исследования отличался от исследований Cutler et al. 7 ,8 Сначала мы лечили здоровых людей, в то время как они лечили более разнородную группу больных с язвой двенадцатиперстной кишки, язвенная болезнь желудка и неязвенная диспепсия.Во-вторых, мы использовали гистологию желудка с окрашивание тканей для микроорганизмов H pylori для оценки излечения, в то время как Катлер и др. использовали дыхательный тест с мочевиной C. Хотя обе техники имеют высокая чувствительность для выявления излечения, использование нами биопсии позволило нам также прямо подтверждают, что излечение было связано с ликвидацией гастрита (табл. 1). В-третьих, мы изучали не только отдельных вылечившихся, но и лиц с персистирующим гастритом после терапии, что позволяет нам рассчитать как чувствительность , так и специфичность сероконверсии.Наконец, мы провели серологические тесты в режиме реального времени (как были собраны образцы сыворотки) для имитации клинической практики, в то время как Катлер et al хранили образцы сыворотки и анализировали их вместе в одном анализе. Оба исследования 2-недельный режим с использованием висмута, тетрациклина и метронидазола, и оба использовали серологический тест IgG того же производителя. Точно так же показатели эрадикации H. pylori в 2 исследованиях были одинаковыми (65% в нашем исследовании). и 57% в исследовании Катлера и др. 7 ,8 ).

Основным открытием нашего исследования было то, что излечение от H pylori приводила не только к ликвидации гастрита, но и к сероконверсии у 60% субъектов примерно через 18 месяцев после завершения терапии. Ни один из 8 субъектов, у которых H pylori инфекция сохранялась после антимикробной терапии сероконверсией или разрешилась гастрита. Эти данные свидетельствуют о том, что сероконверсия после первого года жизни терапии может надежно отражать излечение, хотя 40% субъектов, которые были вылеченные все еще имели положительные результаты тестов (т. е. они не имели сероконверсии).В эти субъекты, которые были вылечены, но оставались серопозитивными через 18 месяцев после терапии, Уровни антител IgG в сыворотке, тем не менее, снизились на 41-94% по сравнению с исходным уровнем. (среднее снижение, 72%), что повышает вероятность того, что более 40% поздних снижение сывороточных антител по сравнению с исходным уровнем может быть полезным для оценки эрадикации, даже если образцы сыворотки анализируются в режиме реального времени. Однако такая возможность маловероятна так оно и есть, поскольку 4 из наших 8 испытуемых, которые, тем не менее, не вылечились снижение уровня антител IgG в сыворотке более чем на 40% по сравнению с исходным уровнем после антимикробной терапии (табл. 2).

Непонятно, почему мы обнаружили, что сероконверсия произошла у 60% вылечили субъектов, в то время как Катлер и Прасад 8 нашли что сероконверсия произошла менее чем у 50%. Эта разница могла иметь было связано с заметно отличающимися популяциями пациентов или случайностью. Наши исследования предполагают, что серология, самый простой из всех тестов для диагностики инфекции H pylori , также может быть использована для оценки адекватности терапии после первого года после лечения.В течение первых 3 мес после лечения однако серология оказалась нечувствительной для подтверждения излечения в этом исследовании, как и в более раннее исследование Cutler et al. 7

Для индивидуума более 1 года после окончания антимикробной терапии сероконверсия является надежным индикатором излечения инфекции H pylori и, вероятно, должен быть тестом первого выбора. Отрицательный результат теста будет исключить необходимость уреазного дыхательного теста или биопсии желудка в большинстве случаев пациентов, которые действительно вылечены.Отсутствие сероконверсии неспецифично, требующие уреазного дыхательного теста или биопсии желудка для подтверждения излечения или стойкого инфекционное заболевание. Поскольку современные схемы эрадикации инфекции H pylori настолько эффективны (80-90% успеха), 11 ,12 еще более высокий процент субъектов, вероятно, будет сероконверсией после первый год, чем мы наблюдали в этом исследовании. Дополнительные долгосрочные исследования необходимы показатели сероконверсии при использовании этих новых схем.

1. Группа разработки консенсуса NIH. Helicobacter pylori при язвенной болезни.  ЯМА. 1994;272:65-69.Google Scholar2.Фельдман М.Клинический тест: придание клинического смысла консенсусной конференции по Helicobacter pylori .  ЯМА. 1994;272:70-71.Google Scholar3.Lee J, O’Morain C. Кого следует лечить от Helicobacter pylori инфекционное заболевание? Гастроэнтерология. 1997;113:S99-S106.Google Scholar4.Хауден CW. При каких состояниях существует доказательное обоснование лечения инфекции Helicobacter pylori ? Гастроэнтерология. 1997;113:S107-S112.Google Scholar5.Graham DY. Может ли когда-либо быть отказано в лечении инфекции Helicobacter pylori ? Гастроэнтерология. 1997;113:S113-S117.Google Scholar6.Cryer B, Lee E, Feldman M. Биопсия слизистой оболочки желудка через назогастральный зонд.  Gastrointest Endosc. 1996;44:317-323.Google Scholar7.Катлер А, Шуберт А, Шуберт Т.Роль серологии Helicobacter pylori в оценке успех лечения.  Научные раскопки. 1993; 38:2262-2266.Google Scholar8.Cutler AF, Prasad VM. Длительное наблюдение за Helicobacter pylori серология после успешной эрадикации.  Am J Гастроэнтерол. 1996;91:85-88.Google Scholar9.Фельдман М., Крайер Б., МакАртур К.Е., Хьют Б.А., Ли Э. Влияние старения и гастрита на секрецию желудочной кислоты и пепсина. у людей: проспективное исследование. Гастроэнтерология. 1996;110:1043-1052.Google Scholar10.Петерсон В.Л., Ли Э., Фельдман М. Связь между Campylobacter pylori и гастрит у здоровых людей после введения плацебо или индометацина. Гастроэнтерология. 1988;95:1185-1197.Google Scholar11.Hopkins RJ. Текущие одобренные FDA методы лечения Helicobacter pylori и процесс одобрения FDA. Гастроэнтерология. 1997;113:S126-S130.Google Scholar12.Unge P. Какие другие схемы лечения инфекции Helicobacter pylori находятся в стадии изучения? Гастроэнтерология. 1997;113:S131-S148.Google Scholar

Возобновление интереса к лечению инфекции Helicobacter pylori

Вопросы и ответы с Уильямом Д. Чеем, доктором медицины

The American Journal of Managed Care® (AJMC®): Лечение Helicobacter pylori ?

CHEY: Это было интересное время, потому что произошло настоящее возрождение интереса к H pylori .За последний год, полтора года в этом пространстве было много движений, тогда как в предыдущие 20 лет в этом пространстве не было абсолютно никакого движения. Я думаю, что рост интереса обусловлен растущим признанием и озабоченностью по поводу растущей распространенности устойчивых к кларитромицину штаммов H pylori . Я был ведущим автором двух последних итераций Руководства по клинической практике Американского колледжа гастроэнтерологов в H pylori , и той, которую мы написали, кажется, в 2007 году, мы начали искать альтернативы тройному кларитромицину. терапии, поскольку показатели резистентности к кларитромицину, по-видимому, растут, а показатели эрадикации при таком режиме составляют 80% или менее.В соответствии с рекомендациями 2017 года мы махали красным флагом, говоря, что нам не следует использовать этот режим, кроме как в очень специфических обстоятельствах.

Наша группа, как и другие группы в Соединенных Штатах, [отслеживала] уровень эрадикации, связанный с тройной терапией кларитромицином (ИПП [ингибитор протонной помпы], кларитромицин, амоксициллин), и в настоящее время он постоянно ниже 80%; обычно в диапазоне от среднего до высокого 70%. Это означает, что примерно 1 из 4 пациентов с H pylori , получающих лечение по этой схеме, не сможет успешно излечиться от своей инфекции.Я думаю, что все чаще люди ищут альтернативы, и, наконец, я думаю, что мы их нашли. Что касается того, что я называю устаревшими схемами — схемами, которые мы используем в течение многих лет, — нам необходимо отказаться от тройной терапии с кларитромицином и отдать предпочтение четырехкомпонентной терапии с висмутом, которая состоит из ИПП, висмута, тетрациклина и метронидазола. . Помимо устаревших схем, существует ряд захватывающих новых комбинированных терапий, которые, я думаю, обеспечат очень жизнеспособные альтернативы и должны быть предпочтительнее традиционной тройной терапии кларитромицином.

AJMC®: Считаете ли вы, что мониторинг результатов был бы полезным вложением, и если да, то насколько сложной будет его реализация?

CHEY: Мониторинг результатов уже проводится в Европе. Что такого интересного в том, что они делают в Европе, так это то, что это происходит во многих разных странах; они приложили сознательные усилия для сотрудничества и создания консорциума исследователей-единомышленников по всей Европе, которые все представляют свои данные и образцы, касающиеся H. pylori , в центральный репозиторий.Им удалось провести несколько очень интересных и ценных исследований, изучающих модели резистентности, а также реальные показатели эрадикации в сочетании с широко используемыми схемами лечения H pylori . Нет ничего, что могло бы помешать нам сделать то же самое здесь, кроме ресурсов и решимости. Я надеюсь, что у нас будет видение, чтобы сделать инвестиции, потому что инфекция H pylori никуда не денется в ближайшее время. Хорошей новостью является то, что Соединенные Штаты являются страной со средней и низкой распространенностью по сравнению со многими другими частями мира, такими как Азия или Латинская Америка, где инфекция H pylori поражает более 60% населения.В Соединенных Штатах мы, вероятно, находимся в диапазоне от 30% до 35%, так что это значительно ниже, но это все еще 1 из 3 человек, которые [заболевают]. Также важно помнить, что [те, кто] иммигрирует в Соединенные Штаты, особенно из России, Азии и Латинской Америки, [могут прибывать из стран, в которых] распространенность инфекции H pylori гораздо выше. Итак, как я уже сказал, H. pylori будет существовать и будет проблемой в обозримом будущем, я думаю, в течение многих лет.

AJMC®: Вы отметили «ресурсы» и «решимость участвовать» как препятствия для мониторинга результатов здесь, в Соединенных Штатах. У вас есть идеи, как это преодолеть?

CHEY: В 1990-х годах существовало что-то под названием Партнерство по наблюдению за устойчивостью к противомикробным препаратам H pylori (SHARP), которое представляло собой национальную программу мониторинга устойчивости к противомикробным препаратам H pylori . Итак, в течение короткого периода времени в США действовала программа слежки.Вы задаетесь вопросом, может ли быть интерес или желание на уровне Национальных институтов здравоохранения, например, финансировать некий тип консорциума, который будет следить за показателями резистентности и отслеживать данные об эффективности лечения H pylori . схемы в США. Я думаю, что другая возможность заключается в том, могут ли компании, разрабатывающие эти новые схемы, быть заинтересованы в создании реестра, в который участники могли бы вводить данные о схемах, которые они используют, — просто данные о практической эффективности, даже если это было бы потенциально полезно.

AJMC®: Какую роль играет скрининг на H pylori у пациентов с симптомами по сравнению с пациентами без симптомов?

CHEY: Если вы сначала рассматриваете пациентов с симптомами, каждое клиническое руководство рекомендует проводить обследование и лечение пациентов с диспепсией. В нашем руководстве также упоминается, что даже при функциональной диспепсии, когда вы делаете эндоскопию и не обнаруживаете язвы, но обнаруживаете инфекцию H. pylori , вам следует провести эрадикацию.Причина [в том, что] инфекция H pylori является одной из немногих излечимых и потенциально обратимых причин диспептических симптомов. Если вы думаете о диспепсии с прагматической точки зрения, вы можете привести аргумент, что воспаление, возможно, активирует чувствительные нервы, которые приводят к возникновению симптомов, которые мы называем диспепсией. Есть также пациенты, у которых, вероятно, есть язвы, которые появляются и исчезают, поэтому во время эндоскопии, возможно, они просто выглядят немного красными, но, возможно, если вы сделали эндоскопию через месяц или 2, вы могли бы обнаружить эрозии или язвы.Этот процесс воспаления и повреждения слизистой оболочки динамичен, и то, что вы обнаружите, в некоторой степени зависит от того, когда вы смотрите. Итак, на самом деле, я думаю, каждая организация, о которой я знаю, рекомендует, чтобы, если у вас есть пациент с необследованной диспепсией или даже функциональной диспепсией, вы должны искать H. pylori , потому что он предлагает одну из единственных обратимых или излечимых причин этих заболеваний. симптомы. Это хорошая новость. Плохая новость заключается в том, что у пациентов с диспепсией только около трети пациентов выздоравливают после эрадикации инфекции H. pylori .Существует также проблема рационального использования антибиотиков, учитывая необходимость многокомпонентных схем лечения. Тем не менее, я поддерживаю рекомендации и считаю, что преимуществ достаточно, чтобы оправдать недостатки лечения пациентов с диспепсией.

Совсем другое дело у инфицированных людей, у которых симптомы отсутствуют. При бессимптомном течении вы, по-видимому, принимаете H. pylori в качестве химиопрофилактической стратегии против рака желудка, потому что H. pylori , по данным Всемирной организации здравоохранения, является канцерогеном класса 1.Есть очень хороший метаанализ, который был опубликован в Gastroenterology в 2016 году Ли и его коллегами 1 , который обобщил все данные на тот момент с точки зрения искоренения H pylori в качестве стратегии химиопрофилактики рака желудка. Исследователи пришли к выводу, что да, скрининг бессимптомных людей на наличие H. pylori и эрадикация H. pylori в надежде на снижение вероятности развития рака желудка имеет потенциальную пользу.Но важно отметить, что преимущества, по-видимому, ограничены странами, где претестовая вероятность рака желудка высока, но менее надежны или даже отсутствуют в таких странах, как США, где претестовая вероятность рака желудка довольно низка.

AJMC®: Следует ли регулярно проводить повторное тестирование после терапии?

ЧЕЙ: Да. В нашем руководстве 2017 г. мы рекомендовали, когда это практически возможно, проводить универсальное послелечебное тестирование для подтверждения эрадикации.Это должно быть сделано с помощью уреазного дыхательного теста, [с] тестом на антиген в кале или, если проводится эзофагогастродуоденоскопия, с помощью гистологического исследования или экспресс-теста на уреазу не менее чем через 4 недели после завершения антибактериальной терапии.

К сожалению, повторное тестирование выполняется не всегда. Есть много практикующих врачей, которые приняли наши рекомендации, и поэтому, если вы опросите гастроэнтерологов, они в основном попадают в 3 лагеря: поставщики, которые регулярно тестируют почти всех, те, кто делает это по определенным показаниям, и те, кто не делает этого. думайте, что это важно или что лечение всегда работает, и по этим причинам не проводите повторное тестирование, чтобы доказать эрадикацию.Я бы предложил такой вопрос: если вы достаточно заинтересованы в том, чтобы найти H. pylori и вылечить его, разве вы не должны быть достаточно заинтересованы, чтобы знать, что его больше нет?

AJMC®: Как вы рекомендуете вести пациента, прошедшего курс лечения от H. pylori , но все еще инфицированного?

CHEY: Допустим, у пациента диспепсия. Вы тестируете их на H pylori , вы находите их, лечите их, они возвращаются для последующего наблюдения, и у них все еще есть симптомы.Не думайте, что симптомы означают, что инфекция все еще присутствует. Повторное тестирование действительно важно, потому что только одна треть пациентов с диспепсией поправится даже после того, как вы успешно ликвидируете инфекцию H. pylori . Постоянные симптомы не равнозначны персистирующей инфекции. Вы должны сделать тест, потому что вы не хотите снова давать кому-то 1, 2 или 3 антибиотика, если у него на самом деле нет инфекции. Если тестирование подтверждает персистентную инфекцию, для лечащего врача важно избегать повторного лечения одними и теми же антибиотиками, подчеркивать важность соблюдения режима лечения и обязательно проводить лечение в течение 14 дней.Приверженность является ключевым фактором, независимо от того, на каком этапе лечения находится пациент. Помните, что с каждым циклом лечения H. pylori становится все труднее успешно искоренить инфекцию, независимо от того, что вы используете для ее лечения. Ваш первый шанс — ваш лучший шанс вылечить инфекцию. После этого все очень быстро начинает катиться вниз. Другие рекомендации можно найти в нашем руководстве ACG. Кроме того, Американская гастроэнтерологическая ассоциация только что опубликовала обновление клинической практики с рекомендациями для пациентов с персистирующей инфекцией H pylori .

ССЫЛКА

1. Lee YC, Chiang TH, Chou CK, et al. Связь между эрадикацией Helicobacter pylori и заболеваемостью раком желудка: систематический обзор и метаанализ. Гастроэнтерология. 2016;150(5):1113-1124.e5 . doi:10.1053/j.gastro.2016.01.028

Обнаружение инфекции Helicobacter Pylori инвазивными и неинвазивными методами у пациентов с желудочно-кишечными заболеваниями из Ирака: валидационное исследование

Abstract

До сих пор нет единого мнения о методе золотого стандарта диагностики H . Pylori в Ираке, а также нехватка данных о достоверности различных методов диагностики. Это исследование было направлено на изучение распространенности этой бактерии с помощью различных методов и сравнение их с количественной полимеразной цепной реакцией (КПЦР) как методом золотого стандарта среди иракских пациентов. Всего 115 иракских пациентов с подозрением на H . В настоящее исследование было включено pylori инфекций. Инвазивные методы, включая экспресс-тест на уреазу (RUT) и посев ткани желудка, в дополнение к неинвазивным методам, включая дыхательный тест с мочевиной 14 C-Urea ( 14 C-UBT), тест на антиген стула (SAT), серологический анализ CagA-IgG, и кПЦР проводили для подтверждения H .Инфекция pylori . КПЦР использовали в качестве золотого стандарта для оценки чувствительности, специфичности, положительных и отрицательных прогностических значений для изученных диагностических тестов. В целом, показатель распространенности H . pylori у иракских пациентов колебалась от 47,8 до 70,4% при использовании различных методов. Положительные результаты для каждого теста были следующими: qPCR 81, (70,4%), UBT 79 (68,7%), SAT 77 (67%), RUT 76 (66,1%), Cag-IgG 61 (53%), и культура 55. (47,8%). 14 C-UBT показал наивысшую общую производительность — 97.Чувствительность 5%, специфичность 97% и общая точность 97,3% с последующими SAT, RUT, Cag-IgG и культуральным методом. На основании точности изученных методов для H . pylori , их можно расположить в следующем порядке: qPCR > UBT > SAT > RUT > CagA IgG > посев. Так как универсальный золотой стандарт для диагностики H . pylori еще не был установлен в Ираке, UBT может быть рекомендован в качестве первого выбора из-за его более высокой эффективности по сравнению с другими методами.

Образец цитирования: Хусейн Р.А., Аль-Укайли МТС, Маджид Ю.Х. (2021) Обнаружение инфекции Helicobacter Pylori с помощью инвазивных и неинвазивных методов у пациентов с желудочно-кишечными заболеваниями из Ирака: проверочное исследование. ПЛОС ОДИН 16(8): e0256393. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0256393

Редактор: Sabato D’Auria, Consiglio Nazionale delle Ricerche, ИТАЛИЯ

Поступила в редакцию: 22 июня 2021 г.; Принято: 5 августа 2021 г .; Опубликовано: 23 августа 2021 г.

Авторское право: © 2021 Hussein et al.Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе.

Финансирование: Авторы не получали специального финансирования для этой работы.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Helicobacter pylori является патогеном человека, инфекция которого тесно связана со многими гастродуоденальными заболеваниями, включая язвенную болезнь, атрофический гастрит, хронический активный гастрит, лимфому лимфоидной ткани, ассоциированную со слизистой оболочкой, в дополнение к некардиальному раку желудка [1] . Распространенность H . Инфекция pylori составляет 30-50% в развитых странах и 70-90% в развивающихся странах [2]. Согласно нескольким исследованиям в Ираке, точные статистические данные и информация о распространенности этой бактерии пока отсутствуют.Разрозненные исследования в Ираке показали распространенность H от 11,3 до 71,3%. пилори [3].

Многие методы используются для диагностики H . pylori , которые делятся на инвазивные и неинвазивные. Инвазивные методы включают экспресс-тест на уреазу (RUT), микробиологический посев и полимеразную цепную реакцию на основе биопсии [4]. Хорошо задокументировано, что неинвазивные методы включают тесты на антигены кала (SAT), дыхательный тест с мочевиной (UBT) и серологические исследования [5].Факторы, влияющие на выбор необходимой методики, включают чувствительность, специфичность, клинический статус и вопросы, связанные с затратами. Поэтому в зависимости от клинических обстоятельств и анамнеза пациентов каждый тест имеет свои ограничения, преимущества и недостатки [4,6]. В определенных ситуациях предпочтение отдается неинвазивным методам. Эти оценки привлекательны из-за их простоты и возможности предоставить результаты в кабинете врача в течение нескольких минут после введения.

В кабинете H . pylori , необходимы неинвазивные методы для выявления ее частоты, передачи и элиминации [7]. UBT считается золотым стандартом неинвазивного метода для H . pylori диагностика с более высокой чувствительностью, специфичностью и точностью по сравнению с другими. Однако специфичность УБТ снижается в присутствии других микроорганизмов, продуцирующих уреазу, в желудочно-кишечном тракте человека [4].Для сравнения, метод SAT является другим основным неинвазивным методом с чувствительностью и специфичностью 94% и 97% соответственно [8]. Анализы стула на антигены недостаточно точны, поскольку на них влияют несколько факторов, таких как антибиотики, ингибиторы протонной помпы (ИПП), N-ацетилцистеин, испражнения и кровотечения из верхних отделов желудочно-кишечного тракта [4,8]. Кроме того, для прогноза H также присутствовали факторы вирулентности. pylori , такие как наличие сывороточных антител CagA, VacA и GroEL у пациентов [9].Однако эти серологические факторы не могут быть использованы для дифференциации между бессимптомным статусом колонизации и активной инфекцией, будь то прошлые или текущие H . pylori , и его нельзя использовать для проверки успешности эрадикации бактерии [4,10].

Эндоскопическая биопсия, инвазивный метод диагностики H . pylori , рекомендуется применять у больных с диспепсическими явлениями. Эндоскопия также дает точную и прозрачную картину слизистой оболочки желудка, хотя и не дает более четких результатов, чем большинство других тестов [4,11].RUT — еще один инвазивный тест, который используется как наиболее рутинный метод в клинической практике. Очень важно знать, что для получения высокой чувствительности необходима бактериальная нагрузка не менее 10 5 бактерий [12]. Таким образом, его не рекомендуется использовать для последующего наблюдения после эрадикации, поскольку такое количество бактерий может быть обнаружено только через 30 дней после неудачи терапии.

Еще одним инвазивным методом является посев. Микробиологический посев из биопсии желудка, основанной на эндоскопии, считается определенным доказательством наличия H . pylori исследование. Культура H . pylori из биоптата желудка характеризуется высокой специфичностью при низкой чувствительности. Культура имеет 100% специфичность, но со значительными вариациями в отношении чувствительности от 85% до 95%. Из-за прихотливого и деликатного характера этой бактерии метод культивирования i n vitro требует определенной транспортной среды, особых условий инкубации и питательной среды для рутинной диагностики H . пилори [8,10]. Хорошо известно, что преимущество изоляции H . pylori в культурах в асептических условиях предрасполагает к проведению высококачественного теста на чувствительность к антибиотикам, чтобы помочь клиницисту в выборе наиболее подходящих противомикробных препаратов для использования в лечении [10].

Количественная полимеразная цепная реакция (кПЦР) на основе эндоскопии имеет преимущество в обнаружении низкой бактериальной нагрузки в дополнение к идентификации генов, кодирующих устойчивость к кларитромицину, из-за специфических мутаций, связанных с таким типом устойчивости к противомикробным препаратам [13].Хорошо известно, что ПЦР характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью (более 95%) по сравнению с другими традиционными методами. Более точно обнаруживает H . pylori у пациентов с кровотечением. Кроме того, ПЦР играет решающую роль в определении точечных мутаций, кодирующих устойчивость к H pylori , в дополнение к факторам вирулентности, таким как CagA и VacA [14].

До сих пор нет согласия в отношении метода золотого стандарта диагностики H . Pylori в Ираке, а также нехватка данных о достоверности различных методов диагностики. Также приведены эпидемиологические сведения о распространенности H . pylori редко встречается в Ираке. Следовательно, это исследование было направлено на изучение распространенности этой бактерии с помощью различных методов и сравнение их с qPCR как методом золотого стандарта среди иракских пациентов.

Материалы и методы

Заявление об этике

Все методы исследования, в которых участвовали пациенты, были одобрены Комитетом по одобрению этики Университета Анбара, Рамади, Ирак (утверждение № 122, 20 ноября 2019 г.).Информированное письменное согласие было предоставлено всеми пациентами или их родителями, участвующими в исследовании.

Коллекция образцов

Всего в текущем исследовании с января 2020 г. по февраль 2021 г. было включено 115 пациентов с симптомами желудочно-кишечных заболеваний, которые обратились в учебные больницы и частные клиники Рамади в Ираке для плановой эндоскопии верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Критерии исключения применялись к пациентам, получавшим h3. – блокаторы рецепторов, противомикробная терапия, ИПП и/или нестероидные противовоспалительные препараты за 1 месяц до эндоскопии.Из исследования также исключались субъекты со следующими клиническими состояниями: цирроз печени, нефропатия в критических стадиях и беременность. Информация о демографических и социально-экономических факторах, а также личная история болезни зарегистрированных пациентов ранее собиралась с помощью анкеты. Неинвазивные тесты (SAT, UBT и Cag-IgG) оценивались у всех пациентов. Образцы желудочной биопсии были получены из антрального отдела и тела желудка во время обычной эндоскопии опытным клиницистом (гастроэнтерологом).Все биоптаты помещали в стерильные пробирки, содержащие бульонную среду для инфузии головного мозга и сердца (BHI) (Oxoid, Великобритания) и 5% фетальной бычьей сыворотки для транспортировки. Желудочные биопсии использовали для посева, БУТ и количественной ПЦР. С образцами фекалий в дополнение к сыворотке исследуемых пациентов сразу же обращались и хранили при температуре -20°C до использования.

Определение

H . пилори статус

Положительный результат количественной ПЦР был определен как положительный H . Инфекция pylori .Отрицательный H . Инфекция pylori была подтверждена, когда все проведенные тесты дали согласующиеся отрицательные результаты.

Экспресс-тест на уреазу (РУТ)

RUT был достигнут путем суспендирования 24,01 г основы мочевинного агара в 950 мл деионизированной воды. После автоклавирования и стерилизации фильтровальной бумагой Millipore добавляли 50 мл 40% раствора мочевины. Составляющие хорошо перемешиваются и заливаются в трубу, уложенную под углом. Биоптат помещали в среду при 25 o С.Изменение цвета с исходного желтоватого на красный через 24 часа свидетельствует о положительном результате теста [15].

Бактериальное культивирование

Образцы биопсии культивировали на агаре BHI (Oxoid, Великобритания), состоящем из 5% фекальной бычьей сыворотки (Capricorn, Южная Америка), 7% лошадиной крови и антибиотиков, включая нистатин, налидиксовую кислоту и ванкомицин. Далее планшеты инкубировали при температуре 37°С в микроаэрофильных условиях с насыщенной влажностью в течение 5–7 дней, что привело к снижению 0.1 кислорода в течение 2,5 часов и увеличение содержания CO 2 на 7–15% в течение 24 часов (Анаэрокульт А; Дармштадт, Германия) [16]. Все исходные культуры хранили в бульоне BHI с добавлением 15% глицерина и 10% фекальной бычьей сыворотки при -20°С. Эти препараты размораживали и пересевали для последующих экспериментов.

14 Дыхательный тест с C-мочевиной (UBT)

Пациенты проглатывают тестовую капсулу, содержащую мочевину, меченную радиоактивным углеродом 14, с водой, либо натощак, либо через два часа после еды.UBT было проведено в течение 7 дней после эндоскопии, прежде чем было назначено лечение антибиотиками. Мочевину, меченную 14 С, определяли с помощью детектора HUBT-20P Helicobacter pylori (Headway, Китай). Если пациент инфицирован H . pylori , тестовая мочевина будет расщеплена, и будет произведен и выдыхаемый изотопно-меченый углекислый газ, который затем будет обнаружен прибором [17].

Анализ кала на антиген (SAT)

Этот тест был проведен с помощью иммунохроматографического анализа с использованием H . pylori Ag Rapid Test CE (CTK Biotech, США). Это было выполнено для качественного обнаружения H . pylori в образце фекалий человека, что указывает на активный H . Инфекция pylori . Процедура выполнялась в соответствии с инструкциями производителя [17]. Случайный образец стула был собран в чистую сухую емкость. Устройство для сбора стула энергично встряхивали для получения однородной жидкой суспензии. Образец и испытуемые компоненты доводили до комнатной температуры при охлаждении или замораживании.Устройство для сбора кала держали вертикально и откручивали колпачок. Две капли (70–90 мкл) раствора наносили в лунку для образца кассеты, при этом раствор не переливался. Результаты можно прочитать через 10 минут. Результаты будут считаться отрицательными, если развилась только линия С, а тест показал, что H не обнаруживается. Антиген pylori в образце. Положительный результат появился, когда развились как линии С, так и линии Т.

Обнаружение CagA-IgG

Сыворотка, полученная из 5 мл образца крови каждого пациента.Тест CagA был проведен на этих сыворотках с использованием набора для иммуноферментного анализа (ELISA) Human Helicobacter Pylori Cytotoxin-Associated Gene A Protein IgG (HP-CagA-IgG) (Cusabio, США) с использованием системы ELISA (Human, Германия). ) в соответствии с инструкциями производителя. Образцы сыворотки или плазмы перед испытанием разбавляли разбавителем для образцов (1:1000). Всего в каждую лунку микропланшета для ELISA добавляли по 100 мкл отрицательного контроля, положительного контроля и разведенных образцов. Микропланшет покрывали клейкой лентой и инкубировали 30 минут при 37°С.Каждую лунку аспирировали и трижды промывали. Затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл HRP-конъюгата (1×). Микропланшет покрывали клейкой полоской и инкубировали в течение 30 минут при 37°С. Процесс аспирации/промывания повторяли пять раз, так как на этапе 6 в каждую лунку добавляли 90 мкл субстрата ТМБ и инкубировали в течение 20 минут при 37°С и в защищенном от света месте. Наконец, в каждую лунку добавляли 50 мкл стоп-раствора, осторожно постукивали по планшету, чтобы обеспечить тщательное перемешивание. Оптическую плотность каждой лунки определяли в течение 10 минут с помощью устройства для считывания микропланшетов, настроенного на 450 нм.Результаты считались положительными, если концентрация антител CagA (IgG) была > 0,9 ЕД/мл.

Молекулярная техника

Извлечение ДНК из биоптатов. ДНК

экстрагировали с использованием набора для выделения тканевой ДНК SaMag TM , а для выделения геномной ДНК использовали автоматическую систему выделения нуклеиновых кислот SaMag-12 TM (Samaga, Cepheid, Италия). Флуориметр Quantus TM (Promega, США) использовали для измерения концентрации выделенной нуклеиновой кислоты с целью определения качества образца для дальнейшего применения.

Количественная ПЦР в реальном времени.

Это было достигнуто с использованием термоциклера (Sacace, Италия) с набором для количественной ПЦР для качественного обнаружения H. pylori (Sacace, Италия). Программа ПЦР состоит из одного 15-минутного цикла при 95°С, за которым следуют 45 циклов по 10 секунд при 95°С, 30 секунд при 60°С и заключительный 10-секундный цикл при 72°С.

Анализ данных

Все данные были проанализированы с использованием программного обеспечения SPSS TM , версия 22.0 (IBM Corporation, Армонк, штат Нью-Йорк, США).Параметры чувствительности и специфичности, положительные и отрицательные прогностические значения, отношение правдоподобия (LR): шансы (вероятность) заражения при положительном результате теста (LR+) и шансы заражения при отрицательном результате теста (LR-). ) были рассчитаны.

Результаты

Пациенты включали 80 мужчин (69,6%) и 35 женщин (30,4%) в возрасте от 18 до 70 лет. Из общего числа больных у 53 (46,1%) был антральный гастрит, у 2 (1,7%) сочетанный гастрит и дуоденит, у 7 (6.у 1 %) был дуоденит, у 1 (0,9 %) — опухоль или аденокарцинома желудка, у 4 (3,5 %) — грыжа пищеводного отверстия диафрагмы, у 19 (16,5 %) — сочетанная язва желудка и двенадцатиперстной кишки, у 1 (0,9 %) — эзофагит и у 28 ( 24,3%) больных имели диспепсию (табл. 1). Распределение людей с желудочно-кишечными расстройствами по возрасту представлено в таблице 2. Большинство пациентов были в возрастном диапазоне ≤ 37 лет.

Результаты каждого диагностического теста представлены в таблице 3. Из 115 образцов биопсии 81 (70,4%) были положительными при количественной ПЦР и 34 (29.6%) были отрицательными. Положительные результаты для других тестов были следующими: UBT 79 (68,7%), SAT 77 (67%), RUT 76 (66,1%), Cag-IgG 61 (53%) и культура 55 (47,8%). Как видно из результатов, наиболее надежным тестом по сравнению с кПЦР оказался УДТ с наименьшим количеством ложноотрицательных и ложноположительных случаев. Кроме того, культуральный метод с наибольшим количеством ложноположительных и ложноотрицательных случаев был признан самым неэффективным тестом.

В таблице 4 показаны чувствительность, специфичность, положительные и отрицательные прогностические значения и отношение правдоподобия для каждого теста.По сравнению с кПЦР, UBT показал самые высокие общие характеристики с чувствительностью 97,5%, специфичностью 97% и общей точностью 97,3%, за которыми следуют SAT, RUT, Cag-IgG и культуральный метод. Культуральный метод с чувствительностью 67,9%, специфичностью 79,4% и общей точностью 71,3% показал самую низкую эффективность.

Обсуждение

Общеизвестно, что выбор метода диагностики для исследования H . Инфекция pylori зависит от штаммов и распространенности этой бактерии в эндемичных районах в дополнение к преимуществам, недостаткам и доступности для каждого метода [8].В клинических условиях это быстрый и экономичный метод определения H . Всегда требуется pylori . До сих пор нет всестороннего исследования для оценки распространенности H . Заражение pylori у иракских пациентов различными методами. Настоящее исследование было первым, в котором изучались различные инвазивные и неинвазивные методы обнаружения H . pylori у иракских пациентов с симптомами желудочно-кишечных заболеваний.

Хорошо известно, что УЗТ является одним из основных неинвазивных диагностических инструментов для обнаружения активного H . пилори инфекций. Этот тест используется во всем мире, является неинвазивным и может использоваться у детей и беременных женщин, при этом каждый год проводится скрининг миллионов субъектов [18]. Результаты УБТ показали, что у 68,7% (79/115) обследованных больных было Н . pylori , который был почти аналогичен предыдущему отчету AL-Saad et al. [19] из Ирака, которые сообщили о распространенности 67.1% для H . pylori инфекций методом УДТ. Однако наш уровень распространенности был намного выше, чем в отчете Altamimi et al. [20] из Иордании методом УДТ [14,6% (48/328)]. Это несоответствие может быть связано с различиями в изучаемой популяции или возрастом участников. Для оценки эффективности этого метода предлагается проводить УТП в различных однородных возрастных популяциях с большим числом пациентов. В этом исследовании было проведено сравнение чувствительности и специфичности УДТ с КПЦР, другим методом диагностики.Чувствительность и специфичность составляли 97,5% и 97% соответственно, что очень близко к показателям, наблюдаемым Atkinson et al. [6] и Рахим и др. [21]. Целью использования выдыхаемого воздуха с мочевиной 14 C было определение его чувствительности и специфичности при диагностике H . pylori по сравнению с КПЦР. Наши результаты показали, что дыхательный тест с мочевиной 14 C показал лучшие результаты, чем SAT, RUT, посев и серология для диагностики H . пилори .В соответствии с текущим исследованием Alzoubi et al. [22] из Иордании сравнили три H . pylori методов диагностики и пришли к выводу, что чувствительность, положительные прогностические/отрицательные прогностические значения и точность UBT были выше, чем у SAT по сравнению с культуральным методом. Хорошо известно, что ложноотрицательные результаты могут быть связаны с низкой колонизацией H . pylori в желудке, что приводит к снижению H . pylori уровня уреазы, либо к приему пациентом ИПП и антибиотиков перед обследованием [22].Кроме того, наличие в желудке других продуцирующих уреазу патогенов также вызывает ложноположительные результаты [8]. Этот тест не может предоставить информацию о генотипах и устойчивости к антибиотикам. Некоторые лекарственные препараты, в том числе висмутсодержащие соединения, антибиотики и ИПП, могут снижать чувствительность теста за счет снижения плотности организма или активности уреазы [10]. Таким образом, исследование также зависит от культуры и от конкретного H . pylori диагностика на основе генов.

Что касается метода SAT, в предыдущем исследовании сообщалось, что этот тест является многообещающим в качестве предварительного диагностического инструмента и полезен для последующего наблюдения после лечения прогрессирования H .инфекция pylori [23]. С помощью теста SAT для H была выявлена ​​распространенность 67%. Инфекция pylori . Этот результат был очень похож на недавний отчет Galal et al. [24] из Египта, которые указали частоту встречаемости 64,6% с использованием метода SAT. Однако, в отличие от этого исследования, Al-Mashhadany et al. [25] сообщили о гораздо более низкой распространенности (11,3%) в Курдистане, Ираке, используя метод SAT. Эти различия могут быть связаны с различиями в социально-экономическом статусе, уровне образования, пищевых привычках и состоянии гигиены в исследуемых регионах.В этом исследовании тест на антиген в стуле показал чувствительность и специфичность 95% и 91,2% соответственно, что было близко к результатам исследования, полученным Miftahussurur et al. [10]. В этом тесте ложноотрицательные результаты, подобные UBT, возникают из-за низкой бактериальной нагрузки и использования ИПП, антибиотиков или висмута [4]. Однако метод SAT не требует голодания, и недавно в продаже появились некоторые его варианты, на которые не влияют ИПП. Кроме того, различные исследования показали эффективность этого метода в диагностике инфицированных пациентов от лечения пациентов, а также его эффективность в оценке эрадикации H .инфекция pylori [4,22]. Хотя это исследование показало, что метод SAT был на втором месте после UBT по чувствительности по сравнению с qPCR, утверждается, что этот тест может превосходить метод UBT [4].

Серологическое обнаружение H . Инфицирование pylori штаммом H , содержащим CagA. pylori с использованием анти-CagA ELISA представляет собой неинвазивный диагностический метод для оценки потенциальной вирулентности и риска исследуемого штамма.Надежность серологии CagA как прогностического теста для определения генотипа CagA инфекционного штамма важна, поскольку в настоящее время доступны различные серологические анализы [25]. Серологическая часть этого исследования отразила снижение специфичности на 85,3% по сравнению с другими. Этот результат очень близок к результатам, полученным Аткинсоном и др. [6] и Amgalanbaatar et al. [26]. Антитела против CagA не всегда вырабатываются в сыворотке людей с H . пилори .Кроме того, было высказано предположение, что разные популяции могут иметь разные иммунные ответы на H . пилори [27]. Ковер и др. использовали ELISA для обнаружения CagA-экспрессирующих H . pylori и коррелировали серологические результаты с обнаружением гена CagA [28]. Они обнаружили значительное несоответствие между ELISA и молекулярным обнаружением CagA, особенно у пациентов, инфицированных CagA-негативными H . пилори штаммов. Они предположили, что интерпретация может быть связана со смешанной инфекцией неизвестного происхождения CagA-позитивными и негативными штаммами.Было замечено, что наборы ELISA различаются по чувствительности и специфичности для обнаружения H . инфекции pylori внутри страны. В каждой стране или регионе более подходящим считается набор ИФА с отечественным репрезентативным штаммом в качестве антигена [26]. В Ираке все наборы ELISA для H . pylori импортируются, а отечественного набора пока нет. В текущем исследовании ложноотрицательные случаи анти-CagA составили 17,4%. Предполагается, что ложноотрицательные результаты ИФА могут иметь несколько возможных объяснений.Во-первых, ген CagA является функциональным, в то время как мутации могли возникнуть в других локусах внутри cag PAI, которые модифицировали способность клетки экспортировать активный белок CagA. Это вызывает отсутствие серопозитивности. Во-вторых, отсутствие анти-CagA-антител у таких пациентов может быть связано с изменением последовательности CagA, приводящим к различным эпитопам [29]. Это также может быть связано с низким уровнем антител, вырабатываемых против антигена, используемого в наборе ELISA [30]. Как правило, неспособность различить текущую и перенесенную инфекцию может объяснять низкую точность серологических тестов [4].

Другим тестом, показавшим хорошую эффективность по сравнению с количественной ПЦР, был метод RUT. Используя RUT, для H был установлен уровень распространенности 66,1%. Пилори . Этот результат был выше, чем в отчете Aftab et al. [31] из Бангладеш (43,6%). В настоящем исследовании чувствительность и специфичность RUT составляли 93,8% и 94,1% соответственно, что было очень близко к значениям, установленным другими авторами [6,10,31]. Ложноотрицательный результат составил 4,3%. Недавнее использование ИПП и наличие кишечной метаплазии рассматривают наиболее частые причины ложноотрицательных результатов [29].Приблизительно 10 5 бактерий должны присутствовать в образце биопсии для положительного результата, и все, что снижает плотность бактерий, например, использование антибиотиков, висмутсодержащих соединений или ИПП, может привести к ложноотрицательным результатам [32]. Также активность уреазы снижалась в коккоидной форме H . Pylori с отрицательным результатом уреазного теста [10]. Ложноположительные результаты очень редки и могут быть связаны с присутствием других уреазосодержащих организмов, таких как Proteus mirabilis , Citrobacter freundii , Klebsiella pneumoniae , Enterobacter cloacae и Staphylococcus aureus. .

Текущее исследование показало чувствительность и специфичность 67,9% и 79,4% для культурального метода соответственно. Однако Аткинсон и соавт. [6] продемонстрировали чувствительность и специфичность этого метода на уровне 60% и 100% соответственно. Другое исследование Aftab et al. [31] сообщили о чувствительности и специфичности 92,1% и 100% для H . pylori культур соответственно. Чувствительность культурального метода к обнаружению H . pylori у взрослого населения колеблется от 62.от 7% до 96,3% в проведенных исследованиях [33]. Несмотря на то, что культуральный метод считается золотым стандартом диагностики, его трудно использовать отдельно в качестве рутинного диагностического подхода. Х . Положительный результат на pylori можно обнаружить в случаях роста из-за низкой чувствительности метода посева. Также отсутствие роста не исключает возможности H . Инфекция pylori . Несмотря на долгое использование, культура остается проблемой из-за прихотливой природы бактерии с особыми требованиями к росту в отношении окружающей среды и атмосферы [33].Изменение рН или ИПП косвенно влияет на H . pylori распределение в желудке. В нашем исследовании критериями исключения были ИПП или антагонисты h3-рецепторов и антибиотики за 4 недели до начала исследования, аналогично другому исследованию и рекомендациям [34]. Текущие результаты показали уровень 22,6% ложноотрицательных случаев культурального метода. Это может быть связано с тем, что H . pylori может существовать в двух формах: активно делящейся спиральной форме и кокковидной форме.Коккоидные формы были описаны как «жизнеспособные, но не культивируемые» [33].

Молекулярные методы превосходят другие методы с точки зрения скорости тестирования, отсутствия ограничений на транспортировку образцов и высокой точности. Метод ПЦР разрабатывается для исследования присутствия микроорганизмов непосредственно в клинических образцах. По сравнению с обычной ПЦР, ПЦР в реальном времени имеет ряд преимуществ, таких как короткое рабочее время, высокая специфичность и низкий риск заражения [8,35]. Количественные результаты ПЦР в реальном времени в нашем исследовании показали, что чувствительность и специфичность составляли 100% и 100% соответственно.Результат количественной ПЦР в этом исследовании был очень близок к результатам, полученным Johannessen et al. [36]. Денг и др. сообщили, что чувствительность ПЦР в реальном времени составила 100%. [34]. Кроме того, в соответствии с текущим исследованием Peng et al. [37] продемонстрировали специфичность количественной ПЦР на уровне 100% и чувствительность на уровне 97,1%.

Заключение

В целом текущее исследование показало, что коэффициент распространенности H . pylori у иракских пациентов колебался от 47,8 до 70,4% с использованием различных инвазивных и неинвазивных методов обнаружения.На основании точности изученных методов для H . pylori , их можно расположить в следующем порядке: qPCR > UBT > SAT > RUT > CagA IgG > посев. Так как универсальный золотой стандарт для диагностики H . pylori еще не был установлен в Ираке, UBT может быть рекомендован в качестве первого выбора из-за его более высокой эффективности по сравнению с другими методами. Кроме того, поскольку большинство медицинских центров не могут позволить себе дорогостоящее оборудование для работы в режиме реального времени, использование быстрого и относительно недорогого неинвазивного метода, такого как УДТ, может использоваться в качестве мощного инструмента первичного скрининга.В этом исследовании сделан заметный вывод о роли ПЦР в реальном времени как более чувствительного, надежного и точного, чем другой метод диагностического исследования. Несмотря на лучшую чувствительность ПЦР в реальном времени, чем у обычной ПЦР, что делает ее более удобной для использования, статистическая значимость все еще ограничена. ПЦР в реальном времени быстрее и дает много наблюдаемых преимуществ по сравнению с обычной ПЦР. Он позволяет обнаруживать низкую бактериальную нагрузку, а также идентифицировать резистентные гены и специфические точечные мутации, опосредованные устойчивостью к кларитромицину, фторхинолонам и другим противомикробным препаратам [6].В настоящее время клиническое использование ПЦР-тестирования ограничено некоторыми факторами, такими как высокая стоимость, но высокая диагностическая эффективность в условиях до и после лечения с дополнительной возможностью выявления штаммов, устойчивых к кларитромицину, делает его превосходным в последнее время. и будущая диагностическая техника [6]. Из-за повышения лекарственной устойчивости H . pylori к наиболее распространенным методам лечения, важно создать быстрый и достоверный тест для скрининга генов устойчивости к антибиотикам у этой бактерии [38].Диагноз H . pylori следует проводить с учетом клинических условий. Также необходима комбинация анализов. Когда пациентам проводят эндоскопию верхних отделов с взятием биопсии, ПЦР, особенно ПЦР в реальном времени, дает несколько преимуществ по сравнению с посевом. ПЦР в реальном времени рекомендуется пациентам, у которых эндоскопия верхних отделов с биопсией по сравнению с посевом, при которой она отличается высокой точностью, надежностью, трудоемкостью и высокой чувствительностью. Исследование предполагает, что метод золотого стандарта диагностики H . pylori — это ПЦР в реальном времени, подтвержденная точным посевом в асептических условиях, особенно у пациентов без ответа на антимикробную химиотерапию. Кроме того, он необходим для наблюдения за устойчивостью к антибиотикам, а также для идентификации и оценки эффективных H . пилори методов лечения.

Каталожные номера

  1. 1. Решетняк В.И., Бурмистров А.И., Маев И.В. Helicobacter pylori : комменсал, симбионт или патоген? Мир J Гастроэнтерол.2021;27(7):545. пмид:33642828
  2. 2. Кано-Контрерас А.Д., Раскон О., Амиева-Балмори М., Риос-Гальвез С., Маза Ю.Дж., Мейшуейро-Даса А. и др. Подход, отношение и знания врачей общей практики в отношении Helicobacter pylori являются неадекватными. Есть много возможностей для улучшения!. Rev Gastroenterol Mex (английское издание). 2018;83(1):16–24.
  3. 3. Маджид П.Д., Хошнав К.Дж. Серопревалентность инфекции Helicobacter pylori среди пациентов с гастродуоденальными заболеваниями в городе Эрбиль.Дияла Дж Мед. 2020;18(1):91–101.
  4. 4. Саббах П., Мохаммадния-Афроузи М., Яванян М., Бабазаде А., Копполу В., Васигала В.Р. и др. Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori : идеалы, варианты и ограничения. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2019;38(1):55–66. пмид:30414090
  5. 5. Каяли С., Алоэ Р., Бонагури С., Гайани Ф., Манфреди М., Леандро Г. и др. Неинвазивные тесты для диагностики Helicobacter pylori : современный уровень техники.Акта Биомед. 2018;89(8-С):58–64. пмид:30561419
  6. 6. Аткинсон Н.С., Брейден Б. . Инфекция Helicobacter pylori : диагностические стратегии при первичной диагностике и после терапии. Dig Dis Sci. 2016;61(1):19–24. пмид:263

  7. 7. Эль-Шабрави М., Абд Эль-Азиз Н., Эль-Адли Т.З., Хассанин Ф., Эскандер А., Абу-Зекри М. и др. Обнаружение антигена в кале по сравнению с 13 Дыхательный тест с мочевиной C для неинвазивной диагностики инфекции Helicobacter pylori у детей в условиях ограниченных ресурсов.Arch Medical Sci. 2018;14(1):69–73.
  8. 8. Wang YK, Kuo FC, Liu CJ, Wu MC, Shih HY, Wang SS и др. Диагностика инфекции Helicobacter pylori : текущие варианты и разработки. Мир J Гастроэнтерол. 2015;21(40):11221–11235. пмид:26523098
  9. 9. Formichella L, Romberg L, Meyer H, Bolz C, Vieth M, Geppert M, et al. Валидация нового иммунологического анализа для стратификации пациентов в соответствии с вирулентностью инфекционного штамма Helicobacter pylori и статусом эрадикации.Дж. Иммунол Рез. 2017;2017:8394593. пмид:28638837
  10. 10. Мифтахуссурур М., Ямаока Ю. Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori для эпидемиологических исследований: критическая важность проверки непрямых тестов. Биомед Рез Инт. 2016;2016:4819423. пмид:268
  11. 11. Талеби Безмин Абади А. Диагностика Helicobacter pylori с использованием инвазивных и неинвазивных подходов. Дж Патог. 2018;2018:52. пмид:29951318
  12. 12.Graham DY, Miftahussurur M. Уреаза Helicobacter pylori для диагностики инфекции Helicobacter pylori : мини-обзор. J Adv Res. 2018;13:51–57. пмид:30094082
  13. 13. Kalach N, Gosset P, Dehecq E, Decoster A, Spyckerelle C, Papadopolos S, et al. Полезность полимеразной цепной реакции в режиме реального времени на основе биопсии желудка для диагностики инфекции Helicobacter pylori у детей. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2015 г.; 61(3):307–312.пмид:25793904
  14. 14. Саес Дж., Белда С., Сантибаньес М., Родригес Дж. К., Сола-Вера Дж., Галиана А. и др. ПЦР в реальном времени для диагностики инфекции Helicobacter pylori у пациентов с кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта: сравнение с другими классическими методами диагностики. Дж. Клин Микробиол. 2012;50(10):3233–3237. пмид:22837325
  15. 15. Аль-Джобори М.Б., Аль-Укаили М.Т. и Абдулла Е.М. Обнаружение гена 16S r РНК Helicobacter pylori у пациентов с язвенной болезнью и карциномой желудка: молекулярное и бактериологическое исследование.Египет Академик J Биолог Sci. 2011;3(1):95–104.
  16. 16. Амин М., Шайестех А.А., Сераджян А., Гударзи Х. Оценка устойчивости к метронидазолу и кларитромицину среди изолятов Helicobacter pylori в Ахвазе (юго-запад Ирана) в течение 2015–2016 гг. с помощью фенотипических и молекулярных методов. Юндишапур Дж. Микробиолог. 2019;12(4):e80156.
  17. 17. Фервана М., Абдулмаджид И., Альхаджиахмед А., Мадани В., Фирвана Б., Хасан Р. и др. Точность уреазного дыхательного теста при инфекции Helicobacter pylori : метаанализ.Мир J Гастроэнтерол. 2015;21(4):1305–1314. пмид:25632206
  18. 18. Молина-Молина Э., Бонфрате Л., Лоруссо М., Шанмугам Х., Скаччаноче Г., Роккас Т. и др. Более быстрое обнаружение инфекции Helicobacter pylori с помощью дыхательного теста с 13c-мочевиной. сравнение короткого и стандартного времени выборки. J Gastrointest и печени Dis. 2019;28(2):157–161.
  19. 19. Аль-Саад Н.Ф., Надхим М.Х., Навар Х.И. Серологический, культуральный и уреазный дыхательный тест для выявления H. Pylori у пациентов с язвой желудка.Indian J Med Forensic Med Toxicol. 2020;14(4):1317–1322.
  20. 20. Альтамими Э., Альшархат Н., Аль-Джаварнех А., Абу Хамад МДР, Асси А.А., Алауна С. и др. Снижение распространенности инфекции Helicobacter pylori среди иорданских детей, отчет из развивающейся страны. Гелион. 2020;6(7):e04416. пмид:32715122
  21. 21. Абд Рахим М.А., Джохани Ф.Х., Шах С.А., Хассан М.Р., Абдул Манаф М.Р. 13 Точность дыхательного теста с мочевиной на Helicobacter pylori у азиатского населения: метаанализ.Энн Глоб Здоровье. 2019;85(1):110. пмид:31348624
  22. 22. Alzoubi H, Al-Mnayyis A, Aqel A, Abu-Lubad M, Hamdan O, Jaber K. Использование 13 C-мочевинного дыхательного теста для неинвазивной диагностики инфекции Helicobacter pylori по сравнению с эндоскопией и исследованием кала тест на антиген. Диагностика. 2020;10(7):448. пмид:32635179
  23. 23. Khalifehgholi M, Shamsipour F, Ajhdarkosh H, Daryani NE, Pourmand MR, Hosseini M, et al. Сравнение пяти методов диагностики Helicobacter pylori .Иран J Microbiol. 2013;5(4):396. пмид:25848511
  24. 24. Галал Ю.С., Гобриал К.М., Лабиб Дж.Р., Абу-Зекри М.Е. Helicobacter pylori среди египетских детей с симптомами: распространенность, факторы риска и влияние на рост. J Ассоциация общественного здравоохранения Египта. 2019;94(1):1–8. пмид:30679877
  25. 25. Аль-Машхадани Д.А. Применение теста на антиген стула для мониторинга Helicobacter pylori среди людей в провинции Эрбиль, регион Курдистан/Ирак. Int J Pharm Pharm Sci.2018;10(11):49–53.
  26. 26. Амгаланбаатар А., Шимомура Х., Сугано К., Бира Т.О., Окамото Х., Хираи Ю. Корреляция между инфекцией Helicobacter pylori и атрофией желудка, изученная в сыворотке монгольского народа. Желудочно-кишечные расстройства. 2019;1(2):241–252.
  27. 27. Сабер Т., Гонаим М.М., Юсеф А.Р., Халифа А., Кураши Х.А., Шакхан М. и др. Ассоциация гена Helicobacter pylori cagA с раком желудка и пептической язвой у пациентов из Саудовской Аравии.J Microbiol Biotechnol. 2015;25(7):1146–1153. пмид:257
  28. 28. Cover TL, Glupczynski Y, Lage AP, Burette A, Tummuru MK, Perez-Perez GI, et al. Серологическое выявление инфекции cagA+ штаммами Helicobacter pylori . Дж. Клин Микробиол. 1995;33(6):1496–1500. пмид:7650174
  29. 29. Peters TM, Owen RJ, Slater E, Varea R, Teare EL, Saverymuttu S. Генетическое разнообразие в острове патогенности Helicobacter pylori cag и влияние на экспрессию анти-CagA сывороточного антитела у британских пациентов с диспепсией.Джей Клин Патол. 2001;54(3):219–23. пмид:11253135
  30. 30. Фернандес-Ботран Р., Веллманн И.А., Уне С., Мендес-Чакон Э., де Родас Э.Х., Бхандари Б. и соавт. Серопревалентность антител Helicobacter pylori /CagA у пациентов с раком желудка в Гватемале: связь серопозитивности с повышенным уровнем пепсиногенов в плазме, но не с растворимым рецептором активатора урокиназы плазминогена. Am J Trop Med Hyg. 2020; 103(1):260–265. пмид:32314688
  31. 31. Aftab H, Yamaoka Y, Ahmed F, Khan AA, Subsomwong P, Miftahussurur M, et al.Валидация диагностических тестов и эпидемиологии инфекции Helicobacter pylori в Бангладеш. J Infect Dev Cries. 2018;12(05):305–312. пмид:31865291
  32. 32. Уотани Т. и Грэм Д.Ю. Диагностика Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста с уреазой. Энн Трансл Мед. 2015 г.; 3(1):1–7. пмид:25705633
  33. 33. Cosgun Y, Yildirim A, Yucel M, Karakoc AE, Koca G, Gonultas A, et al. Оценка инвазивных и неинвазивных методов диагностики инфекции Helicobacter pylori .Азиатский Pac J Рак Prev. 2016;17(12):5265. пмид:28125872
  34. 34. Yoon SB, Park JM, Lee JY, Baeg MK, Lim CH, Kim JS и др. Длительная предварительная обработка ингибитором протонной помпы и эрадикация Helicobacter pylori . Мир J Гастроэнтерол: WJG. 2014;20(4):1061. пмид:24574779
  35. 35. Доре М.П., ​​Пес Г.М. Что нового в диагнозе Helicobacter pylori . Обзор. Дж. Клин Мед. 2021;10(10):2091. пмид:34068062
  36. 36. Йоханнессен Р., Берг К., Джиану С., Кливленд П.М.Полимеразная цепная реакция против посева в диагностике инфекции Helicobacter pylori . Гастроэнтерол Insights. 2013;5(1):1–6.
  37. 37. Peng X, Song Z, He L, Lin S, Gong Y, Sun L и др. ПЦР в реальном времени на основе желудочного сока для индивидуального лечения Helicobacter Pylori : практический подход. Int J Med Sci. 2017;14(6):595. пмид:28638276
  38. 38. Раси-Бонаб Ф., Джафари-Салес А., Шаверди М.А., Навидифар Т., Саки М., Горбани А. и др. Характер резистентности к антибиотикам и частота генов cagA и vacA в штаммах Helicobacter pylori , выделенных от пациентов в городе Тебриз, Иран.Примечания BMC Res. 2021;14:216. пмид:34059110

границ | Методы обнаружения коккоидной формы Helicobacter pylori

в окружающей среде

Введение

Helicobacter pylori признана наиболее частой причиной гастрита, пептической язвы и язвы двенадцатиперстной кишки, а также рака желудка (1, 2). В течение многих лет динамика передачи H. pylori в значительной степени оставалась неизвестной и, таким образом, привлекла внимание многих исследователей во всем мире.Во многих исследованиях загрязненная вода считается источником передачи этого патогена, который колонизирует более 50% людей (3). Водоснабжение, загрязненное сточными водами с биологическими жидкостями или фекалиями инфицированных людей, рассматривалось как потенциальный источник инфекции H. pylori (4, 5). Передача H. pylori может происходить от человека к человеку как перорально-оральным, так и фекально-оральным путем (6). Некоторые предыдущие исследования показали положительную корреляцию между H.pylori и потребление неочищенной или низкокачественной питьевой воды, что свидетельствует о передаче инфекции H. pylori через воду (7–9). H. pylori трансформируется из нормальной спиралевидной бациллярной формы в кокковидную при воздействии воды в неблагоприятных условиях (5, 10). Как и другие грамотрицательные бактерии, коккоидные формы H. pylori также обычно жизнеспособны, но не культивируются (VBNC), менее вирулентны и с меньшей вероятностью колонизируются и вызывают воспаление, чем спиральные формы.Было продемонстрировано, что бактерии в состоянии VBNC способны сохранять свою метаболическую активность и патогенность (11), а также могут возвращаться к условиям активного повторного роста (12, 13). Хорошо известно, что обнаружение H. pylori в кокковидных формах с помощью традиционных методов затруднено (14). Долгое время считалось, что бактериальные клетки мертвы, когда они больше не могут образовывать колонии на обычных культуральных средах. Теперь мы знаем, что это предположение слишком упрощенно, и во многих случаях бактериальные клетки теряют способность к культивированию, но остаются жизнеспособными и потенциально способны к повторному росту.Недавно исследователи продемонстрировали, что коккоидные формы H. pylori можно культивировать в накопительной культуре (15). Эпидемиологические исследования показывают, что уровень санитарии, особенно санитарии воды, влияет на вероятность заражения H. pylori . Было высказано предположение, что риск заражения H. pylori в 2–13 раз выше у людей, которые пьют необработанную речную или колодезную воду и плавают в реках, ручьях или бассейнах, чем у тех, кто пьет водопроводную водопроводную воду и не плавает в такой среде. (8, 9, 16, 17).

Helicobacter pylori был обнаружен в питьевой воде (4, 18–20), а также в морской воде (5). Было обнаружено, что один штамм H. pylori , хранившийся в глубоких грунтовых водах или в естественной морской воде при температуре 4 °C, выживал значительно дольше, чем тот же штамм, хранившийся в среде, богатой питательными веществами (21). Несколько исследований показывают, что H. pylori могут сохраняться в виде культивируемых форм в течение нескольких недель в воде и могут сохраняться дольше в естественных системах, чем в искусственных, богатых питательными веществами (14, 22).Только в нескольких исследованиях сообщалось об обнаружении H. pylori коккоидной формы в пробах воды из окружающей среды. В одном исследовании бактерия была обнаружена в муниципальном канале сточных вод на границе США и Мексики, что предполагает фекально-оральный путь заражения (4). В другом исследовании в пробе морской воды была идентифицирована кокковидная форма H. pylori (23). Кроме того, Samra et al. (24) изучили 600 проб питьевой воды, отобранных службами водоснабжения и санитарии из грунтовых скважин в разных местах.В этом обзоре мы обобщаем текущие подходы к обнаружению коккоидной формы H. pylori в окружающей среде и обсуждаем их чувствительность, специфичность и точность.

VBNC Государство и окружающая среда

H. pylori Коккоидные формы

Жизнеспособное, но не культивируемое состояние представляет собой реакцию бактерий на некоторые формы естественных неблагоприятных условий, таких как голодание по питательным веществам (25), экстремальные температуры (26), инкубация за пределами допустимых диапазонов pH или солености для роста клеток (27, 28), высокие или низкие осмотические концентрации (29), переменные концентрации кислорода (30), воздействие пищевых консервантов (31) и воздействие видимого света и УФ-облучения (32).Шахамат и др. продемонстрировал переход H. pylori в состояние VBNC впервые во время лабораторных исследований, в которых наблюдалось, что клетки становятся непригодными для культивирования в пресноводном микрокосме (33). Клетки в состоянии VBNC обычно демонстрируют очень низкий уровень метаболической активности, но при реанимации снова становятся пригодными для культивирования (5, 34–36). Многие предполагают, что H. pylori сохраняется в окружающей среде в форме VBNC (21, 34, 37, 38), и имеются лишь разрозненные свидетельства реверсии к активно делящейся форме (39, 40). H. pylori чаще всего встречается в организме человека в форме спирали, но при воздействии неблагоприятных условий окружающей среды он превращается в кокковидную форму (41). Было высказано предположение, что на основании данных, собранных за последние несколько лет, VBNC-клетки патогенов человека следует рассматривать как потенциальную опасность для здоровья населения, а не как мертвые клетки (42). Кроме того, патогены в состоянии VBNC могут оставаться вирулентными или продуцировать энтеротоксины (43). Проблема большого значения заключается в обнаружении VBNC и жизнеспособных культивируемых (VC) клеток новыми и более эффективными методами.Существует острая необходимость в методе, который снижает селективность, уменьшает погрешность, связанную с хранением и инкубацией образцов, и сокращает время анализа (44).

Культура

Отсутствуют установленные культуральные методы для обнаружения H. pylori в источниках питьевой воды (45). Несмотря на усилия по получению специфичной культуры, культивирование H. pylori на среде из питьевой воды не увенчалось успехом (46, 47). Была предложена простая посевная среда для обнаружения H.pylori в окружающей среде (48). В нескольких исследованиях сообщалось, что H. pylori переходит в кокковидную форму при воздействии среды с дефицитом питательных веществ (49), при приеме лекарственных препаратов (50), изменении рН (39), аномальной температуре (51) или длительном культивировании (52). . Считается, что спиральная форма (рис. 1А) немедленно и быстро трансформируется в кокковидную форму (рис. 1В) (34). Первая успешная изоляция H. pylori из окружающей воды с использованием обогащенной культуры была проведена из муниципального канала сточных вод, сильно загрязненного неочищенными неочищенными сточными водами в U.Граница между Южной и Мексикой, где часто регистрировалась инфекция H. pylori (4). Однако история безуспешных попыток культивирования H. pylori из природных вод побудила исследователей изучить возможность использования молекулярных методов для обнаружения и идентификации этого организма.

Рисунок 1. Конверсия бациллярной формы H. pylori (A) в кокковую форму (B) (15) .

Авторадиография

Авторадиографию

оптимизировали и использовали для определения метаболической активности клеток VBNC H.pylori в воде. Меченные тритием клетки H. pylori показали скопления зерен серебра, связанные с поглощением H. pylori радиоактивно меченого субстрата. Температура является важным фактором окружающей среды для жизнеспособности организма в воде. Авторадиография показала, что H. pylori сохраняют жизнеспособность при 4°C в течение 26 месяцев. Однако стерильная вода не отражает естественную среду, в которой может происходить конкуренция с встречающимися в природе популяциями микроорганизмов.Выводы, основанные на подходе авторадиографии, предоставили доказательства, подтверждающие гипотезу о том, что существует водный путь заражения H. pylori (51).

Электронная микроскопия

Коккоидные формы были разделены на два типа, a и b, с помощью электронной микроскопии, хотя функция двух разных коккоидных форм H. pylori неясна. Одна возможность состоит в том, что кокковидная форма в целом представляет собой дегенеративное состояние организма (53).Кустерс и др. (54) указали, что кокковидные клетки H. pylori были морфологическим проявлением гибели бактериальных клеток, наблюдая процесс трансформации с помощью электронной микроскопии. Однако другие предположили, что эта форма — VBNC (55). Бенаисса и др. (56) утверждали, что коккоиды H. pylori лишены дегенеративных изменений. Виллен и др. (57) изучали морфологическое превращение H. pylori из спиральной (рис. 2А) в кокковидную (рис. 2В) форму с использованием сканирующей электронной микроскопии и просвечивающей электронной микроскопии.

Рисунок 2. Морфологические проявления Helicobacter pylori . (А) Палочковидная (Б) Кокковидная форма. Исходное увеличение × 20 000 (58).

Флуоресцентный

На месте Гибридизация

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) с олигонуклеотидными зондами рибосомной РНК успешно использовалась для обнаружения и идентификации VBNC-форм бактерий (59).FISH был утвержден как быстрый и чувствительный метод обнаружения H. pylori в пробах окружающей среды (60). В США активное дыхание H. pylori из поверхностной и колодезной воды было обнаружено с помощью микроскопии с флуоресцентным восстановлением антител к тетразолию (FACTC) (18) и подтверждено с помощью видоспецифичной полимеразной цепной реакции (ПЦР) (61). Эти результаты помогли определить присутствие H. pylori в естественной среде и возможный путь передачи через воду.Использование FISH представляет собой альтернативу ПЦР-обнаружению H. pylori в воде (60) и сыром коровьем молоке (62). Эти результаты указывают на то, что в какой-то момент времени хеликобактер проник в источник воды, но методы ПЦР или гибридизации не позволяют установить наличие жизнеспособных организмов, хотя коккоиды в формах VBNC могут передаваться через воду (63, 64).

Методы на основе ДНК

Среди молекулярных методов для диагностики H.pylori , а также анализ разнообразия, вирулентности, персистенции и моделей резистентности этих бактерий (65), включая обнаружение микроорганизмов в пробах из окружающей среды (66, 67). Конкретные гены-мишени выбираются во избежание перекрестной реактивности между H. pylori и другими бактериями. Например, ПЦР, нацеленная на ген 16S рРНК , случайные последовательности хромосом, 26-кДа ген видоспецифического антигена , ген уреазы A ( ureA ) и ген уреазы C ( ureC ) или glmM гена (68–70).Среди этих генов-мишеней обнаружение гена ureC на основе ПЦР представляется наиболее многообещающим для обнаружения H. pylori (69).

О присутствии H. pylori в питьевой воде, которое было обнаружено с помощью ПЦР, сообщалось из многих стран (71, 72). Несмотря на потребность в микроаэробной атмосфере, хеликобактеры, возможно, могут выживать в течение коротких периодов времени в воде в коккоидной форме VBNC (40, 49), что позволяет им передаваться через водопроводную систему, оставаясь при этом необнаруживаемыми культуральными методами.Кроме того, недавние результаты показывают, что клетки H. pylori могут быть в состоянии переносить уровни дезинфицирующего средства, обычно используемые на водоочистных сооружениях. Результаты одного исследования показали присутствие H. pylori в поверхностных водах США (18). ДНК H. pylori также была амплифицирована из образцов питьевой воды в Японии (73), Мексике (74) и Перу (75), неочищенной колодезной воды в США (76), из образцов воды, взятых из грузовика для доставки воды. и два озера возле залива Репалс в канадской Арктике (77) и из резервуаров для хранения питьевой воды в Гамбии (70).

Ясно, что ПЦР — единственный способ продемонстрировать присутствие H. pylori в источниках водоснабжения и морской воде (5, 78). H. pylori нельзя было культивировать, и клеточная мембрана была разрушена, но нуклеиновая кислота все еще обнаруживалась с помощью ПЦР (47, 61). Кроме того, из-за его высокой чувствительности было предложено, чтобы ПЦР был подходящим методом для обнаружения организмов, когда они находятся в небольшом количестве, медленно растут или не поддаются культивированию (79).

Несмотря на результаты многих исследований по идентификации H.pylori в воде, важно учитывать тот факт, что использование ПЦР и других молекулярных методов для выявления патогенов в пробах окружающей среды имеет ряд ограничений. Наиболее серьезным ограничением является то, что ПЦР не позволяет нам отличить живые клетки от мертвых. Он также страдает от того, что он предвзят и занимает много времени (44).

Nayak и Rose (80) продемонстрировали, что количественная ПЦР (кПЦР) может определять концентрацию H. pylori в воде.В этом исследовании было показано, что количественная ПЦР является специфическим, чувствительным и быстрым методом количественного определения H. pylori в сточных водах. Другое исследование показало, что коккоидные формы, независимо от их жизнеспособности, легко выявляются в небольшом количестве с помощью количественной ПЦР (81). Nayak и Rose (80) исследовали обнаружение H. pylori в сточных водах и воде, используя новый метод количественной ПЦР с SYBR green. Янзон и др. (81) обнаружили ДНК H. pylori в питьевой и природной воде в Дакке, Бангладеш, с помощью высокочувствительной ПЦР в реальном времени.Сен и др. (82) разработали внутренний контроль для оценки и стандартизации количественной ПЦР для обнаружения H. pylori в питьевой воде. Имеются также сообщения о неспособности идентифицировать H. pylori в питьевой воде в США (83) и в питьевой воде или очищенных сточных водах в слабоэндемичных развитых странах, таких как Бельгия, Испания и Италия (84).

КПЦР-тест H. pylori имеет несколько преимуществ. Во-первых, он не зависит от культивирования.Во-вторых, многие образцы могут быть проанализированы быстро, поскольку инструменты для количественной ПЦР в реальном времени легко доступны и они могут анализировать до 384 образцов за 2 часа. В-третьих, количественная ПЦР в реальном времени устраняет многие источники человеческих ошибок из процесса анализа и снижает вероятность загрязнения. Результаты McDaniels et al. (83) поддерживают идею о том, что быстрая количественная ПЦР в реальном времени может быть полезна для скрининга большого количества проб питьевой воды на присутствие H. pylori в низких концентрациях.Из-за метаболических и морфологических изменений, которые могут препятствовать росту клеток H. pylori в воде на обычных средах, был разработан специфичный для H. pylori анализ TaqMan qPCR, в котором используется меченный 6-карбоксифлуоресцеином зонд (83).

Кроме того, существует ряд исследований, сообщающих о следах H. pylori в различных источниках воды, в основном с использованием методов на основе ПЦР, хотя успешное выделение живых H. pylori из речной воды (4) или морского зоопланктона (5) было сообщено.Однако некоторые из этих исследований проводились с речной, озерной или морской водой (20, 85, 86), а не с питьевой водой, а в некоторых использовалась вложенная ПЦР (20, 78, 87), которая может повысить чувствительность обнаружения, но более эффективна. склонны к загрязнению.

Проточная цитометрия

Проточная цитометрия — это аналитический метод, позволяющий различать четыре физиологических состояния бактерий: репродуктивно жизнеспособные, метаболически активные, интактные и пермеабилизированные.Он может определять пропорции состояний VBNC и VC и мертвых клеток на основе целостности мембраны грамотрицательных бактерий (44). Применение этой методики делает возможным быстрый анализ одиночных клеток in situ. Кроме того, используя этот метод вместе с методами окрашивания, такими как окрашивание в реальном времени/мертвом состоянии, можно получить качественные данные (88). Хотя использование проточной цитометрии выявило четыре физиологических состояния, быстрые подходы к различению клеток VBNC и VC еще недоступны (44).

Метод изотермической амплификации с помощью петель

Петлевая изотермическая амплификация (LAMP) — многообещающий метод, который может преодолеть некоторые технические недостатки ПЦР. LAMP — это новая стратегия амплификации генов, в которой все реакции проводятся в изотермических условиях (т. е. без необходимости термоциклирования) с использованием одного типа фермента. Этот метод обладает высокой эффективностью амплификации и обеспечивает более быстрое время амплификации, чем ПЦР (65, 89). LAMP амплифицирует целевую ДНК с образованием пирофосфата магния в качестве побочного продукта. Амплификация ДНК может быть обнаружена по мутности, измеренной с помощью фотометрии из-за увеличения содержания пирофосфата магния в растворе (65, 90), или путем добавления зеленого SYBR, который может изменить цвет, обнаруживаемый с помощью «голого» глаза без необходимости в дорогостоящем оборудовании.Кроме того, для обнаружения амплификации ДНК можно использовать нагруженный марганцем кальцеин, который начинает флуоресцировать при смешивании с марганцем пирофосфатом во время синтеза ДНК in vitro (91).

Таким образом, можно обнаружить амплификацию продуктов без гель-электрофореза, используя белый осадок пирофосфата магния в реакционной смеси. Этого можно достичь благодаря высокой специфичности и эффективности амплификации LAMP (65, 89). Простота работы с LAMP дает преимущества по сравнению с доступными в настоящее время ДНК-зондами и методами ПЦР (65).Хотя методы ПЦР являются быстрыми и точными по сравнению с другими методами обнаружения коккоидных форм H. pylori , было обнаружено, что LAMP даже более эффективен для обнаружения коккоидных форм H. pylori в пробах воды (рис. 3) с точки зрения точности. , скорость и чувствительность, основанные на лабораторных экспериментах с микрокосмом (15), аналогичный уровень обнаружения H. pylori был заархивирован в образцах биопсии желудка с использованием метода LAMP (92).

Рисунок 3.ЛАМПА тест . 1: отрицательный контроль, 2: положительный контроль (15).

Секвенирование ДНК нового поколения и метагеномика

Метагеномика — это применение современных методов геномики для изучения микробного сообщества непосредственно в его естественной среде (93). Важно отметить, что метагеномика обходит необходимость лабораторного культивирования отдельных видов бактерий, тем самым позволяя изучать некультивируемые микроорганизмы (94). Присутствие некультивируемых бактерий в окружающей среде известно уже более века и часто упоминается как «большая аномалия подсчета чашек» (95).Эта концепция представляет собой состояние, при котором существует расхождение — часто на несколько порядков — между размерами бактериальной популяции, оцениваемой культурой, по сравнению с наблюдаемой под микроскопом. Будет справедливо отметить, что демонстрация того, что H. pylori вызывает язву желудка и рак, помогла привлечь внимание к важности некультивируемого микробного мира. Хотя спиральные бактерии наблюдались в слизистой оболочке желудка собак в 1893 г. и у людей в 1906 г. (96), а корреляция между появлением бактерий и пептическими язвами была отмечена в 1938 г. (97), до H.pylori культивировали, когда была признана его роль в качестве возбудителя заболевания (98, 99).

К середине 1980-х микробиологи начали описывать филогенетическое разнообразие микроорганизмов в «экзотических» средах, таких как океаны, глубоководные жерла, горячие источники, почва и другие, используя только молекулярные методы. Многие из этих независимых от культуры методов были основаны на выделении тотальной ДНК из образца окружающей среды, клонировании ДНК в подходящий вектор, трансформации клонов в бактерию-хозяина (т.т. е., создание библиотеки клонов) и скрининг клонов на наличие филогенетического маркера (например, 16S рРНК). Затем были секвенированы клоны и каталогизированы последовательности генов 16S рРНК, чтобы выявить различные таксоны, присутствующие в образце (94). Этот метод широко используется для идентификации бактерий и архей из различных сред (100–103). Сегодня высокопроизводительное секвенирование ДНК нового поколения сделало этот процесс намного более эффективным. Достижения в секвенировании следующего поколения (и снижение затрат) теперь предоставляют технические средства, с помощью которых можно не только контролировать микробные сообщества в окружающей среде, но и изучать появление патогенов в естественной среде, особенно тех, которые больше не подлежат культивированию, такие как формы VBNC. бактериальных возбудителей.Метагеномика в сочетании с секвенированием нового поколения использовалась для изучения микробных сообществ во многих природных средах, включая прибрежные районы Таиланда (104), воды Пьюджет-Саунд в США (105), пресноводные и морские отложения вдоль Жемчужной реки в Китае. (106), в том числе. Хотя ни одно из этих исследований не было специально сосредоточено на некультивируемых бактериях или коккоидной форме H. pylori , Zheng et al. разработали методы метагеномного анализа H. pylori из старых фиксированных формалином и парафиновых биоптатов желудочно-кишечного тракта с использованием высокопроизводительного пиросеквенирования Roche 454 (107).Разумно предположить, что эти подходы могут быть использованы для обнаружения и характеристики H. pylori в естественной водной среде.

Заключение

Helicobacter pylori является важным патогеном человека, который, по оценкам, поражает слизистую оболочку желудка половины населения мира (108). Динамика передачи H. pylori плохо изучена; однако эпидемиологические данные и обнаружение H. pylori в самых разных природных водных средах указывают на передачу инфекции через воду.Хотя большинство попыток культивирования H. pylori из проб воды оказались безуспешными, вероятно, из-за присутствия коккоидной формы VBNC, теперь доступны отличные инструменты для обнаружения H. pylori в пробах воды, чаще всего ПЦР и КПЦР. . Являясь мощным и точным методом обнаружения H. pylori , метод количественной ПЦР предоставляет лабораториям диагностической микробиологии возможность количественного определения и достижения высокой степени чувствительности и специфичности мишеней по сравнению со стандартной ПЦР.Другие многообещающие методы обнаружения H. pylori в окружающей среде включают анализ LAMP, который можно проводить без термоциклера, а результаты можно визуализировать невооруженным глазом (рис. 3). Возможно, одной из самых интересных областей в микробиологии за последнее десятилетие является все более широкое использование секвенирования ДНК и метагеномики нового поколения. По мере того, как инструменты для секвенирования ДНК становятся все более распространенными и портативными, а стоимость секвенирования продолжает снижаться, метагеномика, вероятно, станет основной технологией, используемой в экологической микробиологии и микробной экологии, включая исследования динамики передачи и потенциальных резервуаров H.пилори . Эта осведомленность в конечном итоге поможет чиновнику общественного здравоохранения принять необходимые меры для защиты людей от инфекции H. pylori .

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Каталожные номера

1. Malfertheiner P. Интригующая взаимосвязь инфекции Helicobacter pylori и секреции кислоты при язвенной болезни и раке желудка. Dig Dis (2011) 29 : 459–64. дои: 10.1159/000332213

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

2. Calvet X, Ramirez Lázaro MJ, Lehours P, Mégraud F. Диагностика и эпидемиология инфекции Helicobacter pylori . Helicobacter (2013) 18 (1):5–11. дои: 10.1111/hel.12071

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

3.Азиз Р.К., Халифа М.М., Шараф Р.Р. Загрязненная вода как источник инфекции Helicobacter pylori . J Adv Res (2013). doi:10.1016/j.jare.2013.07.007

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

4. Lu Y, Redlinger TE, Avitia R, Galindo A, Goodman K. Выделение и генотипирование Helicobacter pylori из неочищенных городских сточных вод. Appl Environ Microbiol (2002) 68 (3):1436–9.doi:10.1128/AEM.68.3.1436-1439.2002

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

5. Cellini L, Del Vecchio A, Di Candia M, Di Campli E, Favaro M, Donelli G. Обнаружение свободного и связанного с планктоном Helicobacter pylori в морской воде. J Appl Microbiol (2004) 97 : 285–92. doi:10.1111/j.1365-2672.2004.02307.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

6.Челлини Л., Робаффо И., Маральди Н.М., Донелли Г. В поисках точки невозврата в жизни Helicobacter pylori: некроз и/или запрограммированная смерть? J Appl Micro (2001) 90 (5):727–32. doi:10.1046/j.1365-2672.2001.01300.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

7. МакКаллион В.А., Мюррей Л.Дж., Бэйли А.Г., Далзелл А.М., О’Рейли Д.П., Бэмфорд К.Б. Инфекция Helicobacter pylori у детей: связь с текущими бытовыми условиями жизни. Гут (1996) 39 : 18–21. doi:10.1136/gut.39.1.18

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

8. Нургалиева З.З., Малати Х.М., Грэм Д.Ю., Альмучамбетова Р., Махмудова А., Капсултанова Д. и соавт. Инфекция Helicobacter pylori в Казахстане: влияние источника воды и бытовой гигиены. Am J Trop Med Hyg (2002) 67 (2): 201–6.

PubMed Резюме | Академия Google

9.Карита М., Терамукай С., Мацумото С. Риск передачи Helicobacter pylori через питьевую колодезную воду выше, чем от инфицированных внутрисемейных членов в Японии. Dig Dis Sci (2003) 48 : 1062–7. дои: 10.1023/A:1023752326137

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

10. Аль-Сулами А.А., Аль-Эдани ТАА, Аль-Абдула А.А. Культуральный метод и ПЦР для обнаружения Helicobacter pylori в питьевой воде в провинции Басра, Ирак. Gastroenterol Res Pract (2012) 2012 (5):245167. дои: 10.1155/2012/245167

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

11. Колвелл Р.Р., Брайтон П., Херрингтон Д., Талл Б., Хук А., Левин М.М. Жизнеспособный, но не культивируемый Vibrio cholerae O1 возвращается в культивируемое состояние в кишечнике человека. World J Microbiol Biotechnol (1996) 12 (1):28–31. дои: 10.1007/BF00327795

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

12.Su X, Chen X, Hu J, Shen C, Ding L. Изучение потенциальных экологических функций жизнеспособных, но не культивируемых бактерий. World J Microbiol Biotechnol (2013) 29 :2213–8. дои: 10.1007/s11274-013-1390-5

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

13. Сенох М., Гош-Банерджи Дж., Рамамурти Т., Колвелл Р.Р., Миёси С., Наир Г.Б. и соавт. Преобразование жизнеспособных, но не культивируемых кишечных бактерий в культивируемые путем совместного культивирования с эукариотическими клетками. Microbiol Immunol (2012) 56 :342–5. doi:10.1111/j.1348-0421.2012.00440.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

15. Chamanrokh P, Shahhosseiny MH, Mazaheri Assadi M, Nejadsattari T, Esmaili D. Оценка трех тестов, используемых для обнаружения некультивируемых форм Helicobacter pylori в пробах воды. Jundishapur J Microbiol (2014).

Академия Google

16.Гудман К.Дж., Корреа П., Аукс Тенгана Х.Дж., Рамирез Х., ДеЛани Дж.П., Герреро Пепиноса Г. и др. Инфекция Helicobacter pylori в колумбийских Андах: популяционное исследование путей передачи. Am J Epidemiol (1996) 144 : 290–9. doi: 10.1093/oxfordjournals.aje.a008924

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

17. Ахмед К.С., Хан А.А., Ахмед И., Тивари С.К., Хабиб А., Ахи Д.Д. и др.Влияние бытовой гигиены и источника воды на распространенность и передачу Helicobacter pylori : точка зрения Южной Индии. Singapore Med J (2007) 48 :543–9.

PubMed Резюме | Академия Google

19. Glynn MK, Friedman CR, Gold BD, Khanna B, Hutwagner L, Iihoshi N, et al. Сероинцидентность инфекции Helicobacter pylori в когорте сельских детей Боливии: сбор и анализ возможных факторов риска. Clin Infect Dis (2002) 35 :1059–65. дои: 10.1086/342910

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

20. Queralt N, Bartolomé R, Araujo R. Обнаружение ДНК Helicobacter pylori в фекалиях человека и воде с разным уровнем фекального загрязнения на северо-востоке Испании. J Appl Microbiol (2005) 98 :889–95. doi:10.1111/j.1365-2672.2004.02523.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

21.Кониси К., Сайто Н., Сёдзи Э., Такеда Х., Като М., Асака М. и др. Helicobacter pylori : более длительное выживание в глубоких грунтовых и морских водах, чем в среде, богатой питательными веществами. АПМИС (2007) 115 : 1285–91. doi:10.1111/j.1600-0643.2007.00594.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

22. Адамс Б.Л., Бейтс Т.С., Оливер Дж.Д. Выживание Helicobacter pylori в естественной пресноводной среде. Appl Environ Microbiol (2003) 69 (12):7462–6. doi:10.1128/AEM.69.12.7462-7466.2003

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

24. Самра З.К., Джавид У., Гафур С., Батул А., Дар Н., Атар М.А. ПЦР-анализ генов вирулентности Helicobacter pylori , выделенных из питьевой воды и клинических образцов в столичном Лахоре, Пакистан. J Water Health (2011) 9 (1): 208–16.doi: 10.2166/wh.2010.169

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

25. Кук К.Л., Болстер Ч.Д. Выживаемость Campylobacter jejuni и Escherichia coli в грунтовых водах при длительном голодании при низких температурах. J Appl Microbiol (2007) 103 : 573–83. doi:10.1111/j.1365-2672.2006.03285.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

26.Беснар В., Федериги М., Деклерк Э., Жужо Ф., Каппелье Ж.М. Экологические и физико-химические факторы вызывают состояние VBNC у Listeria monocytogenes . Vet Res (2002) 33 (4): 359–70. doi: 10.1051 / vetres: 2002022

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

27. Каннингем Э., О’Бирн С., Оливер Дж. Д. Влияние слабых кислот на выживаемость Listeria monocytogenes : свидетельство доступного, но не культивируемого состояния в ответ на низкий рН. Food Control (2009) 20 :1141–4. doi:10.1016/j.foodcont.2009.03.005

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

28. Дель Кампо Р., Русси П., Мара П., Мара Х., Пейру М., ДеЛеон И.П. и др. Xanthomonas axonopodis pv. Citri переходит в состояние VBNC после обработки медью и сохраняет свою вирулентность. FEMS Microbiol Lett (2009) 298 : 143–8. doi:10.1111/j.1574-6968.2009.01709.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

29.Асакура Х., Кавамото К., Хайсима Ю., Игими С., Ямамото С., Макино С.-И. Дифференциальная экспрессия белка наружной мембраны W(OmpW) в ответ на стресс в энтерогеморрагической Escherichia coli O157:H7 соответствует жизнеспособному, но не культивируемому состоянию. Res Microbiol (2008) 159 :709–17. doi:10.1016/j.resmic.2008.08.005

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

30. Кана Б.Д., Гордхан Б.Г., Даунинг К.Дж., Сунг Н., Востроктунова Г., Маховски Э.Э. и соавт.Факторы, способствующие оживлению Mycobacterium tuberculosis , необходимы для вирулентности и выхода из состояния покоя, но в совокупности они незаменимы для роста in vitro. Mol Microbiol (2008) 67 : 672–84. doi:10.1111/j.1365-2958.2007.06078.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

31. Кирос С., Эрреро М., Гарсия Л.А., Диас М. Количественный подход к определению вклада жизнеспособных, но некультивируемых субпопуляций в процессы яблочно-молочного брожения. Appl Environ Microbiol (2009) 75 (9): 2977–81. doi: 10.1128/AEM.01707-08

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

32. Gourmelon M, Cillard J, Pommepuy M. Повреждение видимым светом Escherichia coli в морской воде: гипотеза окислительного стресса. J Appl Bacteriol (1994) 77 :105–12. doi:10.1111/j.1365-2672.1994.tb03051.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

33.Шахамат М., Пашко-Колва С., Ямамото Х., Колвелл Р. Экологические исследования Campylobacter pylori . Klin Wochenschr (1989) 67 (Приложение XVII): 62–3.

Академия Google

34. Сайто Н., Кониси К., Сато Ф., Като М., Такеда Х., Сугияма Т. и др. Процессы множественной трансформации от спиральной к кокковой Helicobacter pylori и ее жизнеспособность. J Infect (2003) 46 : 49–55.doi:10.1053/jinf.2002.1047

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

35. Азеведо Н.Ф., Пачеко А.П., Виейра М.Дж., Кивил К.В. Питательный шок и атмосфера инкубации влияют на извлечение культивируемых Helicobacter pylori из воды. Appl Environ Microbiol (2004) 70 :490–3. doi:10.1128/AEM.70.1.490-493.2004

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

36.Chaput C, Ecobichon C, Cayet N, Girardin SE, Werts C, Guadagnini S, et al. Роль AmiA в морфологическом переходе Helicobacter pylori и в иммунном ускользании. PLoS Pathog (2006) 2 :e97. doi:10.1371/journal.ppat.0020097

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

37. Queralt N, Araujo R. Анализ выживания H. pylori в лабораторной водной модельной системе с использованием молекулярных и классических методов. Microb Ecol (2007) 54 :771–7. дои: 10.1007/s00248-007-9242-1

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

38. Азеведо С., Алмейда Л., Серкейра С., Диаш С., Кивил В., Виейра М.Дж. Кокковидная форма Helicobacter pylori как морфологическое проявление адаптации клеток к окружающей среде. Appl Environ Microbiol (2007) 73 :3423–7. doi: 10.1128/AEM.00047-07

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

39.Cellini L, Allocati N, Angelucci D, Iezzi T, Di CE, Marzio L, et al. Coccoid Helicobacter pylori , не поддающийся культивированию in vitro, реверсирует у мышей. Microbiol Immunol (1994) 38 :843–50. doi:10.1111/j.1348-0421.1994.tb02136.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

40. Ше Ф.Ф., Линь Дж.И., Лю Дж.И., Хуанг С., Су Д.Х. Вирулентность индуцированного водой коккоида Helicobacter pylori и его экспериментальная инфекция у мышей. World J Gastroenterol (2003) 9 (3):516–20.

PubMed Резюме | Академия Google

41. Андерсен Л.П., Вадстром Т. Основы бактериологии и культуры. В: Mobley HLT, Mendz GL, Hazell SL, редакторы. Helicobacter Pylori: физиология и генетика . Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press (2001). п. 27–38.

Академия Google

42. Хук А., Ривера И., Колвелл Р.Эпидемиологическое значение жизнеспособных, но некультивируемых микроорганизмов. В: Колвелл Р., Граймс Д., редакторы. Некультивируемые микроорганизмы в окружающей среде . Вашингтон, округ Колумбия: Американское общество микробиологии Press (2000). п. 301–23.

Академия Google

43. Pommepuy M, Butin M, Derrien A, Gourmelon M, Colwell RR, Cormier M. Сохранение энтеропатогенности жизнеспособной, но некультивируемой Escherichia coli , подверженной воздействию морской воды и солнечного света. Appl Environ Microbiol (1996) 62 :4621–6.

PubMed Резюме | Академия Google

44. Хан ММТ, Пайл Б.Х., Кампер А.К. Специфический и быстрый подсчет жизнеспособных, но не культивируемых и жизнеспособных культивируемых грамотрицательных бактерий с помощью проточной цитометрии. Appl Environ Microbiol (2010) 76 (15):5088–96. doi: 10.1128/AEM.02932-09

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

46.Азеведо Н.Ф., Алмейда С., Фернандес И., Серкейра Л., Диас С., Кивил К.В. и др. Выживаемость желудочного и кишечно-печеночного Helicobacter spp. в воде: последствия для передачи. Appl Environ Microbiol (2008) 74 (6):1805–11. doi: 10.1128/AEM.02241-07

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

47. Джао М.С., Азеведо Н.Ф., Уилкс С.А., Виейра М.Дж., Кивил К.В. Устойчивость Helicobacter pylori в гетеротрофных биопленках питьевой воды. Appl Environ Microbiol (2008) 74 :5898–904. doi: 10.1128/AEM.00827-08

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

48. Студли П., Уилсон С., Холл-Студли Л., Бойл Дж.Д., Лаппин-Скотт Х.М., Костертон Дж.В. Рост и отделение клеточных кластеров от зрелых смешанных биопленок. Appl Environ Microbiol (2001) 67 :5608–13. doi:10.1128/AEM.67.12.5608-5613.2001

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

49.Mizoguchi H, Fujioka T, Nasu M. Доказательства жизнеспособности коккоидных форм Helicobacter pylori . J Gastroenterol (1999) 34 :32–6.

Академия Google

51. Шахамат М., Май У., Пашко-Колва С., Кессель М., Колвелл Р.Р. Использование авторадиографии для оценки жизнеспособности Helicobacter pylori в воде. Appl Environ Microbiol (1993) 59 :1231–5.

PubMed Резюме | Академия Google

52.Sato F. Helicobacter pylori в культуре: ультраструктурное исследование. Хоккайдо Игаку Засси (2000) 75 (3): 187–96.

Академия Google

53. Hua J, Ho B. Является ли коккоидная форма Helicobacter pylori жизнеспособной? Microbios (1996) 87 : 103–12.

Академия Google

54. Кустерс Дж.Г., Герритс М.М., Ван Страйп Дж.А., Ванденбрук-Граулс СМ.Коккоидные формы Helicobacter pylori являются морфологическим проявлением гибели клеток. Infect Immun (1997) 65 :3672–9.

PubMed Резюме | Академия Google

55. Итон К.А., Катренич К.Е., Макин К.М., Краковка С. Вирулентность коккоидных и бациллярных форм Helicobacter pylori у гнотобиотических поросят. J Infect Dis (1995) 171 : 459–62. doi: 10.1093/infdis/171.2.459

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

56. Бенаисса М., Бабин П., Квеллард Н., Пезеннек Л., Сенатьемпо Ю., Фошере Дж.Л. Изменения ультраструктуры и антигенов Helicobacter pylori при переходе от бациллярной формы к кокковой. Infect Immun (1996) 64 (6):2331–5.

PubMed Резюме | Академия Google

57. Виллен Р., Карлен Б., Ван Х., Пападогианнакис Н., Одселиус Р., Вадстром Т.Морфологическое преобразование Helicobacter pylori из спиральной в кокковидную форму. Сканирование (SEM) и просвечивающая электронная микроскопия (TEM) предполагают жизнеспособность. Ups J Med Sci (2000) 105 (1):31–40.

PubMed Резюме | Академия Google

59. Роуэн, Нью-Джерси. Жизнеспособные, но некультивируемые формы пищевых и водных бактерий: quo vadis? Trends Food Sci Technol (2004) 15 : 462–7. дои: 10.1016/j.tifs.2004.02.009

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

60. Moreno Y, Ferrus MA, Alonso JL, Jimenez A, Herandez J. Использование флуоресцентной гибридизации in situ для подтверждения присутствия Helicobacter pylori в воде. Water Res (2003) 37 : 2251–6. дои: 10.1016/S0043-1354(02)00624-3

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

61.Азеведо Н.Ф., Пачеко А.П., Кивил К.В., Виейра М.Дж. Адгезия штамма Helicobacter pylori , подверженного водному стрессу, к абиотическим поверхностям. J Appl Microbiol (2006) 101 :718–24. doi:10.1111/j.1365-2672.2006.03029.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

62. Ангелидис А.С., Тиродимос И., Бобос М. Обнаружение Helicobacter pylori в сыром коровьем молоке методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Int J Food Microbiol (2011) 151 : 252–6. doi:10.1016/j.ijfoodmicro.2011.09.007

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

63. Сато Ф., Сайто Н., Сёдзи Э., Рани А., Такэда Х., Сугияма Т. и др. Поддержание жизнеспособности и спиральной морфологии Helicobacter pylori в минеральной воде. J Med Microbiol (1999) 48 :971. дои: 10.1099/00222615-48-10-971

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

64.Нильсон Х.О., Блом Дж., Абу-Аль-Суд В., Люнг А.А., Андерсен Л.П., Вадстром Т. Влияние холодного голодания, кислотного стресса и питательных веществ на метаболическую активность Helicobacter pylori . Appl Environ Microbiol (2002) 68 :11–9. doi:10.1128/AEM.68.1.11-19.2002

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

65. Минами М., Охта М., Окура Т., Андо Т., Тории К., Хасегава Т. и др. Использование комбинации техники чистки щеткой и метода изотермической амплификации с помощью петли в качестве новой, быстрой и безопасной системы для обнаружения Helicobacter pylori . J Clin Microbiol (2006) 44 :4032–7. дои: 10.1128/JCM.00898-06

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

66. Mapstone NP, Lynch DA, Lewis FA, Axon AT, Tompkins DS, Dixon MF, et al. Идентификация ДНК Helicobacter pylori во рту и желудках больных гастритом методом ПЦР. J Clin Pathol (1993) 46 :540–3. doi:10.1136/jcp.46.6.540

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

67.Enroth H, Engstrand L. Иммуномагнитное разделение и ПЦР для обнаружения Helicobacter pylori в образцах воды и стула. J Clin Microbiol (1995) 33 :2162–5.

PubMed Резюме | Академия Google

68. De Reuse H, Labigne A, Mengin-Lecreulx D. Ген Helicobacter pylori ureC кодирует фосфоглюкозаминмутазу. J Bacteriol (1997) 179 :3488–93.

PubMed Резюме | Академия Google

69. Lu JJ, Perng CL, Shyu RY, Chen CH, Lou Q, Chang SKF и др. Сравнение пяти методов ПЦР для обнаружения ДНК Helicobacter pylori в тканях желудка. J Clin Microbiol (1999) 37 :772–4.

PubMed Резюме | Академия Google

70. Банн Дж. Э., Маккей В. Г., Томас Дж. Э., Рейд Д. С., Уивер Л. Т.Обнаружение ДНК Helicobacter pylori в биопленках питьевой воды: значение для передачи в раннем возрасте. Lett Appl Microbiol (2002) 34 :450–4. doi:10.1046/j.1472-765X.2002.01122.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

71. Shahamat M, Alavi M, Watts JE, Gonzalez JM, Sowers KR, Maeder DW, et al. Разработка двух методик на основе ПЦР для выявления спиральной и кокковой форм Helicobacter pylori . J Clin Microbiol (2004) 42 :3613–9. doi: 10.1128/JCM.42.8.3613-3619.2004

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

72. Watson CL, Owen RJ, Said B, Lai S, Lee JV, Surman-Lee S, et al. Обнаружение Helicobacter pylori с помощью ПЦР, но не культивирования в образцах воды и биопленки из систем распределения питьевой воды в Англии. J Appl Microbiol (2004) 97 :690–8.doi:10.1111/j.1365-2672.2004.02360.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

73. Сасаки К., Тадзири Ю., Сата М., Фуджи Ю., Мацубара Ф., Чжао М. и др. Helicobacter pylori в естественной среде. Scand J Infect Dis (1999) 31 : 275–9. дои: 10.1080/00365549950163572

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

74.Мазари-Хириарт М., Лопес-Видаль Ю., Кальва Дж.Дж. Helicobacter pylori в системах водоснабжения для человека в Мехико. Water Sci Technol (2001) 43 (12):93–8.

PubMed Резюме | Академия Google

75. Халтен К., Хан С.В., Энрот Х., Кляйн П.Д., Опекум А.Р., Гилман Р.Х. и соавт. Helicobacter pylori в питьевой воде в Перу. Гастроэнтерология (1996) 110 :1031–5. дои: 10.1053/гаст.1996.v110.pm8612990

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

76. Бейкер К.Х., Хегарти Дж.П. Присутствие Helicobacter pylori в питьевой воде связано с клиническими проявлениями инфекции. Scand J Infect Dis (2001) 33 :744–6. дои: 10.1080/003655401317074536

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

77.Маккеун И., Орр П., Макдональд С., Кабани А., Браун Р., Коглан Г. и др. Распространенность Helicobacter pylori в канадской Арктике: серораспространенность и обнаружение в пробах воды в общинах. Am J Gastroenterol (1999) 94 :1823–9. doi:10.1111/j.1572-0241.1999.01212.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

78. Парк С.Р., Маккей В.Г., Рейд Д.К. Helicobacter sp, извлеченный из биопленки питьевой воды, взятой из системы распределения воды. Water Res (2001) 35 : 1624–6. дои: 10.1016/S0043-1354(00)00582-0

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

79. Кабир С. Обнаружение Helicobacter pylori в фекалиях с помощью посева, ПЦР и иммуноферментного анализа. J Med Microbiol (2001) 50 (12):1021–9.

PubMed Резюме | Академия Google

80.Наяк АК, Роуз Дж.Б. Обнаружение Helicobacter pylori в сточных водах и воде с использованием нового количественного метода ПЦР с SYBR green. J Appl Microbiol (2007) 103 :1931–41. doi:10.1111/j.1365-2672.2007.03435.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

81. Янзон А., Шолинг А., Лотигиус А., Ахмед Д., Кадри Ф., Свеннерхольм А. М. Неспособность обнаружить ДНК Helicobacter pylori в питьевой воде и воде окружающей среды в Дакке, Бангладеш, с использованием высокочувствительного ПЦР в реальном времени. Appl Environ Microbiol (2009) 75 :3039–44. doi: 10.1128/AEM.02779-08

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

82. Сен К., Шейбл Н.А., Лай Д.Дж. Разработка внутреннего контроля для оценки и стандартизации количественного ПЦР-анализа для обнаружения Helicobacter pylori в питьевой воде. Appl Environ Microbiol (2007) 73 :7380–7. дои: 10.1128/AEM.00687-07

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

83. McDaniels AE, Wymer L, Rankin C, Haugland R. Оценка количественной ПЦР в реальном времени для измерения Helicobacter pylori при низких концентрациях в питьевой воде. Water Res (2005) 39 : 4808–16. doi:10.1016/j.waters.2005.09.030

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

84.Böckelmann U, Dörries HH, Ayuso-Gabella MN, Salgot de Marcay M, Tandoi V, Levantesi C, et al. Количественный ПЦР-мониторинг генов устойчивости к антибиотикам и бактериальных патогенов в трех европейских системах искусственного пополнения подземных вод. Appl Environ Microbiol (2009) 75 : 154–63. doi: 10.1128/AEM.01649-08

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

85. Фуджимура С., Като С., Кавамура Т. Helicobacter pylori в речной воде Японии и его распространенность среди японских детей. Lett Appl Microbiol (2004) 38 : 517–21. doi:10.1111/j.1472-765X.2004.01529.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

86. Войтек М.А., Ашен Дж.Б., Фогарти Л.Р., Кирштейн Дж.Д., Ланда Э.Р. Обнаружение Helicobacter pylori и фекальных индикаторных бактерий в пяти реках Северной Америки. J Water Health (2005) 3 (4):405–22.

PubMed Резюме | Академия Google

87.Мазари-Хириарт М., Лопес-Видаль И., Кастильо-Рохас Г., Понсе де Леон С., Кравиото А. Helicobacter pylori и другие кишечные бактерии в пресноводной среде в Мехико. Arch Med Res (2001) 32 : 458–67. дои: 10.1016/S0188-4409(01)00304-6

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

88. Verthé K, Verstraete W. Использование проточной цитометрии для анализа опосредованного фагом уничтожения Enterobacter aerogenes . Res Microbiol (2006) 157 :613–8. doi:10.1016/j.resmic.2006.02.007

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

89. Mori Y, Notomi T. Петлевая изотермическая амплификация (LAMP): быстрый, точный и экономичный метод диагностики инфекционных заболеваний. J Infect Chemother (2009) 15 : 62–9. doi: 10.1007/s10156-009-0669-9

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

90.Мори Ю., Нагамин К., Томита Н., Нотоми Т. Обнаружение реакции изотермической амплификации, опосредованной петлей, по мутности, возникающей в результате образования пирофосфата магния. Biochem Biophys Res Commun (2001) 289 (1):150–4. doi:10.1006/bbrc.2001.5921

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

91. Томита Н., Мори Ю., Канда Х., Нотоми Т. Петлевая изотермическая амплификация (LAMP) последовательностей генов и простое визуальное обнаружение продуктов. Nat Protoc (2008) 3 (5):877–82. doi:10.1038/nprot.2008.57

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

92. Chamanrokh P, Shahhosseiny MH, Mazaheri Assadi M, Nejadsattari T, Esmaili D. Сравнение петлевой изотермической амплификации (LAMP) с ПЦР и быстрым уреазным тестом (RUT) для обнаружения Helicobacter pylori в образцах биопсии. J Pure Appl Microbiol (2014) 8 (2):1079–86.

Академия Google

95. Staley JT, Konopka A. Измерение in situ активности нефотосинтезирующих микроорганизмов в водной и наземной среде обитания. Annu Rev Microbiol (1985) 39 : 321–46. doi:10.1146/annurev.mi.39.100185.001541

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

97. Доэнгес Дж.Л. Спирохеты в желудочных железах макак-резусов и людей без определенного анамнеза связанных заболеваний. Proc Soc Exp Biol Med (1938) 38 :536–8. дои: 10.3181/00379727-38-9924P

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

98. Маршалл Б.Дж., Армстронг Дж.А., МакГечи Д.Б., Глэнси Р.Дж. Попытка выполнить постулаты Коха для пилорического Campylobacter . Med J Aust (1985) 142 (8): 436–9.

PubMed Резюме | Академия Google

99.Маршалл Б.Дж., МакГечи Д.Б., Роджерс П.А., Глэнси Р.Дж. Пилорическая инфекция Campylobacter и гастродуоденальная болезнь. Med J Aust (1985) 142 (8): 439–44.

Академия Google

101. Хугенгольц П., Пейс Н.Р. Выявление микробного разнообразия в природной среде: молекулярно-филогенетический подход. Trends Biotechnol (1996) 14 (6):190–7. дои: 10.1016/0167-7799(96)10025-1

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

104.Сомбонна Н., Ассавамакин А., Виланто А., Тангпхатсорнруанг С., Тонгсима С. Метагеномные профили свободноживущих архей, бактерий и мелких эукариот в прибрежных районах острова Сичанг, Таиланд. BMC Genomics (2012) 13 (Приложение 7): S29. дои: 10.1186/1471-2164-13-S7-S29

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

105. Порт Дж.А., Уоллес Дж.К., Гриффит В.К., Фаустман Э.М. Метагеномное профилирование микробного состава и детерминант устойчивости к антибиотикам в Пьюджет-Саунд. PLoS One (2012) 7 (10):e48000. doi:10.1371/journal.pone.0048000

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

106. Wang Y, Sheng HF, He Y, Wu JY, Jiang YX, Tam NF, et al. Сравнение уровней бактериального разнообразия в пресноводных, литоральных водно-болотных угодьях и морских отложениях с использованием миллионов тегов Illumina. Appl Environ Microbiol (2012) 78 (23):8264–71. дои: 10.1128/АЭМ.01821-12

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

107. Zheng Z, Andersson AF, Ye W, Nyren O, Normark S, Engstrand L. Метод метагеномики Helicobacter pylori из архивных фиксированных формалином биопсий желудка, позволяющий проводить продольные исследования канцерогенного риска. PLoS One (2011) 6 (10):e26442. doi:10.1371/journal.pone.0026442

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

108.Вроблевски Л.Е., Пик Р.М. младший, Уилсон Т.К. Helicobacter pylori и рак желудка: факторы, модулирующие риск заболевания. Clin Microbiol Rev (2010) 23 (4):713–39. doi:10.1128/CMR.00011-10

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ведение инфекции Helicobacter pylori в педиатрическом возрасте

Оценка на наличие H. pylori P1. Когда показана оценка H. pylori?

Симптомы инфекции H.pylori неспецифичны, и имеющиеся на сегодняшний день данные не установили связи между этой инфекцией и симптомами со стороны верхних отделов желудочно-кишечного тракта у детей. Клиницисты должны исследовать причину этих симптомов с помощью эндоскопии верхних отделов, а не только тестирования на H. pylori. Основным показанием к тестированию на H. pylori у детей с желудочно-кишечными симптомами является обнаружение язв или эрозий желудка или двенадцатиперстной кишки при эндоскопии, хотя эти признаки обнаруживаются только в 5% от общего числа случаев инфекции.3,4

Показано ли тестирование на H. pylori пациентам с эндоскопическими данными, отличными от язв или эрозий?

У детей инфицирование H. pylori вызывает хроническое воспаление преимущественно в антральном отделе, которое при эндоскопии обычно выглядит узловатым. Наличие узелкового образования в антральном отделе при отсутствии язв не влечет за собой риска для ребенка, если не проводится лечение и эрадикация H. pylori, но следует провести посев образца слизистой оболочки желудка в случае, если пациенту в будущем будет проведено эрадикационное лечение, чтобы избежать эмпирическая терапия.3

Показано ли тестирование на H. pylori пациентам с хронической диспепсией и/или болью в животе?

Хроническая или рецидивирующая боль в животе является одной из наиболее частых жалоб в педиатрии. В большинстве случаев боль в животе свидетельствует о функциональном расстройстве, как указано в Римских критериях IV функциональных желудочно-кишечных расстройств, которые характеризуются отсутствием каких-либо идентифицируемых признаков органического заболевания (таблица 1). Диагноз этих расстройств обычно основывается на наличии симптомов, а не на исключении других заболеваний, и поэтому не всегда требует проведения диагностических тестов.

После публикации самых последних рекомендаций ESPGHAN/NASPGHAN3 в нескольких обсервационных исследованиях на больших выборках пациентов детского возраста оценивалась связь между хронической болью в животе и инфекцией, вызванной H. pylori, и не было обнаружено доказательств этой связи.5–7 Поэтому , мы не считаем, что тестирование показано в случаях болей в животе при отсутствии признаков или симптомов, указывающих на органическое заболевание.

Какие заболевания связаны с инфекцией H. pylori?

Имеются данные о связи между H.pylori и другими заболеваниями, но об ассоциации постоянно сообщалось только для некоторых заболеваний, в то время как доказательства относительно остальных неубедительны или косвенны (таблица 2). За исключением рефрактерной железодефицитной анемии8, хронической первичной иммунной тромбоцитопении (cPIT)9 или лимфомы лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой оболочкой (MALT)10, наличие другого заболевания не является достаточным показанием для тестирования на H. pylori.

Является ли язва желудка или рак в семейном анамнезе показанием для тестирования на H.pylori у детей?

На сегодняшний день ни одно исследование не оценивало преимущества эрадикационной терапии H. pylori у бессимптомных детей с семейным анамнезом язвы желудка или двенадцатиперстной кишки или рака желудка у родственника первой степени родства. В случае рака руководство ESPGHAN/NASPGHAN удалило рекомендацию по тестированию в 2017 г.3, поскольку этот вопрос редко возникает в клинической педиатрической гастроэнтерологической практике.

С2. Показана ли стратегия «тестируй и лечи» педиатрическим пациентам?

Стратегия «тестируй и лечи» включает доставку H.pylori эрадикационная терапия, основанная на положительных результатах неинвазивного теста, такого как дыхательный тест на H. pylori или тест на антиген в кале. Эта стратегия обычно используется при лечении взрослых с диспепсией при отсутствии настораживающих признаков, что дает небольшое, но значительное преимущество в контроле симптомов.11 Однако, поскольку подобные исследования у детей не проводились, эти результаты нельзя экстраполировать на педиатрическое население. Эта практика привела к значительному увеличению распространенности H.pylori, устойчивых к антибиотикам, обычно используемым для его эрадикации.12

По данным Европейского педиатрического регистра для лечения H. pylori, распространенность первичной устойчивости к кларитромицину в странах Южной Европы значительно превышает 15%, и, следовательно, использование этого препарата для эмпирической терапии противопоказано. После неэффективности терапии первой линии распространенность вторичной резистентности превышает 50% как к кларитромицину, так и к метронидазолу.4 Учитывая, что спектр противомикробных препаратов, которые можно использовать в педиатрической популяции, у детей ограничен, ключевым моментом является достижение эрадикации с помощью начальное лечение и, следовательно, выбор препаратов для лечения первой линии должен основываться на результатах определения чувствительности к антибиотикам.

В таблице 3 представлены рекомендации по диагностической оценке инфекции H. pylori.

Диагностика инфекцииP3. Как диагностируется инфекция H. pylori?

Первоначальный диагноз H. pylori у детей должен основываться на результатах эндоскопии верхних отделов13–15. Это обследование позволяет выяснить этиологию присутствующих симптомов и поставить окончательный диагноз, а также дает возможность получить образец биопсии для культурального исследования. и тестирование на чувствительность к противомикробным препаратам для руководства лечением, гистологическая оценка тяжести инфекции и проведение дополнительных тестов, таких как тесты на уреазу или полимеразную цепную реакцию (ПЦР).16,17

Единственными пациентами, у которых диагноз инфекции и последующее лечение, основанное на неинвазивных тестах, приемлемы, являются пациенты с cPIT или с риском тяжелых осложнений эндоскопии верхних отделов, выполненной под анестезией или седацией.

С4. Какие тесты подходят для диагностики?

Диагноз должен быть основан на культивировании биоптата слизистой оболочки желудка или, при его отсутствии или отсутствии роста, на выявлении H. pylori при гистологическом исследовании в дополнение к положительному результату другого инвазивного теста (быстрый уреазный тест или ПЦР).15,16,18,19 Использование методов ПЦР, которые могут предоставить информацию об устойчивости к кларитромицину и/или левофлоксацину, предпочтительнее, чем методы, которые могут только обнаружить присутствие бактерии.20 Аналогичным образом, мы рекомендуем проводить окрашивание по Граму. тест в образце биопсии для уточнения диагноза, вариант, который особенно ценен, когда культура не растет. В Таблице X в Приложении B (онлайн-дополнительный материал) представлены различные тесты, которые можно проводить с образцами биопсии.19,21–27

С5. Какое лечение следует приостановить перед тестированием на H. pylori?

Пациенты не должны принимать антибиотики как минимум за 4 недели до проведения эндоскопии верхних отделов. Ингибиторы протонной помпы должны быть отменены не менее чем за 2 недели до забора образцов биопсии. тестовое задание. Таблетки ранитидина больше не продаются, но больничные аптеки продолжают продавать активный ингредиент и могут изготавливать капсулы в количестве, назначенном педиатром (мы рекомендуем дозу 2 мг/кг/12 ч), или растворы различной концентрации.

С6. Как следует собирать образцы биопсии для диагностики инфекции, вызванной H. pylori?

Необходимо собрать как минимум 6 образцов биопсии слизистой оболочки желудка: по 2 из антрального отдела и тела желудка для выявления патологии и по 1 из антрального отдела и тела желудка для посева.3 Тем не менее, мы рекомендуем взять как минимум еще один образец из антрального отдела для выполнения дополнительных тестов (быстрая уреаза или ПЦР).

Когда дело доходит до сбора образцов, учитывая сложность выращивания H. pylori в культуре, важно взять биопсию до перехода к двенадцатиперстной кишке, сначала собирая образцы для посева чистым пинцетом (что не должно было быть ранее помещают в пробирки с формалином) и объединяют в одну пробирку с 1–2 мл физиологического раствора или специальной транспортной среды.Образцы, собранные для выявления патологии, следует поместить в пробирки с формалином, разделив образцы антрального отдела и тела желудка.19,21,28,29

P7. Как следует хранить и транспортировать образцы биопсии в микробиологическую лабораторию, чтобы максимизировать диагностический результат?

Поскольку H. pylori является прихотливой бактерией и легко погибает, была разработана соответствующим образом обогащенная транспортная среда для поддержания жизнеспособности образцов до тех пор, пока они не будут исследованы в микробиологической лаборатории. Когда такая среда недоступна, можно использовать обычный физиологический раствор, чтобы временно предотвратить высыхание образца биопсии.Кроме того, низкие температуры продлевают жизнеспособность образцов и подавляют размножение других микробов, загрязняющих среду, поэтому, если посев планируется отложить, образцы биопсии следует хранить при температуре -20°C или ниже, если посев планируется. произойти в течение 24 часов и при температуре -70°C или в жидком азоте в случае более длительной задержки.29

P8. Следует ли проводить тестирование на чувствительность к противомикробным препаратам в каждом образце, направляемом в микробиологическую лабораторию?

Учитывая хрупкость H. pylori, существует высокий риск того, что бактерия не будет расти в культуре и не удастся из-за контаминации другими бактериями, поэтому мы рекомендуем посев и тестирование чувствительности к противомикробным препаратам всех образцов, представляемых в отделение микробиологии (не менее 1 образец тела и 1 антральный отдел).С другой стороны, хотя и редко, могут быть случаи колонизации двумя штаммами с разными профилями лекарственной устойчивости, что является дополнительной причиной для проведения тестирования чувствительности в каждом образце.

В таблице 4 представлены рекомендации по диагностике инфекции H. pylori.

Лечение инфекции P9. Каково лечение первой линии в случае положительного результата посева и наличия результатов теста на чувствительность к противомикробным препаратам?

Терапией первой линии для эрадикации H. pylori у детей является тройная терапия, сочетающая один ИПП и два антибиотика (амоксициллин плюс кларитромицин или метронидазол), назначаемые в двух дозах в день в течение 14 дней.Выбор антибиотиков основывается на результатах тестирования чувствительности (таблица 5), хотя в Испании рекомендуется использование метронидазола в отличие от кларитромицина, если нет признаков резистентности к метронидазолу. Дозу следует корректировать в зависимости от массы тела пациента, и для достижения адекватного подавления кислотности рекомендуется высокая доза ИПП (таблица 6). Цель состоит в том, чтобы достичь высокого уровня эрадикации (> 90%), чтобы предотвратить развитие вторичной устойчивости к антибиотикам и уменьшить потребность в терапии спасения.3,11

Эзомепразол и рабепразол менее подвержены, чем омепразол, деградации под действием быстрых метаболизаторов с вариантами CYP2C19, которые чаще встречаются у европеоидной расы (56–81%), и поэтому их использование предпочтительнее, когда они доступны.3

С10. Каково рекомендуемое лечение первой линии при отсутствии тестирования на чувствительность к противомикробным препаратам?

Первоначальное лечение должно быть адаптировано к профилю чувствительности выделенного штамма к противомикробным препаратам, но в случае, если чувствительность неизвестна, мы рекомендуем следующее:

  • 1.

    Адаптация лечения к региональным или национальным тенденциям устойчивости к противомикробным препаратам и назначение схемы эрадикации, которая доказала свою эффективность на местном уровне. устойчивости к противомикробным препаратам (>15%). Последовательная терапия также не рекомендуется.3,11,31,32

  • 3.

    В табл. 5 представлены рекомендуемые схемы эмпирической терапии1

P11.Рекомендуется ли во время лечения принимать добавки с пробиотиками?

В рекомендациях ESPGHAN/NASPGHAN3 от 2017 г. сделан вывод о том, что необходимы дополнительные исследования более высокого качества, чтобы поддержать рекомендацию о дополнительном приеме пробиотиков во время эрадикационной терапии H. pylori.

При поиске литературы, опубликованной за последние 5 лет, мы обнаружили несколько исследований и систематических обзоров с метаанализами с противоречивыми результатами об эффективности различных штаммов и комбинаций пробиотиков, используемых в качестве дополнительной терапии при лечении H.эрадикационное лечение. Некоторые исследования выявили положительное влияние на предотвращение нежелательных явлений, связанных с лечением антибиотиками.10,33–35

P12. Когда и как следует оценивать эффективность эрадикационной терапии?

Необходимо всегда оценивать эффективность эрадикационной терапии.3,13–15 С этой целью мы рекомендуем использовать валидированные неинвазивные тесты: тест на антиген в кале (иммуноферментный анализ на основе моноклональных антител) или дыхательный тест с мочевиной 13-C. .13 У детей в возрасте до 6 лет предпочтительнее проводить тест кала из-за более высокой частоты ложноположительных результатов при дыхательном тесте и практических трудностей при выполнении этого теста у детей младшего возраста (Приложение B, таблица Y, онлайн-дополнительный материал).

С13. Какая терапия спасения рекомендуется в случае неэффективности терапии первой линии?

В рекомендациях ESPGHAN/NASPGHAN3 от 2017 г. указано, что выбор терапии второй линии должен основываться на результатах тестирования чувствительности к противомикробным препаратам или, если они недоступны, терапия спасения должна включать антибиотики, не используемые для терапии первой линии, и/или более высокие дозы или более длительные курсы лечения. Предлагаемые схемы спасения представляли собой тройную терапию ИПП + амоксициллин (75 мг/кг/день) + метронидазол или четырехкратную терапию с добавлением висмута в общей сложности на 14 дней.3,15

Если чувствительность к противомикробным препаратам неизвестна во время лечения первой линии, необходимо провести новое эндоскопическое исследование верхних отделов и биопсию для проведения теста на чувствительность к противомикробным препаратам и назначения терапии на основе результатов. Если тест на чувствительность по-прежнему недоступен, штамм следует считать дважды устойчивым (таблица 5).

Также рекомендуется использование эзомепразола или рабепразола, если они не были включены в схему первого ряда.11

P14.Что можно сделать для обеспечения адекватной приверженности лечению?

Крайне важно, чтобы врач объяснил семье и пациенту, если это соответствует возрасту, что успех лечения зависит от приверженности, которая связана со значительным увеличением скорости эрадикации, которая приближается к 90% в случае адекватной приверженности.13,36 Тщательный мониторинг во время лечения может помочь в достижении этой цели.

Существуют инструменты, которые могут помочь предотвратить пропущенные дозы и способствовать соблюдению режима лечения, такие как руководство для родителей пациентов по лечению H.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.