Ифа на лямблии расшифровка: Антитела к антигенам лямблий суммарные IgA, IgM, IgG (анти-Lamblia intestinalis IgA, IgM, IgG суммарные; anti-Giardia Lamblia IgA, IgM, IgG total)

Содержание

Анализ на антитела IgA, IgM, IgG к антигенам лямблий сдать в Москве

Метод определения Иммуноанализ.

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация

Синонимы: Анализ крови на лямблии; Суммарные антитела к возбудителю лямблиоза; АТ общие к АГ лямблий. 

Giardia intestinalis; Giardia duodenalis; Lamblia intestinalis; Anti-Giardia Lamblia IgА, IgM, IgG total; Total lamblia antibodies.

Краткое описание исследования «Антитела к антигенам лямблий суммарные IgA, IgM, IgG»

Лямблиоз – широко распространенное заболевание, вызываемое представителем семейства Простейшие Lamblia intestinalis (Giardia lamblia).

 

Источником инфекции является человек, инфицированный лямблиями. Передача инфекции осуществляется фекально-оральным путем. Основным фактором передачи является вода, но перенос может осуществляться и через пищевые продукты, на которых цисты лямблий сохраняют жизнеспособность от 6 часов до 2 суток, возможна и контактная передача от человека к человеку. Дети больше подвержены инвазии лямблиями, заболевание у них протекает с более выраженными клиническими признаками. 

Инкубационный период болезни продолжается 1-3 недели. Как правило, лямблиоз протекает без каких-либо проявлений. При большом количестве паразитов заболевание протекает с выраженной клинической симптоматикой и имеет острое или хроническое течение. 

При острой форме лямблиоз начинается с появления жидкого водянистого стула без примесей слизи и крови, болей в подложечной области, метеоризма. У больных снижается аппетит, возникают тошнота, рвота, незначительное повышение температуры тела, отмечаются бледность кожи, синева под глазами, заеды в углах рта, аллергические высыпания.

У большинства заболевших симптомы исчезают самопроизвольно в течение 1-4 недель. Затем болезнь переходит в хроническую форму, которая периодически проявляется вздутием живота, болями в подложечной области, разжиженным стулом. 

Антитела к антигенам лямблий отражают иммунный ответ организма на внедрение возбудителя. По данным клинических исследований, антитела к антигенам лямблий выявляются у 39-42% больных с патологией желудочно-кишечного тракта. В 89-92% случаев выявления антител к лямблиям у больных с патологией желудочно-кишечного тракта лямблиоз подтверждается положительным результатом тестирования образцов фекалий или дуоденального содержимого на наличие цист лямблий. 

С какой целью определяют Антитела к антигенам лямблий суммарные IgA, IgM, IgG

Суммарное выявление антител классов IgA, IgM, IgG к антигенам лямблий как серологических маркеров лямблиоза используется в качестве дополнительного диагностического исследования, позволяющего определить иммунный ответ организма на внедрение возбудителя.

Что может повлиять на результат исследования Антител к антигенам лямблий суммарные IgA, IgM, IgG

Существует проблема перекрестных реакций антигенов лямблий с другими паразитарными и соматическими антигенами, которые дают ложноположительные результаты, поэтому для повышения надежности и достоверности диагностики лямблиоза необходимо комплексное обследование.

Антитела к антигенам лямблий со скидкой до 50%

Описание анализа

Антитела к антигенам лямблий — тест используется в комплексе диагностики лямблиоза. Лямблиоз — часто встречающееся паразитарное заболевание тонкого кишечника человека, вызываемое Lamblia intestinalis. В данном тесте определяются суммарные антитела (IgM, IgG).

Метод исследования — Иммуноферментный анализ (ИФА)

Материал для исследования — Сыворотка крови

Срок исполнения

Анализ будет готов в течение 3 дней, исключая воскресенье и день забора. Срок может быть увеличен на 1 день в случае необходимости. Вы получите результаты на эл. почту сразу по готовности.

Срок исполнения: в течение 3 дней, исключая воскресенье и день забора, исключая субботу и воскресенье (кроме дня взятия биоматериала)

Как подготовиться

Заранее

Не сдавайте анализ крови сразу после рентгенографии, флюорографии, УЗИ, физиопроцедур.

Накануне

За 24 часа до взятия крови:

  • Ограничьте жирную и жареную пищу, не принимайте алкоголь.
  • Исключите тяжёлые физические нагрузки.

От 8 до 14 часов до сдачи крови не принимайте пищу, пейте только чистую негазированную воду.

В день сдачи

Перед забором крови

  • 60 минут не курить,
  • 15-30 минут находиться в спокойном состоянии.

Результат

Пример результата анализа.pdf

Расшифровка

Интерпретация результатов анализов носит информационный характер, не является диагнозом и не заменяет консультации врача. Референсные значения могут отличаться от указанных в зависимости от используемого оборудования, актуальные значения будут указаны на бланке результатов.

Положительный результат исследования свидетельствует о текущем или имевшем место в прошлом лямблиозе.

Отрицательный результат исследования может быть при отсутствии инвазии или у серонегативных пациентов.

При получении сомнительного результата исследование необходимо повторить через 2-3 недели и провести обследование пациента.

Единица измерения: Ед

Референсные значения:

  • < 0,85 — отрицательный
  • 0,85 – 1,0 — сомнительный
  • ≥ 1,0 — положительный

Гарантия качества

Исследование выполняет Вертикальный фотометр iMark фирмы Bio-Rad Laboratories, США

Измеряет коэффициент поглощения и не зависит от реагентов, которые используются для проведения иммуноферментного анализа в микропланшентах

Антитела к антигенам лямблий суммарные

Антитела к антигенам лямблий — тест используется в комплексе диагностики лямблиоза. Лямблиоз (в англоязычной литературе – гиардиаз) — часто встречающееся паразитарное заболевание тонкого кишечника человека, вызываемое Lamblia intestinalis (Giardia lamblia), представителем семейства Protozoa. Лямблии существуют в двух формах: цистах (статическая форма) и трофозоитах (пролиферативная форма). Заражение человека происходит оральным путём, при попадании цист лямблий в желудочно-кишечный тракт. Источник инвазии некипячёная питьевая вода, немытые фрукты и овощи, грязные руки и контакт с домашними животными. Распространённость лямблиоза зависит от состояния питания, водоснабжения и санитарно-гигиенических навыков населения. Среди детей инвазированность лямблиями существенно выше и достигает 15-20%, среди взрослых в развитых странах инвазированность составляет 3-5%. Полагают, что лямблии являются причиной более 20% острых кишечных заболеваний.

Инкубационный период заболевания составляет от 1 до 3 недель. У части инвазированных заболевание протекает без каких-либо клинических проявлений (латентная форма). Клинически выраженная форма заболевания протекает в две стадии: острая и хроническая. Острая стадия лямблиоза продолжается 5-7 дней. Болезнь может переходить в хроническую форму, протекающую в виде рецидивов. Хронические формы наблюдаются преимущественно у детей дошкольного возраста. Клинические симптомы, формы и время развития лямблиоза могут зависеть от наследственной резистентности к инвазии этим паразитом, кратности инвазии, пищевых привычек, наличия других заболеваний и инфекций, возраста. Дети чаще болеют лямблиозом, заболевание у них протекает с более выраженными клиническими признаками. Для них особенно характерен синдром мальабсорбции.

Диагностика достаточно сложна. Традиционно она проводится по обнаружению цист или трофозоитов в кале. Эффективность этого метода составляет не более 50%. Дополнительным методом диагностики лямблиоза является иммуноферментный анализ крови (ИФА), основанный на обнаружении в крови специфических антител к антигенам лямблий. В данном тесте определяются суммарные антитела (IgM, IgG). Уровень антител зависит от особенностей иммунной системы хозяина, интенсивности инвазии, формы течения заболевания и ряда других факторов. Установлено, что специфические антитела к антигенам лямблий присутствуют в крови практически на всех стадиях заболевания. IgM-антитела появляются на 10-14 день после инвазии, затем появляются специфические IgG-антитела и сохраняются на достаточно высоком уровне практически на всех стадиях заболевания.

Лямблии (суммарные антитела)

В связи с высокой загруженностью телефонной линии, значительно увеличилось время ожидания ответа оператора.

Рейтинг статьи:  4,80 (98)

Антитела к лямблиям в крови (суммарные) – показатель текущей или перенесенной инфекции микроорганизмами лямблиями, которые вызывают заболевание лямблиоз.
Лямблиоз широко распространенное заболевание, вызываемое представителем семейства Protozoe Lamblia intestinalis (Giardia Lamblia). Источником инфекции является человек, передается она фекально-оральным путем. Основным фактором передачи является вода, но перенос может осуществляться и через пищевые продукты, на которых цисты лямблий сохраняют жизнеспособность от 6 часов до 2 суток, возможна и контактная передача от человека к человеку. Дети более подвержены инвазии лямблиями, заболевание у них протекает с более выраженными клиническими признаками.
Инвазия Lamblia intestinalis слизистой оболочки тонкого кишечника может давать различную клиническую картину: от бессимптомного течения до аллергических симптомов и диарейного синдрома, особенно тяжело протекающего при выраженной иммуносупрессии. Инфекция лямблиями может спонтанно исчезнуть через 6 недель, а может персистировать годами. Колонизируя слизистую тонкой кишки, трофозоиты лямблий проникают внутрь эпителия и вызывают системный иммунный ответ. В диагностике лямблиоза используется обнаружение цист или трофозоитов лямблий в образцах фекалий или дуоденальном содержимом. Эффективность данных методов составляет около 50% из-за характерной прерывистости в цистовыделении, связанной с особенностями размножения трофозоитов лямблий. Выявление антител к антигенам лямблий существенно дополняет данные методы. Однако антитела к лямблиям выявляются только у 39 – 42% больных с патологией желудочно-кишечного тракта. Кроме того возможны перекрестные реакции антигенов лямблий с другими паразитарными и соматическими антигенами, которые дают ложноположительные результаты, поэтому для повышения надежности и достоверности диагностики лямблиоза необходимо комплексное обследование.
Показания к назначению: диагностика лямблиоза в комплексе с другими методами, оценка эффективности терапии.
Обнаружение в крови суммарных антител к лямблиям помогает в диагностики лямблиоза. Антитела класса IgM выявляются в крови через 10-14 дней после инфицирования, позже появляются антитела класса IgA и IgG, содержание которых снижается через 1-2 месяца после проведенного эффективного лечения. Антитела класса IgG практически полностью исчезают в течение 2-6, реже через 9 месяцев. Выявление высоких титров антител говорит о выраженной инвазии лямблиями. Использование определения суммарных антител позволяет наблюдать течение заболевания в динамике, оценить эффективность проводимого лечения. При адекватной терапии лямблиоза титры антител начинают достаточно быстро снижаться.

Необходимо воздержаться от приема пищи в течение 2-3 часов.

Срок выполнения

1-2 дня

Тип биоматериала

кровь венозная

Цена услуги

510 руб

Процедура взятия биоматериала оплачивается отдельно и зависит от типа материала:

Взятие биоматериала в процедурном кабинете (кровь)

110 руб

Взятие биоматериала в процедурном кабинете (отделяемое мочеполовых органов)

130 руб

Взятие биоматериала в процедурном кабинете (отделяемое уха, глаза, верхних дыхательных путей)

70 руб

Взятие биоматериала на коронавирус (соскоб из ротоглотки, соскоб из носоглотки)

210 руб

Используя сайт gemohelp.ru, вы соглашаетесь с использованием файлов cookie

Анализ крови на лямблии: показания, нормы, расшифровка

По статистике ВОЗ ежегодно в мире заражается лямблиозом 200 млн человек. Исследования показали, что у взрослых и детей, страдающих заболеваниями желудочно-кишечного тракта, в 40% случаев выявлены лямблии.

СодержаниеСвернуть

Анализы крови на лямблии выявляют соотношение антител к антигенам паразитов

Давайте рассмотрим методы диагностирования лямблиоза, узнаем, что за исследование ИФА, как нужно готовиться и сдавать анализ крови на лямблии. Определим расшифровку метода ИФА у детей и взрослых.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Суть иммуноферментного исследования крови заключается в реакции антиген-антитело. Метод ИФА диагностирует инфекцию по наличию антител к лямблиям в крови заражённого пациента. Иммуноглобулины (Ig) или антитела к паразитам (лямблиям) вырабатываются в ответ на проникновение паразита и предназначены для борьбы с ними. Через 2 недели после инфицирования в крови появляются антитела IgM, а спустя ещё 2 недели они меняются на антитела IgG, которые остаются на протяжении болезни. Наряду с антителами IgG, появляются IgA.

После лечения иммуноглобулины IgG уменьшаются в течение 1–2 месяцев, а исчезают к 6 месяцу. Система тестирования определяет раздельные или суммарные антигены классов IgG, IgM и IgA. Анализ ИФА распознаёт иммуноглобулины anti-giardialLamblia (суммарные) и anti-LambliaIgM.

Иммуноферментный анализ (ИФА) – современное лабораторное исследование, в ходе которого ведется поиск специфических антител в крови

Преимущество метода ИФА:

  • метод позволяет различать острую или хроническую форму болезни;
  • ИФА определяет стадию инфекции;
  • ИФА выявляет людей-носителей паразитов;
  • быстрота проведения анализа – 2 рабочих дня;
  • высокая чувствительность метода – 90%;
  • удобный лабораторный контроль динамики заболевания по качественным и количественным изменениям антигенов;
  • удобство лабораторной постановки;
  • относительно невысокая стоимость диагностических наборов;
  • возможность для массовой диагностики.

Недостатки ИФА крови на лямблии:

  1. Этот метод не специфичен. Антитела IgG, IgM и IgA вырабатываются также в ответ на другие инфекции и паразитарные инвазии.
  2. Расшифровка ИФАкрови на лямблии неточная, потому что антитела сохраняются на продолжение длительного периода после лечения.
  3. Серологический метод выявления суммарных антител IgG, IgM и IgA к антигенам лямблий – это косвенный метод диагностики инфекции. Иначе говоря, метод ИФА выявляет не возбудителя болезни, а реакцию иммунитета человека на инфекцию.

Поэтому в настоящее время в России анализ крови на антитела к лямблиям как единственный диагностический метод не рекомендован. ИФА применяется для повышения достоверности диагноза в комплексном исследовании.

Интерпретация анализа ИФА

Расшифровка анализа крови на лямблии основана на выявлении антител человека к антигенам паразитов. Результаты метода ИФА анализирует специалист с учётом анамнеза (опроса) и клинической картины заболевания.

ИФА широко используется для диагностики всевозможных инфекций

Расшифровка анализа крови на антитела к лямблиям:

  1. Наличие антител IgM обозначает острое заболевание лямблиозом.
  2. ВыявлениеIgG свидетельствует о хронической лямблиозной инфекции.
  3. Наличиесуммарных антигенов IgG и IgM обозначает хроническую лямблиозную инфекцию в стадии обострения.

Ответ ИФА крови выдаётся в значении ОПд (оптическая плотность диагностическая):

  1. Нормойявляется значение ОПд меньше 0, 85. Такой показатель ОПД обозначает, что в организме взрослого или ребёнка паразиты отсутствуют.
  2. Значение ОПд >1 – этоположительный ответ. Такой результат обозначает, что у пациента хронический лямблиоз в стадии обострения.
  3. При ОПд85–1 результат сомнительный. Этот показатель требует повторного исследования методом ИФА. Кроме того, при сомнительном анализе нужно сдать анализ кала на лямблии.

Для достоверности результата к анализу следует подготовиться заранее.

Для этого за 10 часов до взятия венозной крови нельзя употреблять соки, кофе, чай или принимать алкоголь. В день сдачи крови утром можно пить только воду. После такой подготовки берут кровь из вены. Срок исполнения исполнения ИФА составляет 2–3 дня.

Диагностические методы исследования

Методы диагностики лямблиоза у детей и взрослых одинаковы. В лаборатории Invitro на ранней стадии болезни проводится иммуноферментный анализ кала (ИФА). Этот метод основан на выявлении антигена лямблий в кале. ИФА обнаруживает все формы паразитов в стуле, но только у 50–70% заражённых взрослых и детей. Это происходит по той причине, что в «немой» период, продолжающийся 8–10 дней, в организме человека прекращается выделение цист лямблий. Однако повторное 3 кратное копрологическое исследование в разное время выявляет паразиты в 90% случаев заражения. При этом следует учесть, что нужно сдавать свежий кал.

Для корректной информации и точного анализа кала на лямблии необходимо сдавать свежий кал

Копрологическое исследование кала проводится и простым микроскопическим способом. Для диагностики лямблиоза применяют также исследование дуоденального содержимого.

Если проведённое обследование не выявило возбудителя, через 2 недели делают анализ крови ИФА, которое выявляет антитела к антигенам лямблий. Метод ИФА используется в диагностике лямблиоза для уточнения формы и стадии заболевания.

Что за болезнь лямблиоз

Лямблиоз – это инфекционное заболевание, вызываемое простейшими одноклеточными паразитами лямблиями (L.Intestinalis и L. Gardialis). Инкубационный период инфекции 1–2 недели. Паразиты поражают тонкий отдел кишечника. Заражение происходит фекально-оральным путём в следующих случаях:

  • инфицирование от человека-носителя;
  • употребление немытых заражённых фруктов и овощей;
  • употребление плохо очищенной водопроводной воды;
  • купание в открытом бассейне или водоёме;
  • бытовой путь через игрушки, посуду и вещи;
  • половой путь.

Заболевание тонкого кишечника, возникающее в результате заражения одноклеточными паразитами — лямблиями

Инфекция у взрослых людей и детей протекает с различной клинической картиной – от бессимптомного носительства до аллергических заболеваний и диарейного синдрома. Острое заражение у взрослых проявляется такими симптомами:

  • боли в подложечной области живота;
  • диарея;
  • рвота;
  • понижение температуры.

Хроническая инфекция протекает с периодическими диспепсическими расстройствами, аллергической сыпью, анемией и авитаминозом.

Дети чаще подвержены заражению лямблиями, и течение болезни у них тяжелее. Считается, что все дети, грызущие ногти, заражены этими паразитами. У детей дошкольного возраста острыйлямблиоз протекает по типу кишечной инфекции с поносом, рвотой и повышенной температурой. При хроническом течении у детей заболевание проявляется чередованием запора и поноса, вздутием в животе.

В заключение отметим, для диагностики лямблиоза применяется исследование крови и кала. ИФА применяют через 3 недели после заражения. Этот метод определяет стадию и форму заболевания. Для достоверности результатов анализа к сдаче крови нужно подготовиться. Ввиду того что этот метод не специфичен, его применяют в комплексной диагностике наряду с исследованием кала двумя способами. Один вариант – обычное микроскопическое исследование кала. Во втором случае проводится иммуноферментный анализ кала (ИФА). Оба варианта кала выявляют лямблии на ранней стадии заболевания, но его нужно сдавать в свежем виде.

Лямблии, IgM

Описание темы:

Рекомендуем сначала ознакомится с материалом: Описание работы личного кабинета

При обращении указывайте ФИО+дата рождения или регистрационный номер из договора.

Обращения обрабатываются только по будним дням в течение 2-х суток.

При обращении обязательно указывайте лабораторный номер (6 цифр под штрих-кодом)!

Обращаем Ваше внимание, что рассылка результатов анализов по электронной почте осуществляется по готовности в районе 13.00 и 18.00.

Рассылка ответов ПЦР на коронавирус  – с 19.00 до 20.00.

Укажите, пожалуйста, свою специальность и контактный телефон (просьба не оставлять в данном сообщении своих полных персональных данных).

Здесь Вы можете задать краткий вопрос и получить краткий ответ врача-специалиста. Но поставить диагноз, назначить лечение, дать рекомендации по приёму лекарств и т.д. врач сможет только при Вашем личном посещении. Расшифровка результатов исследований,  проводится врачом вместе с другими клиническими данными и возможна только на приеме.

В поле “ваш вопрос” укажите телефон, на который вам может перезвонить оператор колл-центра.

Звонки выполняются в часы работы колл-центра: Будни: 8.00 – 21.00, Выходные: 8.00 – 20.00

 

Записаться на приемы врачей, УЗИ, ФГДС и мазок на коронавирус можно в соответствующих разделах или по кнопкам.

Чтобы отменить/перенести запись  – нужно позвонить по телефону медцентра или колл-центра 600-22-10 или оставить свой контактный телефон (просьба не оставлять в данном сообщении своих полных персональных данных).

В данном разделе можно оставить заявку на заключение договора только на выполнение анализов и услуг компанией МедЛаб.

Для коммерческих предложений по поставкам просьба использовать тему “Реклама”

Для оперативного разбора ситуации укажите, пожалуйста, свой регистрационный номер из договора (в разделе реквизиты заказчика), место, дату обращения и контактный телефон (просьба не оставлять в данном сообщении своих полных персональных данных).

Правила подготовки к УЗИ и др. процедурам можно уточнить тут

Мы оставляем за собой право не отвечать на неконкретные вопросы, на вопросы по рекламе и снабжению, не имеющие отношения к содержанию сайта, а также, находящиеся вне компетенции технической службы, а также на вопросы, заданные в неуважительной форме.

Лабораторная диагностика | КДЦ «Ультрамед»

Общий (клинический) анализ крови из плазмы венозной крови 550 ₽
Микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном 140 ₽
Исследование уровня ретикулоцитов в крови 240 ₽
Исследование уровня тромбоцитов в крови 130 ₽
Исследование времени кровотечения и времени свертывания нестабилизированной крови или рекальцификации плазмы неактивированное 120 ₽
Определение основных групп крови по системе АВО., антигена D системы Резус (резус-фактор) 440 ₽
Общий (клинический) анализ мочи 240 ₽
Общий (клинический) анализ мочи (двухстаканная проба) 385 ₽
Общий (клинический) анализ мочи (трехстаканная проба) 550 ₽
Исследование мочи методом Нечипоренко 240 ₽
Исследование скорости оседания эритроцитов 180 ₽
Микроскопическое исследование “толстой капли” и “тонкого” мазка крови на малярийные плазмодии 360 ₽
Группа крови для операции: Группа крови+Резус-фактор; Антитела к антигенам эритроцитов, суммарные (в т.ч. к Rh-фактору, кроме АТ по системе АВ0) с определением титра; определение наличия антигенов эритроцитов C, c, E, e, CW, K и k (фенотипирование антиг 1 650 ₽
Антитела к антигенам эритроцитов, суммарные ( в т.ч. Rh-фактору, кроме АТ по системе АВ0) с определением титра 550 ₽
Исследование уровня свободных метанефринов и норметанефринов в моче 2 050 ₽
Общий (клинический) анализ крови из плазмы капиллярной крови 550 ₽
Общие метанефрины и норметанефрины в моче 2 365 ₽
Микроскопическое исследование отделяемого уретры, цервикального канала, влагалища (степень чистоты) 420 ₽
Микроскопическое исследование спиномозговой жидкости 330 ₽
Исследование уровня глюкозы в крови плазмы венозной крови 165 ₽
Исследование обмена глюкозы-гликемический профиль 350 ₽
Проведение глюкозотолерантного теста 350 ₽
Исследование уровня гликированного гемоглобина в крови 475 ₽
Исследование уровня общего белка в крови 180 ₽
Исследование уровня альбумина в крови 155 ₽
Определение соотношения белковых фракций методом электрофореза 470 ₽
Исследование уровня миоглобина в крови 600 ₽
Исследование уровня тропонина I в крови 470 ₽
Определение содержания ревматоидного фактора в крови 385 ₽
Исследование уровня С-реактивного белка в сыворотке крови, количественный 385 ₽
Определение антистрептолизина-О в сыворотке крови 385 ₽
Исследование уровня мочевой кислоты в крови 175 ₽
Исследование уровня мочевины в крови 175 ₽
Исследование уровня креатинина в крови 175 ₽
Исследование функции нефронов по клиренсу креатинина (проба Реберга, СКФ) 350 ₽
Исследования уровня N-терминального фрагмента натрийуретического пропептида мозгового (NT-proBNP) в крови 2 145 ₽
Исследдование уровня железа сыворотки крови 175 ₽
Исследование железосвязывающей способности сыворотки 175 ₽
Исследование насыщения трансферрина железом 350 ₽
Исследдование уровня железа сыворотки крови (железо, ОЖСС, НЖСС, % насыщения тр-на железом). 600 ₽
Исследование уровня трансферрина сыворотки крови 350 ₽
Исследование уровня ферритина в крови 440 ₽
Исследование уровня общего кальция в крови 175 ₽
Исследование уровня ионизированного кальция в крови 240 ₽
Исследование уровня неорганического фосфора в крови 175 ₽
Фосфорно-кальциевый обмен: кальций ионизированный, фосфор, щелочная ф-за, паратгормон 850 ₽
Исследование уровня калия в крови 180 ₽
Исследование уровня натрия в крови 180 ₽
Исследование уровня хлоридов в крови 180 ₽
Исследование уровня общего магния в сыворотке крови 180 ₽
Исследование уровня меди в крови 420 ₽
Исследование уровня селена в крови 700 ₽
Исследование уровня цинка в крови 290 ₽
Определение уровня витамина В12 (цианокобаламина) в крови 495 ₽
Исследование уровня холестерина в крови 180 ₽
Исследование уровня холестерина липопротеинов высокой плотности в крови (ЛПВП) 180 ₽
Исследование уровня холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) 240 ₽
Исследование уровня триглицеридов в крови 175 ₽
Анализ крови по оценке нарушений липидного обмена биохимический (липидный спектр) 770 ₽
Липидный спектр расширенный (Хс, ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП, триглицериды, коэф. атерогенности, индекс ИБС, коэф. окклюзии периф. артерий, Апо А1, Апо В, липопротеин (а)) 2 000 ₽
Исследование уровня гомоцистеина в крови 1 100 ₽
Исследование уровня аполипопротеина А1 в крови 550 ₽
Исследование уровня аполипопротеина В в крови 350 ₽
Исследование уровня липопротеина (а) в крови 550 ₽
Исследование уровня С-реактивного белка ультрачувствтельного 420 ₽
Исследование уровня общего билирубина в крови 155 ₽
Исследование уровня билирубина свободного (неконъюгированного) в крови 155 ₽
Определение активности аланинаминотрансферазы в крови (АЛАТ) 155 ₽
Определение активности аспартатаминотрансферазы в крови (АСАТ) 155 ₽
Определение активности щелочной фосфатазы в крови (ЩФ) 175 ₽
Определение активности гамма-глутамилтрансферазы в крови (ГГТ) 165 ₽
Определение активности креатинкиназы в крови (КФК) 155 ₽
Исследование уровня/активности изоферментов креатинкиназы в крови (КФК-МВ) 155 ₽
Определение активности лактатдегидрогеназы в крови (ЛДГ) 180 ₽
Определение активности амилазы в крови 180 ₽
Определение активности липазы в сыворотке крови 300 ₽
Исследование уровня фолиевой кислоты в сыворотке крови 550 ₽
Проведение глюкозотолерантного теста (для беременных) 420 ₽
Исследование уровня глюкозы в крови (капиллярная кровь) 165 ₽
Исследование уровня 25-ОН витамина Д в крови 1 760 ₽
Исследование уровня эритропоэтина крови 770 ₽
Исследование уровня церулоплазмина в крови 600 ₽
Определение активности холинэстеразы в крови 230 ₽
Исследование уровня цистатина С в крови (ОМТЕСТ) 800 ₽
Исследование уровня 1,25-дигидроксихолекальциферол витамин D3 в крови 1 650 ₽
Определение активности альфа-амилазы в моче 200 ₽
Исследование уровня глюкозы в моче 150 ₽
Обнаружение кетоновых тел в моче 150 ₽
Определение уровня креатинина в моче 150 ₽
Определение альбумина в моче 300 ₽
Иследование уровня мочевой кислоты в моче 180 ₽
Определение количества белка в суточной моче 180 ₽
Исследование уровня фосфора в моче 180 ₽
Исследование уровня порфиринов и их производных, уровня дельта-аминолевуленовой кислоты (АЛК) в моче 165 ₽
Исследование уровня калия в моче 180 ₽
Исследование уровня натрия в моче 190 ₽
Исследование уровня хлоридов в моче 180 ₽
Исследование агрегации тромбоцитов, индуцированной адреналином 300 ₽
Агрегация тромбоцитов, индуцированная коллагеном 330 ₽
Агрегация тромбоцитов, индуцированная АДФ в одном разведении 200 ₽
Агрегация тромбоцитов, индуцированная ристомицином 385 ₽
Определение протромбинового времени (тромбопластинового)времени в крови 180 ₽
Определение протромбинового времени (тромбопластинового)времени в крови (Протромбиновое отношение). 180 ₽
Определение протромбинового времени (тромбопластинового)времени в крови (ПТИ (протромбиновый индекс)) 165 ₽
Определение международного нормализованного отношения (МНО) 190 ₽
Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) 150 ₽
Определение тромбинового времени в крови 165 ₽
Исследование уровня фибриногена в крови 180 ₽
Определение активности антитромбина III 530 ₽
Определение концентрации Д-димера в крови 950 ₽
Исследование уровня растворимых фибринмономерных комплексов в крови (РФМК) 200 ₽
Определение содержания антител к фосфолипидам в крови (Волчаночного антикоагулянта) 800 ₽
Определение содержания антител к бета-2-гликопротеину в крови (IgM, IgG) 880 ₽
Исследование уровня протеина С в крови 1 000 ₽
Исследование уровня антигена фактора Виллебранда 720 ₽
Коагулограмма (ориентировночное исследование системы гемостаза): МНО, АЧТВ, протромбиновое время, протромбиновый индекс, тромбиновое время, фибриноген. 800 ₽
Коагулограмма (ориентировочное исследование системы гемостаза. (АЧТВ, протромбиновое время, тромбиновое время, фибриноген,Д-димер, антитромбин-3, агрегация тромбоцитов индуцированная адреналином,МНО) 1 650 ₽
Определение содержания антител к фосфолипидам в крови (кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу, фосфатидиловой кислоте), IgM+IgG 880 ₽
Определение содержания антител к фосфолипидам в крови IgM (кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу, фосфатидиловой кислоте). Антитела класса IgМ к фосфолипидам 650 ₽
Определение содержания антител к фосфолипидам в крови IgG (кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу, фосфатидиловой кислоте).Антитела класса IgG к фосфолипидам 600 ₽
Исследование спонтанной агрегации тромбоцитов 180 ₽
Определение активности протеина S в крови 1 650 ₽
Исследование уровня тиреотропного гормона (ТТГ) в крови 350 ₽
Исследование уровня тиреотропного гормона (ТТГ) в крови, тиреотропный гормон суперчувствительный 350 ₽
Исследование уровня свободного тироксина (СвТ4) сыворотки крови 350 ₽
Исследование уровня общего тироксина (Т4) сыворотки крови 350 ₽
Исследование уровня свободного трийодтиронина (СвТ3) в крови 350 ₽
Исследование уровня общего трийодтиронина (Т3) в крови 350 ₽
Исследование уровня тиреоглобулина в крови (ТГ) 420 ₽
Определение содержания антител к тиреопероксидазе в крови (Анти-ТПО) 440 ₽
Исследование уровня тиреотропного гормона (ТТГ) в крови (Тиреоидный диагностический комплекс (ТТГ + FТ4 + анти-ТПО) 935 ₽
Определение содержания антител к тироглобулину в сыворотке крови (Анти-ТГ) 420 ₽
Определение содержания антител к рецептору тиреотропного гормона (ТТГ) в крови 1 050 ₽
Исследование уровня лютеинизирующего гормона в сыворотке крови (ЛГ) 350 ₽
Исследование уровня фолликулостимулирующего гормона в сыворотке крови (ФСГ) 350 ₽
Определение индекса ЛГ/ФСГ, ЛГ, ФСГ в крови 770 ₽
Исследование уровня пролактина в крови 350 ₽
Исследование уровня пролактина в крови (Макропролактин ) 940 ₽
Исследование уровня андростендиона в крови 480 ₽
Исследование уровня дигидроэпиандростерона сульфата в крови (ДГЭА) 350 ₽
Исследование уровня общего тестостерона в крови 350 ₽
Исследование уровня свободного тестостерона в крови 580 ₽
Исследование уровня прогестерона в крови 350 ₽
Исследование уровня 17-гидроксипрогестерона в крови (17-ГПГ) 480 ₽
Исследование уровня глобулина, связывающего половые гормоны, в крови (ГСПГ) 420 ₽
Исследование уровня адренокортикотропного гормона в крови (АКТГ) 530 ₽
Исследование уровня паратиреоидного гормона в крови 530 ₽
Исследование уровня общего кортизола в крови 350 ₽
Исследование уровня инсулина плазмы крови 420 ₽
Исследование уровня С-пептида в крови 420 ₽
Определение индекса HOMA (оценка инсулинорезистентности) в крови 240 ₽
Определение индекса Caro (инсулинорезистентности) в крови 240 ₽
Исследование уровня инсулиноподобного ростового фактора 1 в крови (ИФР-1) 940 ₽
Исследование уровня соматотропного гормона в крови (СТГ) 420 ₽
Определение реакции соматотропного гормона на гипергликемию (Гормон роста + тест толерантности к глюкозе: глюкоза натощак, ГР натощак, ГР через 30, 60, 90 120 мин) 1 760 ₽
Исследование уровня лептина в крови 770 ₽
Исследование уровня альдостерона в крови 770 ₽
Исследование уровня остеокальцина в крови 850 ₽
Исследование уровня кальцитонина в крови 700 ₽
Исследование уровня антимюллерова гормона в крови (АМН,АМГ,MiS) 1 760 ₽
Определение содержания антител к декарбоксилазе глутаминовой кислоты (GAD) 1 100 ₽
Определение содержания антител к антигенам островко Лангерганса в клеток поджелудочной железы в крови (ICA) 950 ₽
Определение содержания антител к инсулину в крови (IAA) 600 ₽
Исследование уровня ренина в крови 880 ₽
Определение индекса свободных андрогенов (включает определение тестостерона общего и свободного, ГСПГ (SHBG), расчет индекса свободного андрогенов) 950 ₽
Исследование уровня свободного кортизола в моче 650 ₽
Исследование уровня ингибина В в крови 1 320 ₽
Исследование уровня дигидротестостерона в крови 1 200 ₽
Определение альдостерон-ренинового соотношения в крови 1 490 ₽
Эстрадиол (Е2) 420 ₽
Комплекс: индексы HOMO/CARO, глюкоза, инсулин – 1 день 550 ₽
Исследование уровня простатспецифического антигена общего в крови (ПСА) 460 ₽
Исследование уровня простатспецифического антигена свободного в крови 460 ₽
Исследование уровня простатспецифического антигена в крови (ПСА общий + свободный (простатический специфический антиген) – скрининг новообразований предстательной железы) 700 ₽
Исследование уровня опухолеассоциированного маркера СА 15-3 в крови 530 ₽
Исследование уровня антигена аденогенных раков СА 19-9 в крови 530 ₽
Исследование уровня опухолеассоциированного маркера СА 242 в крови 800 ₽
Исследование уровня антигена аденогенных раков СА 72-4 в крови ОМТЕСТ 860 ₽
Исследование уровня антигена аденогенных раков СА 125 в крови 530 ₽
Исследование уровня растворимого фрагмента цитокератина 19 (CYFRA 21.1) в крови 880 ₽
Исследование уровня ракового эмбрионального антигена в крови (РЭА) 460 ₽
Исследование уровня альфа-фетопротеина в сыворотке крови (АФП) 400 ₽
Исследование уровня хорионического гонадотропина в крови (ХГЧ) 350 ₽
Исследование уровня плацентарного лактогена в крови 660 ₽
Комплексное исследование для пренатальной диагностики нарушений развития ребенка (внутриутробно) PRISKA-II триместр (15-19 неделя): АФП, ХГЧ, Эстриол свободный 1 320 ₽
Определение секреторного белка эпидидимиса человека 4 (HE 4) в крови 1 320 ₽
Исследование уровня антигена плоскоклеточных раков в крови (SCCА) 1 100 ₽
Исследование уровня нейронспецифической енолазы в крови (NSE) 1 000 ₽
Исследование уровня специфический антиген рака мочевого пузыря (UBC) в моче 1 540 ₽
Комплекс исследований для диагностики злокачественных новообразований яичников (исследование уровня НЕ4 и СА-125 с расчетом индекса ROMA) 1 650 ₽
Пренатальный скрининг I триместра беременности ASTRAIA (8-14 недель): Ассоциированный с беременностью протеин А (PAPP-A), Свободная субъединица бета-ХГЧ 1 925 ₽
Комплекс исследований для выявления аллергена (Аллергопанель педиатрическая (20 аллергенов) 4 200 ₽
Комплекс исследований для выявления аллергена (Аллергопанель пищевая (20 аллергенов) 4 200 ₽
Комплекс исследований для выявления аллергена (Аллергопанель респираторная (20 аллергенов) 4 200 ₽
Исследование уровня общего иммуноглобулина Е в крови 420 ₽
Определение пролиферативной активности лимфоцитов с митогенами и специфическими антигенами (реакции бласттрансформации лимфоцитов с ФГА (РБТЛ) 520 ₽
Определение содержания антител к антигенам ядра клетки и ДНК (антинуклеарных антител, ANA) (анти-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENT-B, Jo-1, гистонов, нуклеосом, Ribo P, AMA-M2) IgG Вестерн-Блот 2 950 ₽
Определение содержания антител к антигенам спермальной жидкости в плазме крови 800 ₽
Определение содержания антител к антигенам спермальной жидкости в цервикальной слизи 800 ₽
Определение содержания антител к глиадину в крови. IgA 880 ₽
Определение содержания антител к глиадину в крови. IgG 880 ₽
диагностика системной красной волчанки ( Антитела к ДНК двуспиральной (a-dsDNA) 650 ₽
Диагностика системной красной волчанки (Антитела к ДНК односпиральной (a-ssDNA) 650 ₽
Определение содержания антител к кардиолипину в крови 720 ₽
Определение содержания антител к антигенам митохондрий в крови (АМА) 880 ₽
Определение содержания антител к циклическому цитрулиновому пептиду (анти-ССР) в крови 1 100 ₽
Определение содержания антител к цитруллинированному виментину в крови 1 100 ₽
Исследование уровня С3 фракции комплемента 250 ₽
Исследование уровня С4 фракции комплемента 260 ₽
Исследование уровня иммуноглобулина А в крови 230 ₽
Исследование уровня иммуноглобулина G в крови 230 ₽
Исследование уровня иммуноглобулина M в крови 230 ₽
Исследование уровня циркулирующих иммунных комплексов в крови 580 ₽
Исследование фагоцитоза с оценкой завершенности 495 ₽
Интерфероновый статус ( 3 показателя: сывороточный интерферон, интерферон-альфа, интерферон-гамма) 3 960 ₽
Определение содержания антилейкоцитарных антител (антинейтрофильные антитела IgG) 1 540 ₽
Определение содержания антител к эндомизию в крови (IgA) 1 200 ₽
Исследование популяций лимфоцитов.Иммунограмма расширенная (ОАК, CD3, CD4, CD8, CD19, CD16(56), CD3+HLA-DR+, CD3+ CD16(56)+(EK-T), CD8+ CD38+, CD3+ CD25+, CD3+ CD56+, CD95, CD4/ CD8, РБТЛ, НСТ-тест, фагоцинтоз с оценкой завершенности, ЦИК) 4 730 ₽
Исследование популяций лимфоцитов Иммунограмма базовая (CD-типирование лимфоцитов периферической крови, общий анализ крови) 3 300 ₽
Определение содержания антител к тканевой трансглютаминазе в крови, IgA 990 ₽
Определение содержания антител к тканевой трансглютаминазе в крови, IgG 990 ₽
Определение содержания антител к антигенам главного комплекса гистосовместимости в сыворотке крови (HLA B27) 2 860 ₽
Определение содержания антител к антигенам печеночной ткани в крови (иммуноблот) (аутоантитела класса IgG к 4 различным антигенам: пируватдегидрогеназному комплексу (М2), микросомам печени и почек (LKM-1), цитозольному печеночному антигену типа 1 (LC-1), 1 430 ₽
Определение содержания антител к антигенам ядра клетки и ДНК (ANA) 640 ₽
Определение содержания антител к аннексину V в крови (IgM) 1 320 ₽
Определение содержания антител к аннексину V в крови (IgG) 1 320 ₽
Определение содержания антител к кардиолипину в крови, IgM 800 ₽
Определение содержания антител к кардиолипину в крови, IgG 800 ₽
Определение содержания антител к кардиолипину в крови, IgA 860 ₽
Определение содержания антител к бета-2-гликопротеину в крови (IgA) 860 ₽
Определение содержания антител к фосфолипидам в крови (к протромбину, IgG) 860 ₽
Определение содержания антител к фосфолипидам в крови (к протромбину, IgМ) 860 ₽
Определение содержания антител к фосфолипидам в крови (к протромбину, IgG) скрининг 860 ₽
Сокращенная панель CD4/CD8 (включая клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой (5DIFF)) 1 980 ₽
Исследование уровня прокальцитонина в крови 2 100 ₽
Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2 (АНФ) 1 200 ₽
Иммунограмма расширенная (CD3, CD3/4, CD3/8, CD19, CD16/56, CD3/16/56, CD3/HLA-DR, CD3/25, CD3/95, CD3/4/95, CD3/8/95, CD3/8/38, лейкоцитарно-Т-ЛФ индекс, иммунорегуляторный индекс. Включает анализ крови с лейкоцитарной формулой) 2 500 ₽
Иммунограмма для оценки и коррекции риска развития онкологической патологии (НСТ-тест, иммуноглобулин А, М,G, иммунограмма (CD3, CD3/4, CD3/8, CD19, CD16/56, CD3/16/56, CD3/HLA-DR, CD3/25, CD3/95, CD3/4/95, CD3/8/95, CD3/8/38, лейкоцитарно-Т-ЛФ индекс, иммунорегуляторный индекс. Включает анализ крови с лейкоцитарной формулой) 3 500 ₽
Определение антител к бледной трепонеме (Treponema pallidum) иммуноферментным методом (ИФА) в крови (сифилис) 350 ₽
Определение антител классов M, G (IgM, IgG) к вирусу иммунодефицита человека ВИЧ -1,2 (Human immunodeficiency virus HIV 1) в крови 420 ₽
Определение антител класса G (anti-HAV IgG) к вирусу гепатита A (Hepatitis A virus) в крови 530 ₽
Определение поверхностного антигена (HbsAg) вируса гепатита B (Hepatitis B virus) в крови 400 ₽
Определение антител к поверхностному антигену (HBsAg) вируса гепатита B (Hepatitis B virus) в крови 410 ₽
Определение антител класса M к ядерному антигену (anti-HBc IgM) вируса гепатита B (Hepatitis B virus) в крови 570 ₽
Определение антител классов к ядерному антигену (HBcAg) вируса гепатита B (Hepatitis B virus) в крови (суммарные) 410 ₽
Определение антигена (HbeAg) вируса гепатита B (Hepatitis B virus) в крови 410 ₽
Определение антител к e-антигену (anti-HBe) вируса гепатита B (Hepatitis B virus) в крови 400 ₽
Определение антител к вирусу гепатита C (Hepatitis C virus) в крови (суммарные) 440 ₽
Определение Core-антигена вируса гепатита C (Hepatitis C virus) в крови 460 ₽
Определение антител класса M (IgM) к вирусу краснухи (Rubella virus) в крови 460 ₽
Определение антител класса G (IgG) к вирусу краснухи (Rubella virus) в крови 460 ₽
Определение индекса авидности антител класса G (IgG avidity) к вирусу краснухи (Rubella virus) в крови 460 ₽
Определение антител класса G к вирусу краснухи (Rubella virus) в крови (IgG -иммуноблот) 2 860 ₽
Определение антител класса M (IgM) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в крови 410 ₽
Определение антител класса G (IgG) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в крови 410 ₽
Определение авидности антител класса G к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) 460 ₽
Определение антител класса М к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в крови (IgM -иммуноблот) 1 540 ₽
Определение антител класса G к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в крови (IgG -иммуноблот) 1 540 ₽
Определение антител класса M (IgM) к цитомегаловирусу (Cytomegalovirus) в крови 500 ₽
Определение антител класса G (IgG) к цитомегаловирусу (Cytomegalovirus) в крови 460 ₽
Определение индекса авидности антител класса G (IgG avidity) к цитомегаловирусу (Cytomegalovirus) в крови 460 ₽
Определение антител класса А (IgА) к токсоплазме (Toxoplasma gondii) в крови 660 ₽
Определение антител класса M (IgM) к токсоплазме (Toxoplasma gondii) в крови 460 ₽
Определение антител класса G (IgG) к токсоплазме (Toxoplasma gondii) в крови 460 ₽
Определение индекса авидности антител класса G (IgG avidity) антител к токсоплазме (Toxoplasma gondii) в крови 640 ₽
Определение антител класса G (IgG) к ранним белкам (EA) вируса Эпштейна-Барр (Epstein-Barr virus) в крови 410 ₽
Определение антител класса G (IgG) к ядерному антигену (NA) вируса Эпштейна-Барр (Epstein-Barr virus) в крови 410 ₽
Определение антител класса M (IgM) к капсидному антигену (VCA) вируса Эпштейна-Барр (Epstein – Barr virus) в крови 410 ₽
Определение индекса авидности антител класса G (IgG avidity) к вирусу Эпштейна-Барр (Epstein-Barr virus, EBV) 710 ₽
Определение антител класса M (IgM) к вирусу Эпштейна-Барр в крови (IgM-иммуноблот) 1 650 ₽
Определение антител класса G (IgG) к вирусу Эпштейна-Барр в крови (IgG-иммуноблот) 1 650 ₽
Определение антител к хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) в крови, IgA 460 ₽
Определение антител к хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) в крови, IgG 460 ₽
Определение антител класса А (IgA) к хламидии трахоматис (Chlamydia trachomatis) в крови 460 ₽
Определение антител класса М (IgМ) к хламидии трахоматис (Chlamydia trachomatis) в крови 440 ₽
Определение антител класса G (IgG) к хламидии трахоматис (Chlamydia trachomatis) в крови 440 ₽
Определение антител классов А (IgА) к хламидии пневмони (Chlamydia pheumoniae) 460 ₽
Определение антител классов М (IgM) к хламидии пневмони (Chlamydia pheumoniae) 460 ₽
Определение антител классов G (IgG) к хламидии пневмони (Chlamydia pheumoniae) 580 ₽
Определение антител классов А (IgА) к микоплазме пневмонии (Mycoplasma pneumoniae) в крови 410 ₽
Определение антител классов M (IgM) к микоплазме пневмонии (Mycoplasma pneumoniae) в крови 410 ₽
Определение антител классов G (IgG) к микоплазме пневмонии (Mycoplasma pneumoniae) в крови 350 ₽
Определение антител класса G (IgG) к уреаплазме уреалитикум (Ureaplasma urealyticum) в крови 410 ₽
Определение антител класса А (IgА) к уреаплазме уреалитикум (Ureaplasma urealyticum) в крови 410 ₽
Определение антител IgA к кандида альбиканс (Candida IgA) 530 ₽
Определение антител IgM к кандида альбиканс (Candida IgM) 530 ₽
Определение антител IgG к кандида альбиканс (Candida IgG) 530 ₽
Определение антител класса G (IgG) к трихомонас урогениталис (Trichomonas urogenitalis) в крови 460 ₽
Определение антител класса G (IgG) к вирусу кори в крови 420 ₽
Определение антител класса А (IgА) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типа (Herpes simplex virus 1) в крови 570 ₽
Определение антител к дифтерийному анатоксину в крови (Corynebacterium diphteriae) 460 ₽
Определение антител к возбудителю столбняка (Сlostridium tetani) 460 ₽
Определение антител класса G (IgG) к вирусу герпеса человека 6 типа (Human herpes virus 6) в крови 530 ₽
Определение вируса Эпштейна-Бара (Epstein-Barr), антитела к капсидному антигену (VGA), IGG 460 ₽
Определение антител класса М (IgМ) к вирусу простого герпеса 1 типа (Herpes simplex virus 1) в крови 410 ₽
Определение антител класса G (IgG) к вирусу простого герпеса 1 типа (Herpes simplex virus 1) в крови 460 ₽
Определение антител класса М (IgМ) к вирусу простого герпеса 2 типа (Herpes simplex virus 2) в крови 460 ₽
Определение антител класса G (IgG) к вирусу простого герпеса 2 типа (Herpes simplex virus 2) в крови 460 ₽
Определение антител класса M (IgM) к вирусу ветряной оспы и опоясывающего лишая (Varicella-Zoster virus) в крови 590 ₽
Определение антител класса А (IgА) к вирусу ветряной оспы и опоясывающего лишая (Varicella-Zoster virus) в крови 590 ₽
Определение антител класса G (IgG) к вирусу ветряной оспы и опоясывающего лишая (Varicella-Zoster virus) в крови 660 ₽
Определение антител класса А (IgА) к цитомегаловирусу (Cytomegalovirus) в крови 550 ₽
Определение антител класса M (IgM) к возбудителям иксодовых клещевых боррелиозов группы Borrelia burgdorferi sensu lato в крови 600 ₽
Определение антител класса G (IgG) к возбудителям иксодовых клещевых боррелиозов группы Borrelia burgdorferi sensu lato в крови 600 ₽
Определение антител класса M (IgM) к вирусу клещевого энцефалита в крови 530 ₽
Определение антител класса G (IgG) к вирусу клещевого энцефалита в крови 530 ₽
Определение антител к возбудителю коклюша (Bordetella pertussis) в крови, (IgА) 460 ₽
Определение антител к возбудителю коклюша (Bordetella pertussis) в крови, IgG 460 ₽
Определение антител к возбудителю коклюша и паракоклюша (Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis), суммарные (РПГА) полуколичественно 770 ₽
Определение антител к легионелле пневмонии (Legionella pneumophila) в крови 720 ₽
Определение антител класса M (anti-HAV IgM) к вирусу гепатита A (Hepatitis A virus) в крови 530 ₽
Определение антител класса М (IgM) к вирусу гепатита C (Hepatitis C virus) в крови (Anti-HCV) 420 ₽
Молекулярно-биологическое исследование крови на возбудителей брюшного тифа (Антитела к Vi-антигену возбудителя брюшного тифа (Salmonella typhi) 495 ₽
Определение антител к хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) в крови (IgM) 460 ₽
Определение антител к бруцеллам (Brucella spp.) в крови, IgA 460 ₽
Определение антител к бруцеллам (Brucella spp.) в крови, IgG 460 ₽
Определение  антител IgG к S-белку короновируса SARS-CoV-2 (COVID-19) 1 000 ₽
Определение  антител IgМ к S- и N-белкам короновируса SARS-CoV-2 (COVID-19) 1 000 ₽
Комплексное определение  антител IgG, IgM к S- и N-белкам короновируса SARS-CoV-2 (COVID-19) 1 870 ₽
Определение антител класса G (IgG) к вирусу паротита (Mumps virus) в крови 340 ₽
Определение антител класса M (IgM) к вирусу паротита (Mumps virus) в крови 340 ₽
Экспресс-тест на антиген к SARS-CoV2 (COVID-19) в соскобе (иммунохроматографический тест) 900 ₽
Антитела IgG к спайковому белку короновируса SARS-CoV2. количественно (результат в BAU/ml) 500 ₽
Выявление РНК коронавируса SARS-CoV-2  в мазке со слизистой носоглотки и/или ротоглотки с забором биологического материала (результат на русском языке) на базе ООО “МЕДЛАБ СИБИРЬ” срок выполнения один день 850 ₽
Выявление РНК коронавируса SARS-CoV-2  в мазке со слизистой носоглотки и/или ротоглотки с забором биологического материала (результат на русском и английском  языке) на базе ООО “МЕДЛАБ СИБИРЬ” срок выполнения один день 1050 ₽
Выявление РНК кононавируса SARS-CoV-2 (COVID-19) c дополнительным определением штаммов Omicron и Delta на базе ОМТЕСТ, срок выполнения 3 дня 1 500 ₽
Определение ДНК вируса гепатита В (Hepatitis B virus) в крови методом ПЦР, качественное исследование 610 ₽
Определение ДНК вируса гепатита B (Hepatitis B virus) в крови методом ПЦР, количественное исследование 2 750 ₽
Определение РНК вируса гепатита C (Hepatitis C virus) в крови методом ПЦР, суммарное определение 720 ₽
Определение РНК вируса гепатита C (Hepatitis C virus) в крови методом ПЦР, количественное исследование 2 860 ₽
Определение генотипа вируса гепатита C (Hepatitis C virus).1a, 1b, 2, 3a 935 ₽
Определение РНК вируса гепатита D (Hepatitis D virus) в крови методом ПЦР, качественное исследование 580 ₽
Определение РНК вируса гепатита G в крови методом ПЦР 800 ₽
Определение ДНК цитомегаловируса (Cytomegalovirus) методом ПЦР, качественное исследование 550 ₽
Определение ДНК цитомегаловируса (Cytomegalovirus) методом ПЦР, количественное исследование 935 ₽
Определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) методом ПЦР, суммарное определение ДНК 570 ₽
Определение ДНК простого герпеса (herpes simplex) 1 типа, количественное 580 ₽
Определение ДНК вируса простого герпеса (Herpes simplex virus),(herpes simplex) 2 типа, количественное 580 ₽
Определение ДНК вируса герпеса 6 типа (HHV6) методом ПЦР в периферической крови, качественное исследование 570 ₽
Определение ДНК вируса герпеса 6 типа (HHV6) методом ПЦР в периферической, количественное исследование 660 ₽
Определение ДНК вируса Эпштейна-Барр (Epstein – Barr virus) методом ПЦР в периферической крови, качественное исследование 570 ₽
Определение ДНК вируса Эпштейна-Барр (Epstein – Barr virus) методом ПЦР в периферической крови, количественное исследование 660 ₽
Определение ДНК токсоплазмы (Toxoplasma gondii) методом ПЦР в периферической крови , 570 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus) 16 и 18 типов в отделяемом (соскобе) методом ПЦР, количественное исследование 1 100 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus) 6 и 11 типов в отделяемом (соскобе) методом ПЦР 570 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus) 31 и 33 типов в отделяемом (соскобе) методом ПЦР, качественное исследование 570 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus)35 и 45 типовв отделяемом (соскобе) методом ПЦР, качественное исследование 440 ₽
Определение ДНК хламидии трахоматис (Chlamydia trachomatis) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР 570 ₽
Определение ДНК хламидии трахоматис (Chlamydia trachomatis) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР, количественное исследование 660 ₽
Определение ДНК микоплазмы хоминис (Mycoplasma hominis) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР, качественное исследование 570 ₽
Определение ДНК микоплазмы хоминис (Mycoplasma hominis) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР, количественное исследование 660 ₽
Определение ДНК микоплазмы гениталиум (Mycoplasma genitalium) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР 570 ₽
Определение ДНК микоплазмы гениталиум (Mycoplasma genitalium) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР, количественное исследование 660 ₽
Определение ДНК уреаплазм (Ureaplasma spp.) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР, качественное исследование 570 ₽
Определение ДНК уреаплазм (Ureaplasma spp.) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР, количественное исследование 880 ₽
Определение ДНК уреаплазм (parvum и urealyticum) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР, качественное исследование 630 ₽
Определение ДНК отделяемого на грибы рода кандида (Candida spp.) с уточнением вида 570 ₽
определение ДНК отделяемого на грибы рода кандида (генотипы albicans, grabrata, krusei), определение ДНК 770 ₽
Определение ДНК гонококка (Neiseria gonorrhoeae) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР 570 ₽
Определение ДНК гонококка (Neiseria gonorrhoeae) в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР. количественное исследование 580 ₽
Определение ДНК трихомонас вагиналис (Trichomonas vaginalis) в отделяемом, методом ПЦР 570 ₽
Определение ДНК трихомонас вагиналис (Trichomonas vaginalis) в отделяемом, методом ПЦР. количественное исследование 580 ₽
Определение ДНК Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Lactobacillus spp. и общего количества бактерий в отделяемом, методом ПЦР, количественное исследование 770 ₽
Определение ДНК гарднереллы вагиналис (Gadnerella vaginalis) в отделяемом, методом ПЦР 570 ₽
Определение ДНК уреаплазм (Ureaplasma urealyticum.) с уточнением вида в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР 460 ₽
Определение ДНК уреаплазм (Ureaplasma urealyticum.) с уточнением вида в отделяемом слизистых оболочек половых органов методом ПЦР, количественное исследование 680 ₽
Определение ДНК условно-патогенных генитальных уреаплазм (Ureaplasma parvum, ) в отделяемом, методом ПЦР, 420 ₽
Определение ДНК условно-патогенных генитальных уреаплазм (Ureaplasma parvum, ) в отделяемом, методом ПЦР, количественное исследование 720 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus 6,11,16,18 в отделяемом (соскобе), методом ПЦР, количественный исследование СКРИНИНГ 720 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus) 16 типа в отделяемом (соскобе) методом ПЦР, качественное исследование 460 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus) 18 типа в отделяемом (соскобе) методом ПЦР, качественное исследование 460 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus) 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов в отделяемом (соскобе), методом ПЦР, количественное определение 990 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus) 6, 11, 16, 18, 26, 31,33, 35, 39, 44, 45,51,52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82 типов в отделяемом (соскобе), методом ПЦР, количественное определение 2 585 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus) 31,33 типов в отделяемом (соскобе) методом ПЦР, количественное определение 680 ₽
Определение ДНК Gardnerella vaginalis, в отделяемом методом ПЦР, количественное исследование 510 ₽
Определение ДНК вирусов папилломы человека (Papilloma virus) 6, 11 типов в отделяемом (соскобе) методом ПЦР, количественное определение 660 ₽
Определение генотипа вируса гепатита C (Hepatitis C virus), (1a, 1b, 2, 3a, 4, 5а, 6) количественное определение РНК 1 760 ₽
ДНК папилломавирусов (Human Papillomavirus) высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59) с определением типа 800 ₽
Определение РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом ПЦР (COVID-19) с забором биологического материала (результат на английском и русском языках) 1 450 ₽
Определение РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом ПЦР (COVID-19) с забором биологического материала (результат на  русском языке) 1 450 ₽
Определение полиморфизма гена UGT1A1 для диагностики синдрома Жильбера 2 585 ₽
Генетический риск нарушения системы свертывания (F2, F5, F7, FGB, F13A1, SERPINE1, ITGA2, ITGB3- 8 точек) 3 190 ₽
Генетические дефекты ферментов фолатного цикла (MTHFR, MTR, MTRR – 4 точки) 2 365 ₽
Генетический риск осложнения беременности и патологии плода (F2, F5, F7, FGB, F13A1, SERPINE1, ITGA2, ITGB3, MTHFR, MTR, MTRR – 12 точек) 4 400 ₽
Генетический риск развития рака молочной железы и рака яичников (BRCA1, BRCA2-8 показателей) 3 850 ₽
Генетический тест на лактозную непереносимость: МСМ6:-13910 Т>C 1 540 ₽
Копрологическое исследование (копрограмма) 410 ₽
Копрологическое исследование (копрограмма расширенная – для детей до одного года и взрослых (с пробами Фуше и др.) 530 ₽
Исследование уровня кальпротектина в кале 1 870 ₽
Иммунохроматографическое экспресс-исследование кала на ротавирус 530 ₽
Опредедление панкреатической эластазы-1 в кале 1 650 ₽
Исследование кала на наличие токсина клостридии диффициле (Clostridium difficile) 1 100 ₽
Экспресс-исследование кала на скрытую кровь иммунохроматографическим методом 350 ₽
Иммунохроматографическое экспресс-исследование кала на хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) 880 ₽
Исследование кала на скрытую кровь (одновременный анализ кала на гемоглобин и трансферрин-HTSA, (качественный метод) 800 ₽
Гемоглобин и гемоглобин/гаптоглобин в кале иммунохроматографическим методом ColonView (качественно) 1 200 ₽
Микроскопическое исследование кала на яйца и личинки гельминтов (по Като) 410 ₽
Микроскопическое исследование кала на гельминты, Комплексное исследование (ИХМ, яйца глист по Като) 530 ₽
Микроскопическое исследование кала на гельминты с применением методов обогащения (Parasep) 530 ₽
Определение антител к грибам рода аспергиллы (Aspergillus spp.) в крови, IgG 610 ₽
Определение антител к трихинеллам (Trichinella spp.) в крови, IgG 530 ₽
Определение антител класса G (IgG) к эхинококку однокамерному в крови 530 ₽
Стронгилоидоз по Бергману, микроскопия 185 ₽
Микроскопическое исследование отпечатков с поверхности кожи перианальных складок на яйца остриц (Enterobius vermicularis) 230 ₽
Определение антител к возбудителю описторхоза (Opisthorchis felineus) в крови (IgG) 460 ₽
Определение антител к возбудителю описторхоза (Opisthorchis felineus) в крови (IgM) 460 ₽
Определение антител класса G (IgG) к токсокаре (Тoxocara) в крови 462 ₽
Определение антител к аскаридам (Ascaris lumbricoides) (IgG) 520 ₽
Определение антител классов G (IgG) к лямблиям в крови 460 ₽
Иммунохроматографическое экспресс-исследование кала на кишечные лямблии (Giardia intestinalis) 460 ₽
Определение антител классов M (IgM) к лямблиям в крови 460 ₽
Определение антител к возбудителям клонорхоза (Clonorchis sinensis), IgG 650 ₽
Микроскопия желчи на описторхоз 230 ₽
Микробиологическое (культуральное) исследование фекалий/ректального мазка на возбудителя дизентерии (Shigella spp.) (Посев кала на кишечную группу инфекций (сальмонеллез, дизентерия, энтеропатогенная кишечная палочка) 340 ₽
Посев кала на условно-патогенные энтеробактерии с определением чувствительности к антибактериальным препаратам и фагам (количественный метод) 440 ₽
Посев кала на стафилококк с определением чувствительности к антибактериальным препаратам и фагам (количественный метод) 275 ₽
Посев мокроты, бронхоольвеолярного лаважа (БАЛ) на микрофлору и грибы (дрожжевые и плесневые) с определением чувствительности к антибиотикам и фагам (количественный метод) 1 050 ₽
Посев мочи на степень бактериурии с определением чувствительности к антибиотикам (ЦНЭ) 570 ₽
Посев на дисбактериоз кишечника (комплексный количественный метод) 1 050 ₽
Гонорея (посев) и микрофлора – комплексное исследование 1 050 ₽
Общий анализ мокроты с микроскопией 260 ₽
Посев мазка на гонорею и чувствительность к антибактериальным препаратам 530 ₽
Микробиологическое (культкральное) исследование гнойного отделяемого на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы 1 050 ₽
Микробиологическое (культуральное)исследование раневого отделяемого на на аэробную, анаэробную микрофлору и грибы с определением чувствительности к АБ, АМ и фагам 1 050 ₽
Микробиологическое (культуральное) исследование крови на стерильность 990 ₽
Посев из полости матки на аэробную и анаэробную микрофлору с определением чувствительности к антибиотикам и фагам 1 100 ₽
Дисбиоз – количественная оценка микрофлоры женских половых органов – расширенный спектр 2 420 ₽
Комплексный метод определения M. hominis и U. urealiticum с определением чувствительности к антибиотикам, микрофлоры половых органов, в т.ч. N. gonorrhoeae, Lactobacillus sp. 2 200 ₽
Микрофлора половых органов с определением чувствительности к антибиотикам и бактериофагам с исследованием на анаэробы 2 090 ₽
Система для выявления Trichomonas vaginalis и Candida albicans 495 ₽
Ureaplasma urealiticum – количественный учет с определением чувствительности к антибиотикам 660 ₽
Mycoplasma hominis – количественный учет с определением чувствительности к антибиотикам 880 ₽
Посев на дисбиоз влагалища (микроскопия, оценка нормальной микрофлоры, условно-патогенные возбудители с определением чувствительности к антибиотикам) 1 540 ₽
Бактериологический посев одной пробы отделяемого зева, носа, уха на микрофлору и грибы с определением чувствительности к антибиотикам и фагам 935 ₽
Бактериологический посев отделяемого зева и носа на дифтерию 610 ₽
Бактериологический посев отделяемого зева и носа на стафилококк 495 ₽
Бактериологический посев мазков из зева и носа на менингит 600 ₽
Определение антигена стрептококка группы A (S.pyogenes) в отделяемом верхних дыхательных путей 550 ₽
Бактериологический посев одной пробы отделяемого зева, носа, глаз, ушей, гнойных очагов (в одной точке) с определением чувствительности к антибиотикам и бактериофагам с исследованием на анаэробы 1 200 ₽
Инфекционный простатит (бак. исследование) 1 650 ₽
Исследование секрета предстательной железы на общий анализ 550 ₽
Исследование мазка из уретры для микроскопии (общий мазок мужской) 495 ₽
Количественный посев на микрофлору, грибы, уреамикоплазмы эякулята, секрета простаты с определением чувствительности к АБ и АМ 2 090 ₽
Микробиологическое (культуральное) исследование отделяемого из ушей на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы 200 ₽
Микроскопические исследования мокроты на микобактерии (mycobacterium spp.) КМХЦ 275 ₽
Микроскопическое исследование бронхоальвеолярной жидкости на микобактерии туберкулеза.КМХЦ 340 ₽
Исследование на Demodex 385 ₽
Микроскопическое исследование соскобов на грибы (дрожжевые, плесневые, дерматомицеты) 460 ₽
Исследование отделяемого глаз, носа, зева, половых органов для выявления грибов (посев) 770 ₽
Посев на грибы (дрожжевые, плесневые) и чувствительность к антимикотическим препаратам любого клинического материала 460 ₽
Микроскопическое исследование ногтевых пластинок на грибы (дрожжевые, плесневые, дерматомицеты) 460 ₽
Общий (клинический) анализ из плазмы венозной крови. Экспресс 620 ₽
Микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном. Экспресс 200 ₽
Определение основных групп по системе АВ0+Определение антигена D системы Резус (резус-фактор). Экспресс 460 ₽
Общий (клинический) анализ мочи. Экспресс 285 ₽
Исследование мочи методом Нечипоренко. Экспресс 285 ₽
Микроскопическое исследование уретрального отделяемого и сока простаты Экспресс 650 ₽
Микроскопическое исследование кала на яйца и личинки гельминтов (по Като). Экспресс 460 ₽
Определение антител к бледной трепонеме (Treponema pallidum) иммуноферментным методом (ИФА) в крови. Экспресс 410 ₽
Определение антител классов M, G (IgM, IgG) к вирусу иммунодефицита человека ВИЧ-1,2 (Human immunodeficiency virus HIV 1) в крови. Экспресс 375 ₽
Определение поверхностного антигена (HbsAg) вируса гепатита B (Hepatitis B virus) в крови. Экспресс 460 ₽
Определение протромбинового времени (тромбопластинового)времени в крови или в плазме (ПТИ (протромбиновый индекс). Экспресс 220 ₽
Определение международного нормализованного отношения (МНО). Экспресс 240 ₽
Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ). Экспресс 210 ₽
Определение протромбинового времени (тромбопластинового)времени в крови или в плазме. Экспресс 210 ₽
Исследование уровня фибриногена в крови. Экспресс 220 ₽
Коагулограмма (ориентировночное исследование системы гемостаза: протромбиновое время, ПТИ, МНО, тромбиновое время, АЧТВ, фибриноген). Экспресс 880 ₽
Исследование уровня глюкозы в крови. Экспресс 220 ₽
Исследование уровня общего белка в крови. Экспресс 230 ₽
Исследование уровня с-реактивного белка в сыворотке крови. Экспресс 440 ₽
Определение антистрептолизина-О в сыворотке крови. Экспресс 385 ₽
Определение содержания ревматоидного фактора в крови. Экспресс 440 ₽
Исследование уровня мочевой кислоты в крови. Экспресс 220 ₽
Исследование уровня мочевины в крови. Экспресс 230 ₽
Исследование уровня креатинина в крови. Экспресс 230 ₽
Исследдование уровня железа сыворотки крови. Экспресс 220 ₽
Исследование уровня ионизированногго кальция в крови. Экспресс 295 ₽
Исследование уровня общего кальция в крови. Экспресс 230 ₽
Исследование уровня холестерина в крови. Экспресс 230 ₽
Исследование уровня холестерина липопротеинов высокой плотности в крови (ХЛВТ). Экспресс 230 ₽
Исследование уровня холестерина липопротеинов низкой плотности (ХЛНП). Экспресс 230 ₽
Исследование уровня триглицеридов в крови. Экспресс 230 ₽
Анализ крови по оценке нарушений липидного обмена биохимический (липидный спектр: ХС, ЛПВП, ЛПНП, коэф. атерогенности, триглицириды). Экспресс 800 ₽
Исследование уровня общего билирубина в крови. Экспресс 200 ₽
Исследование уровня билирубина свободного (неконъюгированного) в крови. Экспресс 200 ₽
Определение активности аланинаминотрансферазы в крови (АЛАТ). Экспресс 200 ₽
Определение активности аспартатаминотрансферазы в крови (АСАТ). Экспресс 200 ₽
Определение активности щелочной фосфатазы в крови (ЩФ). Экспресс 220 ₽
Определение активности гамма-глутамилтрансферазы в крови (ГГТ). Экспресс 210 ₽
Определение активности лактатдегидрогеназы в крови (ЛДГ). Экспресс 230 ₽
Определение активности амилазы в крови. Экспресс 230 ₽
Определение активности креатинкиназы в крови (КФК). Экспресс 200 ₽
Исследование уровня/активности изоферментов креатинкиназы в крови ( КФК-МВ). Экспресс 200 ₽
Определение активности альфа-амилазы в моче. Экспресс 220 ₽
Исследование уровня глюкозы в моче. Экспресс 120 ₽
Обнаружение кетоновых тел в моче. Экспресс 165 ₽
Исследование уровня тиреотропного гормона (ТТГ) в крови. Экспресс 410 ₽
Исследование уровня свободного тироксина (СТ4) сыворотки крови. Экспресс 410 ₽
Исследование уровня простатспецифического антигена общего в крови (ПСА). Экспресс 530 ₽
Исследование уровня антигена аденогенных раков СА 125 в крови. Экспресс 595 ₽
Исследование уровня хорионического гонадотропина в крови (ХГЧ). Экспресс 410 ₽
Экспресс-обработка результатов исследования 70 ₽
Тиреоидный диагностический комплекс (ТТГ + FТ4+анти-ТПО) ). Экспресс 990 ₽
Определение антител к вирусу гепатита C (Hepatitis C virus) в крови (суммарные) Экспресс 495 ₽
Комплекс исследований при экстренных гинекологических операциях (при условии проведения операции в КДЦ «Ультрамед»): Развернутый анализ крови, общий анализ мочи, бихимический анализ крови (глюкоза, ПТИ, билирубин общий, билирубин прямой,амилаза, АлАТ, АсА 3 740 ₽
«Биохимия крови» до 40 лет -(глюкоза, креатинин, билирубин общий, холестерин общий, АлАТ, АсАТ) 935 ₽
«Биохимия крови» после 40 лет (глюкоза, креатинин, билирубин общий, АлАТ, АсАТ, липидный спектр) 1 210 ₽
«Биохимия крови» до 50 лет перед операцией (при условии проведения операции в КДЦ «Ультрамед»): глюкоза, общий белок, билирубин, ПТИ, АлАТ, АсАТ, креатинин, мочевина 1 210 ₽
«Биохимия крови» после 50 лет перед операцией (при условии проведения операции в КДЦ «Ультрамед»): глюкоза, общий белок, билирубин, ПТИ, АлАТ, АсАТ, креатинин, мочевина, калий, натрий, хлориды 1 540 ₽
Лабораторное обследование после холецистэктомии: ОАК (общий анализ крови) с лейкоцитарной формулой, оценкой скорости оседания эритроцитов (СОЭ, амилаза крови 770 ₽
ПЦР-6 ДНК хламидии (Chlamydia trachomatis), ДНК микоплазмы (Mycoplasma hominis) ДНК микоплазмы (Mycoplasma genitalium), ДНК уреаплазмы (Ureaplasma species), ДНК гарднереллы (Gardnerella vaginalis), ДНК трихомонады (Trichomonas vaginalis) 2 640 ₽
ПЦР-6, количественно ДНК хламидии (Chlamydia trachomatis), количественно; ДНК микоплазмы (Mycoplasma hominis), количественно; ДНК микоплазмы (Mycoplasma genitalium), количественно; ДНК уреаплазмы (Ureaplasma species), количественно; ДНК гарднереллы (Gard 3 630 ₽
ПЦР-12 ДНК хламидии (Chlamydia trachomatis), ДНК микоплазмы (Mycoplasma hominis), ДНК микоплазмы (Mycoplasma genitalium), ДНК уреаплазмы (Ureaplasma species), ДНК гарднереллы (Gardnerella vaginalis), ДНК трихомонады (Trichomonas vaginalis), ДНК гонококка 4 950 ₽
ПЦР-12, количественно (ДНК хламидии (Chlamydia trachomatis), количественно; ДНК микоплазмы (Mycoplasma genitalium), количественно; ДНК микоплазмы (Mycoplasma hominis), количественно; ДНК уреаплазмы (Ureaplasma species), количественно; ДНК гарднереллы (Gar 6 270 ₽
ПЦР-15 ДНК хламидии (Chlamydia trachomatis), ДНК микоплазмы (Mycoplasma hominis), ДНК микоплазмы (Mycoplasma genitalium), ДНК уреаплазмы (Ureaplasma species), ДНК гарднереллы (Gardnerella vaginalis), ДНК трихомонады (Trichomonas vaginalis), ДНК бледной т 6 050 ₽
Фемофлор-8 (ДНК) Контроль взятия материала, Общая бактериальная масса, ДНК лактобацилл (Lactobacillus spp.), ДНК гарднереллы (Gardnerella vaginalis) + ДНК превотеллы (Prevotella bivia) + ДНК порфиромонасов (Porphyromonas spp.), ДНК кандиды (Candida albica 1 210 ₽
Скрининг ПЦР-12 Контроль взятия материала, Общая бактериальная масса, ДНК лактобацилл (Lactobacillus spp.), ДНК гарднереллы (Gardnerella vaginalis) + ДНК превотеллы (Prevotella bivia) + ДНК порфиромонасов (Porphyromonas spp), ДНК кандиды (Candida albican 2 090 ₽
Фемофлор-16 (ДНК) Контроль взятия материала, Общая бактериальная масса, ДНК лактобацилл (Lactobacillus spp.), ДНК энтеробактерий (Enterobacterium spp.), ДНК стрептококков (Streptococcus spp), ДНК стафилококков (Staphylococcus spp), ДНК гарднереллы (Gardn 2 200 ₽
Исследование внутрисуставной жидкости (ревматоидный фактор, Chlamydia trachomatis IgA, количество лейкоцитов, лейкоцитарная формула, общий белок, мочевая кислота) 1 100 ₽
Комплекс исследования крови на гельминты: описторхоз IgG, лямблии суммарно, токсокароз IgG, аскароидоз IgG, хеликобактер IgG 1 870 ₽
Флороценоз 1 870 ₽
Флороценоз-комплексное иследование (включает NCMT) 2 100 ₽
Местные анестетики. Комплекс 1. Артикаин (брилокаин, септанест, убистезин, ультракаин) / Скандонест (мепивакаин, изокаин), IgE* 990 ₽
Местные анестетики. Комплекс 2. Новокаин (прокаин, аминокаин, неокаин) / Лидокаин (ксилокаин, астракаин, октокаин, ксилотон, солкаин), IgE* 1 210 ₽
Комплекс: аутоимунное поражение печени (антитела к митохондриям, антитела к гладким мышцам (АГМА), антитела к микросомальной фракции печени и почек (anti-LKM)) 3 190 ₽
Комплексаная программа “Анализ крови биохимический общетерапевтический (стандарт) со скидкой 10% (билирубин общий, билирубин прямой, белок общий, альбумин, креатинин, мочевина, глюкоза, калий, натрий, АлАТ, АсАТ, холестерин общий) 1 800 ₽
Комплексная лабораторная программа “Обследование перед вакцинацией на COVID-19” (клинический анализ крови, С-белок, АЛТ, АСТ, креатинин, мочевина, IgE, SARS-Cov2, белок S. IgM, антитела igG к RBD домену S белка короновируса 2 570 ₽
Комплексная лабораторная программа “Обследование после COVID-19” (Клинический анализ крови, ЛДГ, АЛТ, АСТ, С-белок, ферритин, глюкоза, гликированный гемоглабин, криатинин, цинк, магний, ТТГ, Т4, АЧТВ, протромбин, тромбиновое время, фибриноген, Д-димер) 4 115 ₽
Комплексная лабораторная программа “Обследование при выпадении волос после COVID-19” (клинический анализ крови, цинк, селен, ТТГ, Т4, витамин В9) 1 990 ₽
Комплексная лабораторная программа “Обследование после COVID-19 кардиологическое” (Котнический анализ крови, С-белок, BNP. антитела к миокарду, антитела к митохондриям, тропонин, ЛПНП, ЛПОНП, ферритин, коэф. атерогенности) 5 640 ₽
Комплексная лабораторная программа “Обследование после COVID-19 неврологическое” (клинический анализ крови, С-белок, АЧТВ, протромбин, тромбиновое время, фибриноген, цинк, магний, гомоцестеин, В12, кальций общий0 3 205 ₽
Комплексная лабораторная программа ” Контроль веса” (инсулинорезистентность, ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП, селен, мочевая кислота, лептин, ТТГ) 3 035 ₽
Взятие крови из периферической вены 130 ₽
Взятие крови из пальца 80 ₽
Взятие крови из периферической вены (для справок мед. экспертизы) 60 ₽
Взятие образца биологического материала 275 ₽
Иммуногистохимическое исследование с ограниченным объемом сыворотки до 10 15 125 ₽
Исследование операционно-биопсийного материала на базе Академического центра патологической анатомии I категории сложности 770 ₽
Исследование операционно-биопсийного материала на базе Академического центра патологической анатомии II категории сложности 1 210 ₽
Исследование операционно-биопсийного материала на базе Академического центра патологической анатомии III категории сложности 1 540 ₽
Исследование операционно-биопсийного материала на базе Академического центра патологической анатомии IV категории сложности 2 200 ₽
Исследование операционно-биопсийного материала на базе Академического центра патологической анатомии V категории сложности 3 080 ₽
Иммуногистохимическое исследование на базе Академического центра патологической анатомии I категории сложности 2 090 ₽
Иммуногистохимическое исследование на базе Академического центра патологической анатомии II категории сложности 3 520 ₽
Иммуногистохимическое иссдедование на базе Академического центра патологической академии III категории сложности 4 950 ₽
Иммуногистохимическое исследование на базе Академического центра патологической анатомии IV категории сложности 7 040 ₽
Иммуногистохимическое исследование на базе Академического центра патологической анатомии V категории сложности 8 800 ₽
Морфологическое исследование 1 фрагмент на базе БУЗОО “КДЦ” 1 210 ₽
Морфологиченское исследование 2 фрагмента на базе БУЗОО “КДЦ” 2 200 ₽
Морфологиченское исследование 3 фрагмента и более на базе БУЗОО “КДЦ” 3 300 ₽
Иммуногистохимическое исследование с минимальным объемом сывороток до 3-х 6 270 ₽
Гистологическое исследование 1 категории сложности на базе БУЗОО “КОД” 1 100 ₽
Гистологическое исследование 2 категории сложности на базе БУЗОО “КОД” 1 760 ₽
Гистологическое исследование 3 категории сложности на базе БУЗОО “КОД” 2 530 ₽
Гистологическое исследование 4 категории сложности на базе БУЗОО “КОД” 3 630 ₽
Гистологическое исследование 5 категории сложности на базе БУЗОО “КОД” 4 840 ₽
Иммуногистохимическое исследование с минимальным объемом сывороток до 5 8 470 ₽
Иммуногистохимическое исследование с ограниченным объемом сывороток до 7 10 560 ₽
Цитологическое исследование микропрепарата шейки матки (жидкостная цитология) на базе БУЗОО “КДЦ” 1 650 ₽
Иммуноцитохимическое исследование CINTEC PLUS 5 100 ₽
Иммуногистохимическое исследование CINTEC 3 850 ₽
Цитологическое исследование препарата 600 ₽
Цитологичское исследование отделяемого из носа (риноцитограмма) 550 ₽
Цитологическое исследование бронхо-альвеолярного лаважа (БАЛ) 500 ₽

Иммунологические и серологические исследование

Мне 48 лет, врач мне назначил анализ на сахар. Уровень сахара оказался слегка повышенным – 6,8 г/л. Доктор сказал, что мне надо сдать кровь на гликогемоглобин. И что этот анализ покажет мой уровень сахара за 3 предыдущих месяца, повышался ли он раньше. Разве такое возможно? И можно ли сдать этот анализ у вас в Центре? И стоит ли его сдавать? Мамедов С.И.

Ваш доктор совершенно прав, назначив после того, как он увидел повышенный уровень глюкозы в крови такой анализ как гликогемоглобин (гликированный гемоглобин). Что такое гликированный гемоглобин? Дело в том, что некоторые белки человеческой крови вступают в соединение с глюкозой. Этот процесс называется гликирование, а белки, соединившиеся с глюкозой, называются гликированными. Гемоглобин – это белок красных кровяных клеток (эритроцитов), при соединении с глюкозой он превращается в гликированный гемоглобин.

Мне 48 лет, врач мне назначил анализ на сахар. Уровень сахара оказался слегка повышенным – 6,8 г/л. Доктор сказал, что мне надо сдать кровь на гликогемоглобин. И что этот анализ покажет мой уровень сахара за 3 предыдущих месяца, повышался ли он раньше. Разве такое возможно? И можно ли сдать этот анализ у вас в Центре? И стоит ли его сдавать? Мамедов С.И.

Ваш доктор совершенно прав, назначив после того, как он увидел повышенный уровень глюкозы в крови такой анализ как гликогемоглобин (гликированный гемоглобин). Что такое гликированный гемоглобин? Дело в том, что некоторые белки человеческой крови вступают в соединение с глюкозой. Этот процесс называется гликирование, а белки, соединившиеся с глюкозой, называются гликированными. Гемоглобин – это белок красных кровяных клеток (эритроцитов), при соединении с глюкозой он превращается в гликированный гемоглобин.

Так вот, оказалось, что определение гликированного гемоглобина намного информативнее, чем определение уровня глюкозы. Во-первых, если уровень глюкозы отражает содержание ее в крови только на момент взятия крови, то гликированный гемоглобин показывает содержание глюкозы за 3 предыдущих месяца. Это связано с тем, что срок жизни эритроцитов составляет 3-4 месяца.

Во-вторых, уровень глюкозы очень сильно зависит от питания (может Вы накануне съели много сладостей, и повышение глюкозы просто эпизодическое), зависит также от стресса (может Вы нервничали в момент взятия крови). Все эти факторы не влияют на гликированный гемоглобин. И его определение зачастую помогает избежать гипердиагностики сахарного диабета и назначения ненужных препаратов.

В-третьих, это очень удобный метод взятия крови – из пальца. Этот анализ выполняется в нашей лаборатории на самом современном оборудовании – анализаторе «DCA Vantage» (Siemens, Германия). Этот анализатор – единственный в городе обладатель сертификата NGSP, т.е. качество этого метода подтверждено в Университете Missury(США) при помощи метода масс-спектрометрии («золотого стандарта» определения химических веществ).

Этот метод особенно полюбился детским эндокринологам и нашим маленьким пациентам, т.к. берется очень малое количество крови – 1 мкл (меньше одной капли) из пальца. Дети даже не успевают почувствовать боль. Анализ готов через 10 минут.

Определение гликированного гемоглобина является обязательным не только для постановки диагноза сахарного диабета, но и для контроля лечения. Больные сахарным диабетом должны сдавать его 1 раз в 3 месяца.

У нас с мужем двое маленьких детей – 3 года и 6 лет. За последние полгода у детей ухудшился аппетит, невозможно заставить их поесть. Рассказываем сказки, ругаем, пробовали даже их не кормить, спокойно выдерживают по пол-дня. Изменились приоритеты в еде – просят сладости, едят мучное (хлеб, макароны), совсем перестали есть мясо, иногда едят курицу, сосиски, колбасу. Мясо выплевывают. Старшую дочь тошнит по утрам, бывают поносы. Дети стали капризными, плаксивыми. Педиатр нас успокаивает, что это пройдет, говорит, что анализы крови неплохие. Может, есть какие-то другие анализы, которые помогут установить диагноз? Мукашева Сауле.

Судя по клинической картине, скорее всего ваша девочка заразилась таким распространенным паразитом, как Lambliaintestinalis, возбудитель лямблиоза. Заражение происходит при несоблюдении мер личной гигиены (употребление немытых фруктов, овощей, грязные руки и т.п.) Симптомы лямблиоза – вздутие живота, тошнота, рвота, иногда поносы. У женщин могут выпадать волосы, появляется ломкость ногтей. Ухудшается аппетит, меняются приоритеты в пище – тянет на сладкое и мучное, не хочется мяса. Потому что лямблии – это одноклеточные простейшие, не имеющие собственного пищеварительного аппарата и потому не усваивающие белки, но всей своей поверхностью всасывающие углеводный раствор из кишечника. Вам нужно сдать ребенку анализ крови на антитела к лямблиям и пройти курс противопаразитарного лечения.

Этот анализ – определение антител к антигенам лямблий методом ИФА Вы можете сдать в нашей лаборатории в любой день, кроме воскресенья с 8.00-11.00 натощак.

Моей внучке, которой всего 2 месяца от роду, назначили сдать анализы на биохимию. В поликлинике медсестра пыталась взять у нее кровь, но не смогла. Совсем замучили, давили жгутом крошечную ручку. Сердце кровью обливалось! Неужели нельзя было обойтись без анализа? Можно ли сдать эти анализы у вас в Центре? Смогут ли Ваши медработники взять кровь у таких маленьких детей? С уважением Калиева Г.С.

Вы не написали, какие анализы конкретно были назначены Вашей внучке. Но думаю, что если врач назначил анализы, то к этому есть основания. При необходимости забор крови производится даже новорожденным. В нашей лаборатории работают процедурные медсетры высшей категории, с большим опытом работы, хорошо обученные и очень внимательные. Они умеют брать кровь даже в случае самых проблемных вен и новорожденным детям.

Пожалуйста, обращайтесь в КДЛ Регионального диагностического центра, Вам обязательно помогут!

У меня возникла такая проблема. Уже в течение последних 1,5 лет в общем анализе крови у меня повышены лимфоциты (было 46%, 58%, 54% и т.д.). Пересдаю общий анализ крови в поликлинике чуть ли не ежемесячно, 1 раз в 2 мес. точно. Участковый врач в последний раз меня напугала, что это может быть заболевание крови. Теперь у меня паника. Что делать? Может, пересдать анализ у Вас. Я пенсионерка, мне 68 лет. Бунькова Вера Игнатьевна.

Уважаемая Вера Игнатьевна! Действительно, процентное содержание лимфацитов (относительное количество) превышает допустимые значения. Но не обязательно это заболевание крови. Необходимо также знать остальные параметры общего анализа крови. Я полагаю, что есть смысл повторить общий анализ крови в нашей лаборатории. Потому что исключить заболевания крови можно даже по результатам качественно выполненного развернутого общего анализа крови (код в нашей лаборатории 1.11). Анализ выполняется на современном автоматическом гематологическом анализаторе, но все патологические образцы перепроверяются врачами – лаборантами при помощи микроскопии.

Относительный лимфоцитоз – это не обязательно заболевание крови. Он может наблюдаться при некоторых инфекциях. Можете обратиться за консультацией ко мне лично, как к иммунологу. Калимолдаева СалтанатБулатовна, д.м.н., врач высшей категории.

Уважаемая заведующая лабораторией! Уже в течение 20 лет мы сдаем анализы в Вашей лаборатории, раньше мы жили рядом с Диагностическим центром. 5 лет назад мы переехали в пос. Акжар. Т.к. стало очень далеко ездить, мы пробовали сдавать анализы в частных центрах поближе к дому. Но т.к. анализы были очень разными и не соответствовали нашему состоянию, мы снова вернулись к вам.Теперь нам с мужем не приходится проверять анализы в разных лабораториях, мы знаем, что вашим анализам можно всегда верить. Спасибо Вашим сотрудникам за честное отношение к делу и за ответственность перед пациентами. С уважением Королькова Мария Сергеевна.

Уважаемая Мария Сергеевна! Позвольте от коллектива КДЛ Регионального диагностического центра поблагодарить Вас за высокую оценку нашего труда.

У нас много пациентов, которые в течение многих лет приезжают сдавать анализы именно к нам. И это доверие мы очень ценим. Я думаю, что это итог истории нашего Диагностического центра и добросовестного труда сотрудников. Ведь многие методики, которые сейчас выполняются по всей стране, впервые были внедрены в нашем Диагностическом центре. Залог высокого качества наших исследований – это современная аппаратура экспертного класса, квалифицированные специалисты (все врачи имеют высшую категорию, 90% лаборантов – также с высшей категорий, в КДЛ работает 1 доктор медицинских наук и 1 кандидат биологических наук).

Но самое главное – это многоступенчатый контроль качества. Помимо ежедневного внутрилабораторного контроля качества,это участие в Международных программах внешнего контроля качества исследований («Bio-Rad, США, «Labquality», Финляндия, «PREVECAL», Испания, «RIQAS», Великобритания). Наша лаборатория с 2015 г. также проводит Межлабораторные сравнительные испытания (МЛСИ) с лабораторией Центральной больницы Управления делами Президента РК.

По результатам аудита крупных лабораторий г. Алматы именно наша лаборатория была выбрана в качестве Межрегиональной экспертной лаборатории южного региона (проект МЗ РК и Всемирного банка развития). В настоящее время лаборатория готовится к аккредитации на соответствие Международного стандарта ISO 15189.

Дорогая Мария Сергеевна, позвольте еще раз поблагодарить Вас за доверие и пожелать Вам здоровья, благополучия и долгих лет жизни.

(PDF) Обнаружение цист Cryptosporidium и Giardia (оо) с помощью ИФА, ПЦР и LAMP в поверхностных водах из Рашта, Иран

Австралия). Средняя степень извлечения составила 12% для Cryptosporidium

и 18% для Giardia (oo)cysts, и все засеянные образцы были также положительными на

с помощью молекулярных методов ПЦР и LAMP (данные не показаны).

Концентрации (оо)цист в поверхностных водах обычно низкие,

варьируются от 1 до 18 (оо)цист/10 л.

14,15

В Нидерландах более высокие обнаружены цисты в поверхностных водах.

Средняя концентрация, скорректированная на среднюю эффективность извлечения, составила 4,5 и 5,4 ооцист/л и 22 и 95 цист/л в реках

Рейн и Маас соответственно.

16

Натуральная поверхностная вода из

реки и водохранилища в северной Испании были найдены в центре Con-

, достигнутые 1767 криптоспоридиев ооцист и

.25 000 гардийских кисты на 100 Л.

12

. в Италии

был контаминирован 0–5 ооцистами Cryptosporidium и 6 × 10

3

–8 × 10

1

цист Giardia на л.

17

Ооцисты Cryptosporidium в поверхностных водах

дренаж с животноводческой фермы в поместье Уорикшир (Великобритания) показал среднюю концентрацию

0,48 ооцист/л.

18

При исследовании водных ресурсов юга России и Болгарии 16

из 166 проб (9,6%) были положительными на Giardia и 30 (18,1%)

– на Cryptosporidium.

19

В настоящем исследовании реки Гохарруд

и Зарджуб были сильно загрязнены цистами (1–1800

на 10 л) и ооцистами (1–16 на 10 л).Согласно среднему показателю извлечения засеянных (оо)цист в этом исследовании, средняя концентрация

будет больше, чем эти числа в испытаниях по извлечению, как

, упомянутые выше. Причины таких высоких концентраций

вероятно потому, что реки Гохарруд и Зарджуб пересекают

город Рашт, и, следовательно, они подвергаются воздействию сельскохозяйственных и

городских отходов. Пройдя через город, эти две реки

обеспечивают водой фермы, выращивающие рис и овощи.Приток

этих рек в лагуну Бандар Энзели приведет к загрязнению

этой прибрежной

лагуны и Каспийского моря в северной

иранской провинции Гилян. Эта лагуна занимает 15 000 га,

и была зарегистрирована в качестве международного водно-болотного угодья Рамсарской конвенцией 1975 года

.

Несколько исследований показали, что гнездовая ПЦР

более чувствительна, чем микроскопия, для обнаружения Cryptosporidium и

Giardia в водных концентратах.

20,21

В нашем исследовании только один образец

из шести, который был положительным на Cryptosporidium при ИФА, и 10 из

13 образцов, которые были положительными на Giardia при ИФА, также были положительными при ПЦР

. Это может быть связано с высокой концентрацией ингибиторов ПЦР

или наличием пустых ооцист в исследуемых пробах воды

, что препятствует их обнаружению молекулярными методами

.

19,20

Кроме того, эти результаты могут быть связаны с низкой концентрацией

ДНК и неравномерным распределением матричной

ДНК, особенно в образцах, содержащих небольшое количество (1–3) ооцист

.

22

Мы использовали неацетилированный бычий сывороточный альбумин во всех

первичных ПЦР для нейтрализации или ингибирования ингибиторов ПЦР.

ИФА был более чувствительным методом в наших исследованиях, чем ПЦР

, однако анализ продуктов ПЦР может быть использован для определения вида и генотипа изолята.

23

ПЦР

подтвердил присутствие Giardia в двух образцах, а LAMP – нет. Применение анализа LAMP иллюстрирует важную особенность LAMP:

с использованием шести праймеров для распознавания восьми различных областей,

амплифицируется только целевой ген.Реакция специфична, и

LAMP (праймеры FIP и BIP) обладают способностью различать различия в одиночных

нуклеотидах (SNP). Таким образом, в тех случаях, когда продукты ПЦР-

секвенирования обнаруживали G. duodenalis, а LAMP не обнаруживали, возможно

, что ДНК Giardia в образцах представляет SNP.

8

Различие

среди результатов молекулярных методов, вероятно, связано со стохастическим отбором ДНК с низкой концентрацией и неравномерным распределением

матричной ДНК в каждом образце.

23

Однако другим текущим ограничением

анализа LAMP является требование дизайна праймера,

, который основан на доступных опубликованных последовательностях генов. Вариации в областях связывания праймеров будут влиять на способность праймеров LAMP, специфичных для G.

duodenalis, амплифицировать область-мишень

ДНК всех подгенотипов и генотипов в комплексе G. duodenalis-

. Эта проблема может быть решена в будущем, когда станет доступно больше репрезентативных последовательностей.В настоящее время использование LAMP-анализа

для обнаружения G. duodenalis Assemblage A и B

является дополнительным инструментом для обнаружения с помощью ПЦР, поскольку на LAMP-реакцию не влияет присутствие ингибиторов. Следовательно, LAMP

можно использовать для «фильтрации» ложноотрицательных реакций.

23

В случае Cryptosporidium 6 из 20 образцов были положительными при

ИФА, и один из этих положительных ИФА образцов был положительным при ПЦР.

В четырех ИФА-положительных образцах и пяти ИФА-отрицательных образцах

Cryptosporidium были обнаружены с использованием метода LAMP, что указывает на то, что на метод LAMP не влияют ингибиторы, и

LAMP-реакция оказался более чувствительным, чем ПЦР.Ранее это было

продемонстрировано при применении LAMP для обнаружения плазмы Giardia

11

и Toxo –

в пробах воды.

27

В предыдущем исследовании Xiao et al.

9

с использованием того же набора праймеров, что и

в настоящем исследовании, высокая чувствительность метода ПЦР была

продемонстрирована при очистке ооцист с помощью IMS. В настоящем исследовании

чувствительность обнаружения этого набора праймеров 18s РНК была

намного ниже, чем анализы IFA и LAMP.Причиной такого несоответствия могут быть различные методы очистки ооцист (например,

флотация сахарозой вместо IMS). Расхождения, вызванные положительными результатами ПЦР-

и отрицательными результатами ПЦР, могут быть связаны с тенденцией реагентов ИФА

к перекрестным реакциям с нецелевыми организмами, такими как водоросли

, или из-за ингибирующего действия на ПЦР. ферменты, вызванные

мешающими веществами, такими как гуминовые кислоты.

Важно отметить, что из-за специфичности нацеливания на фактические

генетические последовательности, которые являются уникальными для данного организма, метод ПЦР

с меньшей вероятностью покажет перекрестную реактивность.Это дает явное преимущество перед методом IFA. В настоящее время пустые ооцисты

не могут быть обнаружены молекулярными методами, что приводит к недооценке загрязнения ооцистами. Микроскопическое исследование значительно повышает ценность отрицательных результатов ПЦР.

19,22

Анализ LAMP

для обнаружения Giardia и Cryptosporidium (oo)cysts является

отличным инструментом, дополняющим результаты ПЦР, поскольку ПЦР

сильно ингибируется различными веществами, которые часто присутствуют в

образцы, не влияющие на анализ LAMP.

8

Таким образом,

с помощью LAMP можно повысить методологическую

чувствительность и количество положительных результатов.

Как упоминалось выше, у каждого метода есть преимущества и недостатки,

поэтому в зависимости от цели и дизайна исследования следует применять комбинацию методов обнаружения к пробам воды

для определения того, является ли эта вода является или не является загрязненным. Насколько нам известно, это первое исследование, проведенное в Иране с целью

обнаружения и подсчета Giardia и Cryptosporid-

ium в системе водоснабжения Ирана.В исследовании представлена ​​новая информация

о контаминации рек патогенными простейшими Crypto-

споридиями и лямблиями в г. Рашт. Кроме того, исследование показывает

, что реки Гохарруд и Зарджуб, которые обеспечивают водой

сельское хозяйство, сильно загрязнены Cryptosporidium и

Giardia; Лагуна Энзели также будет затронута. Среди образцов

, взятых из источников питьевой воды (Плотина Сангар, плотина Сефид

Роуд и плотина Бижар), оба паразита были обнаружены с помощью

как минимум одного из методов ИФА, ПЦР или LAMP.Молекулярная идентификация

Cryptosporidium от людей

28,29

и животных

30

в Иране

сообщалась ранее, но наиболее распространенные методы обнаружения

Королевского общества гигиенической медицины и медицины

5of7

гость, 7 июня 2013 г. http://trstmh.oxfordjournals.org/Загружено из

.До сих пор большинство исследований были сосредоточены на ранних событиях, оставляя поздние инцистации плохо определенными. Для дальнейшего изучения инцистирования, сосредоточив внимание на более поздних событиях, мы разработали новый протокол инцистирования, который обеспечивает более высокий выход зрелых кист по сравнению со стандартными методами. Изменения транскриптома на протяжении всей дифференцировки от трофозоитов до цист затем изучали с помощью секвенирования РНК (RNA-seq). Высокий уровень периодичности наблюдался для повышающих и подавляющих генов как на уровне всего транскриптома, так и предполагаемых регуляторов.Это указывает на то, что траектория дифференцировки координируется посредством регуляторной активности генов, связанных с развитием. Наше исследование идентифицирует ядро ​​​​из 13 генов, которые постоянно активируются во время начальной инцистации. Из них два представляют собой ранее не охарактеризованные белки, которые нам удалось локализовать в везикулах, специфичных для инцистации нового типа. Интересно, что самые большие транскрипционные изменения наблюдались на поздней фазе инцистирования с большинством высокоактивированных генов, кодирующих гипотетические белки.Некоторые из них были помечены эпитопами и локализованы для дальнейшей характеристики этих ранее неизвестных генетических компонентов инцистации и, возможно, эксцистации. Наконец, мы также обнаружили переключение вариантов специфических поверхностных белков (VSP) на поздней фазе инцистирования. Это произошло одновременно с делением ядра и репликацией ДНК, что предполагает потенциальную связь между этими процессами.

Резюме автора

Кишечный простейший паразит Giardia кишечная и многие другие важные с медицинской точки зрения простейшие паразиты должны инцистироваться и образовывать инфекционные цисты для передачи новым хозяевам.Таким образом, эффективность инцистирования связана с эффективностью передачи. Мы разработали новые протоколы дифференцировки in vitro и провели первое исследование экспрессии генов на основе секвенирования РНК для полного процесса инцистации Giardia . Наши данные представляют собой дорожную карту инцистирования Giardia и отправную точку, с которой возможно дальнейшее изучение важных процессов, происходящих во время инцистирования. Информация об этом жизненно важном процессе выживания в среде этого и других цистообразующих паразитов может быть использована при разработке новых видов вмешательств.

Образец цитирования: Einarsson E, Troell K, Hoeppner MP, Grabherr M, Ribacke U, Svärd SG (2016) Координированные изменения в экспрессии генов во время инцистации Giardia кишечного . PLoS Negl Trop Dis 10(3): e0004571. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571

Редактор: Adrian B. Hehl, Цюрихский университет, ШВЕЙЦАРИЯ

Поступила в редакцию: 28 октября 2015 г.; Принято: 3 марта 2016 г.; Опубликовано: 25 марта 2016 г.

Copyright: © 2016 Einarsson et al.Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе и в его файлах вспомогательной информации.

Финансирование: Это исследование было поддержано грантом Шведского национального исследовательского агентства VR-M (www.vr.se) для SGS, номер гранта 2012-3364.Спонсор не участвовал в планировании исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Giardia кишечная является кишечным простейшим паразитом человека и других млекопитающих и основной причиной диарейных заболеваний во всем мире [1,2]. Его жизненный цикл состоит из двух этапов; высокоподвижные трофозоиты, колонизирующие тонкую кишку, и спящие кисты, выделяемые с фекалиями хозяина [1,3].Процесс дифференциации в инфекционные кисты, известный как инцистация, имеет решающее значение для передачи и выживания паразитов. Цисты обычно распространяются через зараженную воду, где они могут оставаться заразными в течение нескольких месяцев при низкой температуре. Инфекционная доза может составлять всего десять цист [1], которые при попадании внутрь эксцистируют, давая четыре трофозоита на цисту [4]. Многие другие важные с медицинской точки зрения простейшие паразиты также передаются в виде цист или ооцист (например, Entamoeba histolytica , Cryptosporidium parvum/hominis и Toxoplasma gondii [5,6]), но относительно мало известно о процессах дифференцировки из-за отсутствия из in vitro систем для инцистирования.Эффективные протоколы инцистации и эксцистации Giardia in vitro существуют уже почти 30 лет [7,8]. Это делает Giardia отличной модельной системой для изучения образования кист простейших.

Киста характеризуется прочной стенкой, состоящей на 40 % из белка и на 60 % (ß1-3)-связанного гомополимера GalNAc (гиардин, [9]), причем последний продуцируется индуцируемым синтетическим путем с использованием глюкозы в качестве исходного вещества. субстрат [10]. В свою очередь, белковый компонент состоит из трех основных белков стенки кисты (CWP 1-3), которые транспортируются на клеточную поверхность через специфичные для инцистирования везикулы (ESV, [11,12]).Инцистирование можно разделить на раннюю и позднюю фазу [13]. На ранней стадии адгезивный диск и цитоскелет разбираются, клетка начинает округляться, синтезируются CWP и сахара стенки кисты и формируются ESV. В поздней фазе ядра делятся, ДНК реплицируется, а стенка кисты завершается и созревает [4].

Структурные изменения сопровождаются обширными изменениями в экспрессии генов, процесс, который ранее был исследован с использованием как транскриптомики [14,15], так и протеомики [16,17].Что наиболее важно, эти исследования показали, что существует консервативный набор генов, активация которых активируется на ранних стадиях инцистирования [15]. Однако более подробное представление о постепенных изменениях экспрессии генов в течение всего процесса инцистации от трофозоита до кисты с использованием того же сопоставимого протокола инцистации отсутствовало, в результате чего многие аспекты поздней инцистации были плохо определены.

Чтобы повысить надежность и возможности исследования этой клеточной дифференцировки, мы разработали новый и улучшенный протокол дифференцировки Giardia in vitro , который дает более высокий уровень зрелых кист.Мы использовали этот новый протокол в сочетании с последовательностью РНК, специфичной для цепи, чтобы увеличить разрешение изменений экспрессии генов на протяжении всей инцистации. Наши результаты показывают, что большая часть транскриптома паразита изменяется скоординированным образом при запуске инцистации, причем большинство изменений происходит во время поздней инцистации. Кроме того, были дополнительно охарактеризованы несколько новых и ранее не охарактеризованных генов, специфичных для инцистирования.

Методы

Культура клеток и дифференцировка

Если не указано иное, реагенты были получены от Sigma Chemical Co.Трофозоиты G . Изолят WB-C6 кишечного тракта (каталожный номер АТСС 50803) выращивали в аксиальной среде в среде TYI-S33 с добавлением 10% взрослой бычьей сыворотки (Gibco, Thermo Fisher Scientific) и бычьей желчи (конечная концентрация 0,125 мг/мл) при рН 6,8, как описано ранее [18]. Клетки культивировали в культуральных колбах T25 (Sarstedt) или пробирках с наклонной полистироловой крышкой (Nunc) до слияния 70–80%, когда среду для роста декантировали и добавляли предварительно нагретую среду для инцистации, чтобы вызвать инцистацию.Три разных протокола оценивали на выход зрелых кист с использованием проточной цитометрии. Для стандартного двухэтапного протокола [7] клетки выращивали в среде для инцистирования (pH 7,0) без желчи в течение 44 ч, а затем в среде для инцистирования (pH 7,8) с добавлением свиной желчи (0,25 мг/мл) и молочной кислоты. (5 мМ) за 48 часов до сбора урожая. Инцистирование также индуцировали голоданием по холестерину с использованием среды без желчи (рН 7,85), содержащей делипидированную фетальную телячью сыворотку [19], в которой клеткам давали возможность дифференцироваться в течение 24 часов до сбора.В третьем подходе, называемом протоколом инцистирования с высоким содержанием желчи или Уппсалским протоколом, использовался TYI-S33 с добавлением 10% взрослой бычьей сыворотки и 2,5–5,0 мг/мл бычьей желчи при рН 7,8. Обратите внимание, что количество желчи можно варьировать для достижения максимального эффекта в зависимости от реакции исходной клеточной культуры.

Эксцистирование образовавшихся in vitro кист проводили с использованием улучшенного протокола, основанного на методе Boucher и Gillin [8]. Предварительно подогретый индукционный раствор (6.К кистам добавляли 8 мл 1x сбалансированного солевого раствора Хенкса, содержащего 32,5 мМ восстановленного глутатиона и 57 мМ L-цистеина, смешанного с 6,8 мл 0,1 М NaHCO 3 с добавлением воды до конечного объема 25 мл) с pH 2,5. Цисты инкубировали при 37°С с использованием термомиксера при встряхивании на низких оборотах в течение 30 мин. После удаления индукционного раствора цисты инкубировали в течение 40 мин в теплом растворе для эксцистации (15 мг трипсина и 40 мг таурохолевой кислоты, растворенных в 18 мл однократного раствора Тирода, рН 8.0). Эксцистированные клетки переносили в теплую питательную среду для пролиферации в течение одного часа, после чего определяли количество эксцизоитов/трофозоитов и цист. Частоту эксцистации рассчитывали путем деления числа эксцизоитов/трофозоитов на число цист 1-го типа [8]. Для IFA эксцизоиты фиксировали в 2% PFA после инкубации в растворе для эксцистизации или через час в TYI-S33. После этого клетки добавляли на предметные стекла и проводили IFA, как описано ниже.

Проточная цитометрия

Анализ методом проточной цитометрии

выполняли после фиксации и окрашивания в соответствии с Reiner et al. [20].Приблизительно 10000 клеток на образец анализировали с использованием проточного цитометра BD LSRII в лаборатории BioVis (SciLifeLab, Уппсала, Швеция).

Экстракция РНК и секвенирование РНК

РНК выделяли из неиндуцированных трофозоитов и из клеток через 1,5, 7 и 22 часа после индукции (p.i.) с использованием протокола инцистирования Uppsala. Через 32 часа цисты собирали и хранили в ddH 2 O при 4°C в течение трех дней перед выделением РНК. Все образцы экстрагировали с использованием реагента Trizol, как описано Franzén et al, 2013 [21].Очищенную тотальную РНК использовали для подготовки библиотеки и секвенирования РНК в центре SNP/SEQ Национальной инфраструктуры геномики SciLifeLab (Уппсала, Швеция). Сгенерированные чтения были картированы с эталонным геномом, полученным из GiardiaDB (выпуск 2.4), и анализ транскрипции был выполнен, как описано в Einarsson et al , 2015 [22].

Транскриптомный анализ

Каждый момент времени во время инцистирования сравнивался с неиндуцированными трофозоитами, и подмножество генов с кратностью изменения ≥2 и значениями FPKM ≥50 по крайней мере в один момент времени считались значимыми и использовались для обнаружения функциональных кластеров в наборах данных DAVID. Алгоритм версии 6.7 [23]. Для дальнейшего анализа использовались только группы с оценкой обогащения ≥1,3. Чтобы визуализировать темпоральность по-разному экспрессируемых генов, мы использовали подход, описанный ранее с небольшими модификациями [24]. Вкратце, все гены с кратностью изменения ≥2 при любом сравнении между временными точками и значениями FPKM>50 считались по-разному выраженными (n = 3106). Значения FPKM были преобразованы Log 2 и использованы в функции make.heatmap1, распространяемой в пакете NeatMap R-project, который реализует неметрический алгоритм MDS.Таким же образом были созданы меньшие тепловые карты с генами, имеющими отношение к регуляции транскрипции, гликолизу и вариантным поверхностным белкам.

Количественный ПЦР-анализ в реальном времени

Чтобы оценить точность данных секвенирования РНК в отношении времени и амплитуды экспрессии генов, мы использовали количественную ПЦР в реальном времени (кПЦР). Мы выбрали 12 дифференциально экспрессируемых генов в качестве мишеней, основываясь на различиях в профилях амплитуды и экспрессии на траектории инцистирования.Праймеры для 12 генов, демонстрирующих дифференциальную экспрессию в разное время во время инцистирования, и два эндогенных контрольных гена были разработаны и оценены на эффективность и селективность ПЦР (таблица S5). Реакции четырехкратной амплификации проводили для каждого гена и времени после индукции инцистирования в 10 мл, содержащих сбалансированные количества РНК с обратной транскрипцией Superscript IV, SYBR green (Thermo) и 300 нМ как прямого, так и обратного праймера. То же самое было сделано для трех дополнительных биологических повторов инцистирования (включая 0, 7, 22 и 32 часа после индукции), в результате чего было получено четыре биологических повтора, проанализированных с помощью количественной ПЦР.Данные были проанализированы путем вычисления относительных величин с поправкой на эффективность [25] с использованием эндогенного контрольного гена триптофанил-тРНК-синтетазы в качестве эталона (второй контрольный ген гистидил-тРНК-синтетазы дал очень похожие количества) и образцов трофозоитов в качестве калибраторов. После этого относительные количества на основе qPCR для всех временных точек и генов были нанесены на график относительно кратности изменений, полученных с помощью секвенирования РНК, и корреляционный индекс был рассчитан с помощью корреляций Пирсона.

Конструирование вектора и трансфекция

Гены-кандидаты для характеристики с использованием исследований локализации были отобраны на основе их высокоспецифичной пиковой экспрессии во время инцистирования. Приоритет отдавался генам, кодирующим «гипотетические» белки. Гены амплифицировали с их эндогенными промоторными областями (последовательности праймеров см. в таблице S5) и клонировали в интеграционный вектор pPacV-Integ-HA-C [15] или эписомальный вектор pPAC-3xHA-C [26] с использованием XbaI/PacI и MluI. /NotI сайты рестрикции соответственно.Электропорацию проводили, как описано в [26]. Трансгенных паразитов отбирали путем добавления пуромицина (50 мкг/мл) примерно через 16 ч после трансфекции, а стабильные трансфектанты обычно получали через неделю.

Иммунофлуоресцентный анализ

Трансфицированные клетки индуцировали для инцистирования и собирали в те же моменты времени, что и для секвенирования РНК. Клетки трижды промывали холодным PBS и наносили в виде монослоев на многолуночные предметные стекла, покрытые поли-L-лизином (Thermo Fisher Scientific).Фиксацию и блокировку проводили, как описано в [27]. Водостойкие цисты добавляли в лунки предметного стекла и давали высохнуть на воздухе перед фиксацией 2% PFA. Иммунофлуоресцентный анализ (ИФА) в основном проводили, как описано в [27]. Для белков, меченных эпитопом HA, в качестве первичного антитела использовали кроличье моноклональное антитело против HA (C29F4, кат. № 3724, Cell Signaling), разбавленное 1:1600, с последующей инкубацией со вторичным антителом осла против кролика Alexa Fluor 594 (1:800). ) (каталожный номер A-21207, ThermoFisher).Альтернативно, HA-метка была обнаружена с помощью моноклонального HA.11 Clone 16B12, конъюгированного с Alexa Fluor 594 (A594-101L, Covance). Моноклональное мышиное анти-CWP1, конъюгированное с Alexa Fluor 488 (Warerborne Inc, Новый Орлеан, Луизиана, США), использовали в разведении 1:100. WGA, меченный флуоресцеином (FL-1021, Vector Laboratories), разбавленный до 2 мкг/мл, использовали для визуализации ECV в инцистирующих клетках. Предметное стекло высушивали на воздухе и монтировали с использованием VectaShield (Vector Laboratories), содержащего 4’,6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI) для обнаружения ядерной ДНК.Клетки визуализировали с помощью флуоресцентного микроскопа Zeiss Axioplan 2. Изображения обрабатывали с помощью программного обеспечения ZEN grey (Carl Zeiss GmbH). Изображения со сверхвысоким разрешением были получены для клеток, инцистированных через 22 часа p.i., меченных антителом против CWP1 (зеленый), для визуализации ESV с использованием конфокального микроскопа Zeiss LSM710/SIM. Z-стеки изображений, созданные для зеленого и синего (окрашивание DAPI) каналов, были обработаны с помощью программного обеспечения ZEN black (Carl Zeiss GmbH), и изображения показаны как проекции максимальной интенсивности (MIP).

Вестерн-блот

Образцы для SDS-PAGE готовили, как описано в [26].Образцы белков разделяли на гелях SDS-PAGE (Any kD, Mini-PROTEAN TGX, Bio-Rad) и переносили на мембраны PVDF с помощью электроблоттинга по стандартным методикам. Белки, меченные HA, исследовали с использованием крысиного анти-HA высокоаффинного клона 3F10 (Roche), разведенного до 1:1500 в PBS-T, содержащем 3% BSA, в течение 2 часов при комнатной температуре. Связанные антитела обнаруживали с помощью вторичного антитела, конъюгированного с пероксидазой хрена (козий анти-крысиный HRP, Thermo Scientific), разведенного 1:10000 в 3% молоке. Блоты проявляли с использованием субстрата Clarity Western ECL Substrate (Bio-Rad), а изображения записывали на Chemi-Doc MP (Bio-Rad).

Результаты

Оценка среды для инцистирования

Для индукции инцистации Giardia in vitro было использовано несколько протоколов, и все они имеют общие черты липидного голодания и повышенного pH для запуска процесса [7,19,28]. Для увеличения разрешения всей дифференциации был разработан дополнительный протокол инцистации (инцистация Уппсала, см. Материалы и методы), направленный на увеличение количества зрелых 16N кист и возможность детального изучения поздней фазы инцистации, а также зрелых кисты.Повышение выхода по сравнению с обычно используемым двухэтапным протоколом [7] и методом голодания по холестерину [19] было продемонстрировано с помощью проточной цитометрии (рис. 1A–1C).

Рис. 1. Оценка различных протоколов инцистирования и формирование ESV.

(A-C) Анализ методом проточной цитометрии трех различных протоколов инцистирования зрелых водостойких кист 16N. Гистограммы (A) и (B) представляют клеточное распределение по плоидности, полученное с помощью стандартного двухэтапного метода и метода липидного голодания соответственно.Протокол инцистирования Уппсалы (C) привел к более высокой доле и выходу зрелых кист 16N. Кинетику инцистирования в недавно разработанном протоколе оценивали путем подсчета ESV/клетку (D) и процента ESV-положительных клеток (E) в популяции инцистирующих клеток с использованием моноклонального антитела против CWP1 для обнаружения ESV. Данные представляют собой три биологических повтора с медианой распределения ESV/клетки, обозначенной горизонтальными полосами (D) и планками ошибок, представляющими стандартное отклонение (E).(F) ESV были визуализированы с помощью микроскопии сверхвысокого разрешения. Клетки индуцировали для инцистирования в течение 22 ч, ESV и ядерную ДНК метили с использованием антитела против CWP1 (зеленый) и DAPI (синий) соответственно. Показаны проекции максимальной интенсивности (MIP) стеков изображений, а масштабная линейка обозначает расстояние 10 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.g001

Кинетику инцистирования по этому протоколу оценивали путем подсчета количества специфичных для инцистирования везикул (ESV) в пять различных моментов времени с использованием антител против инцистирования. маркер CWP1 [29] и подсчет процента инцистирующих клеток в популяции.Были большие вариации количества ESV на клетку в популяциях (рис. 1D), что свидетельствует об асинхронном процессе дифференцировки, как ранее наблюдали другие [15,20,30]. Однако медиана ESV/клетка и общее количество инцистирующих клеток значительно увеличились через 7 ч после индукции (рис. 1D и 1E). Через 14 и 22 часа большая часть (62 и 83%) популяции инцистировалась (рис. 1Е). Микроскопия со сверхвысоким разрешением 22-часовых инцистирующих клеток показала ESV в форме пончика, а также то, что морфология ESV и форма клеток изменяются во время процесса инцистирования, как описано ранее (рис. 1F, [31,32]).

Инцистирование продолжалось в течение 32 часов для получения максимального количества кист. После обработки водой в течение 24 часов подсчитывали количество цист, что показало типичный выход 8×10 6 цист из исходной культуры 2×10 7 трофозоитов, эффективность инцистирования аналогична ранее описанным протоколам [7,19,28]. ]. Кисты, полученные по этому протоколу, также могут быть эксцистированы в большей степени по сравнению с кистами, полученными по стандартному двухэтапному протоколу (рис. S1).Таким образом, этот новый метод инцистации Giardia дает более высокие уровни зрелых кист, что позволяет изучать более поздние фазы инцистации, а также эксцистацию с более высоким разрешением.

Транскрипционный ответ во время инцистирования

Мы изучили общие профили экспрессии генов во время полного процесса инцистации (0, 1,5, 7 и 22 ч после индукции инцистации и водостойких кист), используя протокол инцистации Uppsala и RNA-seq (таблица S1).Мы использовали строгие критерии отбора значений FPKM> 50 и кратности изменения> 2 для всех генов, используемых для дальнейшего анализа. Гены с различными профилями экспрессии и амплитудами были отобраны для проверки (см. Материалы и методы) с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени (кПЦР). Все 12 протестированных генов продемонстрировали высокий уровень согласия (Pearson r = 0,877) между данными секвенирования РНК и данными количественной ПЦР, выполненными в четырех биологических повторностях инцистирования (рис. S2). Это предполагает высокую воспроизводимость протокола инцистирования Уппсалы в отношении как времени, так и уровня экспрессии генов во время этого процесса дифференцировки.

После этого мы решили охарактеризовать периодичность экспрессии генов вдоль траектории инцистирования, визуализируя экспрессию всех транскриптов, демонстрирующих переменные уровни, по крайней мере, в один момент времени на некластеризованной тепловой карте (рис. 2А). Очевидные каскады повышающих и подавляющих генов вдоль этой траектории указывают на скоординированную и связанную с развитием активность генов. Это побудило нас исследовать профили известных и предполагаемых медиаторов регуляции транскрипции у паразита.Действительно, как известные, так и предполагаемые факторы и репрессоры транскрипции (рис. 2B) и модификаторы хроматина, такие как гистоновые деацетилазы (HDAC), гистоновые метилтрансферазы (HMT), гистоновые ацетилтрансферазы (HAT), а также предполагаемый член комплекса ремоделирования хроматина SNF2 (рис. 2C) продемонстрировал аналогичную временную зависимость. В совокупности это предполагает, что весь процесс инцистации регулируется скоординированным образом как на уровне доступности ДНК, так и на уровне активации транскрипции. Это также подтверждает предыдущие результаты, которые предполагают, что Myb1 является ключевым медиатором на ранней фазе инцистирования [15,33] и что эпигенетические механизмы играют роль в дифференцировке в трансмиссивные кисты [34].

Рис. 2. Регуляция развития транскриптома по пути инцистирования.

(A) Некластерная тепловая карта всех генов с FPKM ≥50, показывающая кратное изменение ≥2 в любое время на протяжении инцистации (n = 3106). Желтый и синий обозначают гены, регулируемые вверх и вниз соответственно по шкале Log 2 . Каскадный характер глобальных изменений транскрипции вместе с аналогичной периодичностью для известных и предполагаемых факторов транскрипции и репрессоров (B) и модификаторов хроматина (C) предполагает скоординированную регуляцию инцистирования как на уровне доступности ДНК, так и на уровне активации транскрипции.(D и E) Диаграммы Венна, описывающие количество уникальных и общих генов с повышающей и понижающей регуляцией для различных моментов времени после индукции образования кист по сравнению с неиндуцированными трофозоитами. Большинство транскрипционных изменений происходит на поздних стадиях дифференцировки (22 часа и цисты), при этом большинство генов кодирует гипотетические белки.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.g002

Когда транскриптомы в каждый момент времени инцистирования сравнивали с транскриптомами неинцистирующих трофозоитов, было очевидно, что основные транскриптомные изменения происходят на поздних стадиях инцистирования. (рис. 2А).Среди генов, которые были дифференциально экспрессированы, значительное число генов кодирует гипотетические белки (таблица S1). Диаграммы Венна были созданы для визуализации количества генов с измененной экспрессией между временными точками (рис. 2D и 2E) и показали, что большое количество транскриптов специфически индуцируется или сокращается в изобилии на дискретных стадиях инцистирования Giardia (рис. 2D и 2Е).

Инструмент функциональной аннотации DAVID (https://david.ncifcrf.gov/) использовался для выявления того, присутствовало ли какое-либо обогащение функциональных групп генов в каждый момент времени.Функциональный кластерный анализ был проведен как для генов с дифференциальной активацией, так и для генов с пониженной регуляцией, и были включены только кластеры с баллами обогащения ≥1,3 (таблица S2). Большинство дифференциально экспрессируемых генов, кодирующих гипотетические белки, были исключены из кластерного анализа из-за невозможности присвоения идентификационных номеров генам. Данные анализа DAVID обобщены в таблице 1 и подчеркивают, что определенные клеточные процессы изменяются на определенных стадиях инцистирования.

Ранняя фаза инцистирования

Во время ранней инцистации (1.5 и 7 ч после индукции) гены, связанные с «суперсемейством ARF/Sar», «гликолизом», «рибонуклеопротеиновым комплексом» и «связыванием кофактора», были обогащены среди генов с повышающей регуляцией (таблица 1). Основным событием ранней фазы инцистирования является образование ESV. Небольшие GTPases Rab1a, Sar1 и Arf1 участвуют в доставке везикул и, как было показано, необходимы для правильного формирования и созревания ESV [35]. Экспрессия нескольких белков Rab (Rab 1a, Rab 2a, Rab11 и Rab 32), белков Sar1 и Sec (Sec-1, Sec13, Sec20) достигает пика после 1.5 ч инцистации (таблица S1), что отражает подготовку к резким изменениям в транспорте белка, необходимым во время инцистации. Массивная продукция белков стенки кисты CWP-1 и -2 отражалась 100-кратным увеличением количества транскриптов между 1,5 и 7 часами инцистации (таблица S1). Повышенная продукция секретируемых белков через 7 часов также отражалась в повышающей регуляции большинства рибосомных белков, Sec61 и компонентов сигнальных частиц распознавания (таблица S1).

Трофозоиты

Giardia , выращенные in vitro , используют фосфорилирование на уровне глюкозы и субстрата для выработки энергии [36].Поток через гликолиз увеличился через 7 часов (таблица S1 и рис. S3), что свидетельствует о более высокой потребности в энергии на ранней стадии процесса инцистирования. Было показано, что ферменты, ответственные за синтез сахарного компонента стенки кисты, активируются во время дифференцировки [10]. Мы обнаружили, что это отражалось в наших данных транскрипции, поскольку многие ферменты, участвующие в метаболизме углеводов и пути образования сахара GalNAc, активировались через 7 часов и достигли пика через 22 часа после индукции (рис. S3).

Среди генов с пониженной регуляцией были обогащены такие кластеры, как «Цитоскелет», «Гистоновое ядро» и «Интеграл в мембрану» (таблицы 1 и S2). Альфа- и бета-тубулины и несколько генов, кодирующих динеины, были обнаружены в кластере «Цитоскелет», что указывает на то, что некоторые изменения в цитоскелете происходят на ранних стадиях инцистации. Это согласуется с более ранними исследованиями, показывающими разборку адгезивного диска, жгутиков и округлую форму клеток [37].

Консенсус по генам ранней инцистации и характеристика гипотетических белков с повышенной экспрессией на ранней фазе дифференцировки

В более раннем исследовании инцистации Giardia с использованием микрочипов и двух разных протоколов инцистации был получен основной набор из 13 генов, которые активируются на ранних стадиях инцистации [15].Мы сравнили наши данные секвенирования РНК с анализами инцистирования с помощью микрочипов и SAGE [14,15] и показали, что этот набор из 13 генов активируется на ранних стадиях инцистирования во всех трех исследованиях (таблица S3). Жярдиальный транскрипционный фактор Myb1 является частью согласованного списка, и все 13 генов имеют сайты связывания Myb в промоторах [15]. Основная группа также содержит 4 гипотетических белка (GL50803_32657, 12082, 10552, 3063). Два белка (GL50803_3063 и 32657) были изучены с помощью мечения эпитопов, и было обнаружено, что они локализуются на поверхности эксизоита в зрелых цистах [15].Мы пометили эпитопом два оставшихся гипотетических белка (GL50803_10552 и 12082) метками HA и локализовали их в инцистирующих клетках, используя локализацию CWP1 и ядра в качестве эталона (рис. 3). 10552 локализовался в структуре, напоминающей ER точечным образом как через 7, так и через 22 часа после индукции инцистации (рис. 3A). 12082 локализуется в везикулоподобных структурах в ранних инцистирующих клетках и в структуре, напоминающей ER в поздних инцистирующих клетках (рис. 3В). Белок 21.1 GL50803_102813 является одним из генов с наиболее высокой экспрессией в различных наборах данных, и он локализован в ядрах трофозоитов и инцистирующих клеток, но не в кистах (рис. 3C).Мы также локализовали два других гена с наиболее высокой активацией на ранней стадии инцистации, гипотетические белки GL50803_8987 и 103785. Они оба локализовались в ER- и везикулоподобных структурах во время инцистации (рис. 3D и S4). В зрелой кисте они локализуются в неизвестных круглых структурах (рис. 3D и S4).

Рис. 3. Локализация меченых эпитопами белков генов согласно консенсусу между исследованиями транскрипции.

Белки, помеченные HA или 3xHA (красный), были визуализированы в сочетании с ДНК, окрашенной CWP1 (зеленый) и DAPI (синий), для трофозоитов через 7 и 22 часа после индукции инцистации и цист.(A) Гипотетический белок 10552-3xHA демонстрировал ER-подобную локализацию точечным образом как через 7, так и через 22 часа. (B) 12082-3xHA появляется в везикулоподобных компартментах в ранних инцистирующих клетках и ER-подобной локализации в поздних инцистирующих клетках. (C) 102813-3xHA аннотируется как белок 21.1 и локализуется в ядрах части клеток в популяции, но не в кистах. (D) 103785-HA локализуется в ER и не-ESV, везикулоподобных структурах во время инцистации и в кистах. Шкала баров представляет 10 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.g003

Поздняя фаза инцистирования

Обогащенные кластеры, обнаруженные через 22 часа, представляли собой гены, участвующие в «гликолизе» и «связывании кофакторов» (таблицы 1 и S2). Среди генов, связанных с гликолизом, мы обнаружили повышающую регуляцию генов, участвующих в расщеплении гликогена (рис. S3). Гены в кластере «Связывание кофакторов» включали несколько белков со специфичностью связывания пиридоксальфосфата. Двумя из них были серинпальмитоилтрансфераза 1 (GL50803_23015) и серинпальмитоилтрансфераза 2 (GL50803_14374), которые отвечают за первый этап пути синтеза церамида.Анализ всех известных генов липидного обмена у Giardia [38] показал наличие обширных изменений в липидном обмене в поздней фазе инцистации (таблица S1).

Кластерный анализ DAVID для генов с пониженной регуляцией в поздней инцистации выявил обогащение генов, участвующих в таких процессах, как «фактор инициации», «катаболическая активность нуклеотидов» и «трансляция» (таблицы 1 и S2). Постепенное снижение процессов, связанных с трансляцией, ожидалось, поскольку клетки в этот момент готовятся к переходу в состояние покоя и приостанавливают продукцию белка.

Для зрелых кист все основные гистоны были активированы вместе с несколькими кинезинами и генами, связанными с мейозом (таблица S1). Многие из этих генов имели схожие профили экспрессии в наборе данных SAGE и оставались в большом количестве на протяжении всей эксцистации [14]. Повышающая регуляция гистоновых транскриптов может быть результатом конденсации хроматина в кистах или, альтернативно, транскрипты были получены для обеспечения быстрого клеточного деления, которому клетки подвергаются вскоре после эксцистации [4].Это также может иметь место для семи кинезинов, которые, как было обнаружено, активируются, поскольку большинство этих моторных белков связаны со сборкой жгутиков, что является жизненно важным процессом для эксизоитов, поскольку было замечено, что жгутики появляются первыми из кисты [39]. . Giardia имеет несколько гомологов мейотических генов, несмотря на очевидное отсутствие полового цикла [40]. Большинство мейотических генов активируются на поздней фазе инцистации и в зрелых кистах (рис. S5). Также было обнаружено, что три гена с предсказанной регуляторной функцией транскрипции активируются на поздних стадиях инцистирования (GL50803_11383, 9237 и 16143, таблица S1).Однако в настоящее время мы не знаем их специфичности связывания и какую роль они могут играть в инцистировании.

Гены, связанные с такими процессами, как «трансляция» и «свертывание белков», подавлялись в зрелых кистах (таблица 1). Белки, связывающие кальций, большинство из которых альфа-гиардины, были подавлены, что указывает на большие изменения цитоскелета в зрелых кистах. Альфа-гиардины представляют собой семейство аннексиноподобных белков, ассоциированных с цитоскелетом, и многие из них локализуются на плазматической мембране и/или жгутиках [41].Ассоциированные с диском альфа-гиардины (-2, -3, -5 и -17) постепенно снижались во время инцистирования (таблица S1), как и дисковые белки SALP-1, бета-гиардин, гамма-гиардин и дельта-гиардин. giardin, отражающий разборку адгезивного диска [37].

Экспрессионные изменения белков, богатых цистеином, в поздней фазе инцистирования

На основании результатов функционального кластерного анализа было очевидно, что экспрессионные изменения произошли для генов, кодирующих богатые цистеином белки с доменами EGF (таблицы 1 и S2).Большинство из них представляли собой вариантно-специфические поверхностные белки (VSP), богатые цистеином поверхностные белки, участвующие в антигенной изменчивости [42]. Наши данные транскрипции предполагают, что во время инцистации произошли изменения экспрессии нескольких VSP (рис. 4). VSP с наивысшей экспрессией в исходной популяции трофозоитов и в инцистирующих клетках был VSP-5 (GL50803_113797, также известный как TSA 417, [43]), но его экспрессия снижалась через 22 часа (рис. 4). VSP с максимальной экспрессией в цистах не совпадают с VSP, экспрессируемыми в трофозоитах (таблица S1 и рис. 4).Анализ профилей экспрессии конкретных VSP показывает, что между 22 и 32 часами инцистирования наблюдалась значительная повышающая регуляция VSP (таблица S1 и рис. 4).

Рис. 4. Транскрипция переключения VSP во время дифференцировки.

Некластеризованная тепловая карта самых высоких транскрибируемых VSP во время дифференцировки выявляет изменения в экспрессии VSP вдоль траектории инцистирования. В разные моменты времени наблюдается повышение содержания некоторых транскриптов ВСП, не экспрессированных в исходной популяции.VSP с самым высоким кумулятивным уровнем экспрессии в популяции за время инцистирования был GL50803_113797 (выделен жирным шрифтом), также известный как TSA 417.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.g004

Экспрессия связанных с VSP, но менее изученных мембранных белков с высоким содержанием цистеина (HCMp), белков с высоким содержанием цистеина (HCP) [44] и Тенасцины [45] также изменялись при инцистировании. Невариантный поверхностный белок с высоким содержанием цистеина (HCNCp) является единственным HCMp, который был охарактеризован до сих пор, и он транспортируется в ESV на поверхность эксцизоита во время инцистации [44].Таблица S4 показывает обширные изменения в экспрессии всех 60 генов HCMp во время инцистирования, что также наблюдалось в 25 HCP, которые похожи на HCMP, но с меньшим количеством богатых цистеином мотивов (таблица S4). Несколько членов семейства тенасцинов (10 представителей штамма WB) были изучены, и они были локализованы в ESV и стенке кисты [45]. Мы обнаружили большие изменения экспрессии генов в семействе тенасцинов на ранней стадии инцистирования (таблица S4).

Подводя итог, можно сказать, что в поздней фазе инцистации Giardia в семействах генов, связанных с VSP, происходят обширные изменения.Изменения в экспрессии VSP связаны с антигенной изменчивостью, но необходимы дальнейшие исследования, чтобы выяснить функции HCMps, HCP и тенасцинов в клетке и какую роль они играют в жизненном цикле паразита.

Характеристика гипотетических белков с повышенной экспрессией на поздней фазе инцистирования

Самая большая группа генов с повышенной экспрессией на поздней фазе инцистирования включала гипотетические гены (рис. 2 и таблица S1). Чтобы начать характеристику некоторых из них, мы пометили эпитопом 10 различных гипотетических белков HA-метками и изучили их экспрессию и локализацию.Вестерн-блот анализ гипотетических белков 50803_3731, 4984 и 23439 подтвердил, что все они активируются как на уровне РНК, так и на уровне белка на поздних стадиях инцистирования (рис. 5). Белки с меткой HA визуализировали в иммунофлуоресценции с использованием антитела против HA, а ESV и стенку кисты визуализировали с использованием антитела CWP1 (рис. 5). Три гипотетических белка не локализуются в ESV во время инцистации (рис. 5). Белок 3731 локализуется в ядрах через 22 ч инцистирования в части инцистирующих клеток и зрелых кист (рис. 5А).Белок 4984 локализуется в небольших точках, не являющихся ESV, через 22 часа и на поверхности эксизоита в зрелых кистах (рис. 5B). Белок 23439 также локализуется в точках, не являющихся ESV, через 22 часа и на поверхности эксцизоита вблизи стенки кисты (рис. 5C). Присутствие полосы с высокой молекулярной массой на полосе цист вестерн-блоттинга (рис. 5F) похоже на то, что можно увидеть во время вестерн-блоттинга CWP [46]. Кисты, содержащие HA-меченый белок 23439, были эксцистированы с использованием нового более эффективного протокола (Материалы и методы), и белок был локализован в коре эксцизоита (S6 Fig).Мы выбрали семь дополнительных гипотетических белков с такими же профилями экспрессии для изучения в качестве белков, меченных эпитопом (S4 Fig). Белки 4764 и 5062 локализованы в ядрах инцистирующих и зрелых кист аналогично 3731 (рис. S4). 15594 и 14690 оба локализуются в неизвестной структуре в зрелых кистах и ​​в точках, не являющихся ESV, в инцистирующих клетках (рис. S4). 6227, 7374 и 11363 располагаются близко к мембране эксцизоита в зрелых кистах, а 7374 и 11363 показывают те же самые высокомолекулярные полосы, что и 23439 в вестерн-блоттингах (рис. S4).

Рис. 5. Экспрессия и локализация меченых эпитопом белков с повышенной регуляцией на поздней фазе инцистации.

Белки генов с транскрипционным профилем поздней индукции во время инцистации были помечены эпитопом HA (красный) и локализованы с помощью CWP1 (зеленый) и окрашенной ДНК DAPI (синий) с помощью иммунофлуоресценции. Масштабные полосы представляют 10 мкм. (A) 3731-HA локализуется в ядрах части инцистирующих клеток и кист. (B) 4984-HA показал локализацию в неизвестной структуре в зрелых кистах и ​​выглядел везикулоподобным в инцистирующих клетках.(C) 23439-HA локализуется в везикулоподобных структурах в инцистирующих клетках и близко к мембране эксизоита в цистах. (DF) Анализ соответствующих уровней белка в экстрактах из трофозоитов через 22 часа после индукции и цист вестерн-блоттингом показывает заметное увеличение 22,8 кДа 3731-HA (D), 23,6 кДа 4984-HA (E) и 10,8 кДа 23439-HA. (Ф) со временем. Более крупная полоса для 23439-HA указывает на возможную связь белка со стенкой кисты.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.g005

Подводя итог, мы подтвердили активацию 10 гипотетических белков на поздней фазе инцистирования. Белки локализуются в ядрах, на поверхности эксцизоитов и в неизвестных везикулах и клеточных структурах в инцистирующих клетках и кистах.

Обсуждение

Giardia должны дифференцироваться в инфекционные цисты для передачи новому хозяину, поэтому инцистирование связано с эффективностью передачи и вирулентностью.Мы использовали новый протокол инцистирования в сочетании с РНК-seq в попытке получить новую информацию о процессе инцистирования, а также связать более ранние наблюдения по оси времени инцистирования. Наши результаты и ранее опубликованные данные обобщены на рис. 6. В совокупности эти данные показывают, что процесс инцистации можно разделить на раннюю и позднюю фазы и что во время инцистации пошагово происходят разные процессы.

Рис. 6. Обобщающее изображение, показывающее трансформацию подвижного трофозоита через энцизоит в конечную стадию кисты.

Трофозоит контролирует внешнюю среду, и инцистация индуцируется внутриклеточными путями, которые остаются в значительной степени неизвестными. Клетка проходит «точку невозврата» во время ранней инцистации, после чего уже невозможно вернуться к стадии пролиферации. Факторы транскрипции (например, Myb2) активируют специфичные для инцистирования гены, среди которых белки стенки кисты (CWP1-3). Общее увеличение трансляции может наблюдаться на ранней стадии инцистации, поскольку производство CWP резко увеличивается и начинается транспортировка в инцистирующих везикулах (ESV).Везикулы проходят этапы созревания после выхода из ER. Другой компонент стенки кисты, сахар UDP-GalNAc (гиардин), также синтезируется и секретируется посредством положительных по инцистации углеводных везикул (ECV). Ферменты, участвующие в синтезе гиардинов, индуцируются во время инцистации. Во время поздней инцистации клетка меняет форму по мере того, как входит в состояние покоя, а вентральный диск вместе со жгутиками разбираются по мере продолжения строительства стенки кисты. Но механизм сборки до сих пор неизвестен.Часто при инцистации можно наблюдать предкистозные стадии с «хвостом». Два раунда репликации ДНК происходят без цитокинеза, образуя кисту с четырьмя ядрами, каждое из которых имеет геномную плоидность 4N. Формируются взаимосвязи между ядрами в цистах и ​​возможен обмен генетическим материалом посредством процесса «дипломиксис». Во время эксцистации каждая клетка получает одну пару несестринских ядер (обозначены красным и синим).

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.g006

Было высказано предположение, что холестериновое голодание в нижней части тонкой кишки, дополненное повышением внешнего pH, является основным сигналом для индукции Giardia инцистирование [19].Имеются очень ограниченные знания о том, как внутриклеточная передача сигналов индуцируется и опосредуется во время инцистации. Инцистирование синхронизированных паразитов предполагает, что паразиты покидают клеточный цикл в фазе G2 клеточного цикла, чтобы начать инцистирование [20]. Паразит достигает «точки невозврата» на ранней стадии инцистации (3–4 часа, рис. 6), после чего невозможно вернуться к пролиферации, и дифференцировка будет продолжаться до образования зрелых кист [47]. Транскриптом изменился после 1.Через 5 ч после инцистирования и через 7 ч после индукции еще большее количество генов изменило свою экспрессию (рис. 2). В предыдущем исследовании использовались микроматрицы для изучения ранней фазы инцистирования и был выявлен основной набор из 13 генов, постоянно индуцируемых через 7 часов [15], что мы могли проверить (таблица S3). Все эти активируемые гены содержат по крайней мере один сайт связывания Myb, транскрипционный фактор, который, как известно, регулирует специфичные для инцистирования гены [33], подтверждая более раннее наблюдение, что сайт связывания Myb является сигнатурным мотивом для генов ранней фазы инцистирования [15].

Наиболее поразительные изменения в секреции белков происходят на ранней стадии инцистации, когда огромное количество компонентов стенки кисты транспортируется из ER в плазматическую мембрану. Через 7 часов после инцистирования рибосомные белки и факторы трансляции достигают пика экспрессии, что отражает высокую продукцию белков стенки кисты (таблица S1). Материал стенки кисты (CWM) транспортируется в ESV, и их формирование и транспорт широко изучены [11,12]. Грузом ESV является исключительно CWM и никаких других секретируемых белков, что убедительно указывает на сортировку в ER перед экспортом [11,31,48]. Giardia лишены конститутивно выраженного аппарата Гольджи, и особенности ESVs указывают на то, что эти органеллы действуют как стадийно-индуцированные цис Гольджи [35]. Процесс переноса CWM из ER в ESV, по-видимому, зависит от образования оболочки Rab1a, COPII и малой GTPase Sar1 [35]. В соответствии с этим мы могли видеть пик экспрессии этих генов и других белков, участвующих в транспорте белка, уже после 1,5 ч инцистирования (таблица S1). CWP не секретируются напрямую после завершения формирования ESV, а вместо этого задерживаются на несколько часов и превращаются в транс-Гольджи-подобную тубулярно-везикулярную сеть во время поздней фазы инцистации [31].Предположительно, это сделано для обеспечения посттрансляционных модификаций и комплексообразования CWP перед секрецией на клеточной поверхности. [31].

В отличие от хорошо охарактеризованной транспортировки CWM через ESV, очень мало известно о транспортировке и включении сахара GalNAc в стенку кисты. Этот уникальный углевод Giardia синтезируется de novo по пути, содержащему пять ферментов, пик экспрессии которых приходится на 22-часовую инцистацию (рис. S3), поскольку поток через гликолиз уменьшается.Гомополимер GalNAc был визуализирован с использованием связывающих свойств GalNAc рекомбинантного CWP1, и сообщалось, что он присутствует в небольших везикулах инцистирующих Giardia . Эти везикулы не локализовались совместно с ESV, что указывает на другой путь транспортировки сахарных компонентов стенки кисты, и они были названы инцистированными углевод-позитивными везикулами (ECV) [49]. ECV более распространены на поздней стадии инцистирования. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы прояснить, как связаны ESV и ECV, и определить механизм сборки стенки кисты.Интересно, что мы идентифицировали индуцированные инцистацией точки, не являющиеся ESV, которые содержали гипотетические белки 23439, 11363, 7373 и 6227 (рис. 5 и S4) и, по-видимому, ассоциированы со стенкой кисты. Кроме того, белки 4984, 14690 и 15594 появлялись в везикулоподобных структурах во время инцистации (рис. 5 и S4). ECV помечены лектином WGA [49], но белки 6227, 7374, 11363 и 23439 не локализуются совместно с WGA (рис. S7). Остается увидеть, локализуются ли эти гипотетические белки в еще одном классе специфичных для инцистации везикул, индуцируемых на поздних этапах инцистации.

Крупные общие изменения экспрессии генов были идентифицированы на поздней фазе инцистирования в более раннем исследовании транскриптома инцистирования с использованием технологии SAGE [14]. Однако в этом исследовании были объединены два разных протокола инцистации (энцистация трофозоитов до 42 часов с помощью двухэтапного метода и цист с помощью метода с высоким содержанием желчи), что затруднило получение определенных выводов. Здесь мы использовали протокол инцистирования Уппсалы и РНК-seq, и мы могли убедиться, что в поздней фазе инцистирования происходят большие изменения в транскриптоме (рис. 2).Будет важно расширить протеомные исследования инцистирования и связать их с выявленными транскрипционными изменениями во время инцистирования Giardia .

Во время инцистации два ядра делятся без цитокинеза, образуя предкисту с плоидностью 4x2N, за которой следует еще один раунд репликации до конечной плоидности 16N (4x4N) в зрелой цисте [4]. Описаны доказательства слияния ядер и обмена генетическим материалом во время инцистации [30]. Авторы назвали это событие «дипломиксис», и сообщалось, что три мейотических гена экспрессируются на поздних стадиях инцистации для облегчения гомологичной рекомбинации [30].Репликация ДНК происходит примерно через 15–20 часов после инцистирования с использованием нашего нового протокола. В то же время, когда ДНК реплицируется, происходят обширные изменения в экспрессии нескольких генов, участвующих в репарации ДНК и модификациях хроматина (таблица S1). В геноме Giardia было обнаружено несколько факторов транскрипции [50,51], а более ранние данные показали, что эпигенетические изменения участвуют в процессе инцистации [34]. Мы искали консервативные последовательности в восходящих областях генов поздней инцистации с теми же профилями экспрессии, но мы обнаружили только ранее охарактеризованные Myb-боксы в генах синтеза гиардинов [33,52] и консервативные последовательности в промоторных областях гистонов [33, 52]. 53].Это контрастирует с консервативными коровыми генами на ранней стадии инцистации с сайтами связывания Myb [15], указывая на то, что регуляция экспрессии генов во время инцистации происходит на множестве уровней. Следует отметить, что существует необходимость в дальнейших исследованиях секвенирования РНК с использованием дополнительных временных точек и биологических повторов, чтобы увеличить разрешение изменений в транскриптоме во время инцистации. Это, в свою очередь, может выявить консервативные промоторные элементы или модификации хроматина в генах со сходными профилями экспрессии.

Мы обнаружили серьезные изменения в экспрессии поверхностных белков с переменной специфичностью (VSP) во время инцистации. VSP представляют собой богатые цистеином мембранные белки, ответственные за антигенную изменчивость. Они имеют переменный размер (30–150 кДа), и разные изоляты Giardia имеют от 150 до 300 генов VSP, распределенных по 5 хромосомам [54]. Только один VSP экспрессируется на уровне белка на клетку, и предполагается, что регуляция является посттранскрипционной [55,56]. Экспрессия VSP изменяется уже на ранней стадии инцистации, но на поздней фазе (через 22 часа после индукции и кисты) наблюдаются большие изменения в экспрессии генов VSP (рис. 4).Доминирующий VSP, экспрессируемый в популяции трофозоитов (GL50803_113797, VSP5, таблица S1), подавляется, тогда как пять генов VSP сильно активируются (рис. 4 и таблица S4). Первое исследование антигенной изменчивости у инцистирующих паразитов Giardia WB [57] показало, что в кистах доминирует тот же VSP (GL50803_137614, VSP180), что и в нашем эксперименте (таблица S4). Это показывает, что некоторые VSP специфически регулируются сигналами инцистирования, и переключение экспрессии VSP инициируется примерно в то же время, когда ДНК реплицируется на поздних стадиях дифференцировки.Дальнейшие исследования этого события переключения, специфичного для инцистации, потенциально могут показать, как паразит Giardia может экспрессировать один или ограниченное количество генов VSP из 200, присутствующих в геноме.

Вспомогательная информация

S1 Рис. Частота эксцистирования кист, полученных с помощью различных протоколов инцистирования

in vitro .

Частоты эксцистирования сравнивали между кистами, полученными с помощью широко используемого двухэтапного метода и недавно разработанного протокола инцистирования Уппсалы.Инцистация и эксцистация кист из двух протоколов выполнялись параллельно в трех разных случаях (Rep # 1-3). Данные отображаются в виде средних частот эксцистации, а планки погрешностей представляют вариации между подсчитанными полями. Кисты, полученные по Упсальскому протоколу, эксцистировались с более высокой эффективностью во всех исследованных случаях.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.s006

(TIF)

S2 Рис. Проверка данных секвенирования РНК методом количественной ПЦР и надежность протокола инцистирования.

(A-L) Относительные профили экспрессии 12 генов, показывающие различные уровни транскриптов на пути инцистирования. Относительные количества на основе количественной ПЦР в разное время после индукции инцистации по отношению к трофозоитам рассчитывали с использованием эндогенного контрольного гена триптофанил-тРНК-синтетазы и наносили на график вместе с кратными изменениями, наблюдаемыми при секвенировании РНК. Данные секвенирования РНК представлены квадратами, соединенными пунктирными линиями, а данные количественной ПЦР показаны кружками, соединенными сплошными линиями.Последний представляет собой средние относительные количества из 4-х повторных инцистаций (каждая анализируется в четырех повторах) с планками погрешностей, представляющими диапазоны биоповторов. (M) Высокая согласованность двух экспериментальных подходов и повторяющихся инцистаций отражается в высоком корреляционном индексе Пирсона (r = 0,877) и предполагает, что недавно разработанный протокол является надежным, а глобальный анализ транскрипции – точным.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.s007

(TIF)

S3 Рис.Изменения гликолиза при инцистации.

(A) Неупорядоченная тепловая карта уровней транскриптов гликолитических генов (шкала Log 2 ) выявляет высокий уровень периодичности и различий в стадиях инцистирования в катаболизме глюкозы. (B) Схематический путь G . кишечный гликолиз с пиковыми уровнями экспрессии, наблюдаемыми во время инцистирования, отмеченного для отдельных генов.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.s008

(TIF)

S4 Рис.Локализация гипотетических генов активируется во время инцистирования.

Восемь меченных HA-эпитопом белков визуализировали с использованием антител к анти-HA (красный), CWP1 (зеленый) и окрашивания ядерной ДНК DAPI (синий). Все шкалы представляют собой 10 мкм. (A) Ранний индуцированный 8987-3xHA локализуется в везикулоподобных структурах в инцистирующих клетках и кистах. (B) 14690-3xHA локализуется в неизвестной структуре в зрелых кистах и ​​в везикулоподобных структурах в инцистирующих клетках. Вестерн-блот выявляет белок ожидаемого размера (35.9 кДа) сильно увеличена в кистах. 7374-HA (C), 11363-HA (D) и 6227-HA (E) локализуются на мембране эксизоита в зрелых кистах, при этом вестерн-блоты подтверждают позднюю индукцию, а полосы с высокой молекулярной массой указывают на ассоциацию со стенкой кисты для 7374. -HA (С) и 11363-HA (D). 4764-HA (F) и 5062-HA (G) локализуются в ядрах инцистирующих и зрелых кист (F), тогда как 15594-3xHA (H) локализуется в неизвестных структурах в зрелых кистах и ​​в везикулоподобных структурах в инцистирующих клетках.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.s009

(TIF)

S6 Рис. Эксцистация трансфектанта 23439-HA показывает белок на поверхности эксцизоита.

Обработанные водой цисты, экспрессирующие 23439-HA, эксцистировали, как описано в разделе «Материалы и методы». Возникающие эксцизоиты фиксировали в растворе, а белок с меткой HA локализовали с использованием антитела против HA (красный) в сочетании с антителом к ​​CWP1 (зеленый) и DAPI для окрашивания ядерной ДНК. Меченые белки появляются на поверхности формирующихся эксизоитов.Шкала баров 10 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.s011

(TIF)

S7 Рис. Локализация WGA и генов с повышенной экспрессией на поздних стадиях инцистирования.

Белки 6227, 7374, 11363 и 23439 обнаруживают локализацию в пузыреподобных точках, и для исследования потенциальной совместной локализации с ECV мы использовали меченый флуоресцеином WGA. Штаммы этих белков с меткой HA подвергали инцистированию с последующим иммунофлуоресцентным анализом для выявления потенциальной совместной локализации.Мечение WGA (зеленый цвет) демонстрирует окрашивание, подобное ER, и не локализуется совместно ни с одним из меченных HA (красным) белков в инцистирующих паразитах или в кистах. Шкала баров представляет 10 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004571.s012

(TIF)

Благодарности

Мы благодарим Фредрика Эдина из отделения хирургии, хирургии головы и шеи, секции отоларингологии, Университетской больницы Уппсалы, Уппсала, Швеция, за техническую помощь в микроскопии сверхвысокого разрешения.

Авторские взносы

Инициатива и разработка экспериментов: ЭЭ УР КТ СГС МГ МФ. Выполнял опыты: ЭЭ УР КТ МГ МФ. Проанализированы данные: EE UR KT SGS MG MPH. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты для анализа: EE UR KT SGS MG MPH. Написал статью: EE UR KT SGS MG MPH. Спроектировано и проведено большинство экспериментов, получены цифры: ЕЕ. Разработаны, выполнены и проанализированы эксперименты по проточной цитометрии: KT. Проанализированные данные секвенирования РНК: MG MPH. Руководил частями исследований, проектировал и проводил эксперименты с количественной ПЦР, анализировал данные количественной ПЦР и секвенирования РНК, сгенерировал цифры: UR.Руководил исследованиями на всех уровнях и участвовал в планировании и анализе экспериментов: SGS. Прочла и одобрила рукопись: ЕЕ УР КТ СГС МГ МЗ.

Каталожные номера

  1. 1. Анкарклев Дж., Йерлстрем-Хультквист Дж., Рингквист Э., Труэль К., Свярд С.Г. За улыбкой: клеточная биология и механизмы болезней видов Giardia . Nat Rev Microbiol. 2010 г.; 8: 413–422. пмид:20400969
  2. 2. Halliez MCM, Buret AG. Внекишечные и отдаленные последствия инфекции Giardia duodenalis .Всемирный журнал гастроэнтерологии: WJG 2013; 19: 8974–8985. пмид:24379622
  3. 3. Лужан HD. Механизмы адаптации у кишечного паразита Giardia lamblia . Очерки биохим. 2011 г.; 51: 177–191. пмид:22023449
  4. 4. Бернандер Р., Палм Дж. Э., Свярд С. Г. Плоидность генома на разных стадиях жизненного цикла Giardia lamblia . Клеточная микробиология. 2001 г.; 3: 55–62. пмид:11207620
  5. 5. Ehrenkaufer GM, Weedall GD, Williams D, Lorenzi HA, Caler E, et al.Геном и транскриптом кишечного паразита Entamoeba investens , модель инцистирования. Геном биол. 2013; 14: Р77. пмид:23889909
  6. 6. Самуэльсон Дж., Бушкин Г.Г., Чаттерджи А., Роббинс П.В. Стратегии обнаружения структурных компонентов стенок кист и ооцист. Эукариотическая клетка. 2013; 12: 1578–1587. пмид:24096907
  7. 7. Gillin FD, Reiner DS, Gault MJ, Douglas H, Das S, et al. Инцистирование и экспрессия антигенов цист Giardia lamblia in vitro.Наука (Нью-Йорк, штат Нью-Йорк) 1987; 235: 1040–1043.
  8. 8. Буше С.Э., Гиллин Ф.Д. Эксцистация полученных in vitro цист Giardia lamblia . Заразить иммун. 1990 г.; 58: 3516–3522. пмид:2228222
  9. 9. Gerwig GJ, van Kuik JA, Leeflang BR, Kamerling JP, Vliegenthart JFG и др. Стенка нитчатой ​​кисты Giardia кишечная содержит новый полимер бета (1-3)-N-ацетил-D-галактозамин: структурное и конформационное исследование. Гликобиология 2002; 12: 499–505.пмид:12145190
  10. 10. Лопес А.Б., Сенер К., Джарролл Э.Л., ван Кеулен Х. Регуляция транскрипции продемонстрирована для пяти ключевых ферментов биосинтеза полисахарида стенки кисты Giardia enteralis . Мол Биохим Паразитол. 2003 г.; 128: 51–57. пмид:12706796
  11. 11. Фасо С., Хель АБ. Транспортировка мембран и биогенез органелл у Giardia lamblia : используйте или потеряйте. Int J Паразитол. 2011 г.; 41: 471–480. пмид:21296082
  12. 12. Райнер Д.С., Дуглас Х., Гиллин Ф.Д.Идентификация и локализация цистоспецифических антигенов Giardia lamblia . Заразить иммун. 1989 год; 57: 963–968. пмид:2917795
  13. 13. Эрландсен С.Л., Мачечко П.Т., ван Кеулен Х., Джарролл Э.Л. Формирование стенки кисты Giardia : исследования внеклеточной сборки с использованием мечения иммунозолотом и СЭМ с полевой эмиссией высокого разрешения. J Euk Microbiol.1996; 43: 416–429. пмид:8822813
  14. 14. Биркеланд С.Р., Прехейм С.П., Давидс Б.Дж., Чиприано М.Дж., Палм Д. и др.Транскриптомный анализ жизненного цикла Giardia lamblia . Мол Биохим Паразитол. 2010 г.; 174: 62–65. пмид:20570699
  15. 15. Morf L, Spycher C, Rehrauer H, Fournier CA, Morrison HG, et al. Транскрипционный ответ на стимулы инцистирования у Giardia lamblia ограничен небольшим набором генов. Юк Селл. 2010 г.; 9: 1566–1576.
  16. 16. Фасо С., Бишоф С., Хель А.Б. Ландшафт протеома инцистации Giardia lamblia .PloS Один. 2013; 8: e83207. пмид:24391747
  17. 17. Эмери С.Дж., Паскови Д., Лейси Э., Хейнс П.А. Разрыв поколений: изменения протеома и вариации штаммов во время инцистации у Giardia duodenalis . Мол Биохим Паразитол. 2015 г.; 201: 47–56. пмид:26045354
  18. 18. Кейстер ДБ. Аксеническая культура Giardia lamblia в среде TYI-S-33 с добавлением желчи. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1983 год; 77: 487–488. пмид:6636276
  19. 19. Лухан Х.Д., Моватт М.Р., Берд Л.Г., Нэш Т.Е.Холестериновое голодание индуцирует дифференцировку кишечного паразита Giardia lamblia . Proc Natl Acad Sci USA. 1996 год; 93: 7628–7633. пмид:8755526
  20. 20. Райнер Д.С., Анкарклев Дж., Троелл К., Палм Д., Бернандер Р. и соавт. Синхронизация Giardia lamblia : идентификация генов, специфичных для стадии клеточного цикла, и точки рестрикции дифференцировки. Int J Паразитол. 2008 г.; 38: 935–944. пмид:18289546
  21. 21. Франзен О., Йерлстрём-Хультквист Дж., Эйнарссон Э., Анкарклев Дж., Ферелла М. и др.Профилирование транскриптома Giardia enteralis с использованием специфичной для цепи РНК-seq. комп. PLoS биол. 2013; 9: е1003000.
  22. 22. Einarsson E, Svärd SG, Troell K. Реакция на УФ-облучение у Giardia кишечная . Опыт Паразитол 2015; 154: 25–32. пмид:25825252
  23. 23. Huang da W, Sherman BT, Zheng X, Yang J, Imamichi T, et al. Извлечение биологического смысла из больших списков генов с помощью DAVID. Curr Protoc Биоинформатика 2009; 13: Блок 13 11.
  24. 24. Бродбент К.М., Бродбент Дж.С., Рибаке У., Вирт Д., Ринн Дж.Л. и др. Секвенирование РНК, специфичное для цепи, при малярии Plasmodium falciparum идентифицирует регулируемую в процессе развития длинную некодирующую РНК и кольцевую РНК. БМС Геном. 2015 г.; 16: 454.
  25. 25. Пфаффл МВт. Новая математическая модель для относительного количественного определения в ОТ-ПЦР в реальном времени. Нуклеиновые Кислоты Res. 2001 г.; 29: е45. пмид:11328886
  26. 26. Йерлстрём-Хультквист Дж., Штадельманн Б., Биркештедт С., Хеллман Ю., Свярд С.Г.Плазмидные векторы для протеомных анализов Giardia: очистка факторов вирулентности и анализ протеасомы. Эукариотическая клетка. 2012 г.; 11: 864–873. пмид:22611020
  27. 27. Йерлстрём-Хультквист Дж., Эйнарссон Э., Свярд С.Г. Стабильная трансфекция паразита-дипломонады Spironucleus salmonicida. Эукариотическая клетка. 2012 г.; 11: 1353–1361. пмид:22983987
  28. 28. Кейн А.В., Уорд ХД, Кеуш ГТ, Перейра МЭ. Инцистирование in vitro Giardia lamblia : крупномасштабное производство цист in vitro и различия штаммов и клонов в эффективности инцистирования.J Паразитол. 1991 год; 77: 974–981. пмид:1779302
  29. 29. Моватт М.Р., Лужан Х.Д., Коттен Д.Б., Бауэрс Б., Йи Дж. и др. Регулируемая развитием экспрессия гена белка стенки кисты Giardia lamblia . Мол микробиол. 1995 год; 15: 955–963. пмид:7596296
  30. 30. Poxleitner MK, Carpenter ML, Mancuso JJ, Wang CJ, Dawson SC, et al. (2008) Доказательства кариогамии и обмена генетическим материалом у двуядерного кишечного паразита Giardia кишечная. Наука 319: 1530–1533.пмид:18339940
  31. 31. Конрад С, Спайчер С, Хель А.Б. Селективная конденсация управляет разделением и последовательной секрецией белков стенки кисты при дифференциации Giardia lamblia . PLoS Патог. 2010 г.; 6: e1000835. пмид:20386711
  32. 32. Spycher C, Herman EK, Morf L, Qi W, Rehrauer H, et al. Направленный ER транскрипционный ответ на стресс с развернутым белком в отсутствие консервативных белков сенсор-преобразователь у Giardia lamblia .Мол микробиол. 2013; 88: 754–771. пмид:23617761
  33. 33. Sun C-H, Palm D, McArthur AG, Svärd SG, Gillin FD. Новый родственный Myb белок, участвующий в активации транскрипции генов инцистирования у Giardia lamblia . Мол микробиол. 2002 г.; 46: 971–984. пмид:12421304
  34. 34. Sonda S, Morf L, Bottova I, Baetschmann H, Rehrauer H, et al. Эпигенетические механизмы регулируют стадийную дифференциацию минимизированных простейших Giardia lamblia .Молекулярная микробиология. 2010 г.; 76: 48–67.
  35. 35. Стефаник С., Морф Л., Кулангара С., Регос А., Сонда С. и др. Неогенез и созревание транзиентных цистерн, подобных Гольджи, у простого эукариота. Дж. Клеточные науки. 2009 г.; 122: 2846–2856. пмид:19622633
  36. 36. Джарролл Э.Л., Пэджет Т.А. Метаболизм углеводов и аминокислот у Giardia : обзор. Фолиа Паразитол. 1995 год; 42: 81–89. пмид:8801219
  37. 37. Palm D, Weiland M, McArthur AG, Winiecka-Krusnell J, Cipriano MJ, et al.Изменения в адгезивном диске во время дифференцировки Giardia . Мол Биохим Паразитол. 2005 г.; 141: 199–207. пмид:15850703
  38. 38. Yichoy M, Duarte TT, De Chatterjee A, Mendez TL, Aguilera KY, et al. Метаболизм липидов у Giardia : постгеномная перспектива. Паразитология. 2011 г.; 138: 267–278. пмид: 20880419
  39. 39. Карпентер М.Л., Ассаф З.Дж., Гургешон С., Канде В.З. Ядерное наследование и генетический обмен без мейоза у двуядерного паразита Giardia кишечная .Дж. Клеточные науки. 2012 г.; 125: 2523–2532. пмид:22366460
  40. 40. Рамеш М.А., Малик С.Б., Логсдон Дж.М. младший. Филогеномный перечень мейотических генов; доказательства пола у Giardia и раннего эукариотического происхождения мейоза. Карр Биол. 2005 г.; 15: 185–191. пмид:15668177
  41. 41. Weiland MEL, McArthur AG, Morrison HG, Sogin ML, Svärd SG. Аннексиноподобные альфа-гиардины: новое семейство генов цитоскелета у Giardia lamblia . Int J Паразитол. 2005 г.; 35: 617–626.пмид:15862575
  42. 42. Пручка К.Г., Риверо Ф.Д., Лухан Х.Д. Регуляция антигенной изменчивости у Giardia lamblia . Энн Рев Микробиол. 2011 г.; 65: 611–630.
  43. 43. Gillin FD, Hagblom P, Harwood J, Aley SB, Reiner DS, et al. Выделение и экспрессия гена основного поверхностного белка Giardia lamblia . Proc Natl Acad Sci U S A. 1990; 87: 4463–4467. пмид:2352929
  44. 44. Дэвидс Б.Дж., Райнер Д.С., Биркеланд С.Р., Прехейм С.П., Чиприано М.Дж. и др.Новое семейство генов белка не-VSP, богатого цистеином лямблии, и новый белок кисты. PloS Один. 2006 г.; 1: е44. пмид:17183673
  45. 45. Чиу П.В., Хуан Ю.С., Пан Ю.Дж., Ван Ч.Х., Сунь Ч.Х. Новое семейство цистных белков с эпидермальным фактором роста повторяется у Giardia lamblia . PLoS Negl Trop Dis. 2010 г.; 4: е677. пмид:20485485
  46. 46. Райнер Д.С., МакКаффери Дж.М., Гиллин Ф.Д. Обратимое прерывание транспорта белка стенки кисты Giardia lamblia в новом регулируемом секреторном пути.Клеточная микробиология. 2001 г.; 3: 459–472. пмид:11437832
  47. 47. Сулемана А., Пэджет Т.А., Джарролл Э.Л. Приверженность к образованию кист у Giardia . Микробиология. 2014; 160: 330–339. пмид:24307664
  48. 48. Faso C, Konrad C, Schraner EM, Hehl AB. Экспорт материала стенки кисты и неогенез органелл Гольджи у Giardia lamblia зависят от мест выхода эндоплазматического ретикулума. Клеточная микробиология. 2013; 15: 537–553. пмид:23094658
  49. 49. Мидлей В., Мейниг И., де Соуза В., Бенчимол М.Новый набор углевод-позитивных везикул в инцистирующем Giardia lamblia . Протист. 2013; 164: 261–271. пмид:23266141
  50. 50. Моррисон Х.Г., Макартур А.Г., Гиллин Ф.Д., Алей С.Б., Адам Р.Д. и соавт. Геномный минимализм у раннего дивергирующего кишечного паразита Giardia lamblia . Наука. 2007 г.; 317: 1921–1926. пмид:17

    4
  51. 51. Franzén O, Jerlström-Hultqvist J, Castro E, Sherwood E, Ankarklev J, et al. Предварительное секвенирование генома Giardia кишечного сборки B изолята GS: вызывается ли лямблиоз человека двумя разными видами? Путь PLoS.2009 г.; 5: е1000560.
  52. 52. Кнодлер Л.А., Свярд С.Г., Зильберман Дж.Д., Давидс Б.Дж., Гиллин Ф.Д. Регуляция генов развития у Giardia lamblia : первое свидетельство специфичного для инцистирования промотора и дифференциального процессинга 5′-мРНК. Мол микробиол. 1999 г.; 34: 327–340. пмид:10564476
  53. 53. Ву Г., МакАртур А.Г., Физер А., Сали А., Согин М.Л. и соавт. Основные гистоны амитохондриального протиста, Giardia lamblia . Мол Биол Эвол. 2000 г.; 17: 1156–1163.пмид:10
  54. 5
  55. 54. Адам Р.Д., Нигам А., Сешадри В., Мартенс К.А., Фарнет Г.А. и др. Репертуар генов Giardia lamblia vsp: характеристики, геномная организация и эволюция. Геномика BMC. 2010 г.; 11: 424. pmid:20618957
  56. 55. Saraiya AA, Li W, Wu J, Chang CH, Wang CC. МикроРНК у древних протистов репрессируют экспрессию вариантно-специфического поверхностного белка путем нацеливания на всю кодирующую последовательность. Путь PLoS. 2014; 10: e1003791.
  57. 56.Прукка С.Г., Славин И., Кирога Р., Элиас Э.В., Риверо Ф.Д. и соавт. Антигенная вариация у Giardia lamblia регулируется РНК-интерференцией. Природа. 2008 г.; 456: 750–754. пмид:152
  58. 57. Свярд С.Г., Менг Т.С., Хетско М.Л., Маккаффери Дж.М., Гиллин Ф.Д. (1998) Ассоциированные с дифференцировкой вариации поверхностного антигена у древних эукариот Giardia lamblia . Мол микробиол. 30: 979–989. пмид:9988475

Лямблии ИФА | Лаборатория общественного здравоохранения Ньюфаундленда и Лабрадора

Полезно для

 

Дифференциальный диагноз внебольничной и связанной с поездками острой и хронической диареи.

 

 

Рефлекторные тесты
Имя для отчета
Доступен отдельно
Выполняется всегда
Лямблии IFA НЕТ ДА
Cryptosporidium IFA НЕТ ДА
Йод Влажное крепление НЕТ ДА
Трихромный краситель НЕТ ДА
Модифицированный кислотостойкий против изоспор и циклоспор ДА НЕТ

 

 

Алгоритм тестирования

 

Одновременно исследуются образцы на наличие цист Giardia и ооцист Cryptosporidium.Все образцы одновременно окрашивают влажным препаратом трихромом и йодом для поиска других кишечных паразитов.

 

 

Показания для тестирования

 

Внебольничная диарейная болезнь.

 

Клиническая информация

 

Giardia lamblia представляет собой кишечное жгутиковое простейшее, поражающее желчевыводящие пути и верхние отделы тонкой кишки как человека, так и животных. Это наиболее частая причина кишечных паразитозов у ​​людей во всем мире и возбудитель лямблиоза, иногда известного как «бобровая лихорадка».

 

После инкубационного периода продолжительностью примерно 12–20 дней у пациентов могут возникать тошнота, озноб, субфебрильная температура, боли в животе и внезапное появление водянистой диареи. Диарея часто бывает взрывоопасной и проявляется неприятным запахом без присутствия крови, клеточного экссудата или слизи. У отдельных лиц могут развиться подострые или хронические инфекции с такими симптомами, как рецидивирующая диарея, дискомфорт и вздутие живота, отрыжка и изжога.

 

Люди являются основным резервуаром, но организмы Giardia могут заражать бобров, собак, кошек и других животных.Эти животные могут загрязнять воду фекалиями, содержащими заразные для человека цисты. Вакцина Giardia доступна для собак и кошек и может влиять на распространенность инфекций среди людей.

 

Лямблиоз передается фекально-оральным путем. Люди заражаются непосредственно при проглатывании цист с фекалиями инфицированного человека или косвенно при употреблении загрязненной фекалиями воды или пищи. Передача от человека к человеку распространена там, где личная гигиена может быть плохой.Дети, которые не приучены к туалету, часто связаны с детскими садами и семейными вспышками.

 

Среднегодовая заболеваемость, зарегистрированная в Канаде с 2000 по 2004 г., составляла 14,6 на 100 000 населения, а за тот же период средний показатель заболеваемости в Ньюфаундленде и Лабрадоре составлял 7,8 на 100 000 населения.

 

Справочные значения

 

ЦИСТЫ И ПАРАЗИТЫ ЯЙЦА НЕ ОБНАРУЖЕНЫ

 

Интерпретация

 

У большинства людей, инфицированных Giardia кишечной/лямблией, заболевание протекает бессимптомно.Однако острые лямблии могут имитировать другие простейшие, вирусные и бактериальные патогены. Диарея обычно имеет взрывной характер и проявляется неприятным запахом без присутствия крови, клеточного экссудата или слизи. У отдельных лиц могут развиться подострые или хронические инфекции с такими симптомами, как рецидивирующая диарея, дискомфорт и вздутие живота, отрыжка и изжога. У пациентов с хроническим лямблиозом диарея может привести к дегидратации, мальабсорбции и нарушению функции поджелудочной железы.

 

Ссылки

Уайт младший., AC 2010. Cryptosporidium Species, p. 3547-3560. In Mandell, D., Bennett, J.E., and Dolin, R. 2010. Принципы и практика инфекционных заболеваний, 7 -е изд. , том. 2. Черчилль Ливингстон, Эльзевир, Филадельфия, Пенсильвания.

 

Xiao, L., and Cama, V. 2007. Crytosporidium , p. 2122-2132. In Murray, P.R., Baron, E.J., Jorgensen, JH, Landry, M.L., and Pfaller, M.A. Manual of Clinical Microbiology, 9 th ed., том. 2. ASM Press, Американское общество микробиологии, Вашингтон, округ Колумбия.

 

Meridian Biosciences Inc. 2008. MerIFluor Cryptosporidium/Giardia: листок-вкладыш. Meridian Biosciences Inc. Цинциннати, Огайо.

%PDF-1.3 1 0 объект > эндообъект 2 0 объект > эндообъект 3 0 объект > /Цветное пространство > /XОбъект > /Шрифт > /F299fc74ce-d53b-4f3f-8ffb-d3bc47d5cf3c > >> /ProcSet [ /Text /ImageC /ImageB /PDF /ImageI ] /ExtGState > >> /Транс > /Повернуть 0 /MediaBox [ 0 0 612 792 ] /Annots [ 366 0 R 367 0 R 368 0 R 369 0 R 370 0 R ] /Тип /Страница >> эндообъект 4 0 объект > эндообъект 5 0 объект > эндообъект 6 0 объект > эндообъект 7 0 объект > эндообъект 8 0 объект > эндообъект 9 0 объект > эндообъект 10 0 объект > эндообъект 11 0 объект > эндообъект 12 0 объект > эндообъект 13 0 объект > эндообъект 14 0 объект > эндообъект 15 0 объект > эндообъект 16 0 объект > эндообъект 17 0 объект > эндообъект 18 0 объект > эндообъект 19 0 объект > эндообъект 20 0 объект > эндообъект 21 0 объект > эндообъект 22 0 объект > эндообъект 23 0 объект > эндообъект 24 0 объект > эндообъект 25 0 объект > эндообъект 26 0 объект > эндообъект 27 0 объект > эндообъект 28 0 объект > эндообъект 29 0 объект > эндообъект 30 0 объект > эндообъект 31 0 объект > эндообъект 32 0 объект > эндообъект 33 0 объект > эндообъект 34 0 объект > эндообъект 35 0 объект > эндообъект 36 0 объект > эндообъект 37 0 объект > эндообъект 38 0 объект > эндообъект 39 0 объект > эндообъект 40 0 объект > эндообъект 41 0 объект > эндообъект 42 0 объект > эндообъект 43 0 объект > эндообъект 44 0 объект > эндообъект 45 0 объект > эндообъект 46 0 объект > эндообъект 47 0 объект > эндообъект 48 0 объект > эндообъект 49 0 объект > эндообъект 50 0 объект > эндообъект 51 0 объект > эндообъект 52 0 объект > эндообъект 53 0 объект > эндообъект 54 0 объект > эндообъект 55 0 объект > эндообъект 56 0 объект > эндообъект 57 0 объект > эндообъект 58 0 объект > эндообъект 59 0 объект > эндообъект 60 0 объект > эндообъект 61 0 объект > эндообъект 62 0 объект > эндообъект 63 0 объект > эндообъект 64 0 объект > эндообъект 65 0 объект > эндообъект 66 0 объект > эндообъект 67 0 объект > эндообъект 68 0 объект > эндообъект 69 0 объект > эндообъект 70 0 объект > эндообъект 71 0 объект > эндообъект 72 0 объект > эндообъект 73 0 объект > эндообъект 74 0 объект > эндообъект 75 0 объект > эндообъект 76 0 объект > эндообъект 77 0 объект > эндообъект 78 0 объект > эндообъект 79 0 объект > эндообъект 80 0 объект > эндообъект 81 0 объект > эндообъект 82 0 объект > эндообъект 83 0 объект > эндообъект 84 0 объект > эндообъект 85 0 объект > эндообъект 86 0 объект > эндообъект 87 0 объект > эндообъект 88 0 объект > эндообъект 89 0 объект > эндообъект 90 0 объект > эндообъект 91 0 объект > эндообъект 92 0 объект > эндообъект 93 0 объект > эндообъект 94 0 объект > эндообъект 95 0 объект > эндообъект 96 0 объект > эндообъект 97 0 объект > эндообъект 98 0 объект > эндообъект 99 0 объект > эндообъект 100 0 объект > эндообъект 101 0 объект > эндообъект 102 0 объект > эндообъект 103 0 объект > эндообъект 104 0 объект > эндообъект 105 0 объект > эндообъект 106 0 объект > эндообъект 107 0 объект > эндообъект 108 0 объект > эндообъект 109 0 объект > эндообъект 110 0 объект > эндообъект 111 0 объект > эндообъект 112 0 объект > эндообъект 113 0 объект > эндообъект 114 0 объект > эндообъект 115 0 объект > эндообъект 116 0 объект > эндообъект 117 0 объект > эндообъект 118 0 объект > эндообъект 119 0 объект > эндообъект 120 0 объект > эндообъект 121 0 объект > эндообъект 122 0 объект > эндообъект 123 0 объект > эндообъект 124 0 объект > эндообъект 125 0 объект > эндообъект 126 0 объект > эндообъект 127 0 объект > эндообъект 128 0 объект > эндообъект 129 0 объект > эндообъект 130 0 объект > эндообъект 131 0 объект > эндообъект 132 0 объект > эндообъект 133 0 объект > эндообъект 134 0 объект > эндообъект 135 0 объект > эндообъект 136 0 объект > эндообъект 137 0 объект > эндообъект 138 0 объект > эндообъект 139 0 объект > эндообъект 140 0 объект > эндообъект 141 0 объект > эндообъект 142 0 объект > эндообъект 143 0 объект > эндообъект 144 0 объект > эндообъект 145 0 объект > эндообъект 146 0 объект > эндообъект 147 0 объект > эндообъект 148 0 объект > эндообъект 149 0 объект > эндообъект 150 0 объект > эндообъект 151 0 объект > эндообъект 152 0 объект > эндообъект 153 0 объект > эндообъект 154 0 объект > эндообъект 155 0 объект > эндообъект 156 0 объект > эндообъект 157 0 объект > эндообъект 158 0 объект > эндообъект 159 0 объект > эндообъект 160 0 объект > эндообъект 161 0 объект > эндообъект 162 0 объект > эндообъект 163 0 объект > эндообъект 164 0 объект > эндообъект 165 0 объект > эндообъект 166 0 объект > эндообъект 167 0 объект > эндообъект 168 0 объект > эндообъект 169 0 объект > эндообъект 170 0 объект > эндообъект 171 0 объект > эндообъект 172 0 объект > эндообъект 173 0 объект > эндообъект 174 0 объект > эндообъект 175 0 объект > эндообъект 176 0 объект > эндообъект 177 0 объект > эндообъект 178 0 объект > эндообъект 179 0 объект > эндообъект 180 0 объект > эндообъект 181 0 объект > эндообъект 182 0 объект > эндообъект 183 0 объект > эндообъект 184 0 объект > эндообъект 185 0 объект > эндообъект 186 0 объект > эндообъект 187 0 объект > эндообъект 188 0 объект > эндообъект 189 0 объект > эндообъект 190 0 объект > эндообъект 191 0 объект > эндообъект 192 0 объект > эндообъект 193 0 объект > эндообъект 194 0 объект > эндообъект 195 0 объект > эндообъект 196 0 объект > эндообъект 197 0 объект > эндообъект 198 0 объект > эндообъект 199 0 объект > эндообъект 200 0 объект > эндообъект 201 0 объект > эндообъект 202 0 объект > эндообъект 203 0 объект > эндообъект 204 0 объект > эндообъект 205 0 объект > эндообъект 206 0 объект > эндообъект 207 0 объект > эндообъект 208 0 объект > эндообъект 209 0 объект > эндообъект 210 0 объект > эндообъект 211 0 объект > эндообъект 212 0 объект > эндообъект 213 0 объект > эндообъект 214 0 объект > эндообъект 215 0 объект > эндообъект 216 0 объект > эндообъект 217 0 объект > эндообъект 218 0 объект > эндообъект 219 0 объект > эндообъект 220 0 объект > эндообъект 221 0 объект > эндообъект 222 0 объект > эндообъект 223 0 объект > эндообъект 224 0 объект > эндообъект 225 0 объект > эндообъект 226 0 объект > эндообъект 227 0 объект > эндообъект 228 0 объект > эндообъект 229 0 объект > эндообъект 230 0 объект > эндообъект 231 0 объект > эндообъект 232 0 объект > эндообъект 233 0 объект > эндообъект 234 0 объект > эндообъект 235 0 объект > эндообъект 236 0 объект > эндообъект 237 0 объект > эндообъект 238 0 объект > эндообъект 239 0 объект > эндообъект 240 0 объект > эндообъект 241 0 объект > эндообъект 242 0 объект > эндообъект 243 0 объект > эндообъект 244 0 объект > эндообъект 245 0 объект > эндообъект 246 0 объект > эндообъект 247 0 объект > эндообъект 248 0 объект > эндообъект 249 0 объект > эндообъект 250 0 объект > эндообъект 251 0 объект > эндообъект 252 0 объект > эндообъект 253 0 объект > эндообъект 254 0 объект > эндообъект 255 0 объект > эндообъект 256 0 объект > эндообъект 257 0 объект > эндообъект 258 0 объект > эндообъект 259 0 объект > эндообъект 260 0 объект > эндообъект 261 0 объект > эндообъект 262 0 объект > эндообъект 263 0 объект > эндообъект 264 0 объект > эндообъект 265 0 объект > эндообъект 266 0 объект > эндообъект 267 0 объект > эндообъект 268 0 объект > эндообъект 269 ​​0 объект > эндообъект 270 0 объект > эндообъект 271 0 объект > эндообъект 272 0 объект > эндообъект 273 0 объект > эндообъект 274 0 объект > эндообъект 275 0 объект > эндообъект 276 0 объект > эндообъект 277 0 объект > эндообъект 278 0 объект > эндообъект 279 0 объект > эндообъект 280 0 объект > эндообъект 281 0 объект > эндообъект 282 0 объект > эндообъект 283 0 объект > эндообъект 284 0 объект > эндообъект 285 0 объект > эндообъект 286 0 объект > эндообъект 287 0 объект > эндообъект 288 0 объект > эндообъект 289 0 объект > эндообъект 290 0 объект > эндообъект 291 0 объект > эндообъект 292 0 объект > эндообъект 293 0 объект > эндообъект 294 0 объект > эндообъект 295 0 объект > эндообъект 296 0 объект > эндообъект 297 0 объект > эндообъект 298 0 объект > эндообъект 299 0 объект > эндообъект 300 0 объект > эндообъект 301 0 объект > эндообъект 302 0 объект > эндообъект 303 0 объект > эндообъект 304 0 объект > эндообъект 305 0 объект > эндообъект 306 0 объект > эндообъект 307 0 объект > эндообъект 308 0 объект > поток д 1 0 0 1 0 0 см БТ /F1 12 тф 14.4 лиры ET БТ /F2 9 Тф 10,8 турецких лир ET д 0 1 -1 0 15 56 см БТ 1 0 0 1 0 0 Тм 1 0 0 1 0 0 Тм /F2 9 Тф 10,8 турецких лир 0,2667 0,2667 0,2667 рг (источник\072) Tj 0,89 0 0,239 рг (https\072\057\057doi\056org\05710\0567892\057boris\056131612) Tj 0,2667 0,2667 0,2667 рг ( \174 скачано\072 25\0563\0562022) Tj ET Вопрос Вопрос д 0,45 0,36 0,35 0,01 к 0,45 0,36 0,35 0,01 К 1 Дж 1 Дж 0 Вт 10 м [ ] 0 д /GS1 г 1 я д 1 0 0 1 576 136,12 см 0 0 м -375,987 0 л -375,987 0,51 л 0 0,51 л Б* Вопрос 0,83 0,64 0,02 0 к д 1 0 0 1 206,135 520,554 см 0 0 м 74.891 0 л е* Вопрос д 1 0 0 1 302,4 520,554 см 0 0 м 70.413 0 л е* Вопрос БТ /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 7,9999 0 0 7,9999 200,0125 690,6329 Тм 0 0 0 рг 0 Тс 0 тв [ (ИССЛЕДОВАНИЕ) 11 (СН) -215.2 (СТАТЬЯ) ] TJ /F299fc74ce-d53b-4f3f-8ffb-d3bc47d5cf3c 1 тф 20,0001 0 0 20,0001 200,0125 665,6313 Тм [ (статические) -220,7 (клатрин) -222,8 (сборки) -222,3 (ат) -220,2 (эт) -221,6 (периферийные) ] TJ 0 -1,2501 ТД (вакуоль) Tj /F3 1 тф 3.3222 0 ТД (\227) Тj /F299fc74ce-d53b-4f3f-8ffb-d3bc47d5cf3c 1 тф 0,9978 0 ТД [(Плазма)-223.1 (мембрана) -221,3 (интерфейс) -221,7 (из) ] TJ -4,32 -1,2501 ТД [ (the) -221,6 (паразитические) -219,2 (протозойные) ] TJ /F4 1 тф 9,7398 0 ТД [ (Гиар) 11,9 (диаметр) -221,2 (лямблии) ] TJ /F5 1 тф 9 0 0 9 200,0125 590,6266 Тм [ (Джон) -217,9 (Паулин) -221,4 (Цумтор) ] TJ 6,7499 0 0 5,9992 282,5574 594,6519 Тм (1) Тдж 9 0 0 9 286,2991 590,6266 Тм [ (\054) -221,3 (Ленька) -216,3 (Черникова) ] TJ 6,7499 0 0 5,9992 361,5306 594,6519 Тм (1) Тдж 9 0 0 9 365,2723 590,6266 Тм [ (\054) -221,3 (Сэмюэл) -219 (Разгром) ] TJ 6.7499 0 0 5,9992 423,6093 594,6519 Тм (1) Тдж /F6 1 тф 0,5543 0 ТД (\244) Тj /F5 1 тф 9 0 0 9 431,0928 590,6266 Тм [ (\054) -221,3 (Андрес) -219,6 (Каеч) ] TJ 6,7499 0 0 5,9992 494,9857 594,6519 Тм (2) Тj 9 0 0 9 498,7274 590,6266 Тм [ (\054) -221,3 (Кармен) -222,1 (Фасо) ] TJ 6,7499 0 0 5,9992 559,162 594,6519 Тм (1) Тдж /F7 1 тф 9 0 0 9 562,9038 590,6266 Тм (\052) Тдж /F5 1 тф 0,6236 0 ТД (\054) ТДж -40,9449 -1,222 ТД [ (Адриан) -218,2 (B\056) -221,4 (Хель) ] TJ 6,7499 0 0 5,9992 260,3338 583,6534 Тм (1) Тдж /F7 1 тф 9 0 0 9 264.0755 579.6282 Тм (\052) Тдж /F5 1 тф 7,9999 0 0 7,9999 200,0125 561,6566 Тм (1) Тдж /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 0,9921 0 ТД [ (Институт) 10,6 (e) -220,4 (o) 0 (f) -219,7 (Паразитолог) 14,6 (y\054) -222,1 (Университет) -206,8 (of) -219,7 (Цюрих\054) -213,5 (Цюрих\ 054) -213,5 (Швейцария) 11,2 (d\054) ] TJ /F5 1 тф 28.2971 0 ТД (2) Тj /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 0,9921 0 ТД [ (Центр) -208,9 (для) -223,7 (Microsc) 12,4 (копия) -217,3 (и) -214,9 (изображение)] TJ -30,2813 -1.2543 ТД [ (Анализ) 13,8 (\054) -226,1 (Университет) -206,8 (из) -219,7 (Цюрих\054) -213,5 (Цюрих\054) -213,5 (Швейцария) 12 (nd) ] TJ /F8 1 тф 0 -2,4945 ТД (\244) Тj /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 1,0488 0 ТД [ (текущий) -212.8 (адрес\072) -211.1 (кафедра) 10.8 (энтер) -220.5 (факультет) -212.7 (химия) -216.1 (а) -214.9 (биохимия) 14 (факультет\054) -216.1 (университет ) -213,8 ​​(из) -219,7 (Берн\054) -211,2 (Берн\054) -211,3 (Швейцария) 11,3 (г) ] TJ /F9 1 тф -1,0488 -1,2543 ТД (\052) Тдж /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 0.83 0,64 0,02 0 к 0,7654 0 ТД [ (кармен\056фасо\100) 12.2 (уж\056ч) ] ТЖ 0 0 0 рг 9,5812 0 ТД (\050CF\051\073) Tj 0,83 0,64 0,02 0 к 2,452 0 ТД [ (адриан\056ч) 12.5 (эл\100уж\056ч) ] ТЖ 0 0 0 рг 9.0213 0 ТД (\050ABH\051) Tj /F299fc74ce-d53b-4f3f-8ffb-d3bc47d5cf3c 1 тф 15,9999 0 0 15,9999 200,0125 479,6219 Тм (Аннотация) Tj /F10 1 тф 9,5 0 0 9,5 200,0125 457,6251 Тм [ (Giardia) -224,9 (lambl) -9,1 (ia) ] TJ /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 6,6659 0 ТД [(есть)-224,9(а)-217,8(паразитическая)-230.8 (простейшие) -9,1 (н) -217,8 (та) -223,9 (инфек) -8,6 (ц) -220,6 (а) -217,8 (широкий) -227,7 (диапазон) -227,1 (оф) -222,3 (позвоночные) – 228,7 (хозяева) -221,9 (вкл.) -7,1 (луд\055) ] TJ -6,6659 -1,474 ТД [ (инг) -223,6 (человек\056) -228,2 (трофозоит) -10,6 (эс) -219,1 (ар) -221,1 (не\055) -9,2 (инвазивный) -227,3 (но) -219,4 (ассоциация) -9,7 (те) -222,3 (плотно) -224,8 (с) -223,3 (с) -225,3 (энтероцит) -229,7 (поверхностно) ] ТЖ Т* [(из) -222,3 (в) -219,4 (маленький) -8,6 (л) -217,6 (целые) -8,6 (тин\056) -226.7 (Этот) -220,7 (узкий) -228,4 (экологический) -7,1 (гический) -221,8 (специфический) -8,4 (лизированный) -226,1 (энтальный) -228 (экстенсивный) -8,2 (д) -217,8 (морфный) – 10.8 (логи\055) ] TJ Т* [(кал)-221,9(а)-223,8(функция)-10,2(л)-217,6(адапта)-7,6(ции)-223,5(во время)-229,9(хост\055пара)-9,3(сайт)-220,5(ко \055д) -7,5 (об.\054) -224,8 (вкл.) -7,1 (лудинг) -220,5 (а) -223,8 (отчетливо) -230,2 (полярный\055) ] ТДж Т* [ (изм.) -224,9 (массив) -222,6 (из) -222,3 (эндок) -7,3 (итик) -218,8 (орган) -9,2 (нелль) -224.7 (термин) -224,2 (пери) -9 (ферал) -223,9 (вакуоли) -227,5 (\050PVs\051\054) -225,9 (вч) -7,1 (ич) -221,9 (ар) -221,1 (конфайн) – 8,6 (г) -217,8 (т) 0 (о) ] ТДж 0 -1,468 ТД [(к)-219,4(дорс)-7,5(ал)-220,6(кортика)-10,2(л)-217,6(область)-229,9(экспозиция)-220,4(к)-222,3(т)-7,5(д)- 217,8 (кишка) -225,3 (просвет) -222,2 (а) -223,8 (ар) -227 (в) -220,6 (близость) -226,2 (близость) -229,4 (к) -222,3 (в) -219,4 (плазма) ] ТиДжей 0 -1,474 ТД [ (мембрана) -9,3 (д) -217,8 (\050PM) -10,1 (\051\056) -219.6 (Здесь\054) -223,7 (мы) -227,9 (исследо ) -223,7 (адапта) -7,6 (ции) ] ТЖ Т* [(на)-220,8(на)] ТЖ /F10 1 тф 2,9242 0 ТД (Джардия) Tj /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 3.3359 0 ТД [ (эндок) -7,3 (итик) -224,7 (аппарат) -228 (а) -223,8 (мембрана) -9,3 (д) -217,8 (оболочка) -226,6 (комплексы) -8,2 (\056) -219,3 (Д) 0 (e) -7,1 (несмотря) -223,5 (the) -219,4 (abs) -7,3 (ence) ] TJ -6,2601 -1.474 ТД [(оф)-222,3(каноника)-8,4(л)-217,6(клат)-8,6(рин)-220,9(покрыт)-226,6(везикулы)-225,6(в)-220,6(элект)-8,6(рон)- 221,1 (микро) -8,9 (скопия\054) ] ТДж /F10 1 тф 26.1085 0 ТД (Джардия) Tj /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 3.3419 0 ТД [ (обладает) -227,3 (сохраняется) ] TJ -29,4504 -1,474 ТД [ (PV\055assoc) -8,9 (Iated) -225,2 (клатрин) -229,5 (тяжелый) -220,4 (цепь) -227,9 (\050) ] TJ /F10 1 тф 15.8501 0 ТД (Гл) Тдж /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 0,9668 0 ТД [(СН)-8.2 (C\051\054) -223,7 (динамический) -8,7 (n\055родственный) -225,7 (протеиновый) -10,6 (n) -217,8 (\050)] TJ /F10 1 тф 13,8688 0 ТД (Гл) Тдж /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 0,9727 0 ТД [ (DRP\051\054) -230,2 (и) ] TJ -31,6584 -1,474 ТД [ (сборка) -226,1 (полип) -7,1 (эптид) -222,2 (комп.) -8,8 (lex) -221,9 (2) -217,8 (\050AP2\051) -229,1 (субъединица) -7,3 (ит\054) – 222 (предполагать) -7,3 (жал) -223,5 (а) -217,8 (нов) -7,3 (эл) -220,6 (функция) -228 (фор)] ТДж /F10 1 тф 34.8332 0 ТД (Гл) Тдж /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 0.9727 0 ТД (CHC) Tj -35,8059 -1,474 ТД [(и)-223,8(его)-223,4(переходники\056)-228,4(мы)-223,7(найдено)-225,4(то\054)-222,4(в)-220,6(кон)-7,3(траст)-222,4 (до) -222,3 (GFP\055tag) -11,7 (ged) -217,8 (AP2) -228,6 (субъединицы) -224,8 (и) -223,8 (DRP\054) -229,9 (CHC\072\072) ] TJ Т* [(GFP)-221,8(отчет)-9,5(тер)-223,9(есть)-219,1(нет)-226,8(обнаруживаемый)-228(турнов)-9,1(эр)-218,1(в)-220,6(живой)- 230,5 (ячейки\054) -224,6 (указывающие) -232,1 (основные) -231,3 (разн.\055) ] ТДж Т* [ (энц) -220.4(в)-226,6(наборм)-10,7(ент)-219,4(к)-222,3(эт)-225,3(член)-9,3(ан)-217,8(а)-223,8(дисассе)-9,7(мблы)- 223,5 (сравнить) -9,1 (г) -217,8 (т) 0 (о) -222,3 (предыдущий) -7,5 (изначально) -223 (персонаж\055) ] TJ Т* [ (низированный) -224,9 (клатрин) -223,5 (коа) -7,3 (ц\056) -219,2 (гис) -8,2 (тохимический) -229,1 (локализация) -12,4 (н) -217,8 (и) 0 (н) -220,6 (избрано) -8,6 (рон) -221,1 (томог) -9,1 (рафия) -225,4 (показал) -226,2 (то) -223,9 (эт) ] ТЖ Т* [ (долго\055live) -10 (d) ] TJ /F10 1 тф 4.4638 0 ТД (Гл) Тдж /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 0,9727 0 ТД [ (CHC) -221,1 (ассорти) -8,6 (мблии) -223,3 (лок) -7,1 (ализованный) -224,8 (ат) -222,3 (отличительный) -227,2 (приблизительно) -7,6 (имитации) -230,8 (между) – 226,5 (в) -225,3 (в плазме) ] ТДж -5,4365 -1,474 ТД [ (а) -223,8 (ПВ) -219,6 (член) -9,1 (ране\056) -222,6 (А) -223,2 (детализированный) -228 (белок) -228,4 (взаимодействует) -10,4 (оме) -222,4 (из ) ] ТЖ /F10 1 тф 22,9277 0 ТД (Гл) Тдж /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 0,9668 0 ТД [(СН)-8.2 (C) -218,9 (рев.) -7,5 (ал.) -220,7 (все) -223,4 (из) -222,3 (в) -225,3 (консерв.) ] TJ -23,8945 -1,474 ТД [ (факторы) -226,7 (в) -220,6 (дополнение) -10,2 (н) -217,8 (т) 0 (о) -222,3 (новый) -227,9 (или) -218,1 (высокий) -8,6 (у) -216,1 (див) -7,1 (эрг) -221,1 (протеи) -10,6 (нс\054) -223,6 (в т.ч.) -227,6 (а) -217,8 (пута) -7,5 (тив) -220,5 (кла) -7,1 (трин) -222,4 (легкий) ] ТДж Т* [ (цепь) -221,9 (а) -223,8 (липид) -8,4 (\055связывание) -223,7 (протеин) -10,6 (нс\056) -217,7 (Та) -7,7 (кэн) -222.1 (вместе\054) -225,7 (наши) -227 (данные) -222,4 (предоставить) -225,2 (сильно) -229,9 (доказательства) -223,2 (за) -228,6 (giar\055) ] TJ Т* [(циферблат)-220,5(СН)-8,2(С)-218,9(а)0(с)-225,1(а)-217,8(состав)-8,8(ент)-219,4(из)-222,3(высок)-8,6 (y) -216,1 (sta) -8,8 (ble) -217,7 (asse) -8,6 (mblies) -223,3 (at) -222,3 (PV\055PM) -229,7 (узлы) -227,6 (that) -223,9 (вероятно) -228,8 (есть) -219,1 (а) ] ТДж Т* [(центральные)-226,7(ролевые)-223,9(в)-220,6(органы)-9,1(звенящие)-224,9(непрерывные)-231.9 (между) -226,5 (в) -219,4 (ПМ) -224,7 (а) -223,8 (ПВ) -225,6 (мембрану) -9,4 (эс) -219,1 (в) -222,6 (кон) -7,3 (троллинг) ] ТиДжей Т* [ (выборка) -229,3 (из) -222,3 (эт) -219,4 (жидкость) -225 (окружение) -7,3 (железо\056) -228,5 (это) -226,6 (предполагает) -223,3 (а) -223,8 (роман ) -221,9 (функция) -10,2 (n) -217,8 (for) -222,6 (CH) -8,2 (C) -218,9 (i) 0 (n) ] TJ /F10 1 тф 32,9236 0 ТД [(Gia)-8(rdia)] TJ /F1cc6c4f89-311a-434b-86f2-a78f2847042e 1 тф 3.3419 0 ТД [ (и) -223,8 () ] ТДж -36,2654 -1.474 ТД [ (степень) -222,2 (из) -222,3 (м) -7,5 (олекулярный) -228 (ремоделин) -10,4 (г) -217,8 (о) 0 (е) -222,3 (эндок) -7,3 (итоз) -223 (в) -220,6 (это) -226,4 (вид\056) ] TJ ET 0,6 0,91 0 0 к 0,6 0,91 0 0 К д 1 0 0 1 576 734,116 см 0 0 м -540 0 л -540 3,458 л 0 3,458 л Б* Вопрос д 36 764,957 м 180,567 764,957 л 180,567 741,26 л 36 741,26 л Вт н д 144,568 0 0 23,698 36 741,26 см /Im1 Делать Вопрос Вопрос 0 0 0 рг 0 0 0 РГ д 1 0 0 1 36 48,019 см 0 0 м 540 0 л 540 -0,51 л 0 -0,51 л Б* Вопрос БТ 7,9999 0 0 7,9999 36 36 Тм [(ПЛОС)-216.1 (патогены) -205,6 (\174) -217,7 (DOI\07210\056137) 12,3 (1\057journal\056p) 10,7 (pat\0561005756) -990,5 (июль) -214,3 (20\054) -213,4 (2016) ] ТД 65.1407 0 ТД 0,2198 Тс [ (1\0573) 219,8 (3) ] ТДж ET 0,45 0,36 0,35 0,01 к 0,45 0,36 0,35 0,01 К д 1 0 0 1 187,994 475,994 см 0 0 м -151,994 0 л -151,994 0,51 л 0 0,51 л Б* Вопрос 0,83 0,64 0,02 0 к д 1 0 0 1 36 258,916 см 0 0 м 108,964 0 л е* Вопрос д 1 0 0 1 118,772 186,916 см 0 0 м 59.301 0 л е* Вопрос д 1 0 0 1 104,202 147,912 см 0 0 м 32,258 0 л е* Вопрос д 1 0 0 1 57.713 103,918 см 0 0 м 69,676 0 л е* Вопрос БТ /F11 1 тф 10,0001 0 0 10,0001 56,0126 534,7274 Тм 1 1 1 гр 0 Тс (a11111) Тдж ET /EmbeddedDocument /MC1 BDC /Документ /MC2 BDC д 74,294 518,478 м 36,615 518,478 л 36,615 556,157 л 74,294 556,157 л 74,294 518,478 л Вт н д 38,196 0 0 38,196 36,357 518,232 см /Im2 Делать Вопрос Вопрос д 35,887 556,157 38,608 -49,89 рэ Вт н 0 0 0 1 к д 1 0 0 1 39,038 513,279 см 0 0 м -1,818 0 -3,152 1,271 -3,152 3,012 в -3,152 4,724 -1,818 6,048 -0,097 6,048 в 0,477 6,048 0,935 5,95 1,43 5,723 в 1.43 6,119 л 1,845 6,119 л 1,845 4,618 л 1,43 4,618 л 1,43 5,051 л 0,891 5,447 0,494 5,599 -0,071 5,599 в -1,377 5,599 -2,278 4,556 -2,278 3,064 в -2,278 1,6 -1,253 0,46 0,062 0,46 в 0,503 0,46 0,865 0,574 1,43 0,901 в 1,43 1,546 л 1,854 1,546 л 1,854 0,372 л 1,112 0,098 0,626 0 0 0 в ф Вопрос Вопрос 0 0 0 1 к д 1 0 0 1 43,838 516,563 см 0 0 м -0,176 0,168 -0,299 0,247 -0,387 0,247 в -0,546 0,247 -0,705 0,098 -1,191 -0,493 в -1,191 -2,843 л -0,343 -2,843 л -0,343 -3,169 л -2,524 -3,169 л -2,524 -2,843 л -1,854 -2.843 л -1,854 0,337 л -2,622 0,337 л -2,622 0,575 л -1,35 0,919 л -1,191 0,919 л -1,191 -0,07 л -0,556 0,742 -0,326 0,936 -0,008 0,936 в 0,099 0,936 0,186 0,909 0,239 0,857 в 0,513 0,619 л 0 0 л ф Вопрос д 1 0 0 1 46,311 517,128 см 0 0 м -0,663 0 -1,175 -0,759 -1,175 -1,739 в -1,175 -2,71 -0,663 -3,477 0 -3,477 в 0,662 -3,477 1,184 -2,719 1,184 -1,739 в 1,184 -0,759 0,662 0 0 0 в час 0 -3,85 м -1,068 -3,85 -1,934 -2,904 -1,934 -1,739 в -1,934 -0,573 -1,068 0,371 0 0,371 в 1,068 0,371 1,932 -0,573 1,932 -1.739 с 1,932 -2,904 1,068 -3,85 0 -3,85 в ф Вопрос д 1 0 0 1 50,374 513,279 см 0 0 м -0,494 0 -0,865 0,115 -1,121 0,354 в -1,121 0,036 л -1,474 0,036 л -1,474 1,289 л -1,068 1,289 л -1,068 1,051 л -1,068 0,672 -0,573 0,336 -0,026 0,336 в 0,459 0,336 0,821 0,592 0,821 0,945 в 0,821 1,299 0,574 1,493 -0,352 1,854 в -1,2 2,181 -1,5 2,508 -1,5 3,064 в -1,5 3,753 -0,944 4,221 -0,132 4,221 в 0,256 4,221 0,557 4,124 0,804 3,921 в 0,857 4,238 л 1,236 4,238 л 1,024 2,967 л 0,645 2,967 л 0,681 3,064 0,698 3,179 0.698 3,258 с 0,698 3,604 0,301 3,886 -0,177 3,886 в -0,635 3,886 -0,935 3,639 -0,935 3,258 в -0,935 2,878 -0,873 2,835 0,195 2,401 в 1,06 2,057 1,334 1,767 1,334 1,201 в 1,334 0,495 0,786 0 0 0 в ф Вопрос д 1 0 0 1 53,941 513,279 см 0 0 м -0,495 0 -0,865 0,115 -1,122 0,354 в -1,122 0,036 л -1,474 0,036 л -1,474 1,289 л -1,068 1,289 л -1,068 1,051 л -1,068 0,672 -0,574 0,336 -0,026 0,336 в 0,459 0,336 0,821 0,592 0,821 0,945 в 0,821 1,299 0,573 1,493 -0,353 1,854 в -1,2 2,181 -1,501 2,508 -1,501 3,064 в -1.501 3,753 -0,944 4,221 -0,132 4,221 в 0,256 4,221 0,556 4,124 0,803 3,921 в 0,855 4,238 л 1,237 4,238 л 1,024 2,967 л 0,644 2,967 л 0,68 3,064 0,698 3,179 0,698 3,258 в 0,698 3,604 0,3 3,886 -0,176 3,886 в -0,635 3,886 -0,936 3,639 -0,936 3,258 в -0,936 2,878 -0,874 2,835 0,194 2,401 в 1,059 2,057 1,332 1,767 1,332 1,201 в 1,332 0,495 0,785 0 0 0 в ф Вопрос д 1 0 0 1 60,751 513,394 см 0 0 м 0 0,326 л 0,661 0,326 л 0,661 4,67 л -1,501 -0,088 л -3,673 4,767 л -3,673 0,326 л -3,002 0,326 л -3,002 0 л -4.785 0 л -4,785 0,326 л -4,114 0,326 л -4,114 5,501 л -4,785 5,501 л -4,785 5,827 л -3,363 5,827 л -1,351 1,325 л 0,724 5,827 л 2,102 5,827 л 2,102 5,501 л 1,438 5,501 л 1,438 0,326 л 2,102 0,326 л 2,102 0 л 0 0 л ф Вопрос д 1 0 0 1 65,532 515,204 см 0 0 м -1,51 -0,354 л -1,51 -0,795 л -1,51 -1,166 -1,271 -1,404 -0,901 -1,404 в -0,618 -1,404 -0,389 -1,28 0 -0,937 в 0 0 л час 0,75 -1,828 м 0,635 -1,864 0,512 -1,89 0,441 -1,89 в 0,168 -1,89 0,01 -1,695 0,01 -1,369 в 0,01 -1,28 л -0,361 -1,739 -0,697 -1,926 -1.165 -1,926 с -1,774 -1,926 -2,225 -1,502 -2,225 -0,909 в -2,225 -0,459 -1,933 -0,089 -1,51 0,008 в 0 0,353 л 0 1,351 л 0 1,703 -0,265 1,96 -0,618 1,96 в -0,794 1,96 -0,909 1,934 -1,165 1,809 в -1,165 1,385 л -1,951 1,156 л -2,013 1,262 -2,021 1,306 -2,021 1,402 в -2,021 1,915 -1,43 2,295 -0,627 2,295 в 0,149 2,295 0,662 1,906 0,662 1,323 в 0,662 -1,396 л 1,342 -1,396 л 1,342 -1,643 л 0,75 -1,828 л ф Вопрос д 1 0 0 1 69,756 516,563 см 0 0 м -0,177 0,168 -0,302 0,247 -0,389 0,247 в -0,548 0,247 -0,707 0.098 -1,192 -0,493 с -1,192 -2,843 л -0,345 -2,843 л -0,345 -3,169 л -2,525 -3,169 л -2,525 -2,843 л -1,853 -2,843 л -1,853 0,337 л -2,621 0,337 л -2,621 0,575 л -1,351 0,919 л -1,192 0,919 л -1,192 -0,07 л -0,557 0,742 -0,327 0,936 -0,009 0,936 в 0,097 0,936 0,186 0,909 0,238 0,857 в 0,512 0,619 л 0 0 л ф Вопрос д 35,887 556,157 38,608 -49,89 рэ Вт н д 1 0 0 1 73,432 513,394 см 0 0 м -1,811 2,173 л -0,231 3,673 л -0,804 3,673 л -0,804 3,999 л 0,953 3,999 л 0,953 3,673 л 0,273 3,673 л -1,096 2,366 л 0,591 0.326 л 1,095 0,326 л 1,095 0 л 0 0 л час -3,215 0 м -3,215 0,326 л -2,543 0,326 л -2,543 5,925 л -3,32 5,925 л -3,32 6,162 л -2,049 6,506 л -1,881 6,506 л -1,881 0,326 л -1,219 0,326 л -1,219 0 л -3,215 0 л ф Вопрос Вопрос 0,1835 0,9111 0,95306 0,07941 к д 1 0 0 1 41,074 507,294 см 0 0 м -0,109 -0,053 -0,353 -0,134 -0,662 -0,134 в -1,358 -0,134 -1,811 0,338 -1,811 1,043 в -1,811 1,754 -1,325 2,272 -0,572 2,272 в -0,324 2,272 -0,105 2,211 0,01 2,149 в -0,086 1,83 л -0,186 1,882 -0,343 1,939 -0,572 1,939 в -1,101 1.939 -1,387 1,544 -1,387 1,067 в -1,387 0,533 -1,044 0,205 -0,586 0,205 в -0,348 0,205 -0,19 0,262 -0,071 0,314 в 0 0 л ф Вопрос 41,564 507,208 0,41949 3,3838 рэ ф д 1 0 0 1 42,689 507,208 см 0 0 м 0,419 0 -0,41949 2,3067 рэ 0 0 м час 0,2 2,697 м 0,048 2,697 -0,052 2,816 -0,052 2,954 в -0,052 3,103 0,052 3,217 0,209 3,217 в 0,362 3,217 0,467 3,103 0,467 2,954 в 0,467 2,816 0,367 2,697 0,205 2,697 в 0,2 2,697 л ф Вопрос д 1 0 0 1 45,448 507,294 см 0 0 м -0,109 -0,053 -0,353 -0,134 -0,662 -0,134 в -1,358 -0,134 -1.81 0,338 -1,81 1,043 в -1,81 1,754 -1,325 2,272 -0,572 2,272 в -0,324 2,272 -0,105 2,211 0,01 2,149 в -0,085 1,83 л -0,186 1,882 -0,343 1,939 -0,572 1,939 в -1,101 1,939 -1,387 1,544 -1,387 1,067 в -1,387 0,533 -1,043 0,205 -0,586 0,205 в -0,348 0,205 -0,19 0,262 -0,071 0,314 в 0 0 л ф Вопрос д 1 0 0 1 46,358 508,456 см 0 0 м 0,01 0 л 0,21 0,263 л 0,891 1,059 л 1,392 1,059 л 0,501 0,11 л 1,516 -1,248 л 1,005 -1,248 л 0,214 -0,143 л 0 -0,381 л 0 -1,248 л -0,419 -1,248 л -0,419 2,136 л 0 2,136 л 0 0 л ф Вопрос д 1 0 0 1 49.221 507,208 см 0 0 м 0 1,987 л -0,319 1,987 л -0,319 2,307 л 0 2,307 л 0 2,416 л 0 2,74 0,076 3,035 0,271 3,222 в 0,429 3,374 0,639 3,436 0,829 3,436 в 0,982 3,436 1,105 3,402 1,187 3,369 в 1,134 3,045 л 1,067 3,073 0,986 3,098 0,862 3,098 в 0,51 3,098 0,415 2,783 0,415 2,431 в 0,415 2,307 л 0,972 2,307 л 0,972 1,987 л 0,419 1,987 л 0,419 0 л 0 0 л ф Вопрос д 1 0 0 1 51,47 507,47 см 0 0 м 0,4 0 0,701 0,377 0,701 0,901 в 0,701 1,292 0,505 1,782 0,01 1,782 в -0,481 1,782 -0,696 1,325 -0,696 0,887 в -0,696 0.382 -0,41 0 -0,004 0 в 0 0 л час -0,019 -0,314 м -0,638 -0,314 -1,125 0,144 -1,125 0,872 в -1,125 1,645 -0,615 2,097 0,019 2,097 в 0,682 2,097 1,129 1,616 1,129 0,915 в 1,129 0,058 0,534 -0,314 -0,014 -0,314 в -0,019 -0,314 л ф Вопрос д 1 0 0 1 53,129 508,795 см 0 0 м 0 0,271 -0,005 0,505 -0,019 0,72 в 0,348 0,72 л 0,367 0,267 л 0,381 0,267 л 0,486 0,576 0,744 0,771 1,024 0,771 в 1,139 0,763 л 1,139 0,367 л 0,996 0,376 л 0,701 0,376 0,491 0,152 0,434 -0,157 в 0,419 -0,353 л 0,419 -1,587 л 0 -1,587 л 0 0 л ф Вопрос д 1 0 0 1 57.627 507,842 см 0 0 м 0 -0,243 0,005 -0,453 0,019 -0,634 в -0,353 -0,634 л -0,377 -0,258 л -0,386 -0,258 л -0,491 -0,443 -0,738 -0,686 -1,148 -0,686 в -1,511 -0,686 -1,944 -0,481 -1,944 0,324 в -1,944 1,673 л -1,525 1,673 л -1,525 0,4 л -1,525 -0,038 -1,387 -0,338 -1,011 -0,338 в -0,73 -0,338 -0,534 -0,143 -0,458 0,048 в -0,42 0,262 л -0,42 1,673 л 0 1,673 л 0 0 л ф Вопрос д 1 0 0 1 58,741 508,147 см 0 0 м 0,02 -0,171 л 0,091 -0,462 0,349 -0,662 0,644 -0,662 в 1,087 -0,662 1,345 -0,3 1,345 0,23 в 1,345 0.691 1,106 1,087 0,663 1,087 в 0,377 1,087 0,105 0,887 0,024 0,567 в 0 0,4 л 0 0 л час -0,419 0,615 м -0,419 0,91 -0,424 1,148 -0,437 1,368 в -0,062 1,368 л -0,038 0,973 л -0,028 0,973 л 0,139 1,259 0,415 1,42 0,787 1,42 в 1,349 1,42 1,768 0,948 1,768 0,248 в 1,768 -0,581 1,259 -0,991 0,72 -0,991 в 0,41 -0,991 0,148 -0,857 0,01 -0,629 в 0 -0,629 л 0 -1,882 л -0,419 -1,882 л -0,419 0,615 л ф Вопрос д 1 0 0 1 62,607 508,576 см 0 0 м -0,02 0,182 л -0,081 0,443 -0,31 0,663 -0,625 0,663 в -1,059 0,663 -1,315 0.281 -1,315 -0,224 в -1,315 -0,695 -1,082 -1,081 -0,634 -1,081 в -0,352 -1,081 -0,096 -0,891 -0,02 -0,576 в 0 -0,399 л 0 0 л час 0,419 2,017 м 0,419 -0,772 л 0,419 -0,977 0,424 -1,21 0,438 -1,367 в 0,062 -1,367 л 0,043 -0,967 л 0,033 -0,967 л -0,096 -1,225 -0,372 -1,42 -0,748 -1,42 в -1,306 -1,42 -1,739 -0,948 -1,739 -0,247 в -1,744 0,524 -1,263 0,991 -0,705 0,991 в -0,349 0,991 -0,11 0,825 -0,01 0,644 в 0 0,644 л 0 2,017 л 0,419 2,017 л ф Вопрос д 1 0 0 1 64,937 508,385 см 0 0 м -0,458 0,01 -0,978 -0,071 -0.978 -0,52 с -0,978 -0,796 -0,796 -0,92 -0,586 -0,92 в -0,281 -0,92 -0,086 -0,729 -0,02 -0,533 в 0 -0,4 л 0 0 л час 0,409 -0,624 м 0,409 -0,824 0,419 -1,02 0,443 -1,177 в 0,066 -1,177 л 0,028 -0,886 л 0,014 -0,886 л -0,109 -1,067 -0,362 -1,229 -0,691 -1,229 в -1,158 -1,229 -1,396 -0,9 -1,396 -0,566 в -1,396 -0,009 -0,9 0,296 -0,01 0,291 в -0,01 0,339 л -0,01 0,529 -0,062 0,877 -0,534 0,872 в -0,753 0,872 -0,978 0,81 -1,14 0,701 в -1,234 0,982 л -1,044 1,101 -0,763 1,182 -0,472 1,182 в 0,238 1,182 0.409 0,701 0,409 0,238 в 0,409 -0,624 л ф Вопрос д 1 0 0 1 66,504 510,068 см 0 0 м 0 -0,553 л 0,6 -0,553 л 0,6 -0,872 л 0 -0,872 л 0 -2,111 л 0 -2,397 0,081 -2,56 0,314 -2,56 в 0,429 -2,56 0,495 -2,55 0,558 -2,53 в 0,576 -2,85 л 0,495 -2,878 0,367 -2,907 0,205 -2,907 в 0,01 -2,907 -0,147 -2,841 -0,248 -2,73 в -0,362 -2,602 -0,41 -2,397 -0,41 -2,126 в -0,41 -0,872 л -0,768 -0,872 л -0,768 -0,553 л -0,41 -0,553 л -0,41 -0,129 л 0 0 л ф Вопрос д 1 0 0 1 69,011 508,585 см 0 0 м 0,004 0,267 -0,11 0,682 -0,577 0.682 с -1,006 0,682 -1,187 0,291 -1,221 0 в 0 0 л час -1,225 -0,3 м -1,216 -0,862 -0,858 -1,096 -0,439 -1,096 в -0,139 -1,096 0,047 -1,044 0,199 -0,977 в 0,276 -1,277 л 0,128 -1,344 -0,129 -1,425 -0,496 -1,425 в -1,201 -1,425 -1,63 -0,953 -1,63 -0,262 в -1,63 0,434 -1,216 0,981 -0,544 0,981 в 0,209 0,981 0,404 0,319 0,404 -0,104 в 0,391 -0,3 л -1,225 -0,3 л ф Вопрос д 1 0 0 1 69,877 507,637 см 0 0 м 0,129 -0,076 0,349 -0,162 0,558 -0,162 в 0,858 -0,162 1,001 -0,015 1,001 0,182 в 1,001 0,381 0,882 0,486 0.577 0,601 в 0,158 0,753 -0,038 0,982 -0,038 1,254 в -0,038 1,625 0,268 1,93 0,758 1,93 в 0,991 1,93 1,196 1,868 1,32 1,787 в 1,221 1,487 л 1,13 1,539 0,963 1,62 0,749 1,62 в 0,501 1,62 0,367 1,478 0,367 1,306 в 0,367 1,115 0,501 1,029 0,801 0,91 в 1,196 0,763 1,406 0,563 1,406 0,22 в 1,406 -0,19 1,087 -0,477 0,548 -0,477 в 0,296 -0,477 0,063 -0,41 -0,1 -0,314 в 0 0 л ф Вопрос ЭМС ЭМС д 36 460,743 м 45.071 460.743 л 45.071 449.008 л 36 449,008 л Вт н д 9,1162 0 0 11,735 36 449,008 см /Im3 Делать Вопрос Вопрос БТ /F8 1 тф 7.9999 0 0 7,9999 47,622 449,4046 Тм 0 0 0 рг [ (ОТКРЫТЫЙ) -213.1 (ДОСТУП) ] TJ /F12 1 тф -1,4528 -2,048 ТД [ (Citat) 16,3 (ion\072) ] TJ /F13 1 тф 3.4654 0 ТД [ (Zumt) 13,6 (hor) -210,8 (JP) 110,8 (\054) -221,4 (Cerni) 17,7 (kova) -207,4 (L\054) -213,8 ​​(Rout) -211,3 (S\054) -211,9 (Kaec ) 12,6 (ч) -219,1 (А) 0 (\054) ] ТДж -3,4654 -1,3748 ТД [ (Fas) 13,6 (o) -219,1 (C) 0 (\054) -212,4 (Hehl) -209,8 (AB) -214,9 (\050201) 16,5 (6\051) -218,4 (Stat) 13,7 (ic) – 210,7 (клат) 15,3 (рин) -211,5 (ассе) 14,2 (мблис) -206 (ат) ] ТДж Т* [(то)-213.2 (Перип) 18,2 (герал) -203,4 (В) 52 (акуол) 17,7 (д) ] ТЖ /F14 1 тф 8.0221 0 ТД (\227) Тj /F13 1 тф 0,8079 0 ТД [ (плазма) 15,7 (а) -212,1 (мембрана) 15,7 (рана) -210,3 (инте) 11,9 (рлица) ] TJ -8,83 -1,3748 ТД [ (из) -213,7 (the) -213,2 (Para) 11,3 (siti) 14,2 (c) -217,6 (Proto) 16,7 (zoan) ] TJ /F15 1 тф 9.3473 0 ТД [(Гиар) 12,4 (диаметр) -211,7 (лямбль) 18,7 (иа)] ТДж /F13 1 тф 5.3221 0 ТД [ (\056) -221.4 (PLoS) ] TJ -14,6694 -1,3748 ТД [ (Пато) 16,5 (г) -219,1 (12\0507\051) 17,2 (\072) -221,4 (е100) 16.3 (5756\056) -205,1 (doi\0721) 13,9 (0\056137) 14,6 (1\057jou) 13,9 (rnal\056)] TJ Т* [ (ppat) 14,1 (\0561005) 14,6 (756) ] ТДж /F12 1 тф 0 -2,126 ТД [ (Редактировать) 12.4 (или\072) ] TJ /F13 1 тф 2.8063 0 ТД [ (Патрик) 18 (ia) -219,3 (J\056) -212,2 (Johns) 19,9 (on\054) -213,2 (Unive) 19 (rsity) -209,6 (of) -213,7 (Cali) 16,3 (forni) 14,1 (а) ] TJ -2,8063 -1,3748 ТД [ (Los) -209,5 (Ange) 11,1 (les\054) -204,8 (UNIT) 13,1 (ED) -215,4 (ST) 63 (A) 52 (TES) ] TJ /F12 1 тф 0 -2,126 ТД [ (Recei) 16 (ved\072) ] TJ /F13 1 тф 3.9969 0 ТД [ (февраль) 12,8 (март) -208,8 (26\054) -213,2 (2016) ] TJ /F12 1 тф -3,9969 -2,126 ТД [ (Принять) 14.5 (ted\072) ] TJ /F13 1 тф 4.1032 0 ТД [ (июнь) -208,9 (18\054) -206,1 (2016) ] ТД /F12 1 тф -4,1032 -2,126 ТД [ (Опубликовать) 15,7 (выпущено) 14,3 (\072) ] TJ /F13 1 тф 4.33 0 ТД [ (июль) -201 (20\054) -213,2 (2016) ] ТД /F12 1 тф -4,33 -2,126 ТД [ (Копировать) 17,4 (справа) 13,4 (t\072) ] TJ /F13 1 тф 4.2874 0 ТД [ (\251) -214,9 (2016) -210,5 (Цум) 15,3 (тор) -212,5 (эт) -213,7 (ал\056) -206,8 (Это) -206.2 (есть) -217,8 (ан) -211,5 (открытый) ] TJ -4,2874 -1,3748 ТД [(акц) 12,3(сс)-215,6(ст) 13,7(икл)-210,3(дист) 14,9(рибут) 14,1(ред)-218,6(унд) 16,3(р)-219(ст)-213,2(терм) 17,5 (т) -217,6 (о) 0 (ж) -213,7 (т) ] ТДж 0,83 0,64 0,02 0 к Т* [ (Creat) 16,2 (ive) -210,2 (Com) 13,3 (mons) -205,7 (Attri) 13,7 (butio) 13,9 (n) -219,1 (лицензия) 17,7 (se) ] TJ 0 0 0 рг 13.6206 0 ТД [ (\054) -214,3 (который) -207,7 (постоянный) 12,6 (его) ] TJ -13,6206 -1,3748 ТД [ (unres) 18,6 (trict) 13,4 (ed) -218,6 (use\054) -204.1 (дистр) 15,6 (ибути) 13,2 (он\054) -213,2 (и) -211 (репро) 17,2 (дукти) 15,4 (он) -218,6 (в) -212,2 (любой)] ТДж Т* [ (средний) 19,4 (м\054) -217,6 (прови) 17,8 (дед) -211 (эт) -213,2 (ориг) 15,8 (исход) -211,9 (авт) 14,1 (или) -218,4 (и) -211 ( источник) 20,1 (д) -219,1 (ар) ] ТДж Т* [ (credi) 17,8 (ted\056) ] TJ /F12 1 тф 0 -2,126 ТД [ (данные) -208,9 (A) 23,2 (vai) 13,6 (лабильность) 13,6 (ity) -213 (stat) 11,4 (emen) 14,3 (t\072) ] TJ /F13 1 тф 10.7221 0 ТД [ (Дат) 14,9 (а) -219,1 (ар) -210,8 (свободный) 14.3 (лы) ] TJ -10,7221 -1,3748 ТД [(retri) 14,3 (evabl) 17,7 (e) -219,1 (использование) -202 (projec) 18,4 (t) -221,4 (acce) 12,3 (ssion) -200,5 (numb) 12,5 (er) ] TJ Т* [ (PXD) 13,8 (00371) 9,8 (8) -212,1 (и) -211 (проект) 18,4 (t) -221,4 (DOI) ] TJ 0,83 0,64 0,02 0 к 10.3465 0 ТД [ (10\0566) 14,1 (019\057PX) 18,9 (D0037) 11,1 (18) ] ТДж 0 0 0 рг 7.4127 0 ТД (\056) ТДж /F12 1 тф -17,7592 -2,126 ТД [ (Фонд) 15,7 (инг\072) ] TJ /F13 1 тф 3,678 0 ТД [(Это)-206,2(работа)-207,4(была)-208,1(парти)14,1(союзник)-210.3 (поддерж.) 18,4 (прод.) -212,5 (по) -210 (грант) ] TJ -3,678 -1,3748 ТД [ (число) 43,8 (\056) -214,3 (31\05514) 17 (0803\057) 14,6 (1\054) -213,7 (награда) 11,3 (ред.) -211,5 (до) -213,7 (АБХ) -213 ( по) -210 (в) -213,2 (Швейцария) 13,3 (с) ] TJ Т* [ (Nati) 14,7 (onal) -211,2 (Scien) 19,5 (ce) -217,1 (Fund) -207,1 (\050) ] TJ 0,83 0,64 0,02 0 к 8.5253 0 ТД [ (www) 55,3 (\056snf) 13,4 (\056ch) ] TJ 0 0 0 рг 4.0323 0 ТД [ (\051\056) -213,6 (JPZ) -211,3 (прием) 17,8 (ведь) ] TJ -12,5576 -1,3748 ТД [(грант)-204.9 (nrs\056) -211 (5508) 16,3 (0507) -210,5 (foll) 12,7 (причитается) -209,1 (by) -210 (K\05552) 11,3 (201\0550) 9,9 (5\05501) 16,5 ( \054)-221,4(а)] ТЖ Т* [ (КФ) -213,9 (прием) 17,8 (вед) -209,5 (грант) -204,9 (нр) 43,8 (\056) -214,3 (К\05552) 11,3 (201\0550) 9,9 (6\05501) 16,5 (\ 054) -221,4 (все) -212,4 (как) ] TJ Т* [ (упал) 12,7 (овш) 12,1 (ипс) -210,2 (от) -209,3 (у) -206,1 (форсц) 16,4 (венг) 11,3 (креди) 17,8 (т) -221,4 (дер) -210,8 (унив) 18,5 (ersit\344) 16,2 (t) ] TJ Т* [ (Z\374ric) 14.2 (ч) -212,1 (\050) ] ТДж 0,83 0,64 0,02 0 к 2,7142 0 ТД [ (www) 55,3 (\056резе) 16,9 (рчер) 11,6 (с\056уз) 17,1 (ч\056ч) ] ТЖ 0 0 0 рг 8.7095 0 ТД [ (\051\056) -213,6 (The) -214,7 (весело) 13,6 (ders) -208,8 (было) ] TJ -11,4237 -1,3748 ТД [ (нет) -211,5 (роль) -211 (в) -212,2 (учеба) -209,1 (дези) 17,1 (гн\054) -213,2 (данные) -205,6 (коллекция) 19 (тион) -213,4 (и) – 211 (анальный) 15,6 (ysis\054) ] TJ Т* [ (реш) 19,2 (ион) -211,7 (к) -213,7 (обще) 15,4 (ш\054) -211,7 (или) -218,4 (препа) 17 (отношение) 14.->R_=1qsYYXc(h*w`y?1ʳ ;]zj7ǃ5?xt7)CM!JML6L0R.v}_~E

Роль gamma-giardin в формировании вентрального диска Giardia lamblia | Parasites & Vectors

Культивирование

трофозоитов G. lamblia

Трофозоиты штамма G. lamblia WB (ATCC30957; Американская коллекция типовых культур, Манассас, Вирджиния, США) выращивали в течение 72 ч при 37 °C в TYI- Среда S-33 (2% казеинового гидролизата, 1% дрожжевого экстракта, 1% глюкозы, 0,2% NaCl, 0,2% l-цистеина, 0,02% аскорбиновой кислоты, 0,2% K 2 HPO 4 , 0.06% KH 2 PO 4 , 10% телячья сыворотка и 0,5 мг/мл бычьей желчи, pH 7,1) [22].

Синхронизация трофозоита Giardia с использованием афидиколина и анализа проточной цитометрии

Для синхронизации Giardia к клеткам, выращенным примерно до % слияния. Контрольные клетки обрабатывали 0,05% ДМСО, который использовали для солюбилизации 5 мкг/мл афидиколина.После 6-часовой инкубации при 37 °C среду заменяли свежей культуральной средой TYI-S-33, не содержащей лекарственного средства, и инкубировали еще 3 часа.

Проточный цитометрический анализ различных клеток (контроль, обработанный ДМСО, обработанные афидиколином и промытые афидиколином трофозоиты) выполняли, как описано ранее [3]. Вкратце, собранные клетки повторно суспендировали в 50 мкл культуральной среды TYI-S-33 и обрабатывали 150 мкл фиксатора клеток (1% Triton X-100, 40 мМ лимонной кислоты, 20 мМ двухосновного фосфата натрия и 200 мМ сахароза, рН 3.0) при комнатной температуре в течение 5 мин. Образцы разводили 350 мкл разбавляющего буфера [125 мМ MgCl 2 в фосфатно-солевом буфере (PBS: 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 10,1 мМ Na 2 HPO 4 и 2 мМ KH 2 2). PO 4 , pH 7,4)], а затем хранят при 4 °C до использования. Фиксированные клетки реагировали с 2,5 мкг РНКазы А (Sigma-Aldrich) и 10 мкг/мл йодида пропидия (Sigma-Aldrich) в течение 30 минут при 37 °C. Клетки оценивали в отношении содержания их ДНК с помощью проточной цитометрии и программного анализа FlowJO (FlowJo Llc, Ashland, OR, USA).

Двумерный гель-электрофорез (2-DGE) экстрактов

Giardia и анализ изображений трофозоиты, освобожденные от опосредованной афидиколином остановки (клетки фазы G2), ресуспендировали их в буфере для образцов 2-DGE (7 М мочевина, 2 М тиомочевина, 100 мМ ДТТ, 4,5% CHAPS и 40 мМ Трис). Гелевые полоски с иммобилизованным градиентом pH (IPG) (pH 3–10, 18 см; GE Healthcare, Уппсала, Швеция) пропитывали экстрактами в течение ночи.Регидратированные полоски IPG обрабатывали для последовательного изоэлектрического фокусирования при 80 кВ. Разделение во втором измерении проводили при комнатной температуре в гелях для электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) с додецилсульфатом натрия 9–17% (20 × 25 см). Белковые полосы на геле визуализировали окрашиванием Кумасси. Дважды был проведен эксперимент с 2-ДГЭ. Окрашенные гели сканировали с помощью денситометра для визуализации GS-710 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) и анализировали с помощью программного обеспечения для анализа изображений Melanie 5 (GE Healthcare).Надписи изображений были обработаны с использованием программного обеспечения Adobe Photoshop v.7.0. Анализ этих двумерных (2-D) гелей был выполнен в Исследовательском центре протеома Йонсей (Сеул, Корея).

Жидкостная хроматография, масс-спектрометрия

Белковые пятна на 2D-геле вырезали и расщепляли трипсином. Белки, обработанные трипсином, анализировали с помощью квадрупольной времяпролетной (Q-TOF) масс-спектрометрии (МС) в дополнение к лазерной ионизации с матричной десорбцией-TOF MS. Спектры ионов-продуктов собирали в информационно-зависимом режиме регистрации и анализировали с помощью квадрупольно-времяпролетного МС Agilent 6530 с точными массами (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США).Для наборов данных квадрупольно-времяпролетной жидкостной хроматографии-тандемной МС (ЖХ-МС/МС) тандемные масс-спектры были отправлены в нашу внутреннюю поисковую систему базы данных Mascot (база данных NCBI NR загружена 31 июля 2009 г.). Для идентификации белка в качестве критерия значимого результата использовали показатель Mascot ion > 55.

Конструирование

G. lamblia , экспрессирующих меченный эпитопом HA Glγ-гиардин

Фрагмент ДНК гена Glγ-гиардина длиной 936 п.н.геномной ДНК lamblia WB с помощью ПЦР с использованием двух праймеров, γ-гиардин-NcoI-F и γ-гиардин-HAX3-R (таблица 1). Сайты NcoI и NotI, расположенные на концах фрагмента ДНК Glγ-giardin, использовали для клонирования в соответствующие сайты плазмиды pGFP.pac [23], в результате чего была получена плазмида pGlγ-giardinHAX3.pac (таблица 2).

Таблица 1 Праймеры и морфолино, использованные в этом исследовании Таблица 2 Штаммы и плазмиды, использованные в этом исследовании

Трофозоиты выращивали в течение 72 ч в среде TYI-S-33.Тридцать микрограммов эписомальной плазмиды, pGlγ-giardinHAX3.pac, трансфицировали в 1 × 10 7 трофозоитов с помощью электропорации в следующих условиях: 350 В, 1000 мкФ и 700 Ом (Bio-Rad). Трансфекцию проводили сразу 5 независимыми наборами из трофозоитов Giardia . Трофозоиты, несущие плазмиду pGlγ-giardinHAX3.pac, первоначально отбирали путем добавления пуромицина (AG Scientific, Сан-Диего, Калифорния, США) в среду TYI-S-33 в конечной концентрации 10 мкг/мл и дополнительно обогащали в среде содержащие 50 мкг/мл пуромицина, через 4–5 дней после трансфекции.Мы получили 4 линии Giardia , проявляющие устойчивость к пуромицину. Среди них две клеточные линии Giardia продемонстрировали экспрессию меченого HA Glγ-гиардина, как показано в анализе вестерн-блоттинга с использованием антител против HA. В качестве контроля использовали трофозоиты Giardia lamblia , несущие pΔ.pac [24].

Вестерн-блот-анализ и образование антител

Экстракты клеток получали из различных клеток G. lamblia (клетки без плазмиды, клетки, несущие pGlγ-giardinHAX3.pac и клетки, несущие p∆.pac) в PBS. Экстракты разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на мембрану из поливинилиденфторида (PVDF) (Millipore, Бедфорд, Массачусетс, США). Мембрану инкубировали с моноклональным мышиным анти-HA (1:1000; Sigma-Aldrich) в блокирующем растворе [трис-буферный физиологический раствор с твином 20 (TBST): 50 мМ трис-HCl, 5% обезжиренного молока и 0,05% твина 20. ] при 4 °C в течение ночи. После инкубации со вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP), иммунореактивные белки визуализировали с использованием системы усиленной хемилюминесценции (ECL) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).Мембраны инкубировали в буфере для удаления (Thermo Fisher Scientific) при комнатной температуре в течение 20 мин, а затем реагировали с поликлональными крысиными антителами, специфичными к протеиндисульфидизомеразе 1 (PDI1; GiardiaDB ORF № GL50803_29487) G. lamblia (1: 10 000) в качестве контроля загрузки. Крысиные поликлональные антитела к GlPDI1 получали с использованием рекомбинантного белка GlPDI1 [25].

Для получения рекомбинантного белка G. lamblia cyclin B (Glcyclin B; GiardiaDB OFR № GL50803_3977) использовали праймеры 3977-F и 3977-R (таблица 1) для амплификации фрагмента ДНК длиной 1026 п.н. Ген В .Сайт HindIII и XhoI использовали для клонирования продуктов ПЦР в pET21b (Novagen, Дармштадт, Германия), в результате чего был получен pET-циклин B (таблица 2). Рекомбинантный белок глициклин B сверхэкспрессировали в Escherichia coli BL21 (DE3) путем добавления 1 мМ изопропилтиогалактозида (IPTG) (Sigma-Aldrich), а затем использовали для получения поликлональных антител, специфичных для глициклина B, путем иммунизации крыс Sprague-Dawley (три иммунизации в 3-недельные интервалы, 200 мкг на иммунизацию). Специфичность поликлональных антител против рекомбинантного глициклина В подтверждали реакцией их с Е.coli со сверхэкспрессией рекомбинантного глициклина B или экстракта Giardia (см. дополнительный файл 1: рисунок S1).

Иммунофлуоресцентный анализ (ИФА)

Для изучения локализации Glγ-гиардина G. lamblia , экспрессирующий HA-меченный Glγ-гиардин, прикрепляли к предметным стеклам, покрытым L -лизином, во влажной камере. Прикрепленные клетки фиксировали охлажденным 100% метанолом при - 20°C в течение 10 минут и пермеабилизировали с помощью PBS/0,5% Triton X-100 в течение 10 минут.После 1 ч инкубации в блокирующем буфере (PBS, 5 % козьей сыворотки и 3 % BSA) клетки реагировали в течение ночи с мышиными антителами против HA (1:100; Sigma-Aldrich) и крысиными антителами против Glγ-гиардина. поликлональные антитела (1:100). После трех 5-минутных промывок PBS клетки инкубировали с конъюгированным с Alexafluor 488 антимышиным IgG (1:100; Molecular Probes, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США) и конъюгированным с Alexafluor 555 антикрысиным IgG (1:100). ; Molecular Probes) при 37 °C в течение 1 часа. Предметные стекла монтировали с помощью среды VECTASHIELD, препятствующей выцветанию, с 4′,6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI; Vector Laboratories, Берлингейм, Калифорния, США).Затем предметные стекла исследовали с помощью флуоресцентного микроскопа Axiovert 200 (Carl Zeiss, Оберкохен, Германия).

Количественный ПЦР-анализ в реальном времени

Тотальную РНК получали из клеток G1/S-фазы и G2-фазы с использованием TRizol (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя. Пять микрограммов РНК превращали в комплементарную ДНК (кДНК) с использованием системы обратной транскрипции Improm-II (Promega, Мэдисон, Висконсин, США). ПЦР в реальном времени проводили с использованием системы LightCycler и набора LightCycler 480 SYBR Green I Master Kit (Roche Applied Science, Мангейм, Германия).Условия проведения ПЦР в реальном времени были следующими: предварительная инкубация при 95°С в течение 5 мин с последующими 45 циклами амплификации при 94°С в течение 1 мин, 56°С в течение 1 мин и 72°С в течение 1 мин. Нуклеотидные последовательности прямого и обратного праймеров, использованных для ПЦР в реальном времени, перечислены в таблице 1. Транскрипт актин-родственного гена G. lamblia (Glactin; GiardiaDB OFR № GL50803_15113) использовали для нормализации количества мРНК в образцы кДНК.

Нокдаун экспрессии Glγ-гиардина с использованием морфолино

Экспрессия Glγ-гиардина была снижена с использованием 25-мерного морфолино для открытой рамки считывания (ORF) Glγ-гиардина от стартового кодона (таблица 1; Gene Tools Llc, Philomath, OR , США).В качестве контроля использовали контрольный морфолино, неспецифический олигомер (таблица 1). Морфолино добавляли к 5 × 10 6 клеток в конечной концентрации 100 мкМ с помощью электропорации. Трансфицированные клетки выращивали в течение 48 ч, а затем анализировали на уровень Glγ-гиардина с помощью вестерн-блоттинга и ИФА, как описано выше.

Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ)

Клетки, обработанные морфолином, префиксировали в растворе фиксатора Карновского (2% глутарового альдегида, 2% параформальдегида, 0,5% CaCl2 в 0.1 М какодилатного буфера, рН 7,4), с последующей промывкой в ​​0,1 М какодилатном буфере (рН 7,4) и последующей фиксацией 1,33% четырехокиси осмия в 0,1 М какодилатном буфере (рН 7,4). После этого образцы обезвоживали в абсолютном этаноле. Для наблюдения с помощью СЭМ обезвоженные образцы регидратировали изоамиловым спиртом и обработали золотым покрытием 300 Å с помощью устройства для ионного покрытия (Leica EM ACE600; Leica Microsystems, Вена, Австрия).

Просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ)

Для просвечивающей электронной микроскопии обработанные морфолином клетки фиксировали 2% глутаральдегидом-2% параформальдегидом в 0.1 М фосфатный буфер (pH 7,4). Они были постфиксированы 1% OsO 4 в 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,4) в течение 2 ч и обезвожены в возрастающей последовательности (50–100%) этанола и пропитаны пропиленоксидом. Образцы заливали с помощью набора Poly/Bed 812 (Polysciences Inc., Уоррингтон, Пенсильвания, США). После заливки образцы полимеризовали при 65 °C в печи для электронного микроскопа (TD-700; Dosaka EM, Киото, Япония) в течение 24 часов. Затем срезы толщиной 70 нм дважды окрашивали 6% уранилацетатом и цитратом свинца (Fisher Scientific, Рокфорд, Иллинойс, США) для контрастного окрашивания.Срезы вырезали на Leica EM UC-7 (Leica Microsystems) с помощью алмазного ножа и переносили на медные сетки. Все тонкие срезы наблюдали с помощью ПЭМ (JEM-1011; JEOL, Токио, Япония) при ускоряющем напряжении 80 кВ.

Анализ адгезии

Всего 5 × 10 6 Трофозоиты Giardia , обработанные контрольным морфолино или анти-Glγ-гиардин морфолино, культивировали в среде TYI-S-33. Через 48 ч культивирования культуральную среду удаляли для удаления неприкрепленных клеток и заменяли PBS.Пробирки инкубировали на льду в течение 20 минут для отделения прилипших клеток. Отделенные клетки собирали центрифугированием при 3000× об/мин в течение 15 мин при 4°C. Количество клеток на миллилитр определяли с помощью гемоцитометра.

В качестве контроля был проведен нокдаун экспрессии медианного связывающего белок G. lamblia (GlMBP; GiardiaDB ORF № GL50803_16343) [26] путем трансфекции анти-GlMBP морфолино (таблица 1) в трофозоиты G. lamblia . .Прилипание полученных трансфектантов также контролировали, как описано выше.

Определение популяции клеточной стадии и митотического индекса

трофозоитов G. lamblia

клеток Giardia , обработанных контролем или анти-Glγ-гиардином морфолино, окрашивали по Гимза, и процент клеток на разных стадиях, затем определяли интерфазу, митоз, цитокинез. Клетки наносили на предметные стекла, сушили на воздухе, а затем фиксировали 100% метанолом в течение 10 мин.Затем их окрашивали 10 % раствором Гимзы в течение 40 мин и промывали дистиллированной водой. После заливки ксилолом дибутилфталата (Sigma-Aldrich) предметные стекла исследовали с помощью микроскопа Axiovert 200 (Carl Zeiss).

Через 48 ч после обработки контрольным морфолино или анти-Glγ-гиардин морфолино определяли соотношение клеток с двумя ядрами к клеткам с четырьмя ядрами для мониторинга митоза, как описано ранее [27]. Фиксированные клетки помещали в среду VECTASHIELD против выцветания с DAPI (Vector Laboratories).Количество клеток с четырьмя ядрами или двумя ядрами подсчитывали в сумме более 300 клеток на каждое состояние.

In vitro Инцистация Giardi a трофозоитов

Для индукции инцистации in vitro трофозоиты переносили в среду для инцистации (среда TYI-S-33 с 10 мг/мл бычьей желчи, pH 7,8) [28]. В различные моменты времени после инкубации в среде для инцистирования клетки собирали центрифугированием при 3000× об/мин в течение 15 минут при 4°C.Внутриклеточные уровни Glγ-гиардина определяли с использованием антител против Glγ-гиардина. Для мониторинга процесса инцистации внутриклеточный уровень белка стенки кисты 1 (CWP1) [29] измеряли в собранных G. lamblia методом вестерн-блоттинга с использованием антител против GlCWP1 [30]. Количество GlPDI1 отслеживали в качестве контроля загрузки. Локализация Glγ-гиардина в инцистирующих клетках также наблюдалась с помощью IFA, как описано выше.

Статистический анализ

Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов.Чтобы определить статистическую значимость этих результатов, данные были проанализированы с использованием t-тестов для парных выборок. Различия со значениями P менее 0,05 считались значительными. На рисунках и в таблицах две звездочки обозначают P — значения менее 0,01, а одна звездочка указывает P — значения от 0,01 до 0,05.

Если на гельминтов: прописание, прием, правила проверки и анализа декодирования

Čak iu suvremenom svijetu rizik od infekcije helmintom ostaje izuzetno visok.Razlog tome je nedovoljna toplinska obrada hrane, nepoštivanje higijenskih pravila, čest kontakt s domaćim životinjama, итд. Crvi или Crvi su paraziti koji tijekom vitalne aktivnosti u tijelu mogu izazvati razvoj ozbiljnih patologija koje su opasne ne samo za zdravlje, već i za lyudski život. Trenutno postoji nekoliko metoda otkrivanja invazije. Наиинформативный иммунологический тест (ИФА) на гельминты.

Суштинский метод

Припада лабораторной истраживачкой скупины. Njegova suština leži u identifikaciji Proteinskih zastitnih factora (antijela) na patogene microorganizme (антиген).Nastaju kada patogeni agensi uđu u tijelo, kada imunološki sustav pokreće proces neurogumoralnih reakcija.

Специфическая антийела се производитель против сваке против црва. Zatim se vežu на антиген, творечи neku vrstu complexa. Nakon toga se ovaj spoj нейтрализа и izlučuje iz tijela. Informacije о Тим или други complexima pomažu у određivanju vrste patogena i čine najučinkovitiji режим liječenja za pacijenta. U medicini najveći imunološki значай imunoglobulini IgM, IgG, IgA.

свинец

ИФА-тест на обнаружение гельминтов, а также особую инвазию на гельминтозы. Sljedeći znakovi smatraju se uznemirujućim:

  1. Болови у трбуху. Međutim, njihova priroda i lokalizacija mogu biti različiti.
  2. Svrbež u području analnog otvora. U pravilu, njegova se ozbiljnost povećava noću.
  3. Слабость у мишичного tkivu i zglobovima.
  4. Губитак или, против, повечанье аппетита. У потонем случай, особа има прекомьерну производню линию.
  5. Честе эпизод пролива или, обратно, констипация.
  6. Boja mijenja fekalne mase.
  7. Стальные апатии.
  8. Вртоглавица.
  9. Бледило кожи.
  10. Поремечай спаваня
  11. Эмоциональная нестабильность.
  12. Осип на коже.
  13. Эпизод недержания мочи.
  14. Повреждение менструального цикла.

Ako ELISA detektira prisutnost helmintske invazije u tijelu, osoba će se morati posavjetovati s liječnikom i proći liječenje.U većini slučajeva prognoza je povoljna.

Što omogućuje otkrivanje

Помочь энзимному иммунологическому тесту, который может идентифицировать патогенные микроорганизмы:

  1. Острицы (обеспечивают свою жизнь у танком криеву).
  2. Аскарида (личинка паразита может убить на лету и плються).
  3. Трихинелла (живи у танком криеву).
  4. Goveđa pantljičara (u tijelo ulazi nedovoljno obrađenom ribom i mesom).
  5. Эхинококк (извор на яйце).
  6. Свиньска тракавица (проводи свое животное у глаз, серку и мозг).
  7. Альвеококк (большая инфекция, которая может привести к летальному исходу).
  8. Giardia (zaraziti žuč, gušteraču i debelo crijevo).
  9. Токсокара.

Stoga je ELISA za helminte moderna dijagnostička metoda, pomoću koje je moguće otkriti helmintsku invaziju.

тренинг

Da bi rezultati analize bili što je moguće informativniji, potrebno je neko vrijeme prije isporuke biomaterijala slijediti dolje navedene preporuke.

  1. Tijekom 24 sata morate isključiti lijekove. Ako to nije moguće iz zdravstvenih razloga, važno je obavijestiti liječnika. Osim toga, tijekom tog vremena potrebno je napustiti uporabu napitaka koji sadrže alkohol. Iz menija morate isključiti dimljena i pržena jela, kao i hranu koja sadrži velike količine šećera.
  2. ELISA-тест на крвне жиле се изводи само под руководством да е болесник биоматериала узимао на празан желудац. Prije studije nije preporučljivo jesti hranu i razna pica 8 sati.

Ako je osoba odgovorno udovoljila svim pravilima pripreme, ELISA test za helmente će biti što je moguće pouzdaniji, tj. Studija će omogućiti identifikaciju invazije crva u bilo kojoj fazi njegova razvoja.

Алгоритм узоркованья биоматериала

Tijekom darivanja krvi osoba može sjediti ili ležati. Ako je subject u emocionalnoj napetosti, preporuča se odgoditi postupak za 10-15 minuta. У овом временном раздоблю особа се мора смирити. Ta je potreba posljedica činjenice da biti u stresnoj situaciji može utjecati na rezultate istraživanja.

ELISA analiza za helminte uključuje prikupljanje venske krvi. U tu svrhu u pravilu se koriste sljedeće posude: laktarska, radijalna, srednja i vanjska površina. Код люди с prekomjernom tjelesnom težinom, vene su često nevidljive. U takvim situacijama krv se uzima iz žila koje se nalaze na stražnjoj strani šake.

Након одабира Вене, специалист наставля с поступком.

  1. Pletenica se stavlja na pacijentovo rame. Nakon toga, osobi se preporuča da nekoliko puta stisne i otvori šaku.Posude su ispunjene krvlju, tako da liječnik može odabrati venu iz koje će biti uzeta krv.
  2. Mjesto navodne punkcije liječi se alkoholnim maramicama. Nakon toga krvna žila prestaje biti opipljiva.
  3. Liječnik umetne iglu u venu oko trećine svog lumena. Nakon toga uklanja pojas.
  4. Cim se štrcaljka napuni dovoljnom coličinom biomaterijala, igla se ukloni. Nekoliko sekundi prije toga liječnik bi trebao pritisnuti mjesto uboda с антисептиками tretiranim tkivom.
  5. Пасиент Мора Савити Руку.Važno je pritisnuti ubrus na kožu kako bi se izbjeglo stvaranje modrica.

Uzimanje uzoraka venske krvi za ELISA testove helminta je siguran postupak, ali pod uvjetom da liječnik poštuje sva pravila i propise. U nekim slucajevima može doći do complikacija.

Značajke zahvata kod djece

Ако je потребно uzeti krv od djeteta, родитель moraju преузети odgovornost za pripremu. Dan prije uzorkovanja biomaterijala, isključite masne i pržene namirnice, kao i slatkiše iz dječjeg jelovnika.Djeci prve godine života je dopušteno da ne jedu 4 sata. Starije dijete već je u stanju dati krv na prazan želudac, nakon što je zadržalo 8 sati. Dopušteno je piti čistu negaziranu vodu, preporučljivo je uzdržavati se od sokova i kompota.

Vrlo je važno psihološki prilagoditi dijete. Uzimanje krvi kod djece provodi se iz kubitalne vene или iz posude smještene na stražnjoj strani šake. Nema potrebe uvjeriti dijete да je postupak bezbolan. Bolje je usredotočiti se na činjenicu да će se nakon brze процедуры dijete poticati у obliku igračaka, slatkiša я zabave.

Тумаченные результаты

Dešifranje ELISA analyze za gelminte obavlja terapeut, pedijatar или specijalista za zarazne bolesti Liječnik proučava zaključak izdan u Laboratoriju i, ako je potrebno, čini učinkovit tretman.

Tumačenje Результат ИФА на гельминтов:

  1. Лямблии. Rezultat manji от 1, 0 znači da nema napada crva. Vrijednost od 1, 0 или više ukazuje na prisutnost parazita u tijelu.
  2. Аскариды. Rezultat manji od 0, 85 smatra se negativnim, više od 1, 15 je positivno.Srednja vrijednost je upitna, tj. Морат поновно донирать крв за ИФА на присутствие крва.
  3. Трихинелла. Pravila su ista kao u slučaju ascarisa.

U odnosu na gore navedene i other vrste helminta, također se primjenjuje specifikacija klase detektiranih antitijela.

Результат декодирования:

  1. IgM “-“, IgG “-“, IgA “-“. Svi pokazatelji su negativni. To znači da nema immuniteta na infekciju.
  2. IgM “-“, IgG “+”, IgA “-“. Ови результаты указывают на присутсвие постинфекционног иммунитета.
  3. IgM “+”, IgG “+/-“, IgA “+/-“. Prisutnost akutnog infektivnog procesa u tijelu.
  4. IgM “+”, IgG “+”, IgA “+”. Rezultat ukazuje na pogoršanje postojeće infekcije.
  5. IgM “-“, IgG “+/-“, IgA “+/-“. Присутствие хронической инфекции.
  6. IgM “-“. Ovaj rezultat ukazuje na potpuni oporavak.

Применение метода ELISA, источник может выявить вероятность заражения црва чак иу найранийой фази развития. Kada se otkriju paraziti, stručnjak čini najučinkovitiji režim liječenja.

Što učiniti ako se otkriju helminti

Invazija crva zahtijeva integrirani pristup terapiji. Liječenje se sastoji od 3 faze. Prvi je pripremni. Чтобы исключить dijetu. Podešavanje prehrane je potrebno kako bi se smanjilo opterećenje probavnog trakta. Pacijent bi trebao isključiti iz izbornika masne, pržene, dimljene, slane i pikantne jela. Osim toga, tijekom tog razdoblja prikazan je i prijem kelatora.

Другая фаза сама терапия. Дегельминтизация является ключом к узиманию личинок, которые су активне твари способны уничтожить паразитов.Lijekovi mogu biti uski или siroki spectri. Proizvode se u obliku суспензия и таблетка. Наиболее популярные лекарства прописывают следующие препараты: Пирантел, Немозол, Альбендазол, Левамизол, Макмирор.

Завршна фаза восстановительная. Чтобы исключить провоцирование активности усмерених на нормализацию рада органов и сустава кожи су погодени гельминтима. У овой фазы назначены гепатопротекторы, желчегонные ликеры, витамины, сорбенаты.

Где прочи?

Приобретение биоматериала для анализа проводов се у явным и частным здравоохранением установлено.Da biste razjasnili informacije o dostopnosti ove usluge, morate se izravno obratiti registru.

Трошак от

Cijena analyse ovisi o regiji i politici zdravstvene ustanove. U klinici u mjestu prebivališta, krv se može besplatno darivati ​​ako imate polisu osiguranja. У частного установама, trošak analize za jednu vrstu parazita je, u prosjeku, 250 рубаля. Стандартный ИФА тест на гельминты (4 показателя: лямблии, аскариды, токсокары, острицы) цена около 1000 руб. Cijena proširene analyze je oko 2500 rubalja.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.