Как хранить кал: Правила сбора кала

Содержание

Где хранить кал на анализ до утра: рекомендации специалистов

Нам, пожалуй, и в голову не приходит, что результат анализа кала может зависеть от условий хранения этого биологического материала. Оказывается, существует и такая «тонкость», как цель, которую преследует процесс анализа. Поэтому, прежде чем говорить о допустимости и возможности хранения кала в бытовом холодильнике, стоит узнать, для чего назначен такой анализ.

ВАЖНО

Специалисты консультируют: при малейшей возможности кал на анализ лучше принести, опорожнив кишечник утром: свежий «образец» позволит извлечь из него максимум необходимых сведений.

Какие бывают виды анализа?

Обычный пациент знает, что «классический» анализ, который всегда назначается при обследованиях, особенно детям, – на яйца глистов. Но он не единственный.

  • Копрограммой называется процесс комплексного исследования различных характеристик фекалий: микроскопических, физических, химических, что позволяет выявить сбои в функционировании как желудочно-кишечного тракта, так и эндокринных желез.
  • Исследуя кишечную флору, есть возможность выявить дисбактериоз – отсутствие полезных микроорганизмов в кишечнике.
  • Вот здесь мы и подошли к «яйцеглистному» анализу, с помощью которого определяется наличие в кале некоторых видов глистов.
  • Еще один вид является тестированием наличия скрытой крови, которое проводится в случае подозрения на невидимые внутренние кровотечения из любого участка ЖКТ, которые могут протекать бессимптомно и выявиться лишь при исследовании.

В некоторых из указанных видов для установления правильной картины заболевания совершенно недопустимо хранение пробы в течение ночи, а есть такие, которые можно выполнять и в охлажденном виде.

Как собрать кал на анализ

Клинические лаборанты разработали рекомендации по, казалось бы, такому простому процессу. Согласно правилам, биоматериал, предназначенный для анализа, не должен «ускоряться» при помощи клизм. Их запрещено делать за трое суток до сбора кала. За такое же время нельзя принимать медикаменты, особенно слабительные средства и сорбенты.

Накануне сбора кала рекомендуется сделать дневное меню овощным и кисломолочным.

ОБРАТИТЬ ВНИМАНИЕ

Если получено направление на сдачу анализа, чтобы выявить скрытую кровь, железосодержащие продукты должны быть ограничены в потреблении.

Результат анализа будет наиболее точным, если придерживаться таких рекомендаций:

  • каловую пробу для анализа следует собирать, лишь предварительно помочившись. Попавшая в образец моча может исказить результат.
  • Перед процессом сбора необходимо подмыться теплой водичкой с мылом.
  • Дефекацию проводят над сухим чистым сосудом, переместив часть образца в стерильный контейнер, продаваемый в аптеках в комплекте со стерильной же пластиковой ложечкой.
  • Если биоматериал собирается у грудных младенцев, взять образец допускается прямо с пеленки.

Можно ли собрать образцы накануне?

Этот вид сбора хоть и практикуется довольно активно, но подходит лишь для выявления некоторых глистов. Если образец надо принести в лабораторию к восьми утра, то собрать его надо не раньше, чем в восемь вечера накануне, поскольку в течение суток никакие биоматериалы хранить нельзя, максимум – восемь часов. В противном случае в них произойдет изменение химического состава, погибают и разлагаются и сами гельминты и их яйца, т.е. нарушается и, соответственно, искажается биологическая картина возможных происходящих в организме процессов.

Что касается материала, собранного для «дисбактериозного» анализа, то его собирают исключительно утром и сразу же отправляют по месту назначения, поскольку он должен быть максимально свежим: не всем бактериям нравится продолжительное хранение. В исключительных случаях, чтобы определить состояние кишечной микрофлоры, собранный для анализа образец допускается хранить в холоде (холодильник, пакет со льдом) не больше шести часов. И уж совершенно недопустимо его замораживание.

Взрослый и ребенок: как хранить биоматериал?

Отследить акт дефекации у детей обычно довольно сложно в силу его непредсказуемости. Но если повезло собрать образец утром, надо немедленно отправить его на исследование. Это должно произойти в течение первых трех часов.

Если фекалии малыша собраны вечером накануне исследования, их можно оставить в холодильнике на ночь, но чтобы в общем итоге время нахождения биоматериала не превышало восьми часов, иначе результат будет безуспешным.

Кал взрослого допустимо хранить около трех часов, а находящийся в холодильном агрегате – даже до двух суток. Идеальный же срок для сдачи в клиническую лабораторию после сбора – не больше восьми часов, включая время на дорогу (если добираться до поликлиники далеко).

Сосуд с образцом биологического материала рекомендуется поместить на полочку холодильника, расположенную посередине, – именно здесь оптимальная температура для хранения. Боковые, верхние или самые нижние полки для этого не годятся.

Иногда возникает вопрос, можно ли хранить фекалии, собранные для анализа, в морозилке. Многие эксперты не советуют так поступать из-за того, что после замораживания кал может потерять все свои биологические качества и стать непригодным для анализа.

Однако есть и такая точка зрения, что некоторые методы диагностики допускают заморозку образца. В любом случае это стоит выяснить или у врача, выдающего направление, либо непосредственно обратиться к лаборанту.

Сдавая емкость с биоматериалом лаборанту, следует указать возраст человека, а также коротко описать стул – жидкий, обычный или же твердый.

Когда ответ на анализ может быть недостоверным?

Понятно, что если проигнорировать правила сбора и хранения биоматериала, диагностическая ценность процедуры лабораторного анализа будет или снижена, или вообще утрачена. Какие же ошибки в ходе этих действий наиболее распространены?

  • Емкость для сбора кала может быть загрязненной, содержать примеси мочи, крови или моющих веществ;
  • более чем 10-часовое хранение каловых масс вне холодильника;
  • транспортировка биоматериала в лабораторию без термосумки при температуре воздуха ниже нуля или, наоборот, выше +20°;
  • образец взят не с разных «участков» каловых масс, а лишь с одного;
  • кал взят не с подготовленной чистой емкости, а с поверхности унитаза.

Эти тонкости – по большому счету азбучные истины, которые необходимо учитывать и строго выполнять, чтобы не пришлось заново повторять весь процесс.

Доставляем в лабораторию

Как уже отмечалось, утренний кал требуется привезти в лабораторию по возможности скорее. Самым лучшим способом доставить емкость с биоматериалом является контейнер, термопакет или термосумка. В случае их отсутствия сосуд с образцом оборачивают в несколько слоев бумаги и укутывают в какую-нибудь плотную ткань типа полотенца. Таким образом, до своевременной сдачи на анализ «высвобождается» 2-3 часа.

Некоторые лаборатории имеют в своем штате курьеров: можно воспользоваться их услугами.

Исследование кала на яйца гельминтов

№ 2102 Исследование кала на яйца гельминтов с обогощением методом PARASEP

Как правильно подготовиться к исследованию:

  • В течение 72 часов до сбора кала исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонны, пилокарпина и др.) и на окраску кала (железа, висмута, сернокислого бария).

Сбор материала:

  • Сбор фекалий осуществить так, чтобы они не попали в воду. Желательно собрать в чистое, сухое судно, либо закрыть унитаз пленкой так, чтобы кал оказался на пленке.

  • Моча не  должна попасть в кал (предварительно помочится в унитаз)!

  • Сбор кала для анализа проводят шпателем из разных участков каловых масс (сверху, с боков, изнутри) в специальный пластиковый контейнер. Заполнять контейнер надо примерно на 30% (~2 чайные ложки). Контейнер плотно закрыть.

  • Материал для анализа необходимо доставить в лабораторию в день сбора. Кал настоятельно рекомендуется сдавать «свежим». Если вы по каким-то причинам не успеваете отнести кал в лабораторию, вы можете хранить кал в плотно закрытом контейнере не более 5-8 часов в холодильнике при температуре +3ºС – +5ºС. Однако хранение может отрицательно повлиять на результаты анализов.

  • Учитывая цикл развития многих гельминтов, для того чтобы получить наиболее достоверные результаты, необходимо провести 2-4 анализа кала на яйца гельминтов с перерывами в несколько дней.

  • Доставить контейнер в процедурный кабинет ООО «Меддиагностика» согласно времени приёма биоматериала соответствующего процедурного кабинета.

Помните, что получение достоверных результатов предполагает правильный сбор материала для анализа.

Дополнительную информацию по исследованиям вы можете получить по телефонам: 77-01-22, 24-10-55.

Исследования кала – VMC Verte medical clinic

Правила забора анализа кала на дисбактериоз кишечника

  1. Не принимать активированный уголь, др. сорбенты, биопрепараты. Брать материал на анализ до начала антибактериального лечения, либо через 2-3 недели после отмены этих препаратов.
  2. Отбор материала производят в день сдачи анализа. Доставить в лабораторию в течении 2-х часов. В особых случаях (при длительных запорах) отбор можно произвести вечером (накануне), в этом случае флакон с калом хранить в холодильнике.
  3. Заранее подготавливают горшок – тщательно моют с хозяйственным мылом, обрабатывают кипятком, остужают.
  4. Материал для анализа забирают стерильной палочкой из разных мест в количестве 2-3гр в специальный флакон (2-3 полные лопаточки).

Лабораторная диагностика простейших (лямблиоз, балантиоз, амёбиоз) ( не замораживать!!!)

  1. Рекомендуется в течение 5 дней до момента сдачи кала принимать желчегонный сбор № 3 (по инструкции на упаковке).
  2. Доставка кала в течение 2 часов после сбора.
  3. В последующем, при отрицательном результате анализа, кал сдаётся ещё дважды, с интервалом в 5 дней (также с приёмом желчегонного сбора).

Кал на скрытую кровь ( не замораживать !!!)

Сбор материала. Кал доставляют для исследования в количестве 30 гр., свежевыделенным, в чистой сухой стеклянной посуде. Неправильно и негигиенично собирать кал в спичечные коробки, бумагу, пузырьки и другую неудобную посуду. Кал не должен содержать посторонних примесей, например, мочи.

Диета: Запрещается принимать сырое и мало вареное мясо, колбасу, продукты содержащие кровь, бананы, листовые овощи, помидоры, редис, хрен, кольраби. Рекомендуется принимать пищу, содержащую фрукты, овощи и черный хлеб. Также запрещается принимать лекарства, содержащие Витамин С, Аспирин, Кетазон. Исследование нельзя проводить пациентам, страдающим диареей, и женщинам во время менструации.

Копрограмма ( не замораживать !!!)

До начала сбора материала необходимо помочиться в унитаз. Затем поместить кал ложечкой в чистый контейнер, который необходимо накануне взять в лаборатории. Необходимое количество – не более 1/3 объема контейнера. Как можно скорее доставьте материал в лабораторию.

Правила забора кала на панкреатическую эластазу I, опухолевую М-2 пируваткиназу, Helikobacter pylori.

До начала сбора материала необходимо помочиться в унитаз. Затем поместить кал ложечкой в чистый контейнер, который необходимо накануне взять в лаборатории. Необходимое количество – не более 1/3 объема контейнера. Как можно скорее доставьте материал в лабораторию.

Соскоб на энтеробиоз ( использовать специальный контейнер!!!)

Взятие материала должно производиться утром до дефекации и проведения туалета половых органов. Специальной липкой палочкой, сделать соскоб с поверхности перианальных складок. Палочку поместить в пластиковую пробирку и плотно закрыть крышкой.

с вечера перед сдачей на яйцеглист, как и где лучше хранить

Содержание статьи

Собрать мочу для анализа гораздо проще кала. Даже взрослый человек не может подстроить организм под нужно время. Сложнее с детьми, особенно грудничками. Приходится целый день отслеживать, чтобы завтра с утра сдать баночку с содержимым.

Выясним, сколько можно хранить кал для анализа на гельминтоз, скрытую кровь, лямблии, прочие заболевания. Почему не стоит замораживать?

Как правильно хранить кал для анализа

Большое значение имеет используемая тара. Нельзя использовать первые попавшиеся пузырьки. Рекомендуем приобрести специальный стерильный контейнер. Емкость идет с лопаткой для сбора. Продаются контейнеры в аптеках, магазинах. Лаборатории, медицинские учреждения могут выдавать исключительно свои баночки, пробирки. Вопрос заранее обсуждается с врачом.

Подходящая тара:

  • лабораторные емкости;
  • специальные контейнеры;
  • стеклянные банки, пузырьки.

Не подходят:

  • спичечные коробки;
  • полиэтиленовые пакеты;
  • бумага;
  • фольга.

Когда вы сдаете анализы в лабораторию?

В течение дняНа следующий день

Допускается использование домашней банки. Рекомендуем вымыть содой, провести стерилизацию паром, кипятком, обработать крышку. Важно проверить надежность. Содержимое не должно подвергаться воздействию кислорода, влаги. Выбирают миниатюрные емкости. Заполняют треть тары, сразу герметично закрывают.

Кал для анализа на яйцеглист можно хранить до 8 часов в условиях холодильника. На скрытую кровь нельзя хранить более четырех часов. На дисбактериоз, наличие лямблий биоматериал хранению не подлежит. Необходимо доставить в течение двух часов.

Можно ли хранить кал в холодильнике для анализа

Единственное правильное место — холодильник. Оптимальная температура от +4 до +8 градусов. При таком хранении анализ покажет реальную картину. Наличие микроорганизмов, их количество не изменится в течение длительного времени. Допускается временно хранить на балконе при подходящем температурном режиме.

При минусовой температуре микроорганизмы погибают. В морозильную камеру отправлять кал нельзя.

Где нужно хранить анализ кала до утра с вечера

Исключительно в холодильной камере. Рекомендуем сразу отправить контейнер после сбора. Желательно выбирать специальные стерильные емкости.

Как хранить кал для анализа с вечера:

  1. Биоматериал должен собираться естественным путем. Нельзя применять клизмы, слабительные препараты трое суток. Запрещено вставлять глицериновые свечи. Все это искажает результат;
  2. Кал сразу перекладывается в стерильную емкость. Недопустимо использовать грязную тару, посуду большого размера.
  3. Необходимо плотно завинчивать крышку. Спичечные коробки — прошлый век. Используется исключительно герметичная емкость.
  4. Рекомендуем ставить баночку на среднюю полку. Прочие продукты убрать дальше. Отсеки в дверце холодильника, где хранится раствор для линз, марганцовка, йод, не подходят.

Желательно защитить емкость от солнечного света. Баночку можно обернуть темным пакетом. Поместить в другую посуду. Она поможет надежно запереть запах внутри. Другой важный момент — содержимое не испугает домочадцев.

Можно ли кал на анализы собрать с вечера

Вечерний сбор активно практикуется. Только подходит для единичных видов диагностики — определения некоторых гельминтов. При сборе заранее желательно выбирать позднее вечернее время. Для доставки к 8 утра необходимо собрать не ранее 20.00.

Большинство методов позволяют получить правильный результат исключительно на свежем биоматериале. Несоблюдение сроков хранения искажает картину.

Хранить сутки никакой биоматериал нельзя. Максимальный срок 8 часов. Далее меняется химический состав, яйца, глисты погибают, разлагаются.

Особенности хранения анализа кала в холодильнике

Идеальный вариант — сразу отправить биоматериал в лабораторию. Не всегда получается это сделать. В большинстве городов приемное отделение работает только днем, иногда до обеда. Поэтому приходится сдачу откладывать. Сколько можно хранить анализ кала перед сдачей дома в холодильнике, напрямую зависит от вида диагностики.

Перед сдачей

Допускается держать при комнатной температуре до 180 минут. Только многое зависит от вида анализа. Для обнаружения лямлий, диагностики дисбактериоза кал необходимо доставить в лабораторию в минимальные сроки. Максимум 120 минут. Даже хранить в холодильной камере дольше нельзя.

Не получилось отвезти материал сразу? Рекомендуем честно признаться врачу, перенести срок сдачи. Результат будет искаженным, лаборатория затратит материалы для проведения анализа, сотрудники время. В проигрыше останутся все.

На яйцеглист

Анализ на яйцеглист сдается для лечения, профилактики гельминтоза. Зачастую приходят искаженные результаты. Причина — несоблюдение сроков. Многих людей интересует вопрос — сколько вообще можно хранить кал для анализа на яйцеглист в холодильнике? Ответ — не более 8 часов. Аналогичное время для проведения копрограммы.

Сколько можно хранить кал перед сдачей анализов

Срок годности может достигать полусуток. Следует сюда включить время доставки биоматериала до лаборатории. Сохранять дольше нельзя.

На скрытую кровь

По анализу биоматериалов определяют внутренние кровотечения в нижнем отделе кишечника, желудке, пищеводе, тонкой кишке. Просто собрать кал — недостаточно. Перед процедурой больной человек придерживается специальной диеты. Она начинается за три дня до процедуры. Рацион корректируется согласно рекомендациям врача. Исключаются мясные, рыбные продукты, алкоголь, зеленые овощи.

Тщательная подготовка требует времени, сил, поэтому промахи исключают. Важно собрать кал к нужной дате, доставить в течение четырех часов. Далее происходят внутренние изменения. Результат проверки искажается. Временно после сбора тару следует хранить в холодильной камере.

Перед актом дефекации необходимо опорожнить мочевой пузырь. Жидкость не должна попадать в каловую массу.

Ребенка и взрослого человека

Сроки хранения биоматериалов людей разного возраста совпадают. Гораздо сложнее подготовить сырье для анализа ребенка. Зачастую специалисты не находят присутствующих гельминтов, дисбактериоз. Поэтому назначается несколько процедур подряд с периодичностью 5-10 дней.

Основные моменты:

  • детский горшок необходимо обработать дезинфицирующими средствами;
  • важно, чтобы ребенок предварительно опорожнил мочевой пузырь;
  • кал грудничков собирают с подгузника, пеленки. Предварительно требуется подмыть ребенка. Для ускорения процесса рекомендуем сделать массаж нижнего отдела живота;
  • для сбора желательно отобрать порцию с трех разных точек. Они не должны касаться поверхности горшка, унитаза, белья;
  • запрещено ставить клизму, давать ребенку чернослив, прочие слабительные продукты, препараты.

Женщинам во время менструации кал сдавать нельзя. Следует подождать несколько дней после окончания. Запрещено проводить исследования после лечения антибиотиками. Должна пройти минимум одна неделя.

Кал нежелательно хранить. Рекомендуем сразу отправить материал на исследование. Достоверность проведенного анализа будет значительно выше. При сборе вечером необходимо сразу поместить в холодильную камеру. Не забывайте правила сбора, используйте исключительно стерильную, сухую тару.

Предыдущая

РазноеКак дольше сохранить новогоднюю елку дома

Следующая

РазноеХранение и срок годности мочи для сдачи

Как собрать кал и мочу животного для анализов

Часто для постановки диагноза вашей собаке или кошке ветеринарный врач назначает сдачу анализа мочи и/или кала. Получив направление на анализ, вы направляетесь домой озадаченным: как же собрать эти продукты жизнедеятельности организма домашнего любимца? Мы попробуем помочь вам разрешить этот вопрос!

Как собрать мочу у собаки

Для проведения лабораторных исследований лучше всего собирать мочу собаки утром, во время первого выгула.

Чтобы собрать мочу собаки для анализа надо во время мочеиспускания подставить под струю чистую посуду: банку, обрезанную на половину пластиковую бутылку, неглубокую миску и т.п. Посуду для сбора мочи надо предварительно помыть хозяйственным мылом и обдать кипятком. Внимание! Не используйте средства для мытья посуды (Fairy и др.), так как входящие в их состав химические элементы плохо смываются, и анализ может получиться недостоверным.

Собранную мочу аккуратно перелейте в заранее взятый в ветеринарной клинике стерильный контейнер для анализов. Аналогичный контейнер можно приобрести в «человеческой» аптеке. Также в качестве сосуда для анализа может быть использован шприц объемом 20 мл. Количество мочи, необходимое для проведения лабораторного исследования должно быть более 10 мл.

Моча не может храниться долго, даже в холодильнике – не более 6-ти часов. Поэтому планируйте сбор мочи для анализов с учетом того, что материал для лабораторного исследования нужно будет сразу же отвезти в ветеринарную клинику.

Как собрать кал у собаки

На первую утреннюю прогулку возьмите с собой заранее полученный в ветеринарной клинике контейнер для кала со стерильной палочкой или аналогичный, приобретенный в аптеке.

После дефекации животного, используя палочку, аккуратно соберите несколько кусочков испражнений так, чтобы посторонние примеси (земля, песок, трава, снег и т.п.) не попали в контейнер.

Кал должен быть доставлен в лабораторию не позднее, чем 12 ч после дефекации, хранить до исследования в холодильнике. Для исследования кала на наличие простейших (вегетативные формы) материал необходимо доставить не позднее 30 минут после дефекации (позднее вегетативные формы погибают). Для обнаружения цист срок доставки увеличивается до 24 часов.

Противопоказания для сдачи анализа:
1. Прием слабительных средств, в том числе вазелиновых масел
2. Прием активированного угля
3. После клизм и рентгенологического исследования желудка и кишечника

Кал на дисбактериоз (количественноее исследование) – кал 2-3 грамма в контейнере для кала, заливается стерильным физраствором до полного покрытия.

Как собрать мочу у кошки

Уберите наполнитель из кошачьего туалета. Тщательно помойте лоток хозяйственным мылом и обдайте его кипятком. Внимание! Не используйте средства для мытья посуды (Fairy и др.), так как входящие в их состав химические элементы плохо смываются, и анализ может получиться недостоверным. А теперь придется набраться терпения и караулить мурлыку, пока она не сходит в туалет.

Некоторые кошки категорически отказываются посещать лоток без наполнителя. Если ваша киса такая, то попробуйте взять кусок плотного чистого полиэтилена, полностью застелить им наполнитель. И… опять в «засаду».

Можно приобрести лоток с сеткой и попробовать предложить его кошке в качестве временного туалета.

Собранную мочу аккуратно перелейте в заранее взятый в ветеринарной клинике стерильный контейнер для анализов. Аналогичный контейнер можно приобрести в «человеческой» аптеке. Также в качестве сосуда для анализа может быть использован шприц объемом 20 мл. Количество мочи, необходимое для проведения лабораторного исследования должно быть более 10 мл.

Если материал для исследования самостоятельно собрать все же не удалось, то надо обратиться за помощью в ветеринарную клинику, где для сбора материала проведут пункцию мочевого пузыря. Процедура малотравматичная, делается ветеринарным врачом при наполненном мочевом пузыре, в положении животного лёжа на спине, по белой линии живота, в районе чуть ниже пупка, шприцом 10-20 мл с иглой 0,8. Такой метод забора исследуемого материала особенно необходим для проведения бактериологического исследования мочи.

Катетеризация мочевого пузыря могут быть использована только в крайних случаях.

Моча не может храниться долго, даже в холодильнике – не более 6-ти часов. Поэтому планируйте сбор мочи для анализов с учетом того, что материал для лабораторного исследования нужно будет сразу же отвезти в ветеринарную клинику.

Как собрать кал у кошки

Заранее возьмите в ветеринарной клинике контейнер для кала со стерильной палочкой или приобретите аналогичный в «человеческой» аптеке.

После дефекации животного, используя палочку, аккуратно соберите несколько кусочков испражнений так, чтобы посторонние примеси (в т.ч. наполнитель) не попали в контейнер.

Кал должен быть доставлен в лабораторию не позднее, чем 12 ч после дефекации, хранить до исследования в холодильнике. Для исследования кала на наличие простейших (вегетативные формы) материал необходимо доставить не позднее 30 минут после дефекации (позднее вегетативные формы погибают). Для обнаружения цист срок доставки увеличивается до 24 часов.

Противопоказания для сдачи анализа:
1. Прием слабительных средств, в том числе вазелиновых масел
2. Прием активированного угля
3. После клизм и рентгенологического исследования желудка и кишечника

Кал на дисбактериоз (количественноее исследование) – кал 2-3 грамма в контейнере для кала, заливается стерильным физраствором до полного покрытия.

как хранить анализ кала до утра — 25 рекомендаций на Babyblog.ru

Сразу после выписки из роддома вы не могли нарадоваться на своего малыша: такой спокойный, веселый, гладенький. Он подолгу спал и с аппетитом ел, а стул у него по запаху и консистенции напоминал густую сметанку. Но неожиданно стул испортился, стал водянистым, зеленым и пенистым, в нем появились кусочки слизи или кровяные прожилки. Даже с кожей творится что-то неладное: сначала появилась краснота вокруг ануса, но уже через пару дней вся попка покрылась какой-то коростой и стала напоминать ошпаренный помидор. Да и сосать стал плохо: уже через пару секунд начинает извиваться, плакать, отказывается от груди. Что же случилось? Скорее всего, у вашего крохи дисбактериоз.

Ребенок рождается со стерильным кишечником, в котором отсутствуют какие-либо бактерии. Но, уже проходя по родовым путям, он начинает собирать мамину флору. В течение первых десяти дней его кишечник заселяется бифидум, лакто и колибактериями. А затем, в течение полугода эта флора совершенствуется и нарастает.

Бифидумбактерии вырабатывают молочную кислоту, которая создает в кишечнике кислую среду, защищающую от микробов и помогающую выработке витаминов некоторых групп: группа В (B1 влияет на нервную систему, сердце, мышцы, В3 регулирует клеточное дыхание, В6 – обмен аминокислот и жирных кислот, В12 – синтез белка), К (влияет на свертываемость крови), С (формирует иммунитет), и D (способствует усвоению кальция и фосфора, дефицит этого витамина приводит к рахиту).

Лактобактерии защищают кишечник от патогенной флоры и вирусов

Колибактерии (кишечные палочки) вырабатывают ферменты, помогающие переваривать, расщеплять и всасывать пищу.

Нетрудно заметить, что отсутствие или недостаток даже одного из видов бактерий приводит не только к расстройству работы кишечника, но и к нарушению иммунитета, обмена веществ, рахиту. Если у ребенка запущенный дисбактериоз, то к трем месяцам, сколько бы вы не давали ему витамина D, рахит практически неизбежен, потому что нарушается всасывание.

Поэтому так важно постараться не допустить дисбактериоза. Прежде всего, маме нужно проводить профилактику во время беременности. а лучше еще до ее наступления. Если у мамы перед родами было какое-нибудь влагалищное заболевание: молочница или какое-то другое нарушение флоры половых путей, то ребенок, кроме нормальной флоры получит и патологическую, и к концу десятых суток у него будет дисбактериоз.

Чтобы этого не произошло, о состоянии половых путей нужно начинать заботиться с первых месяцев беременности. Если обнаружили молочницу – лечите молочницу, если плохие вагинальные мазки – ставите свечи с лактобактерином, а недели за 2-3 до родов сдаете повторные мазки. За месяц до родов стоит почистить кишечник.

Если ребеночек не рожден кесаревым сечением, дисбактериоз, как правило, никогда не является первичным заболеванием. Он развивается на фоне какого-то основного заболевания, например, воспаления кишечника или ферментной патологии, если у малыша недостаточно развиты ферментные системы.

Сейчас у детей уже в первые месяцы жизни часто бывает лактазная недостаточность: фермент лактаза, которая переваривает молочный сахар, не вырабатывается в нужном количестве. Если уровень лактазы в норме, при переваривании молока должна выделяться молочная кислота, при этом в желудке создается кислая среда. При лактазной недостаточности молоко разлагается, выделяя при этом продукты брожения. Среда кишечника из кислой превращается в щелочную, и в ней активно размножаются патогенные микробы. Если после каждого кормления или между кормлениями у ребенка несколько раз бывает жидкий, обильный пенистый стул с большим количеством жидкости и при этом малыш плохо прибавляет в весе, необходимо срочно сдать анализ на копрологию, чтобы выявить лактазную недостаточность и как можно скорее начать лечение, пока у ребенка не начался дисбактериоз.

Часто дисбактериоз развивается из-за непереносимости белков коровьего молока. Обычно кормящим женщинам рекомендуют есть вволю молочных продуктов и пить побольше молока. Но случается, что, кишечник ребенка не усваивает белки коровьего молока, у него появляются симптомы, похожие на аллергию: кожа на щечках, вокруг ануса, на коленях и локтях краснеет, становится сухой и шершавой. И чем больше мама ест молочных продуктов, тем сильнее эти признаки выражены. То же самое происходит и с кишечником: его поверхность раздражается, воспаляется, и на нее садятся болезнетворные микробы, которые активно размножаются, вытесняя нормальную флору.

К дисбактериозу приводит и гипоксическое поражение кишечника. Если ребеночек перенес в родах гипоксию, родился переношенным, если воды были зеленые, если у него было снижено сердцебиение, то из-за недостатка кислорода страдает и кишечник. На его стенках образуются маленькие трещинки, через которые просачивается кровь, в которой начинают активно размножаться патогенные микробы..

Какие же бактерии поселяются в кишечнике малыша. вытесняя оттуда полезную флору? Чаще всего дисбактериоз вызывают стафилококки. Они бывают разных видов, особенно злостный – золотистый стафилококк. Он обычно живет в молоке и передается при грудном вскармливании. Но если у вас обнаружили стафилококк, это не повод прекращать грудное вскармливание, просто нужно в течение двух недель попить настойку хлорофиллипта на спирту (1 чайная ложка три раза в день). Это вытяжка из листьев эвкалипта, которая уничтожает кокковую флору. Часто задают вопрос: как стафилококк может проникнуть в грудное молоко? Он живет на слизистых при насморке, на кариозных зубах, в воспаленных миндалинах, мочевом пузыре, если у вас был цистит. При экстремальных ситуациях (к которым относятся и роды), когда снижается иммунитет, стафилококк активизируется и попадает в кровь. Плавая в крови, он выбирает в организме самую слабую, наименее защищенную иммунитетом точку и садится на нее. У кормящей женщины наиболее уязвимое место – это грудь. Если стафилококк никак не лечить, со временем он все равно уйдет, но к этому моменту ребенок тоже может заразиться и у него начнется дисбактериоз.

Следующая по частоте – кандида, или, в просторечии, молочница. Ее главный признак – серо-белые пленочки, которые появляются во рту у малыша, главным образом, на слизистой щечек, и с трудом снимаются. Такие же пленочки появляются и в кишечнике у малыша, а у девочек и во влагалище. Молочница может вызывать и поражение кожи, внешне похожее на аллергию. Реже встречается ряд других бактерий.

Каковы же симптомы дисбактериоза? Главное – изменение стула и состояния кожи. В норме стул у новорожденного может быть достаточно разнообразным по частоте, и по внешнему виду. Выделения должны быть однородными, с приятным творожным запахом, цвет варьируется от светло-желтого до коричневого. Могут встречаться белые крупинки молока. Возможна совсем небольшая примесь зелени и немного слизи. Если у стула резкий неприятный запах, если он зеленого цвета, если в нем много слизи или появляются прожилки крови или в нем очень много жидкости или весь стул пенистый, значит необходимо срочно сдать анализы.

Кроме анализа кала на дисбактериоз надо сдать анализ на копрологию, чтобы посмотреть, как переваривается молоко, нет ли слизи и крови, нету ли лейкоцитов, которые указывают на воспаление кишечника, а если стул жидкий или пенистый, нужно сдать еще и анализ на углеводы (лактазную недостаточность). По результатам анализов выделяют четыре стадии заболевания.

1. Снижение нормальной флоры: никакого возбудителя еще нет, просто уровень бифидум или лактобактерий снижается в 10, 100 или 1000 раз. Как правило, дисбактериоз первой степени никак не проявляется: ни болями, ни нарушение стула. может наблюдаться лишь незначительное отставание в весе. Такой дисбактериоз лечить не нужно, просто необходимо укреплять иммунитет, закаливать малыша, купать его в специальных травяных сборах. К примеру, можно взять по столовой ложке тысячелистника, календулы и зверобоя, завяжите в марлю и залейте кипятком. Дайте настояться полчаса, вылейте настой в детскую ванночку. Купать ребенка минут 10-15.

2. Кроме недостатка микрофлоры появляется в небольшом количестве какой-либо один патологический микроб: гемолизирующая кишечная палочка, стафилококк или клебсиела. У ребенка появляются боли во время еды, малыш становится беспокойным. Меняется характер стула, он может стать пенистым, приобрести зеленую окраску. В этом случае у детей чаще бывают запоры, чем поносы.

3. Снижается нормальная микрофлора, появляются два или больше патогенных микробов: стафилококк с кандидой, или клебсиела с гемолизирующей палочкой. У ребенка начинаются сильные поносы, боли во время еды. Дети меньше спят, плохо едят, могут не прибавлять в весе и на какое-то время даже терять вес. Если показать такого ребенка невропатологу, он, скорее всего, найдет у него те или иные неврологические нарушения.

4. Выраженное серьезное заболевание, когда страдает весь организм. Страдает не только флора кишечника, поражается стенка кишечника и желудка. Болезнь поражает и нервную систему. Из-за того, что нарушается всасывание витаминов и микроэлементов, у ребенка ярко выражен авитаминоз. Страдают и внутренние органы: печень селезенка, поджелудочная железа.

Лечение и профилактика. Лучшая профилактика дисбактериоза – раннее прикладывание к груди, это помогает заселить кишечник иммуноглобулинами и уникальными защитными элементами, которые присутствуют лишь в молозиве. Прикладывайте новорожденного к груди так часто, как он просит, потому что такие маленькие дети не в состоянии усвоить сразу большое количество грудного молока. Пища должна в эти недолгие дни поступать буквально по капелькам, по полчайной ложечки, и чем чаще, тем лучше. Кроме того, в первые десять дней жизни ребенка мама должна по возможности максимально ограничить прием любых лекарств, поскольку в это время формируется нормальная кишечная флора. Нельзя есть никаких продуктов с консервантами: колбас, консервированных компотов, газированных напитков, продуктов, которые могли бы вызвать раздражение кишечника: шоколад, клубнику, белокочанную капусту, редиску, горох, грибы, морепродукты, орехи. Если во время беременности вы курили и не собираетесь бросать, не курите хотя бы первые несколько недель жизни ребенка. Это относится и к отцам: если вы курите, не подходите к ребенку в течение часа после курения. Дело в том, что никотин вызывает спазм кишечника и происходит то же самое, что и при внутриутробном кислородном голодании: на стенках кишечника появляются ранки, язвочки, на них размножаются вредные микробы, которые потом начинают вытеснять полезную флору.

Если вы подозреваете, что у ребенка есть риск заболеть дисбактериозом, скажем, после планового кесарева сечения, если у вас не вылечена молочница, если по каким-то причинам не было возможности приложить ребенка к груди в первые часы или дни жизни (к примеру, вы или ребенок попали сразу после родов в больницу), если вы или ваш малыш сразу после родов получали антибиотики и т.д., – нужно, ничего не дожидаясь, сразу после рождения подавать ребенку препараты нормальной кишечной флоры: лактобактерин и бифидумбактерин в профилактических дозах. Утром – лактобактерин, вечером – бифидумбактерин по две дозы.

При дисбактериозе лечение нужно начинать как можно скорее, чтобы заболевание не начало прогрессировать, ведь тогда вылеячить его будет гораздо тружнее. Поэтому в ожидании результатов анализов (они будут готовы только через десять дней), сразу же начинайте давать малышу препарат бактисуптил, он практически не имеет противопоказаний не может навредить ребенку. Это сушеные споры микроба, который не приживается в кишечнике, но, находясь там, выживает всю патогенную флору. Новорожденному дают по 1/3капсулы три раза в день, ребенку 2-3 месяцев – по 1 капсуле три раза в день.

Если дисбактериоз запущенный, нарушается выработка ферментов печени и поджелудочной железы и пища плохо переваривается и начинает гнить в кишечнике, среда меняется с кислой на щелочную, где хорошо развиваются различные патогенные микробы. Значит, если ребенок болен давно, ему необходимо давать ферменты, например, креон, фермент поджелудочной железы, у него практически нет побочных эффектов и его можно принимать даже новорожденным. Его нужно давать с каждым приемом пищи, чтобы она нормально переваривалась. Привыкание он не вызывает, но его надо отменять постепенно. В течение 5-7 дней его дают в нормальной дозе, а затем дозу постепенно уменьшают: на вторую неделю – вдвое, а на третью препарат постепенно снижают и отменяют. Вместо креона можно давать абомин или панкеатин. Дозировку вам индивидуально подберет врач в зависимости от веса ребенка.

Следующим компонентом лечения являются биопрепараты в различных видах и различных лекарственных формах. Удобнее давать жидкие биопрепараты: жидкий бифидумбактерин и жидкий лактобактерин. Начинают лечение с лактобактерина, который сам по себе убивает и замещает патогенную флору. Во вторую очередь дается бифидумбактерин, потому что он способствует росту любой флоры, и хорошей, и плохой. Чаще всего утром и днем дают лактобактерин, а вечером – бифибумбактерин, но в особо тяжелых случаях ребенка сначала в течение долгого времени лечат только лактобактерином и лишь потом назначают бифидумдактерин. В любом случае, этот вопрос должен решать лечащий врач. Лактобактерин продается в виде жидкого жидкого экстракта, в виде порошка или в виде препаратов линекс, ацелакт, ацепол. Бифидумбактерин бывает сухой, жидкий и в виде препарата бифидумбактерин форте. Бифидумбактерин форте – это бифидобактерии, носителем которых является активированный уголь, то есть, он работает еще и как адсорбент: собирает на себя токсины, газы, микробные и вирусные тела. Если у ребенка понос, повышенное газообразование, если врач или вы сами подозреваете лактазную недостаточность, нельзя давать малышу сухие бифидум и лактобактерин, это может усугубить лактазную недостаточность. Врач выписывает либо жидкие формы, либо бифидумбактерин форте. Существуют еще комплексные биопрепараты, которые содержат и лакто и бифидумбактерии, например, линекс, примадофилус. Их можно пить профилактически несколько раз в год и давать для восстановления нормальной микрофлоры, не сдавая анализы (при слабом дисбактериозе). Есть препараты кишечной палочки, которые до полугода нельзя давать вообще, а детям до трех лет – только по строгим показаниям по результатам анализов, поскольку у маленьких детей кишечная палочка может перерасти в мутантные формы. Это препараты бификол и колибактерин.

Существует еще такой замечательный препарат, как хилак форте, который не содержит живых бифидум и лактобактерий, а только продукты их жизнедеятельности: те кислоты и витамины. которые вырабатываются бифидобактериями и факторы защиты, которые вырабатывается лактобактериями. Все это на углеводах, но углеводы уже расщепленные, так что этот препарат можно давать и детям с лактазной недостаточностью. Его применяют и при профилактике, и при лечении дисбактериоза, особенно во время повторного курса.

Еще есть комплексный иммуноглобулиновый препарат КИП, в котором содержатся те же иммуноглобулины. что и в грудном молоке и антитела, которые живут на слизистой и создают барьер для патогенной флоры. Его назначает только врач очень короткими курсами. Особенно он полезен при искусственном вскармливании а также если в грудном молоке много патогенных микробов, если малыш перенес гипоксию или если у него воспален кишечник.

Если в анализах есть срытая кровь или прожилки крови и у вас нет возможности срочно попасть к врачу (например, на даче), без вреда для ребенка можно подавать тыквеол, облепиховое масло (1 капля 3 раза в день) или каратолин по 1 мл 3 раза в день. Можно давать солкосерил или актовегин в ампулах, это препараты из крови телят, они хорошо восстанавливают слизистую.

Как сдавать анализы.
Анализ на дисбактериоз. Кал надо собирать в стерильную посуду. Для этого баночку из-под детского питания нужно прокипятить вместе с крышкой в течение 20 минут. Простерилизованную банку нужно закрыть крышкой и поставить в холодильник. Так ее можно хранить в ожидании нужного момента в течение 24 часов. Собранный анализ нужно доставить в лабораторию в течение трех часов. Объем может быть очень маленьким, достаточно ½ чайной ложки. Кал, собранный с памперса или пеленки не годится. Вымойте клеенку или горшок с мылом и обдайте кипятком. Желательно собирать верхний слой, которые не соприкасался с поверхностью клеенки или горшка. Анализ будет готов через 7-10 дней. Делают его в специализированных лабораториях.

Анализ на копрологию. Его можно доставить в лабораторию в течение суток с момента сбора, но объем чем больше, тем лучше (как минимум 1/3 майонезной банки), потому что потребуется много разных исследований. Анализ готовится в течение 3 дней. Сдать его можно в районной поликлинике. Проследите, чтобы в направлении на анализ было написано, что кал нужно проверить на кислотность. Наличие эритроцитов указывает, что а стенках кишечника есть трещинки и ранки, а наличие лейкоцитов свидетельствует о воспалительном процессе.

Анализ на углеводы. Надо привезти в лабораторию в течение 6-12 часов. Нельзя перед сдачей анализов давать ребенку биопрепараты, т.к. все они на углеводах.

Продукты, которые нормализуют состояние кишечника

сухофрукты: курага, чернослив и инжир нормализуют перистальтику. Для грудного ребенка курагу с черносливом заливают холодной водой для детского питания и оставляют на ночь. Утром дают малышу пить водичку.
проросшие злаки, после 6 месяцев добавляют в пищу. Ближе к году можно давать ребенку зерновой подсушенный хлеб.
если у ребенка щелочная среда в кишечнике, ему дают раствор яблочного уксуса. 1 чайную ложку разводят в стакане воды и дают по капле несколько раз в течение дня.
также нормализует состояние кишечника медовая вода, приготовленная из цветочного, липового или акациевого меда. он убирает гнилостную флору, газы. спазмы и боли в животе.! чайную ложку растворяют в стакане кипяченой воды. Перед первым приемом дайте ребенку одну капельку, чтобы убедиться, что у него нет аллергии.
чесночная вода убивает стафилококк, повышает иммунитет. Кроме того, это отличная профилактика глистов. Ползубчика чеснока натирают и настаивают в небольшом количестве воды в течение часа, доливают водой до полулитра и дают по капле 2-3 раза в течение дня.

У нас появилась новая услуга – анализ кала на дисбактериоз

Уход за новорожденным

Вещи, необходимые на выписку ребёнка из роддома

Две тонкие пелёнки, одну фланелевую, подгузники, две распашонки (тонкую хлопчатобумажную и фланелевую), байковое одеяло и дополнительно, по сезону, тёплую шапочку, шерстяное или ватное одеяло с пододеяльником, уголком и лентой.

Предметы туалета, необходимые для новорожденного ребёнка

Ванночка, градусник для измерения температуры воды, вата, вазелиновое масло, мыло (желательно «Детское»), гребешок для волос, две-три варежки из очень мягкой ткани (для купания), раствор марганцевокислого калия, присыпка, ножницы для волос и ногтей, два махровых полотенца или пелёнки для купания.

Все органы и системы у новорожденных несовершенны, поэтому для них важен правильный уход.

Пупочная ранка

Большинство роддомов сейчас выписывают детей с отпавшим пупочным остатком, на месте которого образуется пупочная ранка. Как правило, она эпителизируется к 18-20 дню жизни. За ней важен особенный и тщательный уход: в пупочную ямку нужно закапывать 3-процентный раствор перекиси водорода, аккуратно протирать стерильной салфеткой и обрабатывать зелёнкой (1-процентный раствор) 2-3 раза в день. Ранку обрабатывают ежедневно, до её эпителизации. Если появились изменения — кровоточивость или гнойное отделяемое из ранки — срочно сообщите врачу.

Гигиена

Памперсы необходимо менять не реже, чем через каждые 4 часа. При смене памперса следует подмыть малыша под проточной водой с детским мылом, промокнуть насухо полотенцем и смазать кремом (вазелином) либо припудрить присыпкой.

Девочек подмывать необходимо после трёх мочеиспусканий, а после каждого достаточно аккуратно промокнуть наружные половые органы салфеткой. После опорожнения из кишечника подмойте малышку тёплой проточной водой. Держите её вверх животиком, чтобы вода попадала спереди. Мылом старайтесь пользоваться поменьше, удобно заменять его влажными салфетками, но не следует ими увлекаться, так как у многих детей развиваются аллергические реакции на салфетки.

Мальчиков подмывают, держа их спинкой вверх. Если вы заметили какие-либо покраснения кожи крайней плоти и головки полового члена или покраснение наружных половых органов у девочек, беспокойство после каждого мочеиспускания, обратитесь к врачу.

Перед тем как вы начнёте проводить ребёнку утренний туалет, тщательно вымойте свои руки. Положите малыша на пеленальный столик, накрытый чистой пелёнкой. Каждое утро необходимо протирать личико малыша кипяченой водой, начиная с глаз. Для каждого глаза — отдельный ватный тампон, промывают от внутреннего угла глаза к наружному, в первые дни можно использовать раствор фурацилина. Затем протрите лобик, щёчки и рот. Если глазки гноятся, то можно их промывать свежей крепкой заваркой из чёрного чая.

Обработайте все естественные складочки небольшим количеством детского крема (за ушками, шейные, подмышечные, локтевые, паховые, подколенные). Чистить носовые ходы можно жгутиками из ваты, смоченными в стерильном вазелиновом масле, либо ватными палочками с ограничителями. Можно использовать такие средства как Салин, Аквамарис и им подобные. При проведении туалета носа и ушей не применяйте палочек, спичек и других предметов. При обрабатывании ушей возможно использование ватных палочек с ограничителем. Не обрабатывайте слизистую полости рта здоровым новорожденным, она очень сухая и легко ранимая.

Подстригание ногтей

Будьте готовы к тому, что ногти вашего ребёнка будут расти очень быстро, их надо регулярно подстригать. Пользуйтесь для этого маленькими ножницами, лучше, если они будут с тупыми закруглёнными концами. Очень удобно стричь ногти, когда ребёнок спит. Чтобы не затронуть его кожу, отжимайте подушечки пальцев. Если вы все-таки порезали ребёнка, смажьте место пореза зелёнкой.

Купание

Младенца следует купать ежедневно. Для купания подготовьте термометр для воды, губку или рукавичку для купания, жидкое детское мыло, присыпку или детский крем, полотенце, подгузник, одежду.

До заживления пупка купать малыша нужно в кипячёной воде, куда добавляется марганцовка (бледно-розового цвета).

Температура воды должна составлять 38 С°, затем постепенно понижайте на 1-2 С°.

Температура воздуха во время купания должна быть 24-25°С.

Продолжительность купания — не более пяти минут в вечерние часы. Постепенно продолжительность водных процедур будет увеличиваться до 15 минут.

Также хорошо применять для купания отвар травы, например, череды и ромашки аптечной. Мыло можно использовать не более двух раз в неделю. Уровень воды не должен закрывать верхнюю часть грудной клетки. Область сердца должна находиться над водой. Во время ополаскивания закрывайте голову малыша рукой.

Два раза в неделю следует мыть голову детским мылом или шампунем. Корочки на голове необходимо смазывать вазелиновым маслом за 2 часа до купания, затем аккуратно удалить расчёской с тупыми зубчиками.

Для профилактики опрелостей применяется крахмальная вода, готовится она так: одна столовая ложка крахмала на литр тёплой кипячёной воды. После купания ребёнка заворачивают в заранее приготовленную простыню или полотенце, тельце его насухо вытирается, кожные складки и область анального отверстия смазываются сушащим или жирным кремом (в зависимости от особенностей кожи ребёнка). Остальные части тела припудриваются присыпкой (за исключением лица). Необходимо следить за тем, чтобы ребёнок не мог вдохнуть присыпку во время припудривания.

Нательное бельё нужно менять каждый день. После купания следует расчесать малыша детской щёточкой, это стимулирует работу сальных желез. Поговорите со своим врачом, когда можно начать купание. Большинству детей нравится купаться. Тёплая вода их успокаивает и помогает заснуть. Купать малыша лучше вечером перед едой. Не купайте малыша, если у него температура или есть гнойничковые заболевания кожи. Ванночку перед использованием тщательно вымойте.

Сон

Новорожденного ребёнка укладывают спать на боку. Бок нужно обязательно чередовать. Если малыш спал на левом боку, то в следующий раз положите его на правый. Подушка в таком возрасте не нужна. Вместо неё можно положить чистую, свёрнутую в несколько раз пелёнку, лучше, если она будет во всю ширину кроватки, чтобы головка малыша всегда была на ней, даже когда он вертится.

Для профилактики кривошеи можно использовать ортопедическую подушку. Температура воздуха в комнате для доношенных детей должна быть обычной, т. е. 20-24 °С. Для недоношенных детей нужно поддерживать температуру на уровне 24-26 °С.

Прогулки

Летом младенца можно впервые вынести на воздух уже в возрасте одной недели. В холодное время года ребёнка начинают приучать к свежему воздуху постепенно, на пятой неделе жизни. При этом его тепло одевают и на несколько минут помещают перед открытым окном. Только после этого его можно вынести на свежий воздух. Первая прогулка должна длиться 10-15 минут. Время пребывания на свежем воздухе постепенно повышается до двух-трех часов в день.

В ветреную погоду, туман гулять с ребёнком не следует. Не следует гулять с грудничком при температуре окружающей среды -12 градусов и ниже, а также при резком перепаде температур. Чтобы убедиться, что вашему малышу тепло, потрогайте шею либо плечи малыша (они должны быть тёплые). Ориентироваться по кончику носа либо ручкам малыша нецелесообразно, так как температура этих частей тела может быть ниже, что связано с особенностями теплорегуляции ребёнка.

Одежда

Необходимо заботиться о том, чтобы младенец имел соответствующую его возрасту возможность двигаться. Новорожденный выполняет лишь нескоординированные движения. Тело его обычно находится в согнутом положении, голова немного повернута набок. В это время нельзя насильственно придавать телу ребёнка иное положение, как нельзя позже насильственно ускорять какой бы то ни было этап развития двигательных способностей ребёнка (умения сидеть, ходить и пр.).

Нужно позаботиться о том, чтобы начиная с 3-4-месячного возраста у ребёнка было достаточно места для удовлетворения потребности в движении (манеж) и чтобы одежда не стесняла его. Держать ребёнка спеленатым в «конверте» следует только в первые дни жизни, позже нужно следить за тем, чтобы его одежда не была слишком узкой или, наоборот, широкой, чтобы она не препятствовала движениям.

Нельзя одевать ребенка слишком тепло, хотя с такой ошибкой приходится встречаться весьма часто.

Кладём ребёнка на живот

На живот ребёнка начинают выкладывать с 3-недельного возраста, желательно перед каждым кормлением. Сначала на 2-3 минуты, затем постепенно увеличиваем продолжительность до 10 минут.

Как мне собрать и хранить образец стула (фекалий)?

Вы должны:

  • собрать образец стула (фекалий) в чистый контейнер
  • храните контейнер в холодильнике в запечатанном пластиковом пакете, если вы не можете сразу передать его

Сбор проб стула

Ваш врач общей практики или другой медицинский работник, например медсестра, должен объяснить, как собирать образец стула. Его следует собирать в чистую сухую емкость с завинчивающейся крышкой.

Ваш врач или сотрудник больницы выдаст вам для использования пластиковый контейнер (для образцов), хотя вы можете использовать любой чистый контейнер, если вы можете его запечатать.

Старайтесь не собирать мочу или воду из унитаза вместе с образцом стула, но не волнуйтесь, если вы это сделаете. Если вам нужно помочиться, сделайте это перед сбором образца кала.

Для сбора образца стула:

  • Наклейте на контейнере свое имя, дату рождения и дату
  • поместите что-нибудь в унитаз для сбора стула, например, горшок или пустой пластиковый контейнер из-под еды, или постелите чистую газету или полиэтиленовую пленку на край унитаза
  • убедитесь, что образец не касается внутренней части унитаза
  • Используйте ложку или шпатель, прилагаемый к контейнеру, чтобы поместить образец в чистый контейнер с завинчивающейся крышкой и завинтить крышку
  • , если вам дали контейнер, постарайтесь заполнить его примерно на треть — это примерно размер грецкого ореха, если вы используете свой собственный контейнер
  • поместите все, что вы использовали для сбора образца, в пластиковый пакет, завяжите его и положите в мусорное ведро
  • тщательно вымойте руки теплой проточной водой с мылом

Выполняйте любые другие указания врача.

Хранение образца стула

Образцы стула должны быть переданы как можно скорее, так как некоторые из них не могут быть проанализированы, если они были охлаждены – ваш врач сообщит вам об этом.

Если вы не можете сразу сдать образец кала, храните его в холодильнике, но не более 24 часов. Сначала поместите емкость в герметичный пластиковый пакет.

Образцы кала должны быть свежими, иначе бактерии в них могут размножаться. Это означает, что уровень бактерий в образце стула не будет таким же, как уровень бактерий в вашей пищеварительной системе.Если уровни бактерий не совпадают, результаты теста могут быть неточными.

Если вы не можете немедленно сдать образец стула, узнайте, как долго его можно хранить в холодильнике. Ваш врач общей практики или медицинский работник, запросивший тест, сможет сообщить вам об этом.

Для чего используются образцы стула?

Врач или другой медицинский работник может попросить вас сдать образец кала, чтобы помочь им диагностировать или исключить определенное состояние здоровья.

Кал содержит бактерии и другие вещества, присутствующие в пищеварительной системе.

Проверяя уровни этих веществ и бактерий в стуле, можно выяснить, что происходит в вашей пищеварительной системе.

Например, образец стула может быть проверен для диагностики:

Сбор проб фекалий, транспортировка, хранение и подготовка

Первым шагом к получению наилучших клинических результатов ПЦР-тестирования на наличие вирусов, паразитов и бактерий является получение образцов высокого качества. Сбор и обработка образцов стула является важным фактором, который напрямую связан с получением наилучших результатов в любом клиническом анализе.

Для сбора образцов свежие образцы стула должны быть помещены в маркированный, стерильный, герметичный контейнер без консервантов. В качестве альтернативы собранный образец можно поместить в контейнер с транспортной средой.

Сырые образцы стула

Необработанные образцы стула следует транспортировать в холодном виде и сразу же хранить при температуре 2–4 °C по прибытии. Лучше всего протестировать образец стула, как только он будет получен. В противном случае образцы должны быть заморожены при -80°C до проведения испытаний.По возможности рекомендуется подготовить несколько аликвот перед замораживанием. Избегание нескольких циклов замораживания-оттаивания поможет избежать деградации образца (например, известно, что C. difficile быстро разлагается при нескольких циклах замораживания-оттаивания). В идеале образцы стула, хранящиеся при температуре -80°C, должны быть проверены в течение 30 дней.

Образцы стула в транспортной среде

Для образцов, собранных с использованием среды для хранения/транспортировки, добавьте стул непосредственно в сосуд для хранения, содержащий среду.Образцы, содержащиеся в удерживающей среде, можно транспортировать в соответствующую лабораторию при комнатной температуре, а затем хранить при 2–4°C не более 3 дней перед обработкой. Если образцы не будут тестироваться в течение 3 дней, храните их в замороженном виде при температуре -80°C. Опять же, рекомендуется делать аликвоты, чтобы избежать многократных циклов замораживания-оттаивания. Обратите внимание, что образцы стула, хранящиеся в фиксаторе, таком как формалин, могут быть несовместимы с методами, основанными на молекулярном анализе.

Среда Кэри-Блэра

популярна для транспортировки кала.Существует много коммерчески доступных наборов среды Кэри-Блэра, предназначенных для сбора и транспортировки образцов фекалий. Среда Кэри Блэра обычно имеет низкое содержание питательных веществ в фосфатной буферной системе (включая тиогликолят натрия), которая ингибирует или устраняет массовый рост бактерий при сохранении стабильного диапазона рН. Это предотвращает возможную компрометацию видов, включенных в панель. Низкий окислительно-восстановительный потенциал обеспечивает выживание бактерий в течение более длительного периода времени.

Заключение

Соблюдение этих рекомендаций по сбору и хранению поможет обеспечить целостность образцов фекалий и, в конечном счете, даст надежные результаты.

Дополнительные указания по сбору образцов см. в Руководстве по сбору образцов Центров по контролю и профилактике заболеваний.

Как собрать образец кала с помощью набора для сбора кала

Время читать: Около 1 минуты

Эта информация научит вас, как собрать образец стула в домашних условиях с помощью набора для сбора стула. Ваш поставщик медицинских услуг обсудит с вами, на что они будут проверять образец вашего стула.Они также предоставят вам необходимые материалы.

Вы должны принести свой образец в лабораторию в течение 24 часов (1 день) после его сбора.

Back to top

Как собрать образец

  1. Мойте руки. Смочите руки и нанесите мыло. Хорошо потрите руки друг о друга не менее 20 секунд, затем смойте. Вытрите руки бумажным полотенцем и используйте это же полотенце, чтобы закрыть кран.

  2. Соберите свои припасы. Вам понадобится:

Разместите их в ванной, где вы сможете легко до них дотянуться.

  1. Поднимите сиденье унитаза. Поместите колпачок для сбора на край унитаза. Закройте сиденье унитаза на колпачке для сбора. Это удержит шляпу для сбора на месте.

  2. Сядьте на унитаз, чтобы как обычно испражняться (какать). Не писайте на свой стул или в шляпу для сбора.

  3. Используя деревянную палочку, поместите от 2 до 3 маленьких ложек кала в каждую чашку(и) для образцов.

  4. Поместите стакан(ы) для образцов в пластиковый пакет для биологической защиты.

  5. Выбросьте шляпу и деревянную палку.

  6. Еще раз вымойте руки.

Back to top

После того, как вы соберете образец

Храните пакет для биологических отходов с образцом стула при комнатной температуре. Принесите его в лабораторию в течение 24 часов после сбора образца.

Ваш лечащий врач сообщит вам, куда сдать образец и когда будет открыта лаборатория. Если есть возможность, лучше принести его в лабораторию Memorial Sloan Kettering (MSK).Если вы хотите принести свой образец в лабораторию ближе к вашему дому, поговорите со своим лечащим врачом.

Если у вас есть какие-либо вопросы или опасения, обратитесь к своему поставщику медицинских услуг.

Back to top
Последнее обновление

Влияние отбора проб и их хранения на состав фекальной микробиоты у здоровых и больных субъектов

PLoS One.2015 г.; 10(5): e0126685.

, 1 , 2 , 1 , 2 , 1 , 2 , 1 и 2 , 3 , *

Данита И. Теджо

1 Школа питания и трансляционных исследований в области метаболизма (NUTRIM), Отделение гастроэнтерологии-гепатологии, Медицинский центр Маастрихтского университета+, Маастрихт, Нидерланды,

2 Школа питания и трансляционных исследований в области метаболизма (NUTRIM), кафедра медицинской микробиологии, Медицинский центр Маастрихтского университета+, Маастрихт, Нидерланды,

Дейзи М.А. Э. Джонкерс

1 Школа питания и трансляционных исследований в области метаболизма (NUTRIM), Отделение гастроэнтерологии-гепатологии, Медицинский центр Маастрихтского университета+, Маастрихт, Нидерланды,

Пол Х. Савелкул

2 Школа питания и трансляционных исследований в области метаболизма (NUTRIM), кафедра медицинской микробиологии, Медицинский центр Маастрихтского университета+, Маастрихт, Нидерланды,

Объявление А. Маскле

1 Школа питания и трансляционных исследований в области метаболизма (NUTRIM), Отделение гастроэнтерологии-гепатологии, Медицинский центр Маастрихтского университета+, Маастрихт, Нидерланды,

Нильс ван Бест

2 Школа питания и трансляционных исследований в области метаболизма (NUTRIM), кафедра медицинской микробиологии, Медицинский центр Маастрихтского университета+, Маастрихт, Нидерланды,

Марике Дж.Пьерик

1 Школа питания и трансляционных исследований в области метаболизма (NUTRIM), Отделение гастроэнтерологии-гепатологии, Медицинский центр Маастрихтского университета+, Маастрихт, Нидерланды,

Джон Пендерс

2 Школа питания и трансляционных исследований в области метаболизма (NUTRIM), кафедра медицинской микробиологии, Медицинский центр Маастрихтского университета+, Маастрихт, Нидерланды,

3 Школа общественного здравоохранения и первичной медико-санитарной помощи (Caphri), кафедра эпидемиологии, Маастрихтский университет, Маастрихт, Нидерланды,

Гвидо Фавиа, академический редактор

1 Школа питания и трансляционных исследований в области метаболизма (NUTRIM), Отделение гастроэнтерологии-гепатологии, Медицинский центр Маастрихтского университета+, Маастрихт, Нидерланды,

2 Школа питания и трансляционных исследований в области метаболизма (NUTRIM), кафедра медицинской микробиологии, Медицинский центр Маастрихтского университета+, Маастрихт, Нидерланды,

3 Школа общественного здравоохранения и первичной медико-санитарной помощи (Caphri), кафедра эпидемиологии, Маастрихтский университет, Маастрихт, Нидерланды,

Университет Камерино, ИТАЛИЯ,

Конкурирующие интересы: А.Маскле получает гранты от DSM, Grunenthal, Abott и Danone. М. Пьерик в прошлом работал консультантом Takeda, а в прошлом был лектором в Abbvie, Falk, MSD и Ferning. Это не меняет приверженности авторов политике PLOS ONE в отношении обмена данными и материалами.

Придумал и спроектировал эксперименты: JP DT DJ MP AM PS. Выполнены опыты: ДТ НБ. Проанализированы данные: DT JP. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты для анализа: DJ MP. Написал статью: DT DJ JP. Написал статью или критически отредактировал ее для важного интеллектуального содержания: DT DJ AM PS MP JP.Окончательное утверждение версии для публикации: DT DJ AM PS MP NB JP.

Поступила в редакцию 15 сентября 2014 г .; Принято 7 апреля 2015 г.

Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии, что первоначальный автор и источник должным образом указаны.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.
Дополнительные материалы

S1 Рис. Анализ основных координат на основе невзвешенного расстояния UniFrac для здоровых субъектов, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).(TIF)

GUID: 0CB347B4-4C0F-412A-B0D2-C13ADBB82468

S2 Рис. Анализ основных координат на основе невзвешенного расстояния UniFrac для пациентов с СРК, окрашенных в зависимости от субъекта (а) и метода хранения (б). (TIF)

GUID: 506E1AB8-569E-438D-863C-5AED16FB3A8B

S3 Рис. Анализ основных координат на основе невзвешенного расстояния UniFrac для пациентов с ВЗК, окрашенных в зависимости от субъекта (а) и метода хранения (б). (TIF)

GUID: CBA53C17-C189-4890-85C1-14F55547C69F

S4 Рис. Анализ основных координат на основе расстояния Брея-Кертиса для здоровых субъектов, окрашенных в зависимости от субъекта (а) и метода хранения (б).(TIF)

GUID: 3B763705-4F4F-4E9C-AC6C-7D328BA01190

S5 Рис. Анализ основных координат на основе расстояния Брея-Кертиса для пациентов с СРК, окрашенных в зависимости от субъекта (а) и метода хранения (б). (TIF)

GUID: B380C664-FDF0-4A1E-9CF4-016988FBCEE8

S6 Рис. Анализ основных координат на основе расстояния Брея-Кертиса для пациентов с ВЗК, окрашенных в зависимости от субъекта (а) и метода хранения (б). (TIF)

GUID: 76E5ECB1-96C4-48A7-81F1-77387C57003E

S7 Рис. Анализ основных координат на основе взвешенного расстояния UniFrac для здоровых субъектов, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).(TIF)

GUID: 7140A5BE-591E-487B-BA1C-24C083264FCF

S8 Рис. Анализ основных координат на основе взвешенного расстояния UniFrac для пациентов с СРК, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b). (TIF)

GUID: 6613AA86-E6B6-4B3D-85A7-FE48AB647AFE

S9 Рис. Анализ основных координат на основе взвешенного расстояния UniFrac для пациентов с ВЗК, окрашенных в зависимости от субъекта (а) и метода хранения (б). (TIF)

GUID: 16B0A317-8EDB-4116-BDE3-0AB43868AABD

S10 Рис. Прямоугольная диаграмма взвешенного расстояния UniFrac между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения.(*p

(TIF)

GUID: 074C4521-6B90-403B-B715-4A581A58765A

S11 Рис. Коробчатая диаграмма Брея-Кертиса. Различия между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения. (*p

( TIF)

GUID: D05A546E-0607-4D78-9550-D2E6B37349C9

S12 Рис. Коробчатая диаграмма и вискерная диаграмма различий Брея-Кертиса между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения при глубине отбора проб 5000 сек/образец ( *p

(TIF)

GUID: CD574A86-13FF-4947-B59B-037A2AE4195C

S13 Рис. Прямоугольная диаграмма и диаграмма «усов» невзвешенного расстояния UniFrac между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения при глубине отбора проб 5000 сек/ образец.(*p

(TIF)

GUID: 2B3113F2-BBBA-4950-B855-6BB55E9

S14 Рис. Прямоугольная и вискерная диаграмма взвешенного расстояния UniFrac между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения при глубине отбора проб 5000 сек. /sample. (*p

(TIF)

GUID: 882CA27C-1B3E-42D7-8253-73D014330F03

S15 Fig: Влияние методов хранения и консистенции стула на альфа-разнообразие. Оценка насыщенности Chao 1 (a) и Шеннон индекс (b) показан на оси y, а испытуемые показаны на оси x.Синие и красные полосы обозначают субъектов с нормальным стулом и субъектов с диареей соответственно. Показаны только испытуемые (17/28) с полным набором образцов (5 различных методов отбора и хранения), доступных для анализа. *p 1 Бристольская шкала стула 3–4. 2 Бристольская шкала стула 5–7.

(TIF)

GUID: A7269DA4-966C-4D96-81E1-DA86258E3644

S1 Таблица: Влияние методов выборки и хранения на показатели альфа-разнообразия при глубине выборки 5000 последовательностей на образец.Медиана и диапазон показаны в таблице. (*p

(DOCX)

GUID: 0372AF56-8E99-4047-941B-09CD03E8449D

Заявление о доступности данных

Соответствующие данные о доступности данных, которые использовались в этих документах и ​​бактериальных файлах, содержатся в документах. статья была представлена ​​в базу данных EMBL под регистрационным номером PRJEB6765.

Abstract

В настоящее время разрабатываются крупномасштабные когортные исследования для изучения микробиома человека в норме и при патологии.Адекватные стратегии отбора проб необходимы для ограничения систематической ошибки из-за изменений в микробных сообществах во время отбора проб и хранения. Поэтому мы исследовали влияние различных условий отбора проб и хранения на стабильность фекальных микробных сообществ у здоровых и больных людей. Образцы кала от 10 здоровых контролей, 10 пациентов с синдромом раздраженного кишечника и 8 пациентов с воспалительным заболеванием кишечника были собраны на месте, разделены на аликвоты сразу после дефекации и хранились при -80°C, -20°C в течение 1 недели, при +4°C или комнатной температуре. на 24 часа.Собирали фекальные транспортные тампоны (FecalSwab, Copan) и хранили в течение 48-72 часов при комнатной температуре. Мы использовали пиросеквенирование гена 16S для исследования стабильности микробных сообществ. Альфа-разнообразие не отличалось между всеми способами хранения и -80°C, за исключением фекальных мазков. Кластеризация UPGMA и анализ основных координат показали значительную кластеризацию по испытуемым (p<0,001), но не по методу хранения. Несходство Брея-Кертиса и (не)взвешенный UniFrac показали значительно большее расстояние между фекальными мазками и -80°C по сравнению с другими методами и образцами при -80°C (p<0.009). Относительная численность Ruminococcus и Enterobacteriaceae не отличалась между способами хранения и -80°C, но была выше в фекальных мазках (p<0,05). Хранение до 24 часов (при +4°С или комнатной температуре) или замораживание при -20°С существенно не изменяли структуру фекального микробного сообщества по сравнению с прямым замораживанием образцов здоровых людей и пациентов с желудочно-кишечными заболеваниями.

Введение

Микробиота желудочно-кишечного тракта представляет собой наиболее сложную и густонаселенную экосистему, колонизирующую организм человека.Эта местная микробиота наделяет своего хозяина несколькими важными полезными функциями, включая защиту от вторжения патогенов, стимуляцию созревания кишечника, развитие иммунитета и гомеостаз, а также метаболизм питательных веществ и ксенобиотиков. [1]

Изменение состава микробиоты (дисбактериоз) связано с широким спектром заболеваний, таких как синдром раздраженного кишечника (СРК), воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), а также с метаболическими заболеваниями, такими как неалкогольная жировая дистрофия печени болезнь и диабет 2 типа [2–4].Недавнее внедрение методов высокопроизводительного секвенирования проложило путь к открытию ключевых микробных игроков в патофизиологии этих заболеваний. Хотя четко сообщалось о различиях в составе и метаболической активности, причинный вклад таких ключевых видов или групп бактерий в большинстве случаев еще не ясен. Это может быть связано с относительно небольшой изучаемой популяцией, различными фенотипами заболеваний и отсутствием контроля за потенциальными смешивающими факторами, такими как лекарства, сопутствующие заболевания и различия в диетических моделях.Следовательно, необходимы большие четко определенные проспективные когорты, чтобы получить более полное представление о роли микробиоты в гетерогенных нозологических формах. Для точного анализа фекальной микробиоты крайне важно, чтобы процедуры отбора проб и хранения не изменяли микробный состав. Следовательно, для этих исследований необходимы методы выборки, применимые в больших когортах и ​​не искажающие результаты. Хотя немедленное замораживание образцов фекалий обычно считается золотым стандартом, в крупномасштабных исследованиях это сложно с точки зрения логистики.Кроме того, известно, что оттаивание замороженных образцов во время транспортировки оказывает существенное влияние на целостность ДНК [5].

В ограниченном числе исследований изучалось влияние различных методов хранения на фекальную микробиоту.

Лаубер и др. . показали, что на филогенетическую структуру и разнообразие бактериальных сообществ в образцах фекалий не влияло хранение при комнатной температуре в течение 14 дней по сравнению с аликвотами, хранившимися сразу при -20°С [6]. Однако три других исследования продемонстрировали значительное изменение состава фекальной микробиоты после 24-часового хранения при комнатной температуре, но не при замораживании в течение 24 часов [5,7,8].

Помимо хранения при комнатной температуре, в больших группах возможно также хранение в охлажденном состоянии. Wu и соавт. исследовали хранение образцов фекалий на льду и показали, что такое хранение до 48 часов не приводило к существенным различиям в бактериальном сообществе фекалий [9].

Вышеупомянутые исследования показали лишь незначительное влияние различных методов хранения на состав микробиоты, но сделанные выводы были основаны на очень небольших размерах выборки, включающей от 2 до 4 человек.[5–9].

Кроме того, подавляющее большинство этих исследований было сосредоточено на образцах фекалий здоровых людей. Однако возможно, что влияние методов сбора образцов и методов хранения по-разному влияет на состав микробиоты у пациентов, особенно у пациентов с измененными привычками кишечника или у пациентов, принимающих лекарства. Данные о влиянии методов отбора проб на микробиоту пациентов с желудочно-кишечными заболеваниями отсутствуют.

Наряду с температурой хранения следует изучить другие удобные для пользователя методы отбора проб, которые относительно легко применять в больших когортах или при включении последовательных пациентов из повседневной клинической практики.Фекальные мазки обычно используются в клинических условиях для обнаружения энтеропатогенов и энтеробактерий с множественной лекарственной устойчивостью, что доказывает осуществимость этого метода [10,11]. Поскольку утверждается, что некоторые из этих мазков также подходят для молекулярного анализа, вполне возможно, что их также можно будет использовать для изучения состава фекальной микробиоты посредством секвенирования следующего поколения. Однако, насколько нам известно, ни одно исследование еще не изучало фекальный мазок как возможный метод отбора проб для характеристики фекальной микробиоты.

Целью настоящего исследования является изучение влияния различных методов отбора и хранения образцов на состав фекальной микробиоты как у здоровых, так и у больных субъектов.

Материалы и методы

Исследуемая популяция

Десять здоровых лиц (HC), 10 амбулаторных пациентов с СРК и 8 госпитализированных пациентов с ВЗК (4 пациента с язвенным колитом (ЯК), 4 пациента с болезнью Крона (БК) были включены в это исследование. СРК был диагностирован. по Римским критериям III. Диагноз ВЗК был основан на клинических и эндоскопических или рентгенологических данных в соответствии с рекомендациями Европейской организации Крона и колита (ECCO).Активность заболевания оценивали по утвержденному индексу Харви Брэдшоу для пациентов с целиакией и простому клиническому индексу активности колита для пациентов с язвенным колитом [12,13].

Критериями исключения для всех субъектов были тяжелые сопутствующие заболевания и наличие стомы или тотальной колэктомии. Здоровым субъектам было предложено заполнить Римский опросник III, чтобы исключить невыявленный СРК.

Все испытуемые заполнили анкету об их возрасте, ИМТ, статусе курения, истории болезни, приеме лекарств.

Сбор образцов

Каждый субъект предоставил свежий образец стула в контейнере для стула на месте.Консистенция всех образцов стула оценивалась с использованием Бристольской шкалы формы стула в диапазоне от 1 ( i , e . твердый комковатый) до 7 ( i , e . водянистый/жидкий стул) [14]. В течение 10 минут после дефекации образец фекалий разделяли на аликвоты, и аликвоты сразу же хранили в различных условиях: при -80°С (контрольный метод), при -20°С в течение 1 недели (1 нед -20°С), при 4°С. в течение 24 часов (24 часа +4°C) или при комнатной температуре в течение 24 часов (24 часа КТ). Помимо влияния различных температур хранения, фекальный тампон (Copan Italia S.P.A., Брешия, Италия), коммерчески доступный транспортный тампон с консервирующей средой, часто используемый в клинической практике (далее FecalSwab), был превращен в кал. После этого фекальные тампоны хранили при комнатной температуре в течение 48–72 часов, чтобы имитировать сценарий автоматического сбора пациентами и/или субъектами исследования и последующей доставки в лабораторию по почте. После этого все образцы были заморожены при -80°С до дальнейшей обработки.

Выделение ДНК

Буфер для лизиса PSP (Stratec Molecular, Берлин, Германия) добавляли в стерильный флакон, содержащий 0.5 г бородок из диоксида циркония/кремнезема диаметром 0,1 мм и 4 стеклянных шарика размером 3,0–3,5 мм (BioSpec, Бартлсвилл, США). Во флаконы добавляли аликвоты замороженного стула. Образцы гомогенизировали в приборе MagNA Lyser (Roche, Базель, Швейцария) в трех циклах по 1 мин. при скорости 5500 об/мин. Образцы выдерживали на льду в течение одной минуты между циклами. Выделение ДНК продолжали с использованием набора PSP Spin Stool Kit (Stratec Molecular, Берлин, Германия) в соответствии с инструкциями производителей. Наконец, ДНК элюировали в 200 мкл элюирующего буфера.Количество и качество ДНК измеряли с помощью NanoDrop ND-1000 (Thermo Scientific, Уилмингтон, США).

Образцы с концентрацией ДНК менее 20 нг или A 260/280 менее 1,8 подвергали осаждению этанолом для концентрирования или дальнейшей очистки, соответственно, для соответствия стандартам качества. Десять образцов FecalSwab с общим содержанием ДНК менее 400 нг были исключены из этого исследования.

454 пиросеквенирование

Всего 147 образцов с минимальной концентрацией 20 нг/мкл и соотношением 260/280 не менее 1.8 были отправлены в BGI (Гонконг) для 454 пиросеквенирования. Библиотеки ампликонов для пиросеквенирования участков 16S рДНК V1–V3 были созданы с использованием праймеров 534F (ATTACCGCGGCTGCTGG) и 27R (AGAGTTTGATCCTGGCTCAG). Использовался ключ из 10 нуклеотидов, уникальный для каждого образца. Секвенирование 454 проводили на системе пиросеквенирования GS FLX с использованием химии титана (Roche, Бранфорд, США).

Подсчет

Methanobrevibacter smithii методом qpCR

Для тех субъектов, у которых все аликвоты были проанализированы методом 454 пиросеквенирования, образцы также подвергались ПЦР в реальном времени на основе 5′-нуклеазы для подсчета археонов M . smithii , направленный на ген 16S рРНК, как описано ранее [15]. Амплификацию проводили в общем объеме 25 мкл, содержащем 1× Absolute qPCR Mix (ABgene, Гамбург, Германия), 200 нМ прямых и обратных праймеров, 200 нМ зонда TaqMan и 2 мкл десятикратно разбавленной ДНК-мишени. Амплификацию (2 минуты при 50°С, 10 минут при 95°С и 42 цикла по 15 секунд при 95°С и 1 минуту при 60°С) и детекцию проводили с помощью системы обнаружения последовательности Applied Biosystems Prism 7900 (Applied Биосистемы).Образцы со значениями порогового цикла (Ct) <40 считались положительными. Log10 копий ДНК для данного вида архей на грамм влажного веса фекалий рассчитывали для каждого образца стула на основе значений Ct с использованием шкалы количественного определения в диапазоне от 10–10 до 7 целевых копий.

Анализ данных

Бактериальные последовательности рДНК 16S V1–V3, которые использовались в этой статье, были внесены в базу данных EMBL под регистрационным номером PRJEB6765.

Чтобы снизить количество ошибок, необработанные данные пиросеквенирования были пропущены через фильтры качества с использованием Mothur версии 1.32.1 [16]. Для дальнейшего анализа были оставлены только последовательности с идеальной точностью проксимального праймера, минимальным средним баллом 25 при размере окна 50 нуклеотидов, длиной считывания от 200 до 590, максимум одним неоднозначным вызовом основания и максимальной длиной гомополимера 6. . Последующую обработку данных проводили с помощью программы Quantitative Insights Into Microbial Ecology (QIIME) версии 1.7 [17].

После демультиплексирования последовательности были сгруппированы алгоритмом UCLUST в операционные таксономические единицы (OTU) на основе 97% сходства с версией эталонного набора Greengenes от мая 2013 г. [18].Параметры по умолчанию для UCLUST применялись отдельно для следующих параметров: maxrejects = 100 и stepwords = 16. Чтобы уменьшить влияние ошибок пиросеквенирования, было отключено создание OTU de novo для последовательностей, которые не объединялись в эталонные последовательности.

Были определены следующие показатели видового богатства и разнообразия внутри сообществ (альфа-разнообразие): наблюдаемые OTU (наблюдаемое богатство), индекс Chao1 (оценочное богатство), индекс разнообразия Шеннона и филогенетическое разнообразие (PD) всего дерева.Бета-разнообразие или разнообразие, общее для разных образцов, определяли по невзвешенному и взвешенному расстоянию UniFrac и несходству Брея-Кертиса (BC) при глубине разрежения 3445 сек/образец. [19].

Статистический анализ

Для изучения потенциальной потери видового богатства/разнообразия во время хранения были проведены попарные сравнения показателей альфа-разнообразия между аликвотами, хранившимися в соответствии с эталонным методом (прямое хранение при -80°C), и каждым других методов хранения с помощью критерия знакового ранга Уилкоксона.

Чтобы определить влияние хранения на общее разнообразие между образцами, были рассчитаны показатели бета-разнообразия (несходство Брея-Кертиса, невзвешенный UniFrac и взвешенный UniFrac) для аликвот, хранившихся при -80°C, по сравнению с каждым из других методов хранения ( i . e . -80°C-1 неделя 20°C, -80°C-24ч +4°C, -80°C-24ч КТ и -80°C-FS). Впоследствии эти расстояния (внутри испытуемых по методам выборки) были проверены с помощью критерия знакового ранга Уилкоксона. U-критерий Манна-Уитни использовался для сравнения расстояний эталонных методов между субъектами.

Статистические различия в структуре сообщества между испытуемыми, а также методы отбора проб и хранения были проверены с помощью PERMANOVA. G-тест использовался для проверки связи между наличием OTU и методом хранения. Чтобы скорректировать множественное тестирование, в качестве порогового значения использовалась частота ложных открытий (FDR), равная 0,25.

Чтобы выяснить, оказывают ли методы хранения значительное влияние на восстановление чувствительных к кислороду микроорганизмов, было проведено попарное сравнение относительной численности Ruminococcus , Faecalibacterium , Roseburia и M . Smithii был выполнен с помощью знакового рангового теста Уилкоксона.

Соответственно, различия в относительной численности Enterobacteriaceae также были исследованы с помощью знакового рангового критерия Уилкоксона, поскольку известно, что среда Кэри-Блера в FecalSwab увеличивает выделение энтеропатогенных бактерий [20].

Статистический анализ выполнен с использованием SPSS версии 19 и QIIME 1.7.

Результаты

Исследуемая популяция

Всего в это исследование было включено 28 субъектов исследования, 10 здоровых лиц, 10 пациентов с СРК и 8 пациентов с ВЗК (18–71 год).У половины пациентов с СРК был диагностирован СРК с преобладанием диареи (n = 5), затем смешанный СРК с преобладанием запоров (n = 4) и СРК с преобладанием запоров (n = 1). Ни один из участников исследования не использовал пробиотики, в то время как один пациент с СРК придерживался строгой вегетарианской и безглютеновой диеты во время исследования. Среди больных ВЗК 4 пациента страдали болезнью Крона и 4 пациента язвенным колитом. Все, кроме одного пациента с ВЗК, испытывали обострение во время взятия проб кала.Исходные характеристики всех участников исследования представлены в .

Таблица 1

Характеристики исследуемой популяции.

2 Б 9 9 9
HC (N = 10) IBS (N = 10) IBD (N = 8)
Возраст (лет) 25,5 (23-44) 51,5 (23–71) 55,5 (20–67)
Мужской (%) 60 60 37,5
3 (19.2-24.8) 23,8 (18.1-34.7) 27.6 (35.3-22.7)
– в настоящее время 0 20 0
– остановлен 10 10 50 50
– Никогда – Никогда 70 50
Согласованность стула 6 (Бристольский стул):
– Тип 1-2 0 3 0 0
– Тип 3-4 10 3 0
– Тип 5–7 0 4 8
Фенотип болезни 1 н.а. IBS-D: 5 4 CD 4 CD
IBS-C: 1 4 UC 4 UC
IBS-M: 4
Местоположение заболевания N.A. н.д. толстая кишка: 1 левосторонняя:3 подвздошно-кишечная: 2 панколит:1
Лекарства (n) 2 3 8 9 9 9
9
Контроль рождаемости: 2 Контроль рождаемости: 2 TNF-α: 3 TNF-α: 3
Ironsupplement и Asthma Medication: 3 Thiopurine: 2
Антидепрессанты: 4 аминосалицилат: 2
ИЦП: 1 Метотрексат
Анальгетики: 3 Глюкокортикоидные: 6
Антибиотики: 2
Абдоминальная хирургия 0 4 3 2 4
Активное заболевание 5 н.а. н.д. CD: 4/4 UC: 3/4

454 секвенирование

Полный набор образцов ( i . e . немедленное хранение при -80°C, хранение при -20°C в течение 1 недели , хранившийся при +4°C в течение 24 часов, хранившийся при комнатной температуре и фекальный мазок) был получен от 28 человек. Десять из 28 образцов FecalSwab были исключены из построения библиотеки 16S V1–V3 из-за недостаточного выхода ДНК.

В результате секвенирования всех оставшихся образцов было получено 1 825 747 необработанных последовательностей.После качественной фильтрации и группирования в общей сложности для дальнейшего анализа осталось 927 825 последовательностей, в среднем 7 137 последовательностей на образец (диапазон 1 066–25 887 последовательностей на образец). Всего было обнаружено 6105 OTU со средним охватом Good 92 ± 0,03%. В микробиоте образцов фекалий, хранящихся по эталонному методу, преобладали Bacteroidetes (в среднем 50,4%, SD 0,17%) и Firmicutes (в среднем 42,1%, SD 0,17%), за которыми следовали Proteobacteria (в среднем 4,6%, SD 5,3%). Не было обнаружено существенных различий в относительной численности доминирующих типов между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения.Микробный профиль на уровне рода у испытуемых был довольно сходным для аликвот, хранившихся в разных условиях (1).

Относительное распределение таксонов бактерий на уровне родов в зависимости от метода хранения или отбора проб для репрезентативной группы испытуемых (2 здоровых в контрольной группе, 2 пациента с СРК и 2 пациента с ВЗК).

Буквы обозначают метод хранения (A = -80°C, B = 1 нед. -20°C, C = 24 ч +4°C, D = 24 ч КТ, E = фекальный мазок).

Влияние методов хранения на разнообразие и богатство

Оценки богатства Chao1 и индексы разнообразия Шеннона не отличались статистически значимо между образцами, хранившимися непосредственно при -80°C, и аликвотами из тех же образцов, хранившимися при -20°C в течение одной недели (р = 0.829 и р = 0,456 соответственно), 4°С в течение 24 ч (р = 0,139 и р = 0,838 соответственно) и комнатной температуре в течение 24 ч (р = 0,946 и р = 0,466 соответственно). Однако FecalSwab показал статистически значимо более высокую оценку Chao1 и индекс Шеннона (p<0,01 и p<0,01 соответственно), чем эталонный метод. Индексы богатства Chao1 и разнообразия Шеннона для субъектов, все аликвоты которых были доступны для анализа (n = 17), изображены на рис. Следует отметить, что образец НС2 при температуре -20°C показал более высокие оценки Chao1 и Шеннона по сравнению с другими аликвотами этого субъекта.По остальным испытуемым таких различий не наблюдалось.

Влияние методов хранения на альфа-разнообразие.

Оценка содержания Chao 1 (a) и индекс Шеннона (b) показаны на оси y, а испытуемые показаны на оси x. Синие, зеленые и красные полосы обозначают здоровых испытуемых, пациентов с СРК и ВЗК соответственно. Показаны только испытуемые (17/28) с полным набором образцов (5 различных методов отбора и хранения), доступных для анализа. *p<0,01 по сравнению с -80°C, как определено с помощью знакового рангового критерия Вилкоксона.

Попарные сравнения других индексов альфа-разнообразия (наблюдаемое богатство и PD-целое дерево) также показали значительно более высокое разнообразие в FecalSwab по сравнению с аликвотами, хранившимися при -80 °C, но не было обнаружено существенных различий между этим эталонным методом и другие методы хранения ().

Таблица 2

Влияние методов выборки и хранения на показатели альфа-разнообразия.

+
Индексы разнообразия Методы отбора проб и хранения
-80°C (n = 28) 1 нед -20°C (n = 27) 24 ч КТ (n = 28) 2 (4 ч) = 28) 48–72 ч Фекальный мазок (n = 18)
Наблюдаемые виды 540.1 (112.5-811.2) 545,5 (93.8-995.9) 549.2 (95,3-830,6) 529.1 (90.6-791.4) 593,9 * (280.8-746.9)
Чао1 955.8 (206.0-1457.3) 935.2 (143.6-1780,6) 963,8 (180.1-1525.6) 936.36 (130.1-1440.3) 1042,62 * (5444-1308.4)
Шеннон 7,0 (4,4–8,4) 6,9 (4,1–8,7) 7,0 (4,1–8,4) 6.9 (4,4–8,5) 7,4* (5,5–8,1)
PD целое дерево 27.5 (8.6-37.3) 27,5 (6.8-46.0) 28.4 (7.8-37.7) 27.6 (7.0-37.2) 30.0 * (14.5-37.3)

Эффект хранения на фекальная микробная структура

Кластеризация UPGMA на основе невзвешенных попарных расстояний UniFrac между всеми образцами привела к разделению образцов на основе испытуемых, как показано на рис.В соответствии с приведенными выше выводами анализ основных координат невзвешенного расстояния UniFrac показал сильную кластеризацию образцов, основанных на испытуемых, хотя FecalSwabs, по-видимому, больше всего отклоняется от своего исходного предметно-специфического кластера (рис. S1, рис. S2 и рис. S3). Анализ основных координат взвешенных расстояний UniFrac и несходства Брея-Кертиса показал аналогичные результаты (рис. S4–S9). Более того, применение PERMANOVA показало, что выборки между испытуемыми статистически значимо отличались друг от друга (p<0.001 для невзвешенных UniFrac, взвешенных UniFrac и Bray-Curtis). На основе различных методов выборки и хранения PERMANOVA не было обнаружено значительной кластеризации.

Дерево UPGMA на основе невзвешенного расстояния UniFrac.

Включены все предметы (n = 28). Буквы обозначают метод хранения (A = -80°C, B = 1 неделя -20°C, C = 24 ч +4°C, D = 24 ч КТ, E = фекальный мазок). Образцы здоровых субъектов (HC), пациентов с СРК и ВЗК отмечены синим, зеленым и красным цветом соответственно.

Чтобы более подробно изучить влияние отдельных методов хранения, мы впоследствии изучили расстояния бета-разнообразия между эталонным методом хранения и каждым из других методов хранения.Медианные и межквартильные невзвешенные расстояния UniFrac показаны на .

Прямоугольный график невзвешенного расстояния UniFrac между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения.

Усы выражают максимальное и минимальное значения. *укажите на достоверную разницу (p<0,01).

Невзвешенное расстояние UniFrac между субъектами для всех образцов, хранившихся при температуре -80°C (эталонный метод), было статистически значимо больше, чем невзвешенные расстояния UniFrac внутри субъекта между эталонным методом и каждым из других методов хранения (p<0.05). Однако парные сравнения продемонстрировали статистически значимо большее невзвешенное расстояние UniFrac между эталонным методом и FecalSwab по сравнению с расстоянием между эталонным методом и всеми другими методами хранения, как показано на рис. Попарные сравнения взвешенного расстояния UniFrac и несходства Брея-Кертиса также показали, что расстояния бета-разнесения между FecalSwab и эталонным методом статистически значимо больше по сравнению с эталонным методом и всеми другими методами хранения (рис. S10 и S11).Средние невзвешенные значения расстояний UniFrac, равные -20°C, +4°C и RT по сравнению с эталонным методом, были сопоставимы между собой (), подразумевая, что аликвоты, хранившиеся в этих условиях, были в равной степени аналогичны образцам, хранившимся непосредственно при -80°C. Это также видно при попарном сравнении взвешенных различий UniFrac и Bray-Curtis (рис. S10 и S11). Эффект различных методов хранения не был значительным в подгруппах здоровых людей, пациентов с СРК и ВЗК.

Влияние отбора проб и хранения на присутствие и относительную численность определенных таксонов бактерий

Не было обнаружено связи между присутствием определенных таксонов бактерий и различными методами хранения при применении G-критерия с пороговым значением д = 0.25.

Впоследствии была изучена относительная численность Faecalibacterium , Roseburia и Ruminococcus , поскольку известно, что эти виды чрезвычайно чувствительны к кислороду и, следовательно, отличаются методами отбора проб и хранения. Не было обнаружено существенных различий между образцами, хранившимися при температуре -80°C, и другими методами отбора проб и хранения в относительной численности Faecalibacterium и Roseburia . Примечательно, что относительная численность Ruminococcus показала значительное увеличение в FecalSwab по сравнению с образцами при температуре -80°C (p<0.05), но не в других методах хранения (). В дополнение к крайне чувствительным к кислороду видам была исследована относительная численность Enterobacteriaceae. Парные сравнения показали значительно более высокую численность Enterobacteriaceae в FecalSwab (p<0,05), но не в других методах хранения, по сравнению с эталонным методом.

Кратность изменения относительной численности Enterobacteriaceae (a) и Ruminococcus spp. . (б) по сравнению с -80°С.

Показаны только испытуемые (17/28) с полным набором образцов (5 различных методов отбора и хранения).Изменения кратности показаны по оси y (в логарифмическом масштабе). * Относительная численность в FecalSwabs была значительно выше по сравнению с эталонным методом хранения (p<0,05, как определено с помощью критерия знакового ранга Уилкоксона).

Количественная оценка археона M . smithii показал, что в случае положительного результата для аликвоты, хранившейся при -80°C (n = 9/18), все остальные аликвоты (20°C, +4°C и КТ) также дали положительный результат ПЦР. Кроме того, концентрация M . smithii в положительных контрольных образцах (медиана = 8.54; диапазон 6,70–10,63 log10 копий ДНК/г фекалий) не отличался от концентрации в других аликвотах. Однако образцы FecalSwab были отрицательными по ПЦР у большинства субъектов, у которых эталонный образец был положительным (n = 7/9) из-за сильного разбавляющего эффекта консервирующего буфера.

Обсуждение

Целью данного исследования было изучение влияния различных методов отбора и хранения образцов на стабильность состава фекальной микробиоты у здоровых и больных субъектов.Предыдущие исследования изучали влияние различных температур хранения на состав фекальной микробиоты и в целом не показали существенных различий в богатстве, разнообразии и кластеризации. Однако эти исследования были основаны на ограниченном числе субъектов, включали только здоровых людей или не сообщали о состоянии здоровья включенных субъектов. Таким образом, неясна обобщаемость их результатов и выводов [5–9]. В наше исследование были включены как здоровые, так и больные субъекты; диагностированы общие желудочно-кишечные расстройства, которые, как сообщается, связаны с кишечной микробиотой, имеют различия в консистенции фекалий и используют различные лекарства, что увеличивает неоднородность нашей исследуемой популяции и, следовательно, внешнюю достоверность наших результатов.Не было обнаружено существенных различий в количестве наблюдаемых OTU, богатстве и разнообразии между эталонным методом хранения и другими методами. Сходные результаты наблюдались в общей исследуемой популяции, а также в подгруппах здоровых лиц, больных СРК и ВЗК и не различались по консистенции стула (т.е. в диапазоне от стула типа запора до типа диареи).

Наши результаты согласуются с большинством предыдущих исследований, которые не показали значительных изменений в общем составе микробиоты между замороженными образцами фекалий и образцами, хранившимися при комнатной температуре или 4°C в течение 24 часов [5–9].Только одно предыдущее исследование сравнило микробное богатство непосредственно замороженных образцов и образцов, хранившихся при комнатной температуре до 24 часов, и не показало статистически значимых различий [8], что согласуется с нашими выводами. Предыдущие исследования в основном проводились на небольшом количестве здоровых людей или с неизвестным состоянием здоровья. Мы показали, что результаты также применимы к пациентам с различными болезненными состояниями, приемом лекарств и/или консистенцией кала. В отличие от исследования Roesch et al., в котором участвовали четыре здоровых субъекта, мы не наблюдали снижения относительной численности чрезвычайно чувствительных к кислороду видов Faecalibacterium и Ruminococcus или увеличения относительной численности Enterobacteriaceae в образцы фекалий хранились при комнатной температуре в течение 24 часов по сравнению с эталонным методом в нашей когорте из 28 объектов исследования.В дополнение к этим результатам мы обнаружили, что относительная численность крайне чувствительных к кислороду видов Roseburia и соотношение Firmicutes/Bacteroides существенно не отличались между методами хранения и эталонным методом. Наши результаты свидетельствуют лишь о минимальном влиянии исследованных способов хранения на состав фекальной микробиоты от всего населения и всех исследованных подгрупп. Это наблюдение дополнительно подтверждается кластеризацией UPGMA и анализом основных координат, которые показали, что аликвоты фекалий сгруппированы на основе испытуемого, а не методов хранения.Хотя различия в бета-разнообразии относительно невелики и сопоставимы между каждым методом хранения, мы все же рекомендуем использовать один стандартизированный метод в рамках одного исследования, чтобы свести к минимуму любую потенциальную систематическую ошибку выборки.

Различия, наблюдаемые у отдельных людей, по крайней мере частично объясняются глубиной секвенирования. Мы понимаем, что наша глубина секвенирования не является сверхглубокой, поэтому не всегда будут обнаружены малочисленные OTU. Однако выводы нашего исследования не изменились, когда мы провели субанализ с образцами, которые имели более высокую глубину секвенирования (разрежение при 5000 сек/образец) (рис. S12–S14 и таблица S1).

В настоящее исследование были включены образцы FecalSwab, чтобы проверить, подходит ли эта стратегия отбора проб, часто используемая в клинических условиях, для анализа микробиоты. Фекальные тампоны хранили в течение 48–72 часов при комнатной температуре в модифицированной среде Кэри-Блэра, которая способствует выживанию облигатных анаэробов благодаря низкому окислительно-восстановительному потенциалу и используется для выделения кишечных патогенов [20]. FecalSwabs показали значительно более высокое микробное богатство и разнообразие. Это может быть объяснено небольшим преимуществом в росте некоторых таксонов бактерий с низкой численностью, особенно в пределах значительно обогащенных семейств Enterobacteriaceae и Ruminococcaceae, в этой среде.Такие малочисленные таксоны, необнаруженные при применяемой глубине секвенирования в других аликвотах, могут затем подняться выше предела обнаружения. Хотя фекальные тампоны по-прежнему сильно сгруппированы с другими аликвотами одного и того же субъекта, это также может объяснить, почему структура микробного сообщества фекальных тампонов показала большее расстояние (несходство Брея-Кертиса и расстояния UniFrac) к эталонному методу, чем к другим методам хранения. Использование фекальных мазков кажется наиболее удобным для пользователя методом получения образцов фекалий, однако в этом исследовании 10 из 28 образцов фекальных мазков дали недостаточное количество ДНК и поэтому не могли быть секвенированы.При использовании FecalSwabs рекомендуется адаптированный протокол выделения ДНК ( e . g , не зависящий от очистки на основе колонки), чтобы сохранить максимально возможный выход ДНК. Результаты FecalSwab применимы только к этому конкретному тампону и другим транспортным тампонам, содержащим среду Кэри-Блэра, и их не следует экстраполировать на тампоны, использующие другую транспортную среду. Важно отметить, что в рамках или между исследованиями результаты FecalSwab не следует сравнивать с другими методами сбора и хранения фекалий из-за различий в микробиологической структуре между этими методами отбора проб.Насколько нам известно, это первое исследование, в котором изучается влияние различных методов отбора проб и хранения с помощью пиросеквенирования в довольно большой гетерогенной группе. Включив в исследование здоровых людей и людей с желудочно-кишечными расстройствами, результаты этого исследования можно распространить на другие группы населения. Результаты и выводы применимы только к исследованиям таксономического состава фекальной микробиоты. Метагеномика, метатранскриптомика, метапротеомика и метаметаболомика приобретают все большее значение в изучении и понимании микробиоты желудочно-кишечного тракта человека.Известно, что метаболиты, белки и особенно мРНК подвержены ферментативной деградации. Поэтому также необходимы исследования влияния различных методов отбора проб и хранения на стабильность метагенома, метаметаболома, метатранскриптома и метапротеома.

Основываясь на наших и предыдущих наблюдениях, мы пришли к выводу, что образцы фекалий, хранившиеся при температуре -20°C в течение 1 недели, при +4°C в течение 24 часов и при комнатной температуре в течение 24 часов, сохраняли очень похожую бактериальную структуру на уровне ДНК, что и образцы фекалий. хранится при температуре -80°C в течение 10 минут.Прямое замораживание фекалий (например, в домашнем морозильнике участников исследования) повышает вероятность проведения дополнительных анализов (например, метатранскриптомики, метапротеомики), но любой ценой следует предотвратить оттаивание образцов во время транспортировки [8]. Если прямое замораживание невозможно в условиях исследования, мы рекомендуем хранить фекалии либо при комнатной температуре, либо при +4°C (в холодильнике) не более 24 часов.

При использовании FecalSwab в качестве метода отбора проб процедуру выделения следует изменить, чтобы обеспечить высокое качество и количество ДНК.Кроме того, время транспортировки (хранение при комнатной температуре) должно быть ограничено, поскольку структура микробного сообщества в фекальных мазках (после 48–72 часов при комнатной температуре) больше всего отклонялась от исходной структуры микробного сообщества. Гомогенизация фекалий перед обработкой кажется необязательной, поскольку недавняя работа показала, что гомогенизация не изменяет фекальную микробиоту [21]. Мы рекомендуем применять единый метод отбора проб и хранения в рамках исследования, чтобы предотвратить возможную систематическую ошибку в результатах.

Вспомогательная информация

S1 Рис.
Анализ основных координат на основе невзвешенного расстояния UniFrac для здоровых субъектов, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).

(TIF)

S2 Рис.
Анализ основных координат на основе невзвешенного расстояния UniFrac для пациентов с СРК, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).

(TIF)

S3 Рис.
Анализ основных координат на основе невзвешенного расстояния UniFrac для пациентов с ВЗК, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).

(TIF)

S4 Рис.
Анализ основных координат на основе расстояния Брея-Кертиса для здоровых субъектов, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).

(TIF)

S5 Рис.
Анализ основных координат на основе расстояния Брея-Кертиса для пациентов с СРК, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).

(TIF)

S6 Рис.
Анализ основных координат на основе расстояния Брея-Кертиса для пациентов с ВЗК, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).

(TIF)

S7 Fig
Анализ основных координат на основе взвешенного расстояния UniFrac для здоровых субъектов, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).

(TIF)

S8 Fig
Анализ основных координат на основе взвешенного расстояния UniFrac для пациентов с СРК, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).

(TIF)

S9 Рис.
Анализ основных координат на основе взвешенного расстояния UniFrac для пациентов с ВЗК, окрашенных в зависимости от субъекта (a) и метода хранения (b).

(TIF)

S10 Рис.
Прямоугольная диаграмма взвешенного расстояния UniFrac между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения.

(*p<0,05).

(TIF)

S11 Рис.
Коробчатая диаграмма Брея-Кертиса. Различия между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения.

(*p<0,05).

(TIF)

S12 Рис.
Прямоугольная диаграмма непохожести Брея-Кертиса между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения при глубине отбора проб 5000 сек/образец.

(*p<0,05).

(TIF)

S13 Рис.
Прямоугольная диаграмма невзвешенного расстояния UniFrac между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения при глубине отбора проб 5000 сек/проба.

(*p<0,05).

(TIF)

S14 Рис.
Прямоугольная диаграмма взвешенного расстояния UniFrac между эталонным методом и другими методами отбора проб и хранения при глубине отбора проб 5000 сек/проба.

(*p<0,05).

(TIF)

S15 Fig
Влияние методов хранения и консистенции стула на альфа-разнообразие.

Оценка содержания Chao 1 (a) и индекс Шеннона (b) показаны на оси y, а испытуемые показаны на оси x.Синие и красные полосы обозначают субъектов с нормальным стулом и субъектов с диареей соответственно. Показаны только испытуемые (17/28) с полным набором образцов (5 различных методов отбора и хранения), доступных для анализа. *p<0,05 сравнение диареи с нормальным стулом. 1 Бристольская шкала стула 3–4. 2 Бристольская шкала стула 5–7.

(TIF)

S1 Таблица
Влияние методов выборки и хранения на показатели альфа-разнообразия при глубине выборки 5000 последовательностей/выборку.

Медиана и диапазон показаны в таблице. (*р<0,05 по сравнению с -80°С).

(DOCX)

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Tim van den Heuvel и Zlatan Mujagic за их помощь.

Заявление о финансировании

Авторы не получали специального финансирования для этой работы.

Доступность данных

Соответствующие данные находятся в документе и в файлах вспомогательной информации. Бактериальные последовательности, которые использовались в этой статье, были внесены в базу данных EMBL под номером доступаPRJEB6765.

Каталожные номера

1. Детлефсен Л., Экбург П.Б., Бик Э.М., Релман Д.А. Сборка микробиоты кишечника человека. Тенденции в экологии и эволюции. 2006. стр. 517–523. 10.1016/j.tree.2006.06.013 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]2. Manichanh C, Borruel N, Casellas F, Guarner F. Микробиота кишечника при ВЗК. Nature Reviews Гастроэнтерология и гепатология. 2012. С. 599–608. 10.1038/нргастро.2012.152 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]3. Мехал ВЗ. Гордиев узел дисбактериоза, ожирения и НАЖБП.Нат Рев Гастроэнтерол Гепатол. 2013; 10: 637–44. 10.1038/нргастро.2013.146 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]4. Карлссон Ф.Х., Тремароли В., Ноокаев И., Бергстрем Г., Бере С.Дж., Фагерберг Б. и др. Метагеном кишечника у европейских женщин с нормальным, нарушенным и диабетическим контролем глюкозы. Природа. 2013; 498: 99–103. 10.1038/природа12198 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]5. Кэрролл И.М., Рингель-Кулка Т., Сиддл Дж.П., Клаенхаммер Т.Р., Рингель Ю. Характеристика фекальной микробиоты с помощью высокопроизводительного секвенирования выявляет стабильное микробное сообщество во время хранения.ПЛОС Один. 2012;7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]6. Лаубер С.Л., Чжоу Н., Гордон Дж.И., Найт Р., Фиерер Н. Влияние условий хранения на оценку структуры бактериального сообщества в почве и образцах, связанных с человеком. FEMS Microbiol Lett. 2010; 307: 80–86. 10.1111/j.1574-6968.2010.01965.x [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]7. Roesch LFW, Casella G, Simell O, Krischer J, Wasserfall CH, Schatz D, et al. Влияние хранения образцов фекалий на разнообразие бактериального сообщества.Open Microbiol J. 2009;3: 40–46. 10.2174/1874285800

0040 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]8. Кардона С., Эк А., Касселлас М., Галларт М., Аластру С., Доре Дж. и др. Условия хранения кишечной микробиоты имеют значение для метагеномного анализа. БМС микробиол. 2012;12:158 10.1186/1471-2180-12-158 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]9. Wu GD, Lewis JD, Hoffmann C, Chen YY, Knight R, Bittinger K, et al. Методы отбора проб и пиросеквенирования для характеристики бактериальных сообществ в кишечнике человека с использованием меток последовательности 16S.БМС микробиол. 2010;10:206 10.1186/1471-2180-10-206 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]10. Musser JMB, Gonzalez R. Эффективность системы транспортировки анаэробных мазков для поддержания жизнеспособности аэробных и анаэробных микроорганизмов после хранения при температуре -80 градусов C. J Vet Diagn Invest. 2011; 23: 95–99. 10.1177/104063871102300115 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Фонтана С., Фаваро М., Фавалли С. Как микробиология на основе жидкости может изменить рабочий процесс в микробиологических лабораториях. Adv Microbiol.Издательство научных исследований; 2013;03: 504–510. 10.4236/прицел.2013.36067 [Перекрестная ссылка] [Академия Google] 12. Д’Хэнс Г., Сандборн В.Дж., Фиган Б.Г., Гебоес К., Ханауэр С.Б., Ирвин Э.Дж. и др. Обзор показателей активности и конечных точек эффективности клинических испытаний медикаментозной терапии язвенного колита у взрослых. Гастроэнтерология. 2007; 132: 763–86. 10.1053/ж.гастро.2006.12.038 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Dridi B, Henry M, El Khéchine A, Raoult D, Drancourt M. Высокая распространенность Methanobrevibacter smithii и Methanosphaera stadtmanae, обнаруженная в кишечнике человека с использованием улучшенного протокола обнаружения ДНК.ПЛОС Один. 2009;4: е7063 10.1371/journal.pone.0007063 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]16. Schloss PD, Westcott SL, Ryabin T, Hall JR, Hartmann M, Hollister EB, et al. Представляем mothur: открытое, независимое от платформы, поддерживаемое сообществом программное обеспечение для описания и сравнения микробных сообществ. Appl Environ Microbiol. 2009; 75: 7537–41. 10.1128/АЭМ.01541-09 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]17. Caporaso JG, Kuczynski J, Stombaugh J, Bittinger K, Bushman FD, Costello EK, et al.QIIME позволяет анализировать данные секвенирования с высокой пропускной способностью. Нат Методы. 2010;7: 335–36. 10.1038/нмет.ф.303 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]18. Макдональд Д., Прайс М.Н., Гудрич Дж., Навроцкий Е.П., ДеСантис Т.З., Пробст А. и др. Улучшенная таксономия Greengenes с явными рангами для экологического и эволюционного анализа бактерий и архей. ISME J. 2012; 6: 610–8. 10.1038/исмей.2011.139 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]19. Лозупоне С, Найт Р.UniFrac: новый филогенетический метод сравнения микробных сообществ. Appl Environ Microbiol. 2005; 71: 8228–35. 10.1128/АЭМ.71.12.8228-8235.2005 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]21. Сантьяго А., Панда С., Менгельс Г., Мартинес Х., Аспироз Ф., Доре Дж. и др. Обработка образцов фекалий: шаг вперед к стандартам анализа микробных сообществ. БМС микробиол. 2014;14:112 10.1186/1471-2180-14-112 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Предоставление образца стула – Департамент Миннесоты.здоровья

Чтобы сообщить о подозрении на заболевание пищевого или водного происхождения, позвоните по номеру 1-877-FOOD-ILL.


Экспонаты для более безопасного контакта с сельскохозяйственными животными (Safer FACEs)
Учебная программа Safer Farm Animal Contact Exhibits (Safer FACEs) может помочь вам понять риски заболеваний и травм от сельскохозяйственных животных, а также то, как защитить ваших посетителей. Пройдите это бесплатное онлайн-обучение, и Министерство здравоохранения Миннесоты предоставит подтверждение того, что ваше заведение узнало об этих проблемах.


Безопасность яиц
Яйца могут быть частью здорового питания. Однако они скоропортящиеся, как сырое мясо, птица и рыба. Чтобы быть безопасными, они должны быть должным образом охлаждены и приготовлены.


Готовка для групп
Информация для потребителей о приготовлении и подаче блюд для больших групп. Информация, которая поможет волонтерам безопасно готовить и подавать еду для больших групп, таких как семейные встречи, церковные обеды и общественные собрания.


Цыплята и утята: Salmonella
Эти милые маленькие цыплята и утята могут быть большой достопримечательностью для детей в это время года, но они также могут быть источником болезней, поэтому важно, чтобы те, кто их держит, принимали меры для предотвращения заражения.


Нет такой вещи, как «желудочный грипп» (PDF)
Жалобы на «желудочный грипп» обычно связаны с норовирусом, наиболее частой причиной желудочно-кишечных заболеваний.

Основы безопасности пищевых продуктов: профилактика болезней пищевого происхождения
Вы можете многое сделать для безопасного обращения с едой и ее приготовления.Узнайте, как безопасно готовить, подавать и хранить пищу.

Защитите других, если у вас диарея!
Людям, страдающим диареей, следует избегать плавания в общественных бассейнах или озерах, совместного принятия ванн с другими людьми и приготовления пищи для других.
Маленьким детям (детям в подгузниках), страдающим диареей, нельзя разрешать плавать или посещать детский сад.


Свяжитесь с нами:

Если у вас есть вопросы или комментарии по поводу этой страницы, воспользуйтесь нашей формой комментариев IDEPC или позвоните по телефону 651-201-5414 в отдел эпидемиологии, профилактики и контроля инфекционных заболеваний MDH.

Почему мне нужно принести образец стула для моего нового питомца?

 

Кишечные паразиты чрезвычайно часто встречаются у щенков, котят и взрослых новых домашних животных. Эти паразиты иногда могут заражать людей. Таким образом, анализ стула и дегельминтизация считаются рутинной процедурой.

 

Что мы ищем в образце кала?:  

Мы отправляем стул в лабораторию для анализа на наличие микроскопических признаков таких паразитов, как аскариды, анкилостомы, лямблии и кокцидии.

 

Мы ищем настоящих червей в образце кала?:

Обычно нет. В образце стула развитые черви обнаруживаются редко, поэтому мы ищем их яйца. Одним из исключений являются ленточные черви. Мы редко находим микроскопические доказательства, яйца, в образце. Если вы видите рисоподобные сегменты на задней части вашего питомца или в свежем стуле, мы предлагаем вам принести его нам в отдельном пакете от образца стула, чтобы червь не исчез.

 

Сколько стула мне нужно принести?:

Нам нужно около 1 столовой ложки свежего стула. Мы можем обойтись немного меньше, если у вас очень маленький питомец.

 

Насколько свежим должен быть этот образец?:

Обычно мы говорим в течение 12 часов, но полный ответ требует больше времени. Образец должен оставаться влажным и не замерзать. Для уличных питомцев в зимнее время нужно доставать довольно быстро, чтобы предотвратить повреждение яиц из-за замерзания.Летом образец может слишком быстро высохнуть или обзавестись «жучками», которых мы не ищем. Для кошек, использующих наполнитель, сам наполнитель не является проблемой, но слишком долгое пребывание в коробке при контакте с большим количеством наполнителя может высушить его. Поэтому мы рекомендуем вам получить образец у источника как можно скорее, хорошо запечатать его в пластиковом пакете, чтобы защитить образец, и хранить в прохладном месте до 12–24 часов. Если вы собираетесь более 4-8 часов, это означает холодильник.  

 

Достаточно ли убирать испражнения после моей новой собаки каждое утро?:

№.Важно сразу же убирать за своим щенком/новой собакой. Как только этот стул соприкасается с почвой, удаление загрязненной почвы становится необходимым. Чем дольше стул сидит, тем дальше идет загрязнение. В некоторых случаях яйца в почве могут оставаться заразными в течение многих лет. Следовательно, другие домашние животные, люди и даже тот же самый питомец (в будущем) подвержены риску заражения паразитами.

 

Могут ли паразиты появиться непосредственно у моего питомца?:

Для некоторых паразитов да.Если у вашего питомца есть какие-либо признаки диареи или грязный зад, это может содержать яйца паразитов и быть источником инфекции для собак, кошек и людей. Держите заднюю часть вашего нового питомца в чистоте, делая ежедневные ванночки для ягодиц или используя детские салфетки, если это необходимо.

 

Дополнительные источники информации о паразитах:

Собаки: домашние животные и паразиты

Кошки: домашние животные и паразиты

Центр контроля заболеваний

Сеть здоровья домашних животных

   

Manchester Veterinary Clinic, Inc. – Ветеринары – Манчестер – Коннектикут – Ветеринары, которым доверяют, для ваших питомцев

5 советов, как взять образец кала вашего питомца к ветеринару

5 шагов для доставки образца кала вашего питомца ветеринару

 

Берите с собой экскременты вашего питомца к ветеринару в рамках его ежегодного осмотра — это неотъемлемая часть плана медицинского обслуживания вашего питомца.

Некоторые люди могут думать иначе, но имейте в виду, что любой питомец в любом возрасте подвержен риску заражения глистами, и многие из этих паразитов могут передаваться человеку.

Проверка образца кала вашего питомца 1-2 раза в год является частью ответственного поведения владельца животного.

Но когда, где и как можно успешно доставить образец какашек в ветеринарную клинику?

Мы вас прикроем!

Вот 5 советов, как доставить ваш ветеринарный образец кала!

1.Чем свежее, тем лучше .

Если экскременты вашей собаки просидели на заднем дворе 3 дня, оставьте их там.

3-дневный образец кала не очень диагностический.

My Brown Newfies является участником партнерской программы Amazon Services LLC, партнерской рекламной программы, предназначенной для предоставления сайтам средств для получения платы за рекламу за счет рекламы и ссылок на Amazon.com

То же самое касается кошачьих какашек.

Кошачьи какашки, пролежавшие в лотке 3 дня и сильно обезвоженные, сами понимаете, трескаются, как палка, не являются хорошим образцом.

Свежие образцы (в течение 24 часов) дают более точные и точные результаты, поэтому постарайтесь собрать образец, как только ваш питомец какает.

2. Ключ хранения .

Вы хотите сохранить образец как можно лучше.

Если у вашего питомца назначена встреча после обеда, а он какает только утром, ничего страшного.

Хранить можно в холодильнике, или в прохладную погоду хранить на улице.

Не храните его в морозильной камере и не оставляйте запекаться на жарком солнце, это приведет к получению плохого образца.

3. Больше не лучше .

Большинству ветеринаров и лабораторий требуется лишь небольшое количество корма для анализа кала.

Размером примерно с 2 кубика сахара . (перепроверьте у своего ветеринара, чтобы быть уверенным) Вам не нужно приносить целую кучу какашек.

4. Выбирайте контейнер с умом .

В большинстве ветеринарных клиник должны быть контейнеры для фекалий, которые вы можете взять домой и взять образец.

Другие контейнеры, которые хорошо работают, — это старые бутылочки из-под таблеток или пластиковые контейнеры.

Пластиковые пакеты могут работать хорошо, но они могут протекать, поэтому убедитесь, что вы упаковываете образец в двойную упаковку.

 Сумки для какашек отлично работают и отлично подходят для всех участников!! Не забудьте также пометить образец именем вашего питомца.

5. Убедитесь, что вы берете какашки .

Звучит безумно, но комок кошачьей мочи часто можно спутать с кошачьим фекалиями, но образец кошачьей мочи будет отклонен при проверке на фекальные паразиты.

 

У каких домашних животных должны быть проверены образцы экскрементов?

Каждому питомцу!

Образец стула домашних животных должен проверяться ветеринаром не реже одного раза в год при ежегодном посещении.

Если вы не можете взять образец кала со своего двора, ваш ветеринар может использовать инструмент, называемый фекальной петлей, чтобы взять образец у вашей собаки.

Фекальная петля похожа на маленькую палочку с маленькой петлей на конце.

Ваш ветеринар может ввести зонд в прямую кишку вашей собаки и взять образец стула.

Почему необходимо проверять образцы экскрементов домашних животных? Образцы стула

помогут вашему ветеринару определить, есть ли у вашего питомца кишечные паразиты, такие как аскариды, анкилостомы, власоглавы, кокцидии и лямблии.

Кишечные паразиты болтаются в желудочно-кишечном тракте вашего питомца, где вы их не видите.

Единственный способ обнаружить наличие кишечных гельминтов — посмотреть образец кала под микроскопом и проверить наличие яиц.

Некоторые из паразитов, которые могут быть у домашних животных, могут передаваться другим домашним животным и людям.

Сколько времени занимает анализ какашек?

Некоторые ветеринары делают анализ фекалий или мазок на дому, и это обычно занимает около 15-20 минут.

Другие ветеринары предпочитают отправлять образцы фекалий в лабораторию, и это может занять 1-2 рабочих дня.

Стоимость образца кала варьируется в зависимости от вашего региона, но в большинстве клиник вы можете заплатить от 25 до 50 долларов.

Ваш ветеринар требует, чтобы вы также принесли образец мочи вашей собаки?

Подождите!

Прежде чем идти, обязательно ознакомьтесь с нашим новым постом «Почему сейчас так сложно записаться на прием к ветеринару».

 

Материалы

  • Пластиковый контейнер для перевозки какашек, например:
  • Промытый контейнер для таблеток
  • Контейнер для фекалий от ветеринара (если есть)
  • Сумка на молнии
  • Мешок для какашек
  • Пластиковая ложка

Инструкции

  1. Соберите небольшой свежий образец кала в течение 24 часов
  2. Храните в холодильнике или прохладном месте до назначенного приема
  3. Не оставляйте на жарком солнце и не храните в морозильной камере
  4. Этикетка с именем вашего питомца прием к ветеринару

Примечания

Большинству ветеринаров требуется лишь небольшое количество экскрементов, но они всегда заранее звонят, чтобы убедиться.

Убедитесь, что вы приносите какашки, в которых мало мусора.

Используйте пластиковую ложку, чтобы собрать экскременты и поместить их в контейнер. Выбросьте ложку!

Этот пост содержит партнерские ссылки 😉

Делиться заботой!

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.