Зондирование на описторхоз: Диагностика описторхоза – сдать анализ в СЗЦДМ

Содержание

Лечение описторхоза в Одинцово

В организм человека личинки паразитов попадают вместе с сырой или недостаточно термически обработанной рыбой и длительно живут в нем (35-40 лет), нанося вред и отравляя организм продуктами своей жизнедеятельности. Против описторхов не вырабатывается иммунитет и возможно неоднократное заражение ими.

Описторхии в организме не размножаются. Количество их увеличивается каждый раз при приеме в пищу зараженной рыбы. Больной описторхозом не является заразным для других людей. Возбудитель описторхоза поражает обычно весь желудочно-кишечный тракт, но наиболее часто паразита находят в желчных ходах, желчном пузыре и протоках поджелудочной железы.

Организм хозяина вынужден постоянно обеспечивать паразита питательными веществами, удалять продукты его жизнедеятельности. С другой стороны паразит подавляет защитные реакции организма хозяина. Борьба человека с паразитом проявляется в виде клинических симптомов заболевания описторхозом.

Симптомы

Ведущим из них является развитие аллергических реакций, в виде крапивницы, которая появляется и исчезает независимо от каких либо причин, отека, вплоть до отека Квинке, холодовой аллергии. Описторхоз может быть основной причиной поллинозов, бронхиальной астмы, различных поражений кожи – проблемной кожи, псориаза, экземы. Больные обычно жалуются на боли в правом подреберье, тошноту, головные боли, боли в суставах и в мышцах, постоянную утомляемость, усталость. Описторхоз может быть основной причиной или поддерживать язвенную болезнь желудка и 12-перстной кишки, воспаления поджелудочной железы, дискинезии желчевыводящей системы, гипертонии, бесплодия, облысения, различных расстройств со стороны сердечнососудистой системы (аритмии, экстрасистолии и др.), нервной системы (неврозы, депрессии), эндокринной и что наиболее важно, иммунной систем. При наличии описторхоза, трудно или вообще не поддаются лечению различные хронические заболевания (трихомониаз, хламидиоз, простатит и др.) Однако необходимо отметить, что описторхоз может протекать до поры до времени, совершенно бессимптомно и сразу проявиться в виде цирроза и рака печени. Гельминты оказывают отрицательное влияние на течение беременности и родов, физическое и умственное развитие детей и на многое, многое другое.

Диагностика и лечение

Диагностика описторхоза проводится на основании клинических симптомов, результатов дуоденального зондирования и анализа кала на яйцеглист. Все другие методы являются косвенными и не могут с достоверностью констатировать наличие или отсутствие заболевания.

В настоящее время существуют множественные методы лечения описторхоза, которые делятся на общепринятые, традиционные и нетрадиционные, и все они содержат рациональные элементы воздействия на паразита. Для того чтобы обезопасить себя и членов своей семьи нужно соблюдать элементарные правила профилактики описторхоза. Основой эффективной профилактики является исключение из рациона не обеззараженной рыбы и рыбной продукции. Обеззараживание можно достигнуть благодаря тщательной термической обработке, замораживанию, копчению или солению.

Дуоденальное зоднирование – Гастроэнтерология – Terve: российско-финский медицинский центр в Красноярском крае и Санкт-Петербурге

Для выявления паразитов (описторхии, лямблии и другие) необходимо проведение лабораторного анализа желчи и изучение функции желчного пузыря. Для этого применяется классический метод дуоденального зондирования.
Это диагностирование происходит путем сбора и обследования состава желчи. Точность результатов проведенной процедуры составляет более 90%.

Показаниями к дуоденальному зондированию являются:

  • подозрение на наличие у пациента  паразитарной инвазии
  • чувство горечи в рту, боли и дискомфортные ощущения в правом подреберье, диагностированный по результатам УЗИ застой жёлчи, постоянная тошнота и приступы рвоты, кожный зуд, кожные высыпания

Процедура не проводится, если у пациента наблюдается:

  • патологии сердечно-сосудистой системы
  • нарушения свёртывания крови
  • кровотечения в пищеварительном тракте
  • серьёзные искривления позвоночника
  • плохая проходимость пищевода
  • язвенная болезнь  (эрозии) желудка и двенадцатиперстной кишки
  • варикозно расширенные вен пищевода
  • острые заболевания печени, желудка и желчного пузыря
  • эпилепсия
  • судорожные припадки
  • беременность
  • отравление
  • астма
  • ожоги в пищеварительном тракте
  • заболевания ЛОР органов
  • камни в желчном пузыре

ОСОБЕННОСТИ ПОДГОТОВКИ К ДИАГНОСТИКЕ: 

Процедура дуоденального зондирования может проводиться только строго натощак, поэтому за 8-10 часов до неё пациенту нельзя кушать, а за 3-4 часа следует воздержаться и от употребления жидкости. В рамках подготовки пациента, за пять дней до запланированной процедуры требуется введение диетических ограничений в рационе. Из меню необходимо исключить: фрукты и овощи с высоким содержанием клетчатки, в сыром и приготовленном виде; хлеб, выпечку; кондитерские изделия; молоко и молочные продукты; бобовые; жирные сорта мяса и рыбы. Такая диета вводится для снижения уровня газообразования в кишечнике.

Подготовка к процедуре дуоденального зондирования

Проводится дуоденальное зондирование с помощью одноразового зонда, который представляет собой тонкую длинную эластичную полую трубку, на конце которой находится полая металлическая олива. Диаметр трубки – не более 5 миллиметров, её длина – 1,5 метра. Олива имеет форму небольшой оливки длиной 20 миллиметров, шириной – 5 миллиметров. Её округлая форма и небольшой размер должны облегчить пациенту процесс заглатывания зонда.
Весь процесс проглатывания зонда  проводит лаборант, который подробно рассказывает как правильно дышать  и что делать, чтобы процедура прошла безболезненно и правильно, поэтому мы рекомендуем  не волноваться перед  и во время  процедуры , а внимательно слушать специалиста – правильно дышать и глотать зонд.

Если говорить о боли, то её не будет. Да, процедура неприятная, но не болезненная, главное  настроить себя и понимать , что качественно проведенное дуоденальное зондирование залог правильного диагноза и лечения.

При прохождении обследования  могут быть выявлены паразитарные инвазии (описторхоз, лямблиоз и многие другие). Заболевания подобного типа самостоятельно лечатся нудно и довольно тяжело. Лечение должно быть комплексным, с применением правильной схемы, поэтому лечение нужно пройти под четким контролем специалиста.

В нашей клинике дегельминтизацию можно пройти, как амбулаторно, так и в рамках дневного стационара.

Лечение описторхоза в Красноярске ➫ Натали Бьюти в Красноярске

Лечение описторхоза

Описторхоз – это паразитарная инфекция с фекально-оральным механизмом передачи возбудителя (плоские черви вида Opisthorchis felineus и Opisthorchis viverrini) с поражением желудочно-кишечного тракта (преимущественно печени, желчных путей и поджелудочной железы). Человек заражается вследствие употребления недостаточно термически обработанной рыбы из пресных водоемов.

Симптомы описторхоза

Заболевание чаще всего протекает в двух последовательных фазах: острой (аллергической) и хронической (скрытой). Однако в некоторых случаях, ввиду индивидуальных особенностей организма и возбудителя, острая фаза может быть стертой и напоминать хроническую.

В острой фазе описторхоза после попадания возбудителя в печень, желчный пузырь и/или поджелудочную железу возникают следующие симптомы:

  • Немотивированная слабость, утомляемость, мышечные боли.
  • Незначительное повышение температуры тела или выраженная лихорадка.
  • Аллергические реакции в виде сыпи на коже вплоть до экземы.
  • Тяжесть в животе, нарушение обычного режима дефекации.
  • Иногда может возникать кашель с отделением слизистой мокроты, одышка.

Длительность острого периода обычно составляет 3-4 недели с постепенным уменьшением выраженности клинических проявлений. Далее заболевание переходит в хроническую стадию с преимущественно неспецифическими симптомами:

  • Немотивированная слабость, утомляемость, мышечные боли.
  • Тяжесть в животе с нарушением перевариваемости пищи, вздутие.
  • Хронические боли в верхней части живота слабой или умеренной интенсивности.
  • Лабильность настроения, чаще в сторону депрессии.
  • Аллергические реакции на коже.

Длительность хронической фазы описторхоза может достигать многих лет, вплоть до назначения успешного лечения. Самостоятельно организм человека не в состоянии излечиться от заболевания.

Диагностика описторхоза в нашей клинике

Описторхоз – это инфекционное заболевание, чрезвычайно распространенное на территории России. Особенно высокая заболеваемость, регистрируется в ее восточной части у проживающих по берегам Сибирских рек. Это связано с привычками в питании и употреблением большого количества вяленой рыбы. Заболевание имеет разнообразные проявления и его трудно диагностировать. Единственным достоверным методом его диагностики является

дуоденальное зондирование.

Анализ желчи при дуоденальном зондировании имеет гораздо большее диагностическое значение, чем анализ кала или крови. В фекалиях не всегда можно обнаружить яйца паразита, а ИФА крови может давать ложные результаты, из-за наличия в организме дополнительных инфекций. Плюс такого исследования в возможности обнаружения паразитов на ранней стадии развития инвазии – до того, как они отложили яйца, а также выявления самих кист и личинок, еще не перешедших во взрослую форму.

Пробирки с содержимым отправляют в лабораторию для микроскопического анализа желчи  и исследования желчи  описторхоз. В пользу описторхоза свидетельствует факт употребления недостаточно термически обработанной ранее рыбы,  а также следующие клинико-лабораторные показатели:

  • Лейкоцитоз и эозинофилия крови.
  • Увеличение размеров печени – гепатомегалия.
  • Увеличение концентрации печеночных маркеров в крови (АЛТ, АСТ, ГГТ и др.).
  • Наличие антител IgG и IgM к червям рода Opisthorchis в крови.

Дуоденальное зондирование при описторхозе

Дуоденальное зондирование при описторхозе проводят натощак утром. Перед ее проведением необходима предварительная подготовка. Без него не будет достоверности результатов исследования.

Она включает следующее:

  1. Отмена приема желчегонных средств за пять суток до обследования. Отменяются также слабительные, сосудорасширяющие, антиспастические лекарственные средства.
  2. За три дня до исследования исключают все продукты, усиливающие образование и отделение желчи. Запрещено употреблять все жареное, жирное, крепкий мясной и рыбной бульон, яйца, бобовые, сливки, сметану. Не рекомендуют различные сладости, свежие ягоды, овощи, фрукты. Спиртное, газирование напитки, крепкий чай, кофе тоже запрещают.
  3. В день, предшествующий обследованию, рекомендуют легкий ужин не позднее шести часов вечера (максимум возможного до восьми вечера). Затем следует принять две таблетки Но-шпы. После этого разрешается пить только несладкий, некрепкий чай.
  4. Рано утром перед обследованием нельзя завтракать. Нежелательно пить ничего, кроме теплой воды. Запрещено курить, пользоваться жевательной резинкой. Разрешается только почистить зубы.

В клинике “Натали-Бьюти” можно пройти процедуру дуоденального зондирования по предварительной записи.

Диагностика описторхоза – инвазионного заболевания, вызываемое печеночным сосальщиком (описторхом), довольно затруднительно. Для точного подтверждения диагноза, а также выявления данного гельминта, его яиц и личинок у человека, назначается дуоденальное зондирование, которое помогает получить полную картину состояния желчных путей и степень запущенности недуга.

Дуоденальное зондирование на паразитов является единственным методом выявления у человека лямблий и возбудителей описторхоза. Определение яиц паразитов в желчи является самым достоверным способом диагностирования описторхоза. В дополнение к нему можно применять анализ крови на антитела, но этот метод является косвенным, и не всегда дает точную информацию о состоянии здоровья пациента. Окончательное решение о целесообразности применения диагностических методик принимает лечащий врач. Он учитывает состояние здоровья пациента, наличие показаний и противопоказаний. На основании этих данных специалист может подобрать метод, который будет наиболее информативен в каждом конкретном случае

И помните, перед выполнением зондирования очень важно соблюдать все предписания врача-диагноста. Только при правильной подготовке удается получить точные результаты. В противном случае все старания пациента и врача будут напрасными.

Лечение описторхоза

Заболевание необходимо лечить в стационаре под контролем врача с использованием контрольных диагностических тестов. После выздоровления человек еще в течение нескольких лет наблюдается у специалиста на риски повторного заражения.

Медикаментозное лечение подразумевает три этапа лечения:

  1. Подготовка. На начальном этапе врач способствует оттоку желчи, снятие интоксикационного и аллергического синдрома у человека, воспалительных процессов в органах ЖКТ. Применяются спазмолитики, антигистаминные средства и препараты, блокирующие Н1-гистаминовые рецепторы. Уместна дифференцированная желчегонная терапия, а также прием антибиотиков в случае выявления воспаления. Подготовительный этап включает в себя также физиотерапию для микроциркуляторного, десенсибилизирующего и спазмолитического воздействия на организм.
  2. Дегельминтизация. Самым востребованным препаратом в данном случае считается Празиквантел (Бильтрицид), который является препаратом широкого спектра воздействия. К его составу чувствительны почти все виды гельминтов, происходит спастический паралич особей и выведения паразита наружу. На каждый килограмм веса пациента берут 50-60 мг активного вещества, полученную дозу дробят на 3 приема, между которыми выдерживают 4-6 часов.
  3. Реабилитация. В данном случае врач назначает несколько способов восстановления организма:
  • процедуры дуоденального беззондового зондирования;
  • желчегонная медикаментозная терапия;
  • прием сорбентов;
  • прием пребиотиков и пробиотиков для нормализации микрофлоры кишечника.

Первая фаза лечения описторхоза включает в себя применение базисных противоаллергических, дезинтоксикационных препаратов, а также нормализацию процесса пищеварения, в частности, оттока желчи и панкреатического сока в двенадцатиперстную кишку.

После стабилизации состояния пациента проводится курс противомикробного лечения специфическими препаратами. На данный момент наиболее эффективным и безопасным считается препарат бильтрицид, который при правильном использовании позволяет избавиться от описторхоза за 3-4 дня. Механизм его действия – прямой противогельминтный.

На третьей фазе лечения проводятся восстановительные мероприятия с назначением индивидуального режима питания и поддерживающими желудочно-кишечный тракт (в частности печень), препаратами.

В нашей клинике в круглосуточном стационаре пациенты могут пройти необходимую диагностику и полный курс лечения описторхоза всего за 3 дня под контролем опытных врачей-инфекционистов.

Пребывание в стационаре 1 день.

В Медицинском Центре “Натали-Бьюти” вы можете пройти процедуру дуоденального зондирования с исследованием на описторхоз, и лечение описторхоза для этого необходимо записаться по телефону +7 (391) 228-73-73

Описторхоз: диагностика, лечение

Описторхо́з (лат. opisthorchiasis) – это опасное паразитарное заболевание, вызываемое паразитическими плоскими червями из рода Описторхис. Употребление в пищу речной рыбы вызывает непосредственное заражение до 95 % населения Обь-Иртышского бассейна. Возбудителями описторхоза являются печеночные сосальщики двух видов: двуустка кошачья и двуустка сибирская – мелкий паразит ланцетовидной формы длиной 8–18 мм и шириной 1,2–2 мм.

Описторхисы паразитируют в желчных протоках печени, желчном пузыре и поджелудочной железе. Как происходит жизненный цикл паразита? Яйца описторхисов заглатывают пресноводные моллюски (рачки) рода Codiella, обитающие в пресных водоёмах. В теле моллюска происходит образование церкарий (личинок), они покидают моллюска и активно внедряются в тело речной рыбы.

В теле рыбы паразит располагается в мышцах и подкожной клетчатке. Здесь он переходит к следующей стадии развития и превращается в метацеркарий, который лежит в округлой цисте (защитной оболочке) серого цвета. Поэтому уже при чистке рыбы происходит обсеменение кухонных поверхностей и последующее заражение человека, даже если он не ест речную рыбу.

 У освобождённого метацеркария хорошо видны две присоски и экскреторный пузырёк, заполненный чёрными гранулами. Через 6 недель после заражения рыбы паразит становится способным заражать конечного хозяина, в съедобной части одной рыбы может находиться до 20 000 личинок. Потенциальными носителями личинок описторхиса являются: язь, елец, плотва, красноперка, лещ, пескарь, карась, сазан и другие карповые виды рыб. В настоящее время установлено, что описторхисами заражено 29 видов рыб, в том числе такие «благородные» как стерлядь и муксун!

Конечные хозяева паразитов (человек, кошки, собаки, лисицы, песцы, хорьки и другие плотоядные животные) заражаются после поедания речной рыбы. В желудке и начальном отделе тонкого кишечника конечного хозяина метацеркарии освобождаются от цист, после чего проникают через желчные протоки в желчный пузырь и желчные ходы печени. Здесь они через 10–12 дней достигают половой зрелости и начинают откладывать яйца.

 Яйца паразита, попавшие на почву, погибают в течение 8–10 дней, при попадании же в воду сохраняют жизнеспособность до года. В теле конечного хозяина паразит может обитать в течение десятков лет.

 Следует обратить внимание, что люди, кошки, собаки и другие плотоядные животные   так как они выделяют только яйца, а не личинки!

Различают острый описторхоз (от нескольких дней до 4–8 недель), он развивается у впервые заболевших людей, недавно попавших в зону распространения описторхоза и хронический описторхоз, который характерен для жителей эндемичных районов (Западная Сибирь и другие), продолжается 15–25 лет и пожизненно!

Негативное воздействие описторхоза на организм человека. Какой вред приносят описторхисы? 

Хроническая интоксикация, обусловленная описторхозом, может являться также причиной возникновения различных аллергических проявлений вплоть до отека Квинке. У больных отмечаются аллергические кожные реакции (дерматит, экзема, псориаз и др.), аллергические суставные боли. Хронические тонзиллит, аденоидит, бронхит, бронхиальная астма и другие заболевания зачастую вызываются токсическим действием описторхисов. Дети отстают в росте и весе, хуже учатся в школе.

Клинически выявить этот паразитоз невозможно, он проявляется симптомами различных заболеваний. При хроническом описторхозе часто выявляются гастрит, дуоденит, язвенная болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки, рефлюкс-эзофагит (ГЭРБ), панкреатит, холецистит, желчекаменная  болезнь, цирроз печени, ВСД (вегетососудистая дистония), сахарный диабет 2 типа, аллергические и аутоиммунные заболевания и их различные последствия. Симптоматика часто бывает не ярко выраженной. Он может протекать бессимптомно, возможно проявление клинических симптомов через 10–20 лет после заражения.

У отдельных больных хронический описторхоз может проявляться только симптомами холецистита, холангита, у других – преимущественно признаками недостаточности пищеварительных ферментов – плохим пищеварением, у третьих – общетоксическими и аллергическими реакциями.

При хроническом описторхозе часто возникают нарушения психоэмоционального состояния, которые могут проявляться головной болью, головокружением, нарушением сна, эмоциональной неустойчивостью, апатией, депрессией, гиперактивностью у детей, раздражительностью, частой сменой настроения и др. После снижения токсического воздействия описторхисов психоэмоциональная сфера, как правило, нормализуется.

При описторхозе нередко возникают признаки поражения сердца: больные жалуются на боль или неприятные ощущения в области сердца, аритмию. Нам известны случаи, когда у больных с обострением сердечной патологии значительно улучшалось состояние здоровья после лечения описторхоза.

Наличие описторхоза часто сопровождается снижением иммунитета, вирусными и бактериальными инфекциями. По словам больного с большим стажем описторхоза, при лечении в стационаре сахарного диабета 2 типа, который возник у него вследствие паразитоза, он переболел тремя внутрибольничными инфекциями! Настолько был снижен иммунитет.

Особая опасность описторхоза  заключается еще и  в том, что по данным ученых Института цитологии и генетики СО РАН, выделения описторхисов, кроме общего токсического действия, обладают генотоксическим действием, могут повреждать ДНК и вызывать предраковые изменения клеток. Любителям речной рыбы следует знать, что описторхоз увеличивает риск онкологических заболеваний!

Возможен также своеобразный симбиоз описторхисов и микробов. Так, Е.Н. Ильинских (2002) установил, что описторхисы, по выражению автора, буквально «начинены» микроорганизмами, в том числе лямблиями, сальмонеллами, Helicobacter pylori и др. Нередко у больных описторхозом возникают проблемы с желудком, у них обнаруживают бактерии Helicobacter pylori, назначается медикаментозное лечение желудочной патологии.

Коварство описторхоза и заключается в том, что врачи годами лечат заболевания отдельных органов и систем, не связывая ухудшение состояния с патологическим действием описторхисов.

Диагностика описторхоза до сих пор остается серьезной проблемой  и  осуществляется по наличию яиц в кале, при дуоденальном зондировании, методом иммунно-ферментного анализа крови.  Определить их наличие можно только в период активности, а этот период  у каждого симбиоза: человек-паразит свой (далеко не всегда весной и осенью, как принято считать).

 Например, нам известен случай, когда у больного, по его словам завзятого рыбака, с явными клиническими проявлениями возможного описторхоза: хронический холецистит, суставная, кожная патология и др., описторхоз был выявлен только на пятом дуоденальном зондировании, которое было проведено с момента поступления в стационар. /Ранее по просьбе заведующего отделением мы провели обследование этого больного и установили описторхоз./

Мы используем  инновационную методику диагностики описторхоза без дуоденального зондирования с помощью диагностического прибора «Кирлиан-биоэлектрограф» по характерной картине свечения пальцев рук и ног. 


Прибор покажет особенности свечения, излучаемого вашими пальцами. Многолетние исследования показали, что у больных описторхозом отмечаются косвенные признаки описторхоза – тотальное (повсеместное) распространение маркеров интоксикации – токсических  пятен свечения на фотографиях свечения (кирлианограммах) пальцев рук и ног.

Кирлианограммы пальцев рук и ног пациентов с подтвержденным диагнозом «Описторхоз» – токсические пятна свечения:

Результаты такой диагностики описторхоза подтверждаются методом дуоденального зондирования и другими рутинными методами.  Ниже вы увидите, как разительно меняется картина свечения после курса лечения по программе, разработанной в нашем медицинском центре. 

Лечение описторхоза в настоящее время проводится, в основном, с помощью медикаментозного препарата бильтрицид (празиквантель) под защитой капельниц в условиях стационара. Считается, что эффективность действия препарата составляет 85–90 %, но проблема в том, что полностью освободить организм от паразитов не удается, а сам препарат обладает рядом побочных эффектов, особенно страдает печень.

Проблема лечения описторхоза заключается в том, что личинок паразита в виде цист (в защитных оболочках) в организме может быть большое количество. При заражении  не все личинки развиваются в половозрелые особи, которые дают потомство в виде яиц. Множество  личинок (цист) могут годами и десятилетиями находиться в организме в «спящем состоянии».  После лечения и  уничтожения половозрелых особей «спящие» просыпаются и начинается заново процесс развития паразита.

А у человека, несмотря на отказ в употреблении речной рыбы, возникает рецидив заболевания, в анализах снова появляются яйца описторхисов, снова проявляются клинические нарушения: кожная сыпь и другие проявления.  Такие случаи известны и в нашей практике встречались не раз.

Поэтому однократное лечение описторхоза даже эффективным препаратом бильтрицид не дает желаемого результата, а более двух курсов лечения вследствие токсичности лекарства проводить запрещается. Кроме того,  само по себе «уничтожение» какого-то количества описторхисов не дает стойкого улучшения здоровья, ведь организм остается «отравленным».

В связи с широким распространением описторхоза среди населения и его негативным воздействием на состояние всего организма, нами была разработана немедикаментозная программа  лечения описторхоза. Она оказалась простой и эффективной, будет описана ниже.

Лечение  описторхоза без химии, очищение организма (лимфосанация)

Программа выполняется амбулаторно (в домашних условиях) в 3 этапа, курс –5 недель.

1 этап – подготовка: общее очищение организма – энтеросорбенты (поглощающие токсины), очищение желчных протоков – применяются желчегонные препараты, гепатопротекторы, проводится тюбаж печени и желчевыводящих путей (шиповник и сорбит, магнезия). Курс  2 недели, в зависимости от степени интоксикации может быть продлен.

2 этап – дегельминтизация (уничтожение) описторхисов:  препарат Экорсол (экстракт коры осины), курс 7 дней, при необходимости дополнительно применяется препарат Фиторал № 2.

3 этап – лимфосанация: усиление очищения межклеточного пространства, лимфостимуляция, очищение печени и желчевыводящих путей, восполнение витаминов, микроэлементов и других нутриентов. Курс 2 недели.

Лечение описторхоза с помощью  программы позволяет улучшить состояние при самых различных патологиях, потому что устраняется причина – загрязнение межклеточного пространства.

Кирлианограммы пальцев конечностей пациентки М.

D.S. Хронический описторхоз, два года назад прошла курс лечения бильтрицидом


По данным метода Кирлиан-диагностики – косвенные признаки описторхоза (тотальное распространение токсических пятен свечения), диагноз подтвердился при дуоденальном зондировании. После выполнения программы – положительная динамика свечения. Прошли боли в спине, суставах ног, исчезли фурункулы, которые безуспешно лечили различными способами, нормализовались биохимические показатели крови. Улучшились состояние и цвет кожи, исчезло депрессивное состояние, появился блеск в глазах, “прилив сил”.

Программа доказала свою эффективность при оздоровлении людей с самыми различными патологиями: сахарный диабет 2 типа, аллергия, бронхиальная астма, полиартрит, псориаз и другими.

Для профилактики рецидивов и сохранения хорошего уровня здоровья программу рекомендуется повторять 1 – 2 раза в год.

причины, симптомы, анализы, лечение, профилактика

Краткая характеристика заболевания

Описторхоз – это заражение паразитическими червями описторхисами, при котором поражаются протоки поджелудочной железы, печень и желчный пузырь.

Нередко описторхоз провоцирует развитие рака поджелудочной железы и печени.

Причины появления

Возбудители описторхоза – трематоды двуустка сибирская и двуустка кошачья. Промежуточные хозяева паразита – жаберный моллюск, который водится в водоемах с пресной водой, рыба семейства карповых: карп, чебак, елец, красноперка, вобла, язь, европейская плотва, линь, лещ, сазан.

Человек заражается описторхозом, употребляя сырую, плохо обработанную термически, слабо посоленную рыбу, в которой есть личинки двуустки. Попадая в кишечник, личинки выходят из оболочек, проникают в печень, поджелудочную железу, желчный пузырь и там размножаются.

Симптомы описторхоза

Симптомы описторхоза отличаются в зависимости от длительности, интенсивности заражения организма червями. Описторхоз может быть острым и хроническим.

Острый описторхоз может продолжаться в течение нескольких дней или недель, сопровождаться крапивницей, лихорадкой, ломотой в суставах, мышцах, болями в правом подреберье, под ложечкой, может наблюдаться увеличение желчного пузыря, печени. Также известны такие симптомы описторхоза в острой стадии: рвота, метеоризм, изжога, тошнота, жидкий и частый стул, ухудшение аппетита. При обследовании ЖКТ могут быть обнаружены язва желудка, двенадцатиперстной кишки, эрозивный гастродуоденит. В редких случаях острый описторхоз сопровождается поражением легких.

Хронический описторхоз может продолжаться 15-25 лет и больше. Проявляется описторхоз симптомами гепатита, панкреатита, холецистита, гастродуоденита: наблюдаются боли в правом подреберье, похожие на желчные колики и переходящие на правую половину грудины, болезненность при пальпации желчного пузыря.

Нередко описторхоз поражает нервную систему, из-за чего могут возникать раздражительность, головные боли, повышенная утомляемость, головокружения, бессонница. Потливость, тремор пальцев на руках, языка и век – это также симптомы описторхоза, возникающие из-за нарушения деятельности нервной системы.

Хронический описторхоз может сопровождаться аллергическими реакциями: отеком Квинке, крапивницей, зудом кожи, артралгией.

Острый описторхоз у детей диагностируется редко, а хроническая стадия в возрасте 1-3 лет проявляется в виде отставания в физическом развитии, ухудшения аппетита, дискинезии желчных путей, умеренной эозинофилии. Описторхоз у детей более старшего возраста сопровождается подъемом температуры, болями в животе, сыпью на коже, расстройством стула, покраснениями верхних дыхательных путей, хронической усталостью.

Диагностика заболевания

Диагностировать заболевание на ранней стадии его развития сложно, потому что яйца червей в кале и желчи можно обнаружить, сдав анализ на описторхоз только через 4-6 недель после заражения. Поэтому большое значение имеют осмотр пациента, выявление характерных симптомов описторхоза, и уточнение данных об употреблении за последний месяц-полтора рыбы семейства карповых. Дополнительно проводят анализ на описторхоз, исследуя кровь больного.

Окончательно описторхоз подтверждают через один или полтора месяца, если найдены яйца паразитов в кале или желчи.

Для определения описторхоза в хронической стадии применяют паразитологический метод, основанный на исследовании дуоденального содержимого желчевыводящих путей или кала на предмет наличия в них яиц описторхисов.

Для исследования дуоденального содержимого проводят зондирование желчевыводящих путей, накануне которого, чтобы спровоцировать активное откладывание яиц паразитами, необходимо принять 1-2г Хлоксила. Образец желчи, взятый при зондировании для проведения анализа на описторхоз, изучают под микроскопом.

Лечение описторхоза

Лечение описторхоза начинают с устранения аллергических реакций – назначают антигистамины (тавегил, супрастин или димедрол, кальций хлористый), седативные препараты, после чего начинают комплексную терапию: назначают противогельминтные, желчегонные, ферментные препараты и средства, улучшающие моторику и тонус ЖКТ.

Единственным эффективным препаратом для лечения описторхоза, является на сегодня Празиквантел (Билтрицид). Принимают его в дозировке 40-75мг/сутки на килограмм веса за два или три приема. Описторхоз у детей также лечится этим препаратом.

В терапию обязательно включают желчегонные препараты (Холагогум, Хофитол, Аллохол, Холосас) – для того чтобы Празиквантел, накапливающийся в желчных путях, вместе с парализованными червями легко выходил в кишечник.

Взрослым, детям при описторхозе на время лечения показана диета, в которой преобладают свежие и запеченные овощи, фрукты, соки натуральные, каши на воде, овощные супы, мед. Из рациона необходимо исключить яйца, сдобу, жирные, копченые продукты.

Практикуется и народное лечение описторхоза. Официальной медициной такие методы лечения не одобрены, но положительных отзывов об устранении паразитов в домашних условиях немало. Следует только помнить, что и при применении рецептов народного лечения описторхоза необходимо сдавать контрольные анализы и пройти обследование органов ЖКТ, желчного пузыря, печени для выявления возможных осложнений.

Вывести описторхисов можно дегтем, который принимают по такой схеме на протяжении 9 дней:

  • в первый день выпивают две капли дегтя, смешанные с одной чайной ложкой молока или воды;
  • во второй день – 4 к. дегтя;
  • на третий день – 6 к.;
  • на четвертый день – 8 к.;
  • на пятый день – 10 к.;
  • на шестой день – 8 к.;
  • на седьмой день – 6 к.;
  • на восьмой день – 4 к.;
  • на девятый день – 2 к.

Используют в народном лечении описторхоза и тыквенные семечки: один стакан свежих семечек необходимо пропустить через мясорубку, добавить два сырых яичных желтка, стакан кипяченой воды, чайную ложку меда, перемешать. Приготовленную смесь нужно съесть вместо завтрака, натощак и после этого полежать два часа с грелкой под правым боком. Процедуру необходимо повторить еще 2р., с интервалом в 10 дней.

Через три, шесть месяцев после лечения для контроля его эффективности делают повторный анализ на описторхоз.

Несмотря на полное выведение паразитов, функциональность ЖКТ, печени остается нарушенной. Поэтому перенесшим описторхоз показано реабилитационное лечение, направленное на устранение оставшейся патологии.

Профилактика заболевания

Профилактика описторхоза заключается в соблюдении правил разделывания и обработки рыбы: следует отвести для нее отдельные разделочные доски и ножи, выдерживать температурный режим в процессе ее приготовления.

Видео с YouTube по теме статьи:

Описторхоз – Страница 2 – Красота и здоровье

Мне в Астане делали дуоденальное зондирование во 2 поликлинике, обстановка там как в СССР заброшенном колхозе, но говорят специалисты толковые. Стоит это 1200 тенге. Я лечилась у Бритеевой Маргариты Владимировны тел в Астане 232881. Применяли лазеротерапию, метронидазол, макмирор и бильтрицид. Прокапали внутривенно ККБ, аскорбиновую кислоту, глюкозу, гемодез. И отдельно эссенциале. Сейчас пью БАДы компании NSP, для очистки организма, крови, восстановления печени. Делаю тюбажи на убывающую луну, по 2 раза в неделю. Клизмы. Пью кефир из молочного гриба. Через месяц, сказали надо будет пропить макмирор, который должен помочь от цистных лямблей, которые активизируются от бильтрицида, и начать удобрять организм полезными бактериями, витаминами.
Кстати, мне привезли липовую золу с Алматы. Но сейчас ее пить наверное нет смысла. Разве что для профилактики потом, через пол года, может быть. Врач говорит, что БАДы, зола, деготь действуют на половозрелые особи, а бильтрицид на личинки тоже, в содействии с лазером.
Кстати, диагностика на аппарате оберон тоже показал описторхоз.
А анализ ИФА крови не показывает описторхоз в острой форме. Дуоденальное зондирование самая лучшая диагностика. Они очень быстро погибают в воздухе.
Есть такая дыхательная гимнастика Бодифлекс называется, Книжка продается в пределах 500 тенге (Грир Чайлдрес автор кажется) снабжает клетки организма кислородом. Очень полезна при всех формах анаэробных микробов и паразитов.
Кстати, жизненный цикл описторхоза достигает 90 лет, в организме травоядных (например у овец, зайцев они заражаются через траву, на которую попадают через фекалии хищников) сохраняются в пассивной форме, попав в организм волка живут до его смерти.
В принципе, у некоторых людей тоже, говорят, у кого то бабушка умерла от цирроза печени, бабушка мусульманка, спиртное не потребляла, обычная восточная местами жирная пища. А цирроз из-за описторхоза.
Симптомы: отрыжка, изжога, повышенный метеоризм, удушье, одышка, нервоз, бессонница, депрессия, аппетит по ночам, при этом, потеря веса (хотя не у всех), запах со рта, налет, зуд, сыпь, аллергия. Практически любое кож заболевание – если нет гормональных нарушений, значит паразиты.
Описторхоз и Лямблиоз самые коварные. А страдают самые слабые места. у кого то предрасположенность к угрям, а у кого то просто зуд, а у кого то страдает внутренний орган, пески, камни.
Говорят, что лечат травами с учетом их жизненного цикла, например сгоняют половозрелых сначала, а потом воздействуют на личинки, так как они зреют в течение 1,5-2 месяцев (они гермофродитные), и по мере роста уничтожают их, применяя диету и очистительные программы. Но это долго. Если ничего не лезет на лице можно и так полечиться. Главное найти хорошего врача, пролечиться и менять образ жизни, питание. Всем удачи!!!

Сообщение отредактировал Jane7172: 24.03.2009, 02:05:54

Описторхоз – обзор | Темы ScienceDirect

124.1 Описторхоз и клонорхоз

Введение

Описторхоз и клонорхоз вызываются печеночными сосальщиками из рода Opisthorchiadae и Clonorchiadae . Три наиболее распространенных вида, вызывающих заболевания у людей, – это Opisthorchis viverrini, O. felineus и Clonorchis sinensis .

Эпидемиология

Opisthorchis viverrini является эндемиком Юго-Восточной Азии, в основном Таиланда, Лаосской Народно-Демократической Республики, южной части Вьетнама и Камбоджи.Распространенность на северо-востоке Таиланда в 1980-х годах составляла 90% и остается около 20%, несмотря на меры контроля. Opisthorchis felineus является эндемиком России и Восточной Европы, а C. sinensis распространен в Корее, Китае и северном Вьетнаме. В эндемичных районах дети в возрасте от 1 года были инфицированы O. viverrini .

Естествознание, патогенез и патология

Люди являются случайным хозяином O. viverrini, O.felineus и Clonorchis sinensis . Употребление в пищу сырых или недоваренных карповых рыб (например, карпа), содержащих метацеркарию – инфекционную стадию этих сосальщиков, – приводит к инфицированию. Метацеркария, выделяющаяся в кишечнике, перемещается через ампулу Фатера в общий желчный проток к желчному пузырю и периферическим желчным протокам в печени и превращается во взрослых червей (рис. 124.1). Взрослые черви выделяют яйца, которые выводятся с калом. Попадая в пресную воду, из яиц вылупляются мирацидии, которые поглощаются улитками, в которых происходит размножение паразитов.Церкарии выходят из улиток и заражают восприимчивых пресноводных рыб, инцистируя их как метацеркарии.

Наличие взрослых червей в желчных протоках вызывает хроническое раздражение; черви также выделяют токсичные метаболические вещества. Иммунный ответ приводит к инфильтрации эозинофилами и мононуклеарными клетками в перидуктальных областях; могут возникнуть вторичные бактериальные инфекции. Наблюдается десквамация эпителиальных клеток желчных протоков, гиперплазия эпителиальных клеток и железистая пролиферация (рис. 124.2). Внутрипеченочные желчные протоки расширяются с образованием булавы на дистальной части и кистозными изменениями.Желчный пузырь может быть расширен и содержать белесую желчь [1], а на его стенке могут быть видны гипертрофированные эпителиальные клетки. Степень тяжести патологии зависит как от интенсивности, так и от продолжительности инфекции. Хронические изменения в сочетании с эндогенными и экзогенными канцерогенами, особенно с нитрозаминами, вызывают мутагенные изменения в эпителии желчных протоков и могут привести к холангиокарциноме.

Клинические признаки

Острые симптомы чаще встречаются при инфицировании C. sinensis и O. felineus и редко встречаются при O.viverrini . Высокая температура, артралгия, миалгия, увеличение лимфатических узлов, эозинофилия и, иногда, отек лица могут возникать через 2–3 недели инфекции во время миграции и развития глистов [2]. Поскольку черви еще не созрели, на этой стадии яйцеклетки в кале не обнаруживаются. Заболевание обычно длится 1-2 недели. Иногда наблюдается аллергический гепатит, особенно в тяжелых случаях.

Хронические инфекции обычно протекают бессимптомно. Большинство инфекций обнаруживается при обычном осмотре кала.В симптоматических случаях жалобами являются неспецифические симптомы, такие как усталость, анорексия, метеоризм, дискомфорт в животе, плохой аппетит и периодический жидкий стул. Своеобразное ощущение жара в правой верхней части живота – характерный симптом, обнаруживаемый при инфекции O. viverrini . При обследовании обнаруживается субфебрильная температура и гепатомегалия [3].

Осложнения, такие как рецидивирующий холангит или абсцесс, вызванные вторичными бактериальными инфекциями, обычны при запущенной инфекции.Пациенты обращаются с лихорадкой, желтухой и болями в животе с гепатомегалией и увеличенным желчным пузырем. Холангиокарцинома тесно связана с инфекциями описторхов и клонорхов [4], особенно в сочетании с диетой с высоким содержанием нитрозаминов. Исследования на животных документально подтвердили, что у хомяков, инфицированных O. viverrini , развилась холангиокарцинома при питании с высоким содержанием нитрозаминов [5].

Оценка пациента и дифференциальный диагноз

Поскольку пациенты с ранней или легкой инфекцией могут протекать бессимптомно, диагноз обычно основывается на обычном осмотре кала.Люди в эндемичных районах, которые едят сырую рыбу и имеют неспецифические абдоминальные симптомы, должны ежегодно проходить обследование кала на Opisthorchis или Clornorchis ova. Однако эти яйцеклетки сложно отличить от сосальщиков, присутствующих в тонком кишечнике [6]. Пациенты с инфекцией кишечного сосальщика обычно страдают хронической водянистой диареей.

Острый описторхоз или клонорхоз отличаются от острого фасциолеза, острого шистосомоза и других тканевых паразитов по анамнезу и эпидемиологии.

На поздних стадиях заболевания пациенты могут иметь механическую желтуху, холангит или холангиокарциному; другие причины механической желтухи, такие как камни желчных путей, должны быть исследованы.

Диагноз

Обследование кала на Opisthorchis или Clonorchis ova является стандартом диагностики. Другие образцы, которые можно использовать для обнаружения яйцеклеток, – это двенадцатиперстная жидкость или желчь, взятые с помощью эндоскопической ретроградной холангиопанкреатографии (ЭРХПГ) или во время операции.

Серология может использоваться для диагностики острой инфекции, но не помогает при хронической инфекции или повторном инфицировании в эндемичных районах, так как положительные антитела сохранятся после лечения. Обнаружение со-проантигена можно использовать как «тест на излечение» после лечения.

ПЦР позволяет обнаружить ДНК Opisthorchis в образцах фекалий и отличить ее от кишечных сосальщиков с высокой чувствительностью и специфичностью. Это также полезно для эпидемиологических обследований [7].

Ультрасонография печени и желчного пузыря на ранних стадиях инфекции обычно показывает увеличенный нефункционирующий желчный пузырь с осадком.Инфекции на более поздних стадиях могут проявляться расширением внутрипеченочных желчных протоков или образованием. Новообразование в печени с расширением желчных протоков внутри очага поражения свидетельствует о холангиокарциноме. Холангиография проводилась до того, как стала доступна компьютерная томография (КТ) или магнитно-резонансная томография (МРТ). Могут быть визуализированы расширенные внутрипеченочные желчные протоки с дистальной булавой (рис. 124.3), а также случайные дефекты наполнения из-за наличия взрослых сосальщиков (рис. 124.4). КТ или МРТ полезны для определения стадии холангиокарциномы.

Лечение
Opisthorchis viverrini

Празиквантел – препарат выбора. При дозе 25 мг / кг массы тела перорально три раза в течение 1-2 дней показатель излечения составил 100% [8]. Однократная доза 40 мг / кг перед сном дала 91–95% излечение, тогда как доза 50 мг / кг дала 97% излечение, но с более высокой частотой нежелательных явлений [9, 10]. Поэтому для массового лечения рекомендуется празиквантел в дозе 40 мг / кг.

Альбендазол в дозе 400 мг два раза в день в течение 3–7 дней показал эффективность только 40–63% [11].

Clonorchis sinensis

Празиквантел эффективен при клонорхозе. Двадцать пять мг / кг три раза в день в течение 1 дня дают 85% излечение, в то время как та же доза, вводимая в течение 2 дней, излечивает до 100%. Однократная доза 40 мг / кг дала только 25% излечение [12].

Пациенты со вторичным холангитом должны лечиться противомикробными препаратами. При раннем обнаружении холангиокарцинома может быть удалена. Однако при позднем обнаружении паллиативное лечение путем оттока желчи может помочь облегчить симптомы механической желтухи.Прогноз для этих пациентов плохой, поскольку химиотерапия или лучевая терапия обычно не эффективны при холангиокарциноме.

Профилактика и контроль

Тщательное приготовление рыбы – лучший способ предотвратить заражение. Это должно быть обеспечено посредством непрерывного санитарного просвещения в эндемичных районах. Меры борьбы с помощью программ массового лечения и улучшения санитарии могут снизить распространенность.

Молекулярная идентификация Clonorchis sinensis и дискриминация с другими видами печеночных двуусток-описторхов с использованием множественной лигированной амплификации зондов (MLPA) | Паразиты и переносчики

  • 1.

    ФАО: Оценка и управление качеством и безопасностью морепродуктов. Технический документ по рыболовству. 2004, 444.

    Google Scholar

  • 2.

    Lun ZR, Gasser RB, Lai DH, Li AX, Zhu XQ, Yu XB, Fang YY: Клонорхоз: ключевой зооноз пищевого происхождения в Китае. Lancet Infect Dis. 2005, 5: 31-41. 10.1016 / S1473-3099 (04) 01252-6.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 3.

    ВОЗ: Борьба с трематодными инфекциями пищевого происхождения: отчет исследовательской группы ВОЗ.ВОЗ, Женева, Швейцария. 1995 г., Серия технических отчетов ВОЗ № 849.

    Google Scholar

  • 4.

    Sayasone S, Odermatt P, Phoumindr N, Vongsaravane X, Sensombath V, Phetsouvanh R, Choulamany X, Strobel M: Эпидемиология Opisthorchis viverrini в сельском районе на юге Лаосской НДР. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2007, 101: 40-47. 10.1016 / j.trstmh.2006.02.018.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 5.

    Sriamporn S, Pisani P, Pipitgool V, Suwanrungruang K, Kamsa-ard S, Parkin DM: Распространенность инфекции Opisthorchis viverrini и заболеваемость холангиокарциномой в Хон Каене, Северо-Восточный Таиланд. Trop Med Int Health. 2004, 9: 588-594. 10.1111 / j.1365-3156.2004.01234.x.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 6.

    Sripa B, Sithithaworn P, Sirisinha S: Opisthorchis viverrini и описторхоз: обзор 21 века.Acta Trop. 2003, 88: 169-170. 10.1016 / j.actatropica.2003.08.001.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 7.

    Sithithaworn P, Haswell-Elkins M: Эпидемиология Opisthorchis viverrini . Acta Trop. 2003, 88: 187-194. 10.1016 / j.actatropica.2003.02.001.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 8.

    Yossepowitch O, Gotesman T, Assous M, Marva E, Zimlichman R, Dan M: Описторхоз от импортной сырой рыбы.Emerg Infect Dis. 2004, 10: 2122-2126.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

  • 9.

    Штауффер В.М., Селлман Дж. С., Уокер П. Ф.: Билиарные печеночные двуустки (описторхоз и клонорхоз) у иммигрантов в Соединенных Штатах: часто незаметные и диагностируются через несколько лет после прибытия. J Travel Med. 2004, 11: 157-159.

    PubMed Google Scholar

  • 10.

    Tesana S, Srisawangwonk T, Kaewkes S, Sithithaworn P, Kanla P, Arunyanart C: Морфология яичной скорлупы маленьких яиц человеческих трематод в Таиланде.Юго-Восточная Азия J Trop Med Public Health. 1991, 22: 631-636.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 11.

    Ли С.Х., Хван С.В., Чай Дж.Й., Сео Б.С.: Сравнительная морфология яиц гетерофидов и Clonorchis Sinensis , вызывающих человеческие инфекции в Корее. Kisaengchunghak Chapchi. 1984, 22: 171-180.

    PubMed Google Scholar

  • 12.

    Zhou XN, Lv S, Yang GJ, Kristensen TK, Bergquist NR, Utzinger J, Malone JB: Пространственная эпидемиология зоонозных паразитарных болезней: идеи, полученные на 1-м Международном симпозиуме по геопространственному здоровью в Лицзяне, Китай, 2007 г. .Паразиты и переносчики. 2009, 2: 10. 10.1186 / 1756-3305-2-10.

    Артикул Google Scholar

  • 13.

    Parvathi A, Sanath Kumar H, Kenchanna Prakasha B, Lu J, Xu X, Hu W., Feng Z, Karunasagar I: Clonorchis sinensis : разработка и оценка анализа вложенной полимеразной цепной реакции (ПЦР) . Exp Parasitol. 2007, 115: 291-295. 10.1016 / j.exppara.2006.09.010.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 14.

    Cai XQ, Xu MJ, Wang YH, Qiu DY, Liu GX, Lin A, Tang JD, Zhang RL, Zhu XQ: Чувствительное и быстрое обнаружение инфекции Clonorchis sinensis у рыб с помощью петлевой изотермической амплификации (LAMP). Parasitol Res. 106: 1379-1383.

  • 15.

    Канг С., Султана Т., Локтев В.Б., Вонгратаначеевин С., Сон В.М., Эом К.С., Парк Дж.К .: Молекулярная идентификация и филогенетический анализ последовательностей ядерной рДНК среди трех видов описторхидных печеночных двуусток (Opisthorchiidae: Trematoda).Parasitol Int. 2008, 57: 191-197. 10.1016 / j.parint.2007.12.007.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 16.

    Sato M, Thaenkham U, Dekumyoy P, Waikagul J: Дискриминация O. viverrini , C. sinensis , H. pumilio и H. taichui с использованием нацеливания ПЦР на основе ядерной ДНК ЕГО районы рибосомной ДНК. Acta Trop. 2009, 109: 81-83. 10.1016 / j.actatropica.2008.09.015.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 17.

    Парвати А., Умеша К.Р., Кумар С., Сититхаворн П., Карунасагар И.: Разработка и оценка анализа полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения Opisthorchis viverrini в рыбе. Acta Trop. 2008, 107: 13-16. 10.1016 / j.actatropica.2008.04.001.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 18.

    Трауб Р.Дж., Макаранас Дж., Мунгтин М., Лилайова С., Крибб Т., Муррелл К.Д., Томпсон Р.С.: Новый подход, основанный на ПЦР, показывает, что диапазон Clonorchis sinensis теперь распространяется в Центральном Таиланде.PLoS Negl Trop Dis. 2009, 3: e367. 10.1371 / journal.pntd.0000367.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

  • 19.

    Muller B, Schmidt J, Mehlhorn H: Чувствительное и видоспецифичное обнаружение Clonorchis sinensis с помощью ПЦР у инфицированных улиток и рыб. Parasitol Res. 2007, 100: 911-914. 10.1007 / s00436-006-0322-9.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 20.

    Meine MH, Zanotelli ML, Neumann J, Kiss G, de Jesus Grezzana T, Leipnitz I, Schlindwein ES, Fleck A, Gleisner AL, de Mello Brandao A: рандомизированный клинический анализ сохранения печеночных трансплантатов с помощью Университета Висконсина или гистидин-триптофан Растворы -кетоглутарата при трансплантации печени. Transplant Proc. 2006, 38: 1872-1875. 10.1016 / j.transproceed.2006.06.071.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 21.

    Абу Аль-Суд В., Радстром П.: Влияние фасилитаторов амплификации на диагностическую ПЦР в присутствии крови, фекалий и мяса.J Clin Microbiol. 2000, 38: 4463-4470.

    PubMed Central CAS PubMed Google Scholar

  • 22.

    Chai JY, Park JH, Han ET, Guk SM, Shin EH, Lin A, Kim JL, Sohn WM, Yong TS, Eom KS: смешанные инфекции, вызванные Opisthorchis viverrini и кишечными сосальщиками у жителей Вьентьяна Муниципалитет и провинция Сараване в Лаосе. J Helminthol. 2005, 79: 283-289. 10.1079 / JOh3005302.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 23.

    Харпер Г.Л., Кинг Р.А., Додд С.С., Харвуд Д.Д., Глен Д.М., Бруфорд М.В., Саймондсон В.О.: Быстрый скрининг беспозвоночных хищников на предмет наличия нескольких мишеней ДНК жертвы. Mol Ecol. 2005, 14: 819-827. 10.1111 / j.1365-294X.2005.02442.x.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 24.

    Le TH, Van De N, Blair D, Sithithaworn P, McManus DP: Clonorchis sinensis и Opisthorchis viverrini : разработка митохондриальной мультиплексной ПЦР для их идентификации и различения.Exp Parasitol. 2006, 112: 109-114. 10.1016 / j.exppara.2005.09.012.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 25.

    Schouten JP, McElgunn CJ, Waaijer R, Zwijnenburg D, Diepvens F, Pals G: Относительное количественное определение 40 последовательностей нуклеиновых кислот с помощью мультиплексной амплификации зонда, зависимой от лигирования. Nucleic Acids Res. 2002, 30: e57. 10.1093 / нар / gnf056.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

  • 26.

    Hogervorst FB, Nederlof PM, Gille JJ, McElgunn CJ, Grippeling M, Pruntel R, Regnerus R, van Welsem T, van Spaendonk R, Menko FH: большие геномные делеции и дупликации в гене BRCA1, идентифицированные новым количественным методом. Cancer Res. 2003, 63: 1449-1453.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 27.

    Стерн Р.Ф., Робертс Р.Г., Манн К., Яу С.К., Берг Дж., Огилви К.М.: мультиплексная амплификация зонда, зависимая от лигирования, с использованием полностью синтетического набора зондов.Биотехники. 2004, 37: 399-405.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 28.

    Volikos E, Robinson J, Aittomaki K, Mecklin JP, Jarvinen H, Westerman AM, de Rooji FW, Vogel T, Moeslein G, Launonen V: делеции экзонов LKB1 и целых генов являются частой причиной Peutz- Синдром Егерса. J Med Genet. 2006, 43: e18.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 29.

    Vorstman JA, Jalali GR, Rappaport EF, Hacker AM, Scott C, Emanuel BS: MLPA: быстрый, надежный и чувствительный метод обнаружения и анализа аномалий 22q. Hum Mutat. 2006, 27: 814-821. 10.1002 / humu.20330.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 30.

    Wilting SM, Snijders PJ, Meijer GA, Ylstra B, van den Ijssel PR, Snijders AM, Albertson DG, Coffa J, Schouten JP, van de Wiel MA: Повышенное количество копий гена на хромосоме 20q часто встречается в как плоскоклеточный рак, так и аденокарциномы шейки матки.J Pathol. 2006, 209: 220-230. 10.1002 / путь.1966.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 31.

    Элдеринг E, Spek CA, Aberson HL, Grummels A, Derks IA, de Vos AF, McElgunn CJ, Schouten JP: профилирование экспрессии с помощью нового мультиплексного анализа позволяет быстро оценить регуляцию генов в определенных сигнальных путях. Nucleic Acids Res. 2003, 31: e153. 10.1093 / нар / gng153.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

  • 32.

    Nygren AO, Ameziane N, Duarte HM, Vijzelaar RN, Waisfisz Q, Hess CJ, Schouten JP, Errami A: Специфический для метилирования MLPA (MS-MLPA): одновременное обнаружение метилирования CpG и изменений числа копий до 40 последовательностей. Nucleic Acids Res. 2005, 33: e128. 10.1093 / нар / gni127.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

  • 33.

    Kluwe L, Nygren AO, Errami A, Heinrich B, Matthies C, Tatagiba M, Mautner V: Скрининг больших мутаций гена NF2.Гены Хромосомы Рак. 2005, 42: 384-391. 10.1002 / gcc.20138.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 34.

    Slater HR, Bruno DL, Ren H, Pertile M, Schouten JP, Choo KH: быстрое высокопроизводительное пренатальное обнаружение анеуплоидии с использованием нового количественного метода (MLPA). J Med Genet. 2003, 40: 907-912. 10.1136 / jmg.40.12.907.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 35.

    Worsham MJ, Pals G, Schouten JP, Van Spaendonk RM, Concus A, Carey TE, Benninger MS: Определение генетических путей прогрессирования заболевания при плоскоклеточном раке головы и шеи. Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 2003, 129: 702-708. 10.1001 / archotol.129.7.702.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 36.

    Бергвал И.Л., Виджелаар Р.Н., Далла Коста Е.Р., Скуитема А.Р., Оскам Л., Критски А.Л., Клацер П.Р., Энтони Р.М.: Разработка мультиплексного анализа для быстрой характеристики Mycobacterium tuberculosis .J Clin Microbiol. 2008, 46: 689-699. 10.1128 / JCM.01821-07.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 37.

    Terefework Z, Pham CL, Prosperi AC, Entius MM, Errami A, van Spanning RJ, Zaura E, Ten Cate JM, Crielaard W: MLPA-диагностика сложных микробных сообществ: относительное количественное определение видов бактерий в биопленках полости рта . J Microbiol Methods. 2008, 75: 558-565. 10.1016 / j.mimet.2008.08.012.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 38.

    Reijans M, Dingemans G, Klaassen CH, Meis JF, Keijdener J, Mulders B, Eadie K, van Leeuwen W., van Belkum A, Horrevorts AM, Simons G: RespiFinder: новый многопараметрический тест для дифференциальной идентификации пятнадцать респираторных вирусов. J Clin Microbiol. 2008, 46: 1232-1240. 10.1128 / JCM.02294-07.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 39.

    Zhang JM, Sun JF, Feng PY, Li XQ, Lu CM, Lu S, Cai WY, Xi LY, de Hoog GS: Быстрая идентификация и характеристика Penicillium marneffei с использованием мультиплексной лигированной амплификации зонда (MLPA) в парафине -вложенные образцы тканей. J Micro Method. 2011, 85: 33-39. 10.1016 / j.mimet.2011.01.022.

    CAS Статья Google Scholar

  • 40.

    Faruqi AF, Hosono S, Driscoll MD, Dean FB, Alsmadi O, Bandaru R, Kumar G, Grimwade B, Zong Q, Sun Z: высокопроизводительное генотипирование однонуклеотидных полиморфизмов с амплификацией по скользящему кругу.BMC Genomics. 2001, 2: 4. 10.1186 / 1471-2164-2-4.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 41.

    Nilsson M: Lock and roll: одномолекулярное генотипирование in situ с использованием зондов с замком и амплификации по методу «катящегося круга». Histochem Cell Biol. 2006, 126: 159-164. 10.1007 / s00418-006-0213-2.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 42.

    Nilsson M, Malmgren H, Samiotaki M, Kwiatkowski M, Chowdhary BP, Landegren U: Зонды с замком: циркуляционные олигонуклеотиды для локализованного обнаружения ДНК. Наука. 1994, 265: 2085-2088. 10.1126 / science.7522346.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 43.

    Долезел Дж., Бартос Дж., Фоглмайр Х., Грейлхубер Дж.: Содержание ядерной ДНК и размер генома форели и человека. Cytometry A. 2003, 51: 127-128. ответ автора 129.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 44.

    Pomp D, Medrano JF: Органические растворители как ускорители полимеразной цепной реакции. Биотехники. 1991, 10: 58-59.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 45.

    Нагаи М., Йошида А., Сато Н.: Аддитивные эффекты бычьего сывороточного альбумина, дитиотреитола и глицерина на ПЦР. Биохим Мол Биол Инт. 1998, 44: 157-163.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 46.

    Хенке В., Хердель К., Юнг К., Шнорр Д., Ленинг С.А.: Бетаин улучшает ПЦР-амплификацию последовательностей ДНК, богатых GC.Nucleic Acids Res. 1997, 25: 3957-3958. 10.1093 / nar / 25.19.3957.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 47.

    Kreader CA: снятие ингибирования амплификации в ПЦР с бычьим сывороточным альбумином или белком гена 32 Т4. Appl Environ Microbiol. 1996, 62: 1102-1106.

    PubMed Central CAS PubMed Google Scholar

  • 48.

    Langerak P, Nygren AO, Schouten JP, Jacobs H: быстрое и количественное определение событий гомологичной и негомологичной рекомбинации с использованием трех олигонуклеотидов MLPA.Nucleic Acids Res. 2005, 33: e188. 10.1093 / нар / gni187.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

  • 49.

    ST H: Clonorchis sinensis. Международный справочник патогенов пищевого происхождения. Под редакцией: Miliotis MD, Bier JW. 2003, Марсель Деккер, Нью-Йорк, 581-592.

    Google Scholar

  • 50.

    Verweij JJ, Pit DS, van Lieshout L, Baeta SM, Dery GD, Gasser RB, Polderman AM: Определение распространенности инфекций Oesophagostomum bifurcum и Necator americanus с использованием специфической ПЦР-амплификации ДНК из образцов фекалий.Trop Med Int Health. 2001, 6: 726-731. 10.1046 / j.1365-3156.2001.00770.x.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 51.

    Liu WQ, Liu J, Zhang JH, Long XC, Lei JH, Li YL: Сравнение древних и современных Clonorchis sinensis на основе последовательностей ITS1 и ITS2. Acta Trop. 2007, 101: 91-94. 10.1016 / j.actatropica.2006.08.010.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • [PDF] Описторхоз и холангиокарцинома, ассоциированная с описторхозом, в Таиланде и Лаосе.

    ПОКАЗЫВАЕТСЯ 1-10 ИЗ 85 ССЫЛОК

    СОРТИРОВАТЬ ПО РелевантностиСамые популярные статьиНедавность

    Иммунология и молекулярная биология инфекции Opisthorchis viverrini. Был сконструирован специфический ДНК-зонд

    O. viverrini и проведено детектирование на основе ПЦР с высокой специфичностью для амплификации повторяющихся последовательностей для обнаружения присутствия ДНК яиц в образцах стула по сравнению с классическими методами. Развернуть
    • Посмотреть 6 выдержек, ссылки на методы

    Патобиология описторхоза: обновленная информация.

    • B. Sripa
    • Биология, медицина

      Acta tropica

    • 2003
    Тема состоит в том, чтобы выделить новую эру патогенетического исследования описторхоза, особенно на взаимодействие хозяина-паразит и иммунные / воспалительные реакции хозяина, приводящие к тканям. повреждать. Развернуть
    • Просмотреть 2 выдержки, справочная информация

    Обнаружение Opisthorchis viverrini в образцах стула человека с помощью ПЦР

    Метод ПЦР для обнаружения Opisthorchis viverrini у экспериментально зараженных хомяков успешно разработан и оказался более чувствительным, чем предыдущий метод с использованием ДНК-зонд как диагностический инструмент, без амплификации, когда образцы содержали тонкие кишечные сосальщики или другие паразитарные яйца.Развернуть

    «Борьба с описторхозом» в Таиланде.

    Основные стратегии борьбы с печеночными двуустками состоят из трех взаимосвязанных подходов, а именно: исследования стула и лечение положительных случаев празиквантелом для устранения резервуара человека-хозяина; санитарное просвещение для пропаганды употребления вареной рыбы для предотвращения инфекции и улучшение гигиенической дефекации для прерывания передачи болезней. Развернуть

    Opisthorchis viverrini: недооцененный паразит в мировом здравоохранении.

    Недавнее открытие высокого уровня популяционной генетической изменчивости O. viverrini на различных водно-болотных угодьях в Таиланде и Лаосе, что указывает на присутствие видов-братьев, предполагает, что сложность этой эпидемиологической ситуации могла быть недооценена. Развернуть
    • Просмотреть 5 выдержек, справочная информация

    Клонорхоз: ключевой зооноз пищевого происхождения в Китае.

    Приведены общие сведения о паразите и его жизненном цикле, кратко изложены ключевые аспекты патогенеза, диагностики и лечения клонорхоза, описано географическое распространение и распространенность, а также даны некоторые рекомендации для будущих исследований и борьбы с этим важным заболеванием. сделал.Развернуть

    Описторхоз из импортированной сырой рыбы

    Ссылки

    1 июля 1977 г. · Тропический врач · WS KammererK E Mott

    28 февраля 1992 · Deutsche medizinische Wochenschrift · A Cherdron, P Fiegel

    1 июля 1990 · Ангиология · F SoltiN Iskum

    1 августа 1984 г. · Южный медицинский журнал · AH DaoL C McKee

    1 ноября 1980 г. · Американский журнал тропической медицины и гигиены · T Sun

    1 сентября 1996 г. · Гастроэнтерологические клиники Северной Америки · LX Liu, KT Harinasuta

    20 марта 2001 г. · Zeitschrift für Gastroenterologie · B Berger, M Vierbuchen

    13 ноября 2003 г. · Acta Tropica · B SripaS Sirisinha

    13 ноября 2003 г. · Acta Tropica · Sasithorn Kaewkes

    , 2003 · Acta Tropica · Paiboon Sithithaworn, Melissa Haswell-Elkins

    13 ноября 2003 г. · Acta Tropica · Eimorn Mairiang, Pisaln Mairiang


    Цитирование

    31 мая 2008 г. · Паразитологические исследования · Pewanchai Intapan leewong

    12 ноября, 2010 · Паразитологические исследования · Пусади Шри-АрунПол Т Брей

    4 мая 2011 · Паразитологические исследования · Пенчом Джанван Ванчай Малеевонг

    28 августа 2013 · Международный журнал паразитологии · Тревор Н. , 2006 · Труды Королевского общества тропической медицины и гигиены · Сомфу СаясонМишель Штробель

    22 января 2011 г. · Наука · Алан Д. Зиглер Тревор Н. Петни

    9 июня 2011 г. · Паразиты и переносчики инфекции · Цзюфэн Сунсинбин Юй

    4 мая 2010 · Забытые тропические болезни PLoS · Питер Дж. Хотез

    8 октября 2011 · Забытые тропические болезни PLoS · Питер Дж. Хотез, Кен Алибек

    15 мая 2013 · PloS One · Мария Анхелес Гомес-Моралес Эдоардо Позио

    5 июля 2013 г. · PloS One · Цзюфэн Сунь Xinbingyu

    22 октября 2013 г. · Тенденции в паразитологии · Люси Дж. Робертсон, Рон Файер

    24 января 2014 г. · Паразитологические исследования · Мария В. Жукова Елена Киселева

    17 января 2012 г. · Паразитология Исследования · Оранух СанпулЮкифуми Нава

    20 июня, 2014 · Acta Tropica · А Султанов П. Р. Торгерсон

    27 января 2016 · Международный журнал паразитологии · Мария Львова Вячеслав Мордвинов

    23 августа 2011 · Международная паразитология · Мария Н. 7 сентября 2011 г. · Parasitology International · Paiboon SithithawornBanchob Sripa

    8 августа 2009 г. · Acta Tropica · Ти Лан Ань НгуенСтиг Милан Тамсборг

    23 сентября 2008 г. · Экспериментальная паразитология · Канасинакатте R UmeshaIddya

    Vegas6, 2 сентября 2008 г. · PM IntapanW Maleewong

    6 января 2009 · Анналы Нью-Йоркской академии наук · Andrés Gómez, A Alonso Aguirre

    11 января 2014 · Journal of Hepato-bili-pancreatic Sciences · Paiboon SithithawornChawalit Pairojkul

    Sep 2005 · Международный журнал паразитологии · Чон-Йил ЧайАлан Дж. Лимбери

    23 мая 2008 г. · Acta Tropica · Аммини Парватииддья Карунасагар

    16 мая , 2014 · Acta Parasitologica · Фуджан МехрданаКурт Бухманн

    15 января 2015 г. · Паразиты и переносчики инфекции · Нгуен Ман ХунгЛе Суан Кань

    16 февраля 2008 г. · Parasitology International · Парк Сеока Канджун-Ки

    22 октября 2008 г. · Тенденции в паразитологии · Росс ЭндрюсТревор Н. Петни

    19 июля 2011 г. · Международный журнал инфекционных заболеваний: IJID: официальная публикация Международного общества по инфекционным заболеваниям · Питер Дж. Хотез, Мередит Гурвит

    23 января 2013 г. · Acta Tropica · Эдоардо Поцио-Анхелес Гомес Моралес

    12 февраля 2014 г. · Корейский журнал паразитологии · Worasak KaewkongWanchai Maleewong

    17 сентября 2014 г. · Memórias do Instituto Oswaldo Cruz · Сергей Михайлович Слепченко Евгения Олеговна Святова

    9 августа 2017 · Кишечник и печень · Piyapan PrueksapanichRungsun Rerknimitr

    S 5 эп., 2019 · Американский журнал тропической медицины и гигиены · Lakkhana SadaowPewpan M Intapan

    15 февраля 2020 г. · Патогены и глобальное здоровье · Sharmin S Labony Anisuzzaman

    3 декабря 2015 г. · Азиатско-Тихоокеанский журнал профилактики рака: APJCP · Paitoon PromthetSupannee Promthet

    7 марта, 2019 · Корейский журнал паразитологии · Parichart BoueroySirintip Boonjaraspinyo

    11 апреля 2020 г. · Продукты питания · Мишель УильямсShokoofeh Shamsi

    29 декабря 2020 г. , 2021 · Животные: журнал в открытом доступе от MDPI · Элизабет РашА Алонсо Агирре


    Исследовательское метаболомическое исследование экспериментального описторхоза на лабораторных моделях животных (золотой хомяк, Mesocricetus auratus)

    Абстрактные

    Фон

    Описторхоз – паразитарная инфекция, вызываемая печеночными двуустками семейства Opisthorchiidae.Как экспериментальные, так и эпидемиологические данные убедительно подтверждают роль этих паразитов в этиологии гепатобилиарной патологии и повышенном риске внутрипеченочной холангиокарциномы. Понимание функциональной связи между инфекцией и гепатобилиарной патологией требует подробного описания взаимодействия паразит-хозяин на разных уровнях биологической регуляции, включая метаболический ответ на инфекцию. Последний, однако, остается практически недокументированным. Здесь мы описываем реакцию хозяина на инфекцию Opisthorchiidae с использованием метаболомического подхода и представляем первое исследовательское исследование метаболомики экспериментальной модели O . felineus инфекция.

    Методология и основные выводы

    Мы провели исследование продольной метаболомики на основе ядерного магнитного резонанса (ЯМР) с участием когорты из 30 животных с двумя степенями инфекции и контрольной группы. Исследовательский анализ показывает, что наиболее заметная тенденция (30% от общей дисперсии) в данных была связана с гендерными различиями. Поэтому дальнейший анализ проводился для каждой гендерной группы отдельно с применением многомерного расширения ANOVA — ASCA (одновременный компонентный анализ ANOVA).Мы показываем, что у мужчин специфические временные тренды инфекции присутствуют в основном компоненте (43,5% дисперсии), тогда как у женщин они представлены только во втором компоненте и покрывают 24% дисперсии. Мы отобрали и аннотировали 24 метаболита, связанных с наблюдаемыми эффектами, и предоставили физиологическую интерпретацию результатов.

    Выводы

    Первое исследовательское исследование метаболомики экспериментальной модели O . Представлена ​​инфекция felineus .Наши данные показывают, что на ранней стадии заражения реакция организма проявляется в зависимости от пола. Также основные затронутые физиологические механизмы выглядят довольно неспецифическими (статус метаболического стресса), данные предоставляют набор гипотез для поиска более специфических метаболических маркеров инфекции Opisthorchiidae.

    Информация об авторе

    Описторхоз – это паразитарная инфекция, вызываемая печеночными двуустками семейства Opisthorchiidae ( Trematoda ; Platyhelminthes ).Инфекции печеночного двуустки вызывают развитие гепатобилиарной патологии, в том числе хронических форм холецистита, холангита, панкреатита, желчнокаменной болезни. Однако наиболее опасным эффектом инфекции Opisthorchiidae является повышенный риск внутрипеченочной холангиокарциномы. С помощью этой работы мы получаем представление об ответе хозяина на инфекцию Opisthorchiidae с использованием метаболомического подхода. Метаболомика – это постгеномная дисциплина, изучающая метаболом. Динамический характер метаболома, его способность изменяться в ответ на внешние раздражители делают его оптимальным «считывающим устройством» для исследовательских исследований, направленных на описание системных ответов организма.Используя этот подход, мы демонстрируем, что ранний ответ на O . felineus Инфекция развивается в зависимости от пола. Более того, с этим первым исследовательским анализом метаболического ответа на O . felineus на модели животных мы представляем подмножество метаболитов, изменяющихся на ранней стадии инфекции, и предлагаем возможную физиологическую интерпретацию.

    Образец цитирования: Кокова Д.А., Костидис С., Морелло Дж., Дементьева Н., Перина Е.А., Иванов В.В. и др.(2017) Изучение экспериментальной метаболомики экспериментального описторхоза на модели лабораторных животных (золотой хомяк, Mesocricetus auratus ). PLoS Negl Trop Dis 11 (10): e0006044. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0006044

    Редактор: Джон Пиус Далтон, Королевский университет Белфаста, СОЕДИНЕННОЕ КОРОЛЕВСТВО

    Поступило: 12 июня 2017 г .; Одобрена: 17 октября 2017 г .; Опубликован: 31 октября 2017 г.

    Авторские права: © 2017 Kokova et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

    Доступность данных: Минимальный набор данных (данные уже были обработаны с использованием спектрального биннинга) предоставляется в качестве вспомогательной информации (вспомогательная информация 4) в соответствии с политикой данных PLOS. Для получения полных исходных данных, пожалуйста, свяжитесь с Центром протеомики и метаболомики LUMC по следующему адресу: Rob Marissen [email protected]

    Источник финансирования: Работа поддержана Российским научным фондом (http://www.rscf.ru/ru) [грант № 14-15-00247]. Кроме того, J.M. был поддержан Фондом науки и технологий Португалии (грант № SFRH / BSAB / 114291/2016). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

    Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

    Введение

    Описторхоз – это паразитарная инфекция, вызываемая печеночными двуустками семейства Opisthorchiidae ( Trematoda ; Platyhelminthes ). Семейство включает три наиболее важных для здоровья человека вида: C . sinensis , O . viverrini , O . felineus ; вместе они несут ответственность за более чем 45 миллионов инфекций во всем мире; В настоящее время риску подвержено 600–750 миллионов человек [1, 2]. О . viverrini и C . sinensis являются эндемиками регионов Дальнего Востока и Юго-Восточной Азии, оставаясь важной проблемой общественного здравоохранения [3]. О . Инфекция felineus широко распространена в Восточной Европе (Украина и европейская часть России), Средней Азии (северный Казахстан) и Северной Азии (Сибирь) [2]. Как экспериментальные, так и эпидемиологические данные убедительно подтверждают роль инфекций двуустки печени в этиологии гепатобилиарных патологий, таких как хронические формы холецистита, холангита, панкреатита и холелитиаза [2–5].Однако наиболее опасным эффектом инфекции Opisthorchiidae является повышенный риск внутрипеченочной холангиокарциномы [6].

    В отличие от других патогенов, e . г . вирусы и микробы, паразитические гельминты не размножаются внутри своего млекопитающего-хозяина. Соответственно, интенсивность инфекции – одна из ведущих причин заболеваемости. Например, O . viverrini ассоциированные симптомы чаще встречались у лиц с высокой интенсивностью инфекции [7] и положительной ассоциацией между гепатобилиарной патологией и O . viverrini интенсивность заражения хорошо задокументирована [4]. Причем аномалии желчевыводящих путей чаще выявляются при УЗИ у пациентов с тяжелой формой O . viverrini инфекций, чем легкие или средние [8]. Однако, несмотря на явные феноменологические и эпидемиологические данные, связывающие инфекцию Opisthorchiidae и гепатобилиарную патологию, наше понимание механистической и описательной биохимии ассоциации все еще довольно плохо. Только гуморальный ответ на O . viverrini достаточно хорошо задокументирован; например, исследование инфицированных хомяков показало, что титр паразитоспецифического IgG в острой стадии прямо коррелирует с интенсивностью инфекции, что определяется как количеством глистов, так и количеством яиц на грамм (EPG). Более дискриминационный подход, при котором специфические антитела к патогену были разделены в соответствии с их специфичностью к яичным, экскреторно-секреторным и соматическим антигенам, показывает интересную кинетику гуморального ответа: в острой фазе инфекции ответ антител был выше у животных, инфицированных вирусом. более высокие дозы метацеркарий, в хронической фазе более высокие ответы, особенно на соматические и яичные антигены, были обнаружены у слабо инфицированных хомяков [9].Недавний отчет Khoontawad и др. [10] представляет собой наиболее подробную работу по протеомике O . viverrini инфекция опубликована на данный момент. Авторы исследуют дифференциальную экспрессию белка в ткани хозяина с хроническим воспалением по сравнению с образцами ткани от субъектов с O . viverrini индуцировал рак. Что касается метаболомики, постгеномной дисциплины, направленной на изучение метаболитов – конечных точек и промежуточных продуктов метаболизма, то данные просто недоступны.Метаболом жидкостей организма является наиболее близким к физиологическому фенотипу организма и, как таковой, представляет собой важный, но все еще недооцененный источник клинической / физиологической информации [11]. Динамический характер метаболома, его способность изменяться в ответ на внешние раздражители делают его оптимальным «считывающим устройством» для исследовательских исследований, описывающих системные реакции организма. В то время как в отношении шистосомоза был проведен ряд исследовательских исследований метаболомики на животных моделях и материалах пациентов [12–16], таких исследований в отношении опишторхоза пока нет.

    Здесь мы представляем первое исследовательское исследование метаболомики экспериментальной модели O . felineus инфекция. Используя установленную модель инфекции хомяка, мы провели исследование метаболомики на основе ядерного магнитного резонанса (ЯМР) с участием когорты из 30 животных с двумя степенями инфекции (тяжелой и легкой) и контрольной группы. Образцы мочи собирали каждые две недели в течение нескольких месяцев. Используя комбинацию неконтролируемого и контролируемого многомерного статистического анализа, мы смогли различить разрешенные во времени метаболические паттерны инфекции в моче.

    Материалы и методы

    Заявление о соблюдении этических норм

    Все хомяки, использованные в исследовании, содержались в соответствии с рекомендациями национального руководства по уходу за животными: 12.08.1977 N 755 «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с экспериментальными животными». Исследование одобрено локальным этическим комитетом Сибирского государственного медицинского университета с лицензией № 3296 от 29.04.2013.

    Описторхоз экспериментальный, модель

    Хомяки Mesocricetus auratus были приобретены в зоотехнике Института биоорганической химии академиков М.М. Шемякин, У. А. Овчинников. Метацеркарии О . felineus были получены из естественно инфицированных рыб, продаваемых в местных супермаркетах в качестве продукта потребления. Мышечную ткань и подкожную клетчатку переваривали пепсином-HCl, собирали жизнеспособные метацеркарии и идентифицировали с помощью микроскопии. Хомяки были разделены на 3 группы: группы высокой интенсивности (50 метацеркарий / хомяк), группы низкой интенсивности (15 метацеркарий / хомяк) и неинфицированные (носитель – PBS) группы.Каждая группа состояла из 10 животных – пяти самцов и пяти самок. Хомяков содержали в отдельных клетках, поддерживали в режиме 12:12 свет-темнота (06: 00–18: 00: 18–0600 ч) и давали пищу и воду ad libitum на время эксперимента. На момент заражения хомякам было около пяти недель. Животных умерщвляли через 46 недель заражения. Во время умерщвления собирали печень для подсчета взрослых червей. Мочу и кал собирали каждые две недели, особенно на 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30 и 32 неделях после заражения.Для сбора мочи и фекалий хомяков по отдельности помещали в стерильную пустую стеклянную воронку и наблюдали до тех пор, пока не образовывались гранулы мочи и фекалий. Образцы мочи и фекалий собирали в индивидуально промаркированные пробирки Эппендорфа и переносили в морозильную камеру (-80 ° C) для длительного хранения.

    Количество яиц

    Среднее количество яиц на грамм фекалий было рассчитано по модифицированному методу Като (Katz et al. 1972). Образцы фекалий от каждого животного в исследуемый момент времени перемешивали с помощью Mini-Beadbeater-16 (Bio-Spec) в течение 5 минут.Образец 25 мг фекалий взвешивали с помощью электронных весов (Sartorius тип 1702, чувствительность 0,1 мг) сразу после гомогенизации. Готовили два предметных стекла на каждые 25 мг фекалий. Экстраполяцию количества яиц на образец 25 мг к значениям яиц на грамм производили простым умножением (x 40).

    Подготовка проб мочи

    Все химические вещества, используемые для буферного раствора, были приобретены у Sigma-Aldrich, за исключением 2 H 2 O, который был приобретен у Cortecnet, и 3- (триметилсилил) пропионовой кислоты-2,2,3,3- d 4 натриевая соль кислоты (TSP) от Cambridge Isotope Laboratories Inc.96-луночные планшеты и пробирки для ЯМР были приобретены у Bruker Biospin Ltd. (Германия).

    Аликвоты 0,5 мл мочи на образец размораживали в течение ночи при 4 ° C. Затем клеточные компоненты и другой нерастворимый материал центрифугировали в течение 10 минут при 3184 g и 4 ° C, а супернатанты переносили в 96-луночные планшеты. 270 мкл мочи из каждого образца смешивали с 30 мкл буферного раствора в 2 H 2 O (pH = 7,4), содержащем 1,5 MK 2 HPO 4 , 2 мМ NaN 3 и 4 мМ TSP. -2,2,3,3- d 4 в качестве внутреннего стандарта и эталона химического сдвига (0.Конечная концентрация 4 мМ в каждом образце). Наконец, 165 мкл каждой смеси моча-буфер переносили в 3-миллиметровые пробирки для ЯМР SampleJet и помещали в охлаждаемые стойки (6 ° C) системы SampleJet до проведения измерений ЯМР. Как смешивание мочи с буфером, так и перенос смеси в пробирки для ЯМР выполнялись двумя роботами-манипуляторами 215 Gilson и контролировались программным обеспечением SampleTrack (Bruker Biospin Ltd.).

    Сбор данных ЯМР

    Данные ЯМР

    регистрировали на приборе Bruker 14.Спектрометр 1T AVANCE II на 1 H 600 МГц, оснащенный трехрезонансным инверсным криозондом (TCI). Каждому образцу позволяли сидеть в зонде в течение 5 минут для достижения стабильной температуры 27 ° C перед запуском процедур калибровки и сбора данных. Затем зонд автоматически настраивался и согласовывался с последующим регулированием и калибровкой протонного импульса. Одномерные (1D) спектры ЯМР 1 H были записаны с использованием первого приращения импульсной последовательности NOESY [17] (noesygppr1d в Topspin 3.0 библиотека). Подавление сигнала воды достигалось с помощью предварительного насыщения, непрерывного волнового излучения с частотой 50 Гц мягким импульсом во время задержки релаксации 4 с и времени перемешивания 10 мс. Спектральная ширина была установлена ​​на 20 ppm (12335 Гц), и было собрано 16 сканирований 65536 точек. Зарегистрированные спады свободной индукции (FID) были преобразованы Фурье и применено уширение линии на 1,0 Гц. Спектры были автоматически фазированы, и базовая линия скорректирована и привязана к химическому сдвигу внутреннего стандарта (TSP; δ 0.0 частей на миллион). После обработки производилась оценка качества спектров. Ширину линий пиков оценивали с помощью синглета TSP и дублета метильных протонов аланина. Кроме того, была проверена эффективность водоотталкивания и качество базовой линии. Спектры, которые не соответствовали критериям качества, исключались из дальнейшего анализа.

    Двумерные спектры с разрешением J (2D J res) также были собраны для каждого образца с использованием той же схемы подавления воды, которая описана выше, во время задержки релаксации 2 с.Спектральная ширина была установлена ​​на 16,66 ppm (12288 Гц) для прямого измерения и 78 Гц для непрямого измерения, и было получено 2 сканирования за 40 приращений. FID были автоматически обработаны с преобразованием Фурье, и спектры были привязаны к сигналу TSP при 0,0 ppm в измерении F2 и при 0,0 Гц в измерении F1.

    Для целей назначения были также получены 2D ЯМР-спектры для образца, полученного в виде смешивания всех образцов мочи. Набор 2D-экспериментов включал 1 H- 1 H корреляционная спектроскопия (COSY), 1 H- 1 H полная корреляционная спектроскопия (TOCSY), 1 H- 13 C гетероядерная одноквантовая корреляция (HSQC) и 1 H- 13 C гетероядерная корреляционная спектроскопия множественных связей (HMBC) с использованием стандартных параметров, реализованных в Topspin 3.0 (Bruker Biospin Ltd.).

    Обработка и анализ спектральных данных

    Предварительная обработка данных ЯМР (файл S2) для использования в статистическом анализе выполнялась с помощью внутренних процедур, написанных в Matlab 2014a (The Mathworks, Inc., США) и Python 2.7 (Python Software Foundation, www.python.org) . Все спектры 1D ЯМР 1 H были повторно оценены на предмет неправильных базовых линий и скорректированы с использованием полиномиальной аппроксимации степени 5. Спектральная область от 0,5 до 9,5 ppm была объединена с использованием внутреннего алгоритма для адаптивного интеллектуального бинирования [18].Начальная ширина ячейки была установлена ​​на 0,02 ppm, а конечные переменные размеры ячейки были рассчитаны на основе краев пиков в спектрах с использованием критерия наименьшего стандартного отклонения. Спектральная область, включающая остаточную воду и пики мочевины (δ 4,5–6,2 м.д.), была исключена из данных.

    Окончательные данные состояли из 392 ячеек переменного размера × 490 наблюдений (образцов), которые были нормализованы методом нормализации вероятностных коэффициентов (PQN) [19] для корректировки различий в разбавлении от образца к образцу.Наконец, нормализованные данные были масштабированы до единичной дисперсии для статистического анализа.

    Анализ данных проводился с помощью статистической среды R ((http://www.r-project.org/, R версии 3.3.2). Для исследовательского анализа « Rcpm », « pcaMethods » и « caret ». Моделирование ASCA выполнялось с использованием пакета« lmdme »[20]. Визуализации выполнялись с использованием пакетов« ggplot2 »,« cowplot »и« gridExtra ».

    Идентификация метаболитов

    Идентификация метаболитов проводилась путем тщательного перебора полных 1D и 2D данных J res с использованием собственного кода Bbiorefcode (Bruker Biospin Ltd.) и базы данных ChenomX NMR Suite 8.1 (Chenonx Inc.). Идентификаторы аннотированных резонансов были дополнительно проверены с помощью собранных данных 2D ЯМР.

    Результаты

    Количество взрослых червей и яиц

    План исследования включает 30 животных, разделенных на три группы: контрольную неинфицированную группу и две экспериментальные группы, инфицированные пятнадцатью и пятьдесят метацеркариями. Рис. 1. Каждая экспериментальная группа состояла из равного количества самцов и самок. Набор данных, описанный в текущей рукописи, включает образцы от исходного уровня до тридцати двух недель, собираемые каждые две недели.Среднее количество взрослых гельминтов в конце исследования составило 35 для группы тяжелой и 6 для группы легкой степени интенсивности соответственно (p-значение = 0,003) (S1A, рис.). Яйца О . felineus были обнаружены во всех образцах фекалий, начиная с 4 недель после заражения. S1B Фиг. Показывает график яйценоскости за весь период эксперимента. Он показывает последовательное увеличение яйценоскости в обеих экспериментальных группах за период от 4 до 10 недель. Мы рассматриваем изменения яйценоскости, связанные с разными стадиями инфекции: острой (до 10 недель) и хронической (с 10 недель).С 12 по 30 неделю эксперимента яйценоскость стабильна, и в группе с высоким уровнем заражения яйценоскость постоянно повышается. Результат значительно выше на 12 неделе (значение p = 0,002), 14 (значение p = 0,004), 16 (значение p = 0,030), 20 (значение p = 0,001), 26 (значение p = 0,001) и 28 (значение p = 0,009).

    Исследовательский анализ метаболических профилей в моче

    Первым шагом поискового исследования является определение основных источников расхождений в данных и влияния вмешивающихся факторов.Анализ главных компонентов (PCA) является общепринятым подходом. На рис. 2 показаны графики оценок первых двух основных компонентов модели PCA, построенной на всем наборе данных. Модель требовала 5 компонентов, чтобы объяснить 50% дисперсии, при этом 34% объяснялись первыми двумя компонентами. Каждый блок рисунка представляет собой одну и ту же модель, окрашенную в зависимости от различных факторов. Удивительно, но интенсивность инфекции (рис. 2А) не влияет на основные источники расхождения в данных.Гендер оказывает глубокое влияние на профиль, влияние четко представлено в первых двух основных компонентах (рис. 2С). Другой узнаваемый источник дисперсии – время сбора образца (рис. 2B и 2D). На рис. S2 показаны модели PCA, построенные отдельно для самцов (A, B) и самок (C, D) животных. Модели имеют характеристики, аналогичные «глобальной», обе требуют 5 компонентов для объяснения 50% дисперсии; первые два компонента объясняют 37% и 32% дисперсии мужской и женской моделей соответственно.Опять же, интенсивность заражения не объясняет основных различий в данных (S2A и S2C, фиг.), Но четко видна временная тенденция (S2B и S2D, фиг.). Более того, направления временных трендов в моделях, построенных на гендерно-специфических подмножествах, кажутся разными.

    Рис. 2. Графики оценок первых двух основных компонентов модели PCA, построенной на всем наборе данных; Каждый блок рисунка представляет собой одну и ту же модель, окрашенную в соответствии с разными факторами; A – группа заражения, B – сезон, C – пол, D – время в неделях.

    https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0006044.g002

    Анализ гендерных метаболических изменений в острой фазе инфекции

    Данные, представленные на рис. 2, ясно показывают, что прямому анализу инфекционно-зависимых изменений будет препятствовать влияние гендерной и временной тенденции. Таким образом, чтобы уменьшить сложность анализа, мы решили сконцентрироваться на периоде от 0 до 10 недель эксперимента: временные рамки, когда выход яиц неуклонно увеличивался (S1B Рис.).Анализ проводился отдельно на мужской и женской подгруппах. На рис. 3 показаны модели PCA, построенные на данных с 0 по 10 неделю эксперимента. «Мужская модель» (рис. 3A, 3B и 3C) требовала четырех компонентов, чтобы объяснить 50% дисперсии, при этом 42% объяснялись первыми двумя. Построение модели данных, включающих только женщин (рис. 3D, 3E и 3F), потребовало 6 компонентов, чтобы объяснить 50% дисперсии, а первые два объясняют 34%. Обе модели кажутся довольно похожими, однако, применяя анализ геометрической траектории [21] (рис. 3C и 3F), можно выявить некоторые основные различия.Геометрические временные траектории для инфицированных животных (группы E1 и E2) четко выражены в мужской модели (рис. 3C). В то же время в подгруппе самок (рис. 3F) только траектория для сильно инфицированных животных (E1) имеет отчетливую форму, траектория для группы с более низким уровнем заражения оказывается такой же случайной, как и для контрольной.

    Рис. 3. Модели PCA строятся для каждой гендерной группы отдельно на подмножестве выборок, собранных между 0 и 10 неделями; А, Б – самцы, Г, Д – самки.

    Геометрические траектории времени: C – самцы, F – самки.

    https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0006044.g003

    Моделирование одновременного компонентного анализа (ASCA) ANOVA

    Чтобы проанализировать метаболические особенности, связанные с инфекцией, необходим подход к анализу данных, который позволяет одновременно анализировать план эксперимента и время. Выбор весьма ограничен. Одним из «стресс-тестируемых» методов является одновременный компонентный анализ ANOVA или ASCA [22, 23]. Короче говоря, ASCA – это многомерное расширение ANOVA, и самым сильным преимуществом метода является возможность моделирования экспериментальных планов с несколькими факторами.Что касается нашего исследования, этими факторами являются время, интенсивность инфекции и пол. Чтобы избежать сложной интерпретации множественных межфакторных взаимодействий, мы применили ASCA отдельно к каждой гендерной подгруппе. На рис. 4 показаны результаты анализа для первых двух компонентов. Тенденции выглядят похожими, но не идентичными. В мужской подгруппе специфические временные тренды инфекции присутствуют в основном компоненте (отклонение 43,5%). Временные тренды для неинфицированных и инфицированных 50 метацеркариями животных имеют почти противоположное поведение в первом компоненте, демонстрируя несколько случайную закономерность во втором.В женской подгруппе тенденции, связанные с инфекциями, не представлены в первом компоненте, но хорошо представлены во втором. Последний, однако, покрывает только 24% дисперсии, почти половину того, что наблюдалось у мужчин.

    Выбор и аннотация переменных

    На рис. 4 показаны характерные для времени / инфекции тенденции и системные различия между мужчинами и женщинами в реакции на заражение. Тем не менее, он не дает никакой информации о природе биохимических образований, участвующих в наблюдаемых явлениях.Таким образом, используя кредитное плечо в качестве меры важности переменной, мы извлекли подмножество переменных, влияющих на модели, показанные на рис. 4. В таблице 1 приведены выбранные переменные. Большинство переменных можно аннотировать, но некоторые сложные области (1,63–1,69, 1,71–1,74 и 2,46 частей на миллион) просто не могут быть отнесены к одному метаболиту. Файл S1 показывает тенденции за 24 недели для каждой отдельной функции, включенной в таблицу. Кривые представлены как медианные значения для экспериментальной группы, исходные значения включены в графики в виде графиков прозрачности.Визуальный осмотр графиков показывает, что только несколько соединений демонстрируют устойчивую тенденцию в течение всего периода. Для большинства из них изменения заметны только в первые недели; Некоторые соединения (например, 2-аминоадипиновая кислота и никотинуровая кислота) демонстрируют четкую тенденцию для группы животных, инфицированных 50 метацеркариями.

    Обсуждение

    Здесь мы впервые представляем исследовательский анализ метаболической реакции на O . felineus на животной модели.Следуя установленной схеме описательного исследования, мы начали анализ с изучения основных источников расхождений в данных. Используя методы неконтролируемого прогнозирования, а именно PCA, мы показали, что ни статус заражения, ни время не являются основными источниками расхождений в данных. Фактически, наиболее заметная тенденция в данных была связана с гендерными различиями. На первый взгляд, это наблюдение может показаться противоречащим более ранним публикациям на моделях животных, инфицированных другими трематодами S . japonicum [13] и S . mansoni [12], а также в нашем собственном отчете об исследовании на людях [15], в котором сообщалось о явных различиях между инфицированными и неинфицированными субъектами. Тем не менее, для выявления различий, связанных с инфекцией, авторам вышеупомянутых исследований приходилось использовать методы контролируемого моделирования, и объективная оценка основных источников расхождений в данных, как правило, показывала влияние физиологических смешивающих факторов, таких как, например, возраст [15, 24].Гендерная предвзятость в исследованиях на людях была скрыта возрастным фактором из-за широкого возрастного диапазона участников. В исследованиях на животных использовались однополые модели: самки мышей [12, 14, 25] и самцы хомяков [13, 26]. Поскольку животные, включенные в наше исследование, были сопоставимы по возрасту, пол в настоящее время является самым сильным физиологическим соучредителем [27]; следовательно, следует ожидать гендерной предвзятости, наблюдаемой в данных. Конечно, следует иметь в виду, что все приведенные выше примеры взяты из публикаций по метаболическим эффектам Schistosomiasis , информации о Opisthorchiasis еще не опубликовано.

    Гендерная тенденция объясняет примерно 30% расхождений в данных; поэтому дальнейший анализ проводился отдельно для каждой подгруппы. Как многомерное моделирование без учителя, так и анализ на основе ASCA показали, что временная реакция на инфекцию проявляется по-разному у мужчин и женщин. Более того, рис. 4, на котором представлен обзор основных закономерностей, связанных с взаимодействием времени и инфекции, ясно показывает, что в мужской модели отчетливая тенденция присутствует в первом основном компоненте, охватывающем вдвое большую дисперсию, чем в женской модели, где аналогичная тенденция наблюдается. виден только во втором компоненте.Естественно, обсуждение биологической значимости наблюдаемых эффектов возможно только в том случае, если мы знаем идентичность метаболитов, влияющих на модели. Подмножество наиболее влиятельных субъектов представлено в Таблице 1. В целом это выглядит как более или менее стандартный набор метаболитов, о которых регулярно сообщают в исследованиях метаболомики мочи на основе ЯМР. Он также имеет сильное совпадение с метаболитами, описанными в упомянутых выше публикациях по Schistosomiasis .

    В контексте острой инфекции Opisthorchiasis , состояния энергетического стресса, становится интересным одна особая тенденция, а именно, желчные кислоты. Файл S1 показывает, что в группе сильно инфицированных животных экскреция желчных кислот с мочой увеличивается с начала эксперимента, достигая пика через четыре недели и снижаясь после этого момента. Современная физиологическая парадигма связывает повышенную экскрецию желчных кислот с мочой с возможными обструкциями основного дуоденального пути [28].Мы можем только предполагать точные физиологические механизмы, которые приводят к увеличению секреции желчных кислот, но время наблюдаемого эффекта полностью совпадает с периодом, когда паразит «оседает» в желчных протоках хозяина. Конечно, наш метод улавливает только общий эффект и не может дать точную аннотацию желчных кислот. Из литературы мы знаем, что основная часть желчных кислот с мочой выводится в виде сульфированных разновидностей [29], но, насколько нам известно, нет опубликованных отчетов о профилях желчных кислот в моче в Opisthorchiasis .Аналогичная временная картина для желчных кислот наблюдалась также для областей спектра, где расположены резонансные лизин и продукт его катаболизма 5-аминопентановая кислота. Несмотря на интригующее сходство, трудно принять «простую» интерпретацию, согласно которой лизин следует рассматривать как продукт распада конъюгированных желчных кислот; конъюгаты лизина довольно необычны и описаны только как второстепенные продукты литохолевой кислоты в печени [30]. Другая группа метаболитов, связанных с физиологическим контролем метаболизма липидов, состоит из никотиновой кислоты и ее метаболитов, никотинуровой кислоты и никотинамид-N-оксида.Последние два соединения показывают временное снижение с пиком через четыре недели. Эффект более выражен в мужской группе. Логично предположить, что энергетический метаболизм хозяина работает в стрессовом режиме во время вторжения паразита, большая часть пула никотиновой кислоты будет использоваться для производства NAD +, что, в свою очередь, может привести к снижению выработки и клиренса никотинуровой кислоты и никотинамида с мочой. -N-оксид. Другой метаболит, который хорошо вписывается в структуру стрессового режима энергетического метаболизма, – это гуанидиноацетат – предшественник креатина [31].Конечно, интерпретация данных с точки зрения метаболического стресса имеет слабые места. Ни одно из описанных изменений не может рассматриваться как специфическое для Описторхоз ; все изменения отражают общую реакцию организма на острую инфекцию. Тем не менее, исследовательское исследование, особенно то, которое проводится на относительно неизведанной территории, должно предоставить зацепки и гипотезы для дальнейшего исследования. С этой целью мы выполнили цель исследования. Логическим продолжением нашего исследования, по-видимому, является углубленный анализ профиля желчных кислот в моче и кале с использованием более чувствительных методов, а именно масс-спектрометрии.Уже в последние десятилетия двадцатого века аналитические методы позволили обнаруживать и количественно определять некоторые из желчных кислот [32], современные технологии предлагают надежный анализ более ста видов [33]. Кроме того, существующие сообщения об изменении профиля желчных кислот в моче при патологических состояниях печени [34] подтверждают нашу гипотезу. Учитывая другие упомянутые соединения и тенденции, они соответствуют контексту энергетического стресса и метаболического перераспределения основных метаболитов в кровообращении, однако еще неизвестно, можно ли перенести наши результаты на человеческую инфекцию.

    Ссылки

    1. 1. Petney TN, Andrews RH, Saijuntha W., Wenz-Mucke A, Sithithaworn P: зоонозные, переносимые рыбами печеночные двуустки Clonorchis sinensis, Opisthorchis felineus и Opisthorchis viverrini. Международный журнал паразитологии 2013, 43 (12–13): 1031–1046. pmid: 23978669
    2. 2. Федорова О.С., Ковширина Ю.В., Ковширина А.Е., Федотова М.М., Деев И.А., Петровский Ф.И., Филимонов А.В., Дмитриева А.И., Кудяков Л.А., Салтыкова И.В. и др. Инфекция Opisthorchis felineus и холангиокарцинома в Российской Федерации: Обзор медицинской статистики.Паразитол Инт 2016.
    3. 3. Sripa B, Bethony JM, Sithithaworn P, Kaewkes S, Mairiang E, Loukas A, Mulvenna J, Laha T., Hotez PJ, Brindley PJ: Описторхоз и холангиокарцинома, ассоциированная с описторхозом, в Таиланде и Лаосе. Acta tropica 2011, 120: S158 – S168. pmid: 20655862
    4. 4. Elkins DB, Mairiang E, Sithithaworn P, Mairiang P, Chaiyakum J, Chamadol N, Loapaiboon V, Haswell-Elkins MR: Поперечные образцы гепатобилиарных аномалий и возможные предшественники холангиокарциномы, связанной с инфекцией Opisthorchis viverrini у людей.Am J Trop Med Hyg 1996, 55 (3): 295–301. pmid: 8842118
    5. 5. Sriamporn S, Pisani P, Pipitgool V, Suwanrungruang K, Kamsa-ard S, Parkin DM: Распространенность инфекции Opisthorchis viverrini и заболеваемость холангиокарциномой в Кхон Каене, Северо-Восточный Таиланд. Тропическая медицина и международное здравоохранение: TM & IH 2004, 9 (5): 588–594.
    6. 6. Sripa B, Kaewkes S, Sithithaworn P, Mairiang E, Laha T, Smout M, Pairojkul C, Bhudhisawasdi V, Tesana S, Thinkamrop B и др.: Печеночная двуустка вызывает холангиокарциному.Plos Med 2007, 4 (7): 1148–1155.
    7. 7. Upatham ES, Viyanant V, Kurathong S, Rojborwonwitaya J, Brockelman WY, Ardsungnoen S, Lee P, Vajrasthira S: Взаимосвязь между распространенностью и интенсивностью инфекции Opisthorchis viverrini и клиническими симптомами и признаками в сельской местности на северо-востоке Таиланда. Bull World Health Organ 1984, 62 (3): 451–461. pmid: 6331907
    8. 8. Майианг Э., Элкинс Д.Б., Майианг П., Чайякум Дж., Чамадол Н., Лоапайбун В., Посри С., Сититхаворн П., Хасвелл-Элкинс М.: Взаимосвязь между интенсивностью инфекции Opisthorchis viverrini и гепатобилиарной болезнью, обнаруженной с помощью ультразвукового исследования.J Gastroenterol Hepatol 1992, 7 (1): 17–21. pmid: 1311966
    9. 9. Sripa B, Kaewkes S: Связь между паразит-специфическими реакциями антител и интенсивностью инфекции Opisthorchis viverrini у хомяков. Иммунология паразитов 2000, 22 (3): 139–145. pmid: 10672195
    10. 10. Khoontawad J, Pairojku C, Rucksaken R, Pinlaor P, Wongkham C, Yongvanit P, Pugkhem A, Jones A, Plieskatt J, Potriquet J и др.: Дифференциальная экспрессия белка знаменует переход от инфекции Opisthorchis viverrini к холангиокарциноме.Молекулярная и клеточная протеомика: MCP 2017.
    11. 11. Николсон Г., Ранталайнен М., Махер А.Д., Ли Дж.В., Мальмодин Д., Ахмади К.Р., Фабер Дж. Х., Халльгримсдоттир И.Б., Барретт А., Тофт Х. и др.: Метаболические профили человека стабильно контролируются генетическими и экологическими вариациями. Мол Сист Биол 2011, 7.
    12. 12. Ван Ю.Л., Холмс Э., Николсон Дж. К., Клорек О., Чоллет Дж., Таннер М., Зингер Б. Х., Утцингер Дж.: Метабономические исследования мышей, инфицированных Schistosoma mansoni: подход к идентификации биомаркеров.Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 2004 г., 101 (34): 12676–12681. pmid: 15314235
    13. 13. Ван Ю.Л., Утзингер Дж., Сяо С.Х., Сюэ Дж., Николсон Дж. К., Таннер М., Зингер Б. Х., Холмс Э: метаболические эффекты на системном уровне инфекции Schistosoma japonicum у сирийского хомяка. Молекулярная и биохимическая паразитология 2006, 146 (1): 1–9. pmid: 16337285
    14. 14. Wu JF, Xu WX, Ming ZP, Dong HF, Tang HR, Wang YL: метаболические изменения выявляют развитие шистосомоза у мышей.Плос забытые тропические болезни 2010, 4 (8).
    15. 15. Balog CIA, Meissner A, Goraler S, Bladergroen MR, Vennervald BJ, Mayboroda OA, Deelder AM: Метабономическое исследование инфекции человека Schistosoma mansoni. Молекулярные биосистемы 2011, 7 (5): 1473–1480. pmid: 21336380
    16. 16. Балог С., Александров Т., Деркс Р., Хенсберген П., Ван Дам Г., Тукахебва Е., Кабатерейн Н., Тиле Х., Веннервальд Б., Майборода О. и др.: Возможность использования рассеянного склероза и расширенной обработки данных для мониторинга инфекции Schistosoma mansoni.Клинические применения протеомики 2010, 4 (5): 499–510. pmid: 21137067
    17. 17. Кумар А., Эрнст Р. Р., Вутрих К.: Двумерный ядерный эксперимент Оверхаузера (2d Noe) для выяснения полных протон-протонных сетей кросс-релаксации в биологических макромолекулах. Biochem Bioph Res Co 1980, 95 (1): 1–6.
    18. 18. Де Мейер Т., Синнав Д., Ван Гассе Б., Ципоркова Е., Рицшель Э. Р., Де Бузер М.Л., Гиллеберт Т.С., Бекаерт С., Мартинс Дж. К., Ван Крикинге В.: характеристика метаболических изменений при гипертонии на основе ЯМР с использованием адаптивного интеллектуального алгоритма биннинга .Аналитическая химия 2008, 80 (10): 3783–3790. pmid: 18419139
    19. 19. Дитерле Ф., Росс А., Шлоттербек Г., Сенн Х. Нормализация вероятностного коэффициента как надежный метод учета разбавления сложных биологических смесей. Применение в метабономике ЯМР H-1. Аналитическая химия 2006, 78 (13): 4281–4290. pmid: 16808434
    20. 20. Фресно К., Бальзарини М.Г., Фернандес Э.А.: lmdme: Линейные модели для спроектированных многомерных экспериментов в R. J Stat Softw 2014, 56 (7): 1–16.
    21. 21. Keun HC, Ebbels TMD, Bollard ME, Beckonert O, Antti H, Holmes E, Lindon JC, Nicholson JK: Анализ геометрической траектории метаболических реакций на токсичность может определять профили, специфичные для лечения. Chem Res Toxicol 2004, 17 (5): 579–587. pmid: 15144214
    22. 22. Smilde AK, Jansen JJ, Hoefsloot HCJ, Lamers RJAN, van der Greef J, Timmerman ME: ANOVA-одновременный компонентный анализ (ASCA): новый инструмент для анализа разработанных данных метаболомики. Биоинформатика 2005, 21 (13): 3043–3048.pmid: 158
    23. 23. Jansen JJ, Hoefsloot HCJ, van der Greef J, Timmerman ME, Westerhuis JA, Smilde AK: ASCA: анализ многомерных данных, полученных в результате экспериментального плана. Журнал Chemometr 2005, 19 (9): 469–481.
    24. 24. Singer BH, Utzinger J, Ryff CD, Wang Y, Holmes E: Использование потенциала метабономики в крупных популяционных исследованиях: три направления. В: Справочник по метабономике и метаболомике. edn. Под редакцией Холмса Э., Николсона Дж. К. Оксфорд: Эльзевьер Б.V .; 2007: 289–325.
    25. 25. Ли Дж. В., Холмс Э., Сарик Дж., Кейзер Дж., Дирнхофер С., Утцингер Дж., Ван Ю. Л.: Метаболическое профилирование инфекции Schistosoma mansoni в тканях мышей с использованием спектроскопии ядерного магнитного резонанса с вращением под магическим углом. Международный журнал паразитологии 2009, 39 (5): 547–558. pmid: 118
    26. 26. Wu JF, Holmes E, Xue J, Xiao SH, Singer BH, Tang HR, Utzinger J, Wang YL: метаболические изменения у хомяков, коинфицированных Schistosoma japonicum и Necator americanus.Международный журнал паразитологии 2010, 40 (6): 695–703. pmid: 19951707
    27. 27. Bollard ME, Stanley EG, Lindon JC, Nicholson JK, Holmes E: Метабономические подходы на основе ЯМР для оценки физиологического влияния на состав биожидкости. Nmr Biomed 2005, 18 (3): 143–162. pmid: 15627238
    28. 28. Corbett CL, Bartholomew TC, Billing BH, Summerfield JA: Выведение желчных кислот с мочой при холестазе – доказательства почечной канальцевой секреции у человека. Clin Sci 1981, 61 (6): 773–780.pmid: 7297039
    29. 29. Alnouti Y: Сульфатирование желчных кислот: путь выведения и детоксикации желчных кислот. Toxicol Sci 2009, 108 (2): 225–246. pmid: 163
    30. 30. Наир П.П., Менделофф А.И., Воччи М., Банкоски Дж., Горелик М., Герман Г., Плапингер Р.: Литохолевая кислота в печени человека – идентификация эпсилон-литохолиллизина в тканевом белке. Липиды 1977, 12 (11): 922–929. pmid: 927045
    31. 31. Wyss M, Kaddurah-Daouk R: Креатин и метаболизм креатинина.Физиологические обзоры 2000, 80 (3): 1107–1213. pmid: 10893433
    32. 32. Альме Б., Бреммельгаард А., Шовалл Дж., Томассен П.: Анализ метаболических профилей желчных кислот в моче с использованием липофильного анионообменника и компьютерной масс-спектрометрии для газожидкостной хроматографии. Журнал липидных исследований 1977 г., 18 (3): 339–362. pmid: 864325
    33. 33. Сарафиан М.Х., Льюис М.Р., Печливанис А., Ральфс С., Макфайл М.Дж., Патель В.К., Дюма М.Э., Холмс Э., Николсон Дж. К.: Профилирование и количественное определение желчных кислот в биожидкостях с использованием тандемной масс-спектрометрии для сверхэффективной жидкостной хроматографии.Аналитическая химия 2015, 87 (19): 9662–9670. pmid: 26327313
    34. 34. Bremmelgaard A, Sjovall J: Профили желчных кислот в моче пациентов с заболеваниями печени. Eur J Clin Invest 1979, 9 (5): 341–348. pmid: 118027

    ПРАЙМ PubMed | Молекулярная идентификация Clonorchis sinensis и различение с другими видами описторхидных печеночных двуусток с использованием множественной лигированной амплификации зонда (MLPA)

    Citation

    Sun, Jiufeng, et al.«Молекулярная идентификация Clonorchis Sinensis и дискриминация с другими видами описторхидных печеночных двуусток с использованием множественной лигаторно-зависимой амплификации зонда (MLPA)». Паразиты и векторы, т. 4, 2011, с. 98.

    Sun J, Xu J, Liang P, et al. Молекулярная идентификация Clonorchis sinensis и различение с другими видами описторхидных печеночных двуусток с использованием множественной лигированной амплификации зондов (MLPA). Векторы паразитов . 2011; 4: 98.

    Вс, Дж., Сюй, Дж., Лян, П., Мао, К., Хуанг, Ю., Львов, X., Дэн, К., Лян, К., де Хуг, Г. С., и Ю, X. (2011). Молекулярная идентификация Clonorchis sinensis и различение с другими видами описторхидных печеночных двуусток с использованием множественной лигированной амплификации зондов (MLPA). Parasites & Vectors , 4 , 98. https://doi.org/10.1186/1756-3305-4-98

    Sun J, et al. Молекулярная идентификация Clonorchis Sinensis и дискриминация с другими видами описторхидных печеночных двуусток с использованием множественной лигаторно-зависимой амплификации зонда (MLPA). Векторы-паразиты. 7 июня 2011 г .; 4:98. PubMed PMID: 21649899.

    TY – JOUR T1 – Молекулярная идентификация Clonorchis sinensis и различение с другими видами печеночных двуусток описторхид с использованием множественной лигированной амплификации зондов (MLPA). AU – Вс, Цзюфэн, AU – Сюй, Цзинь, AU – Лян, Пей, AU – Мао, Цян, AU – Хуанг, Ян, AU – Lv, Сяоли, AU – Дэн, Чуаньхуань, AU – Лян, Чи, AU – де Хуг, G S, AU – Юй Синьбинь, 1-й год – 2011/06/07 / PY – 2011/03/14 / получено PY – 2011/06/07 / принято PY – 2011/6/9 / entrez PY – 2011/6/9 / pubmed PY – 2011/10/26 / medline СП – 98 EP – 98 JF – Паразиты и векторы JO – Векторы-паразиты ВЛ – 4 N2 – ИСТОРИЯ: Инфекции, вызываемые описторхидом, печеночными двуустками Clonorchis sinensis, Opisthorchis viverrini и O.felineus вызывают серьезные проблемы со здоровьем во всем мире, особенно в Юго-Восточной Азии. Раннее выявление инфекции важно для своевременного проведения соответствующей химиотерапии пациентам. РЕЗУЛЬТАТЫ: В этом исследовании мы оцениваем основанный на ПЦР метод молекулярной идентификации, мультиплексное лигирование-зависимое усиление зонда (MLPA), которое позволяет быстро и точно определять различия в нуклеотидных кислотах между Clonorchis sinensis, Opisthorchis viverrini и O. felineus. Три пары зондов были получены из внутренне транскрибируемого спейсера 1 (ITS1) трех описторхидных печеночных двуусток с использованием систематического филогенетического анализа.Специфические локусы были обнаружены у всех трех видов, что дало три ампликона с 198, 172 и 152 п.н. соответственно, при этом перекрестных реакций не наблюдалось. Панель из 66 изолятов C. sinensis подвергали скринингу с использованием MLPA. Все виды были идентифицированы положительно, ингибирования не наблюдалось. Предел обнаружения составлял 10 (3) копий гена ITS для трех печеночных двуусток или около 60 пг геномной ДНК для Clonorchis sinensis. Продукты амплификации можно обнаружить с помощью электрофореза на агарозном геле или в капиллярном секвенаторе.Кроме того, геномная ДНК Clonorchis sinensis в образцах фекалий инфицированных крыс была положительно амплифицирована с помощью MLPA. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Гибкость и специфичность делают MLPA потенциальным инструментом для специфической идентификации инфекций, вызываемых описторхидными печеночными двуустками в эндемичных районах. SN – 1756-3305 UR – https://www.unboundmedicine.com/medline/citation/21649899/molecular_identification_of_clonorchis_sinensis_and_discrimination_with_other_opisthorchid_liver_fluke_species_using_multiple_ligation_depended_mlpa_amplification__pabe_ampl L2 – https: // паразиты и векторы.biomedcentral.com/articles/10.1186/1756-3305-4-98 БД – ПРЕМЬЕР DP – Unbound Medicine ER –

    Очень низкая распространенность Opisthorchis viverrini s.l. cercariae в улитках Bithynia siamensis siamensis из системы сети каналов в столичном регионе Бангкока, Таиланд

    Паразит 28 , 2 (2021)

    Исследовательская статья

    Очень низкая распространенность

    Opisthorchis viverrini s.l. cercariae в Bithynia siamensis siamensis улиток из системы сети каналов в Бангкокском столичном регионе, Таиланд

    Très faible prevalence des cercaires d ’

    Opisthorchis viverrini s.л. chez les mollusques Bithynia siamensis siamensis du réseau de canaux dans la région métropolitaine de Bangkok, Thaïlande

    Phuphitchan Rachprakhon and Watchariya Purivirojkul *

    Отделение специальных исследований по систематике и экологии животных, отделение зоологии, факультет естественных наук, университет Касетсарт, кампус Банг Кхен, 10900 Бангкок, Таиланд

    * Автор для переписки: [email protected]

    Поступило: 22 июль 2020 г.
    Принято: 11 Декабрь 2020 г.

    Аннотация

    Печеночная двуустка Opisthorchis viverrini s.л. связано с давней проблемой общественного здравоохранения в Таиланде. Однако O. viverrini s.l. инфекция в Bithynia улиток в системе сети каналов (CNS) в Бангкокском столичном регионе (BMR) никогда не оценивались. Это исследование было направлено на изучение встречаемости B. siamensis siamensis и распространенности O. viverrini s.l. инфицирование этой улитки в ЦНС в BMR вместе с морфологическим исследованием и молекулярным анализом на O.viverrini s.l. церкарии. Образцы улиток были случайно взяты из ЦНС во всех областях BMR с января 2018 года по июль 2019 года. Образцы улиток были идентифицированы и исследованы на дигенеевую инфекцию путем выделения и вскрытия. Церкарии были идентифицированы с использованием морфологических и молекулярных методов, включая ПЦР с видоспецифическим праймером и байесовский филогенетический анализ последовательностей ITS2. Bithynia siamensis siamensis был обнаружен почти во всех точках отбора проб с разным количеством и частотой обнаружения.Из всего 7473 B. s. siamensis экз., O. viverrini s.l. Инфекции были обнаружены в северных районах Бангкока, Муанг Накхон Патом, Кратум Баен и Лам Лук Ка с общей распространенностью 0,05% (4/7473) и распространенностью 0,22% (1/455), 0,21% (1/469) , 0,40% (1/253) и 0,16% (1/614) в отдельных местах с положительными улитками соответственно. Это исследование является первым исследованием дигенеевой инфекции в среде обитания системного типа сети каналов в Таиланде и выявило чрезвычайно низкий уровень O.viverrini s.l. распространенность.

    Резюме

    La douve du foie Opisthorchis viverrini s.l. вызвать проблему непрекращающегося публичного обращения в Тайланде. L’infection des Bithynia par O. viverrini s.l. dans le réseau de canaux (RC) dans la métropolitaine de Bangkok (RMB) n’a jamais été évaluée. Cette étude visait à étudier la présence de B. siamensis siamensis et la prevalence de l’infection par O. viverrini s.л. chez ce mollusque dans le RC de la RMB, avec aussi une étude morphologique et des analysis moléculaires sur les cercaires d ’ O. viverrini s.l. Моллюски, прошедшие предварительные испытания в период с января по июль 2019 г. Сертификаты, полученные при помощи методов морфологии и молочных желез, включают в себя ПЦР с использованием специальных методов и методов анализа и филогенетического анализа последовательностей ITS2. Bithynia siamensis siamensis a été Trouvé dans presque toutes les localités d’échantillonnage, avec des Quantités et des fréquences de detection différentes. Всего на 7473 экземплярах B. s. siamensis , дезинфекция пар. O. viverrini s.l. обнаружены в северных регионах Бангкока, Муанг Накхон Патом, Кратум Баен и Лам Лук Ка с глобальной сохранностью 0,05% (4/7473) и сохранностью соответственно 0,22% (1/455), 0,21% (1/469), 0,40% (1/253) и 0,16% (1/614) в соответствии с местными положительными моллюсками.Это исследование является первым заражением Digènes dans l’habitat de type réseau de canaux en Thaïlande et al.

    Ключевые слова: Распространенность / Церкариозная инфекция / Печеночная двуустка / Дигенея личинка / Промежуточный хозяин / Среда обитания в проточной воде

    © P. Rachprakhon & W. Purivirojkul, опубликовано EDP Sciences, 2021

    Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (https: // creativecommons.org / licenses / by / 4.0), что разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

    Введение

    Зоонозный дигенеан, переносимый рыбой, Opisthorchis viverrini sensu lato (s.l.), вызвал значительную и устойчивую проблему для общественного здравоохранения в бассейне Нижнего Меконга [24]. В Таиланде описторхоз наиболее распространен в северо-восточном регионе, снижаясь соответственно в северном, центральном и южном регионах [55]. Opisthorchis viverrini s.l. использует три таксона улиток: Bithynia funiculata , B. siamensis goniomphalos и B. s. siamensis , как первый промежуточный хозяин, и центральный Таиланд имеет широкое распространение B. s. siamensis [23]. Церкариальная стадия и улитки Bithynia играют ключевую роль в распространении O. viverrini s.l. в экосистемах и ограничивая границы эпидемии описторхоза [18, 26]. Более того, данные о распространенности O.viverrini s.l. Инфекция у улиток отражает передачу O. viverrini s.l. от окончательных хозяев в окружающую среду [7, 32], и полезны для прогнозирования эпидемиологической ситуации инфекций у рыб и людей для разработки профилактических приложений на будущее [1, 55].

    Хотя Бангкокский столичный регион (BMR) является частью центрального Таиланда, он обладает двумя уникальными характеристиками, которые могут иметь эпидемиологическое значение. Во-первых, BMR является наиболее густонаселенным районом Таиланда и имеет наибольшее количество рабочих-мигрантов из других регионов и соседних стран [5].Во-вторых, система сети каналов (CNS) в BMR, которая является наиболее полной и плотной CNS в Таиланде [33, 50], возможно, является идеальной средой для передачи и распространения дигенеев на протяжении их жизненного цикла, поскольку: (1) она может имеют высокую зараженность гельминтами [61]; (2) это никогда не пересыхающая водная среда обитания [44, 50], в которой численность и разнообразие улиток и рыб-хозяев могут быть высокими круглый год [34]; (3) он имеет отличные маршруты распространения водных животных [15]; и (4) это общественный источник воды, где люди могут ловить хозяев рыб.Это может отражать эпидемиологическое значение ЦНС. Тем не менее, BMR – это плохо и лишь очень частично изученная область, касающаяся дигенеевой инфекции у пресноводных улиток [1, 59]. Кроме того, O. viverrini s.l. заражение любыми таксонами Bithynia , в том числе B. s. siamensis , и их появление в любой из ЦНС Таиланда на сегодняшний день не исследовано.

    Для оценки эпидемиологической ситуации O. viverrini s.l. инфекция в B.с. siamensis в ЦНС BMR, встречаемость B. s. siamensis и распространенность O. viverrini s.l. инфекции у этой улитки. Кроме того, были выполнены морфологические и молекулярные анализы для идентификации и описания O. viverrini s.l. cercariae, полученные из этого неисследованного O. viverrini особого типа местообитания в районе, не связанном с рекой Меконг и ее притоками.

    Материалы и методы

    Заявление об этике

    Этика использования животных для выращивания собранных особей улиток и исследование O.viverrini s.l. инфекции в этом исследовании были одобрены этическим комитетом Университета Касетсарт (номер разрешения ACKU61-SCI-034).

    Коллекция образцов улиток

    Тридцать пять населенных пунктов CNS в шести провинциях BMR были выбраны для отбора проб улиток; на каждую границу района / области приходилось одно место отбора проб (рис. 1 и таблица 1). Географические координаты в системе координат WGS 1984 для каждой точки отбора проб были отмечены глобальной системой позиционирования. Случайные выборки B.с. siamensis из каналов проводились с использованием одного коллектора и 20 минут в каждом месте путем ручного сбора и черпания на основе подсчетов на единицу времени метода [38] каждые три месяца с января 2018 года по июль 2019 года. Собранные улитки были идентифицированы с использованием морфологические критерии раковины по таксономическим определителям [8].

    Рисунок 1 Карта

    исследуемой территории в столичном регионе Бангкока, Таиланд. Небесно-голубое пятно, желтое пятно и красное пятно представляют: (1) место отбора проб без распределения улиток Bithynia siamensis siamensis , (2) место отбора проб с B.с. siamensis , но не обнаружено Opisthorchis viverrini s.l., и (3) местонахождение с B. s. siamensis и обнаружено O. viverrini s.l. соответственно.

    Таблица 1

    номеров доступа GenBank данных последовательностей ITS2, используемых для филогенетического анализа.

    Исследования

    O. viverrini s.l. инфекция

    Модель B. s. siamensis обследовано экз. на O.viverrini s.l. инфекции путем церкариального отслоения и расслоения. Каждую особь улитки помещали в небольшую прозрачную пластиковую чашку, содержащую дехлорированную воду, а затем подвергали воздействию света с интенсивностью около 3000 лк от дневных светодиодных ламп (850 лм) с 6:00 до 14:00 в час. комнатная температура (25 ± 2 ° С). Впоследствии каждую чашку исследовали под препаровальным микроскопом. Живые церкарии фиксировали 10% нейтральным забуференным формалином (NBF), а некоторые окрашивали 0.5% нейтральный красный краситель (NR). Затем они были исследованы и сфотографированы с помощью яркого поля Olympus BX51, установленного на цифровой камере Olympus DP70 (Olympus Corporation, Япония). После этого улиток препарировали, а затем исследовали так же, как описанную выше процедуру линьки.

    Морфологическая идентификация и описательное исследование

    O. viverrini s.l. церкарии

    Микрофотографии образцов зрелой церкарии были использованы для идентификации O.viverrini s.l по морфологическим описаниям [23, 45, 63]. Измерения 17 морфологических характеристик (Таблица 4 и Рис. 4C) 20 сфотографированных O. viverrini s.l. церкарии (от всех четырех инфицированных улиток), фиксированные 10% NBF, были выполнены в ImageJ версии 1.50e. Метрические данные в микрометрах (мкм) для всех измеренных характеристик в тексте и таблице 4 представлены как среднее арифметическое ± стандартное отклонение, за которым в скобках указаны значения диапазона (минимум – максимум).Многоплоскостные микрофотографии O. viverrini s.l. церкарии использовались при рисовании и маркировке для отображения их характерных деталей (рис. 4).

    Препарат ДНК

    Приблизительно 1200 особей морфологически аутентифицированного O. viverrini s.l. церкарии собирали отдельно от каждого инфицированного – B. s. siamensis (общее количество инфицированных улиток было 4), промывали фосфатно-солевым буфером и сверхчистой водой и хранили в абсолютном этаноле в пределах каждой 1.Микроцентрифужная пробирка на 5 мл. Для использования в качестве компаратора при молекулярном обнаружении прибор O. viverrini s.l. взрослые особи, консервированные в 70% этаноле, были получены с медицинского факультета Университета Кхон Каен, Таиланд. Геномную ДНК церкариальных и взрослых образцов экстрагировали отдельно с использованием набора для экстракции ДНК ткани GF-1 (Vivantis, Малайзия) в соответствии с протоколом производителя.

    Молекулярное обнаружение с использованием видоспецифичных праймеров

    ПЦР-амплификацию специфической области 330 п.н. с использованием зонда pOV-A6 проводили четыре раза для 4 образцов ДНК O.viverrini s.l. cercariae и образец ДНК O. viverrini s.l. взрослых с праймерами OV-6F и OV-6R от Wongratanacheewin et al. [62] в общем реакционном объеме 50 мкл, содержащем 1 × буфер для ПЦР (ViBuffer A, Vivantis, Malaysia), 2 мМ MgCl 2 , 0,7 мкМ каждого праймера, 1 мМ смесь dNTP, 1 мкл ДНК-полимеразы Taq . (5 ед / мкл) и 10 мкл ДНК-матрицы в термоциклере (Mastercycler Pro, Eppendorf, Германия), соблюдая рабочие условия Prasopdee et al.[42]. Гель-электрофорез использовали для исследования полосы 330 п.н. продуктов ПЦР в 2% агарозном геле. ПЦР-продукты O. viverrini s.l. взрослые особи и сверхчистая вода использовались в качестве положительного и отрицательного контроля (рис. 2).

    Рисунок 2 Агарозный гель

    (2%), демонстрирующий специфические полосы длиной 330 п.н., достигнутые с помощью праймеров pOV-A6 для Opisthorchis viverrini s.l. Дорожка M: ДНК-маркеры размером 100 п.н., полоса P: O. viverrini, взрослый (положительный контроль), полоса C: O.viverrini s.l. церкария из улиток Bithynia siamensis siamensis и полоса N: сверхчистая вода (отрицательный контроль).

    ITS2 усиление

    Один из 4 образцов ДНК церкарий, которые все были проверены как O. viverrini s.l. вид с молекулярным обнаружением, был использован в качестве представителя для дальнейшего анализа филогенетическим анализом. Область ITS2 амплифицировали с помощью ПЦР с праймерами ITS3 и ITS4 от Barber et al.[3] в общем реакционном объеме 50 мкл, содержащем 1 × буфер для ПЦР (ViBuffer A, Vivantis, Malaysia), 2 мМ MgCl 2 , 0,4 мкМ каждого праймера, 0,16 мМ смесь dNTP, 0,4 мкл ДНК-полимеразы Taq (5 ед / мкл) и 2 мкл ДНК-матрицы в термоциклере (Mastercycler Pro, Eppendorf, Германия) при следующих рабочих условиях: начальная денатурация при 94 ° C в течение 5 мин, затем 35 циклов денатурации при 94 ° C в течение 1 мин каждый, отжиг при 56 ° C в течение 1 мин и удлинение при 72 ° C в течение 30 с, затем последующее окончательное удлинение при 72 ° C в течение 10 мин.Продукты ПЦР проверяли с помощью гель-электрофореза так же, как и молекулярное обнаружение. Амплифицированный образец ДНК был отправлен в Macrogen (Корея) для очистки, после чего было выполнено секвенирование с использованием праймеров ITS3 и ITS4.

    Молекулярная идентификация и филогенетический анализ

    Прямые и обратные хроматограммы ДНК и последовательности были обработаны в BioEdit версии 7.2.5 для получения согласованной последовательности OVCLLK18 (таблица 1), а затем отправлены в базу данных GenBank. Набор данных из 28 сравнительных последовательностей ITS2 был получен из GenBank (Таблица 1).Все последовательности были выровнены с помощью ClustalW и улучшены путем обрезки в BioEdit версии 7.2.5. Модель GTR + G была наиболее подходящей моделью нуклеотидного замещения для набора данных последовательности путем оценки с помощью MrModeltest версии 2.4 через PAUP * версии 4.0a с использованием информационного критерия Акаике. Для филогенетического анализа с использованием байесовского вывода (BI) Haplorchis taichui из семейства Heterophyidae (номер доступа KX815126.1 в таблице 1) был определен как внешняя группа. BI-анализ был выполнен в MrBayes версии 3.2.7a с использованием четырех цепочек алгоритма Монте-Карло цепей Маркова для 15 миллионов поколений с частотой выборки 100. Первые 25% выборочных деревьев были отброшены, а оставшиеся образцы деревьев были использованы для построения правила большинства на 50%. дерево консенсуса и вычислить байесовские апостериорные вероятности (BPP).

    Результатов

    Появления

    Б. с. siamensis улитки

    Всего 7473 Б. с. siamensis были обнаружены практически во всех местах отбора проб, кроме Южного Бангкока, Центрального Бангкока, Пак Крет, Пхра Самут Чеди и Муанг Самут Пракан (рис.1 и таблица 2). В каждом населенном пункте были разные частоты обнаружения и различное количество Б. с. siamensis (таблица 2). Модель B. s. siamensis были обнаружены во всех населенных пунктах только провинции Накхонпатхом, вместе с самой высокой частотой обнаружения B. s. siamensis .

    Таблица 2

    Встречаемость Bithynia siamensis siamensis и Opisthorchis viverrini s.l. и распространенность O. viverrini s.l. инфекция в каждом месте отбора проб в столичном регионе Бангкока, Таиланд.

    Встречаемость и распространенность

    O. viverrini s.l.

    Opisthorchis viverrini s.l. cercariae обнаружены у четырех особей B. s. siamensis , только с использованием метода церкариального отслаивания (рис. 1 и таблица 2). Общая распространенность O. viverrini s.l. Инфекции, обнаруженные в районах Северный Бангкок, Муанг Накхонпатхом, Кратум Баен и Лам Лук Ка, составили 0,05% (4/7473). Только одна улитка, инфицированная O. viverrini s.l., была обнаружена один раз в каждом зараженном месте, что представляет собой распространенность на момент заражения 1.16% (1/86), 2,17% (1/46), 4,55% (1/22) и 0,85% (1/118), соответственно, и общая распространенность 0,22% (1/455), 0,21% (1/469), 0,40% (1/253) и 0,16% (1/614) в каждой зараженной местности соответственно (таблица 2). Среднее O. viverrini s.l. распространенность составила 0,22% (0,16–0,40%). Распространенность других типов церкария показана в Таблице 3.

    Таблица 3

    Распространенность других церкариальных типов, обнаруженных в этом исследовании у улиток Bithynia siamensis siamensis .

    Морфологическое описание

    O.viverrini s.l. церкарии

    Взрослая вольноплавающая O. viverrini s.l. cercariae представляли собой изогнутую форму табачной трубки, вогнутую на вентральной стороне и выгнутую наружу на дорсальной стороне во время покоя церкарии и на мгновение зависшей в воде (рис. 3B). Его основные конструкции состояли из тела и хвоста (рис. 3 и 4). Тело имело плохо различимые сенсорные волоски на поверхности, было яйцевидным и с заметными коричневатыми зернистыми пигментами, которые распределялись по телу с двух сторон и симметрично.Очевидная яйцевидная мускулистая оральная присоска, расположенная около середины переднего конца тела, имела три ряда коренных зубчатых структур, которые были весьма заметны при сокращении оральной присоски. Вентральная присоска, расположенная перед выделительным пузырем, была небольшой и почти незаметной. Каждая из 10 желез проникновения представляла собой слегка заметную полупрозрачную мешковидную структуру и имела один проток. Эти протоки, расположенные на средней линии тела, выходили из желез, проходили через центральную щель между одной парой ярких темно-коричневых пигментированных глазных пятен, проходили через менее заметную сферическую глотку, продолжались к ротовой присоске и, наконец, открывается к отверстию ротовой присоски.Было обнаружено множество цистогенных желез небольшой, относительно плоской круглой каплевидной формы, которые распространялись в дорсо-вентральном и передне-заднем направлениях с обеих сторон тела, что было хорошо видно для окрашенных образцов.

    Рисунок 3

    (A) живая улитка Bithynia siamensis siamensis и (B) неокрашенная живая свободно плавающая O. viverrini s.l. церкарии в изогнутой табачной трубке в периоды покоя и кратковременного подвешивания.

    Рисунок 4

    Морфология Opisthorchis viverrini s.l. церкарии. (A) Микрофотография неокрашенных церкарий, зафиксированных в 10% NBF, (B) чертежное изображение, (C) измеренные морфологические признаки. Сокращения в (A) и (B): os = оральная присоска, pa = глотка, es = глазное пятно, pg = проникающая железа, ivs = незаметная вентральная присоска, eb = выделительный пузырь, sh = сенсорные волосы, tst = поперечно-полосатая оболочка , ta = хвост, df = спинно-вентральная плавниковая складка.Определение сокращений в (C) показано в первом столбце таблицы 4. Общая длина = длина фиолетовой пунктирной стрелки + TL + длина оранжевой стрелки (в позиции, следующей за концом хвоста).

    Экскреторный пузырь имел толстую стенку, особенно в заднем положении, большой и хорошо различимый. Его форма была разной в зависимости от состояния особи: шаровидная у свободно плавающих особей, особенно у церкарий в форме изогнутой бильярдной трубки; перевернутый треугольник с закругленными углами на живых окрашенных и фиксированных неокрашенных образцах; трапециевидные с закругленными углами в фиксированных неокрашенных образцах.В переднем положении, близко к стенке экскреторного пузыря, зачаток половых органов представлял собой почти уплощенную полупрозрачную шишку треугольной формы с основанием, имеющее основание и высоту, равную 4/5 и 1/5 длины мочевого пузыря. Генитальный зачаток можно было легко увидеть на незакрепленных окрашенных и фиксированных неокрашенных образцах, если он не был ни скрыт, ни сдвинут вниз к дорсальному участку экскреторного пузыря железистыми мешочками для проникновения, когда передняя часть церкариального тела сжимается.

    Начало хвоста было связано с задним концом выделительного пузыря внутри тела.Хвост представлял собой длинную полупрозрачную цилиндрическую структуру с окружностью, которая постепенно уменьшалась от самой широкой передней части хвоста до самой маленькой части на заднем конце. Хвост был значительно длиннее тела, в среднем в 2,5 раза больше (таблица 4). Крошечные прозрачные ядра, похожие на пилюли, появились внутри хвоста, в основном на центральной оси хвоста и редко распространялись от передней части к задней части хвоста. Эти ядра были легко заметны на окрашенных образцах.Полупрозрачный, поперечно-исчерченный, расширенный тегумент охватывает переднюю часть хвоста в среднем на 1/3 длины хвоста. Дорсовентральная плавниковая складка была похожа на тонкую полупрозрачную мембрану, которая материализуется с двух сторон вдоль краев хвоста. Расположение плавниковой складки немного перекрывается с задним концом тегумента передней части хвоста, пока она не проходит через задний конец хвоста.

    Таблица 4

    Сравнение измеренных метрических данных (в мкм) Opisthorchis viverrini s.л. cercariae из разных таксонов улиток-хозяев в разных средах обитания в разных районах между настоящим исследованием и предыдущими исследованиями.

    При сравнении интенсивности окраски NR на живом O. viverrini s.l. cercariae, большинство структур внутри тела были успешно окрашены, но различались по интенсивности цвета, что помогло различить эти структуры, особенно цистогенные железы. Напротив, хвост и структуры внутри и на нем, особенно спинно-вентральная плавниковая складка, были окрашены безуспешно, за исключением несколько удачно окрашенных ядер хвоста.Данные 17 количественных морфологических характеристик O. viverrini s.l. cercariae были перечислены и сравнены с предыдущими исследованиями в таблице 4.

    Молекулярные анализы

    Морфологически верифицированный O. viverrini s.l. cercariae от всех четырех инфицированных улиток были O. viverrini s.l. видов на основании наличия полосы ДНК из продуктов ПЦР всех четырех церкариальных источников в положении, параллельном специфической полосе ДНК pOV-A6 длиной 330 п.н. из продуктов ПЦР O.viverrini взрослых (рис. 4, на котором показан пример одноразового результата гель-электрофореза в общей сложности четырех тестов). Кроме того, филогенетический анализ дигенеев в соответствии с 394 п.н. (после нескольких этапов выравнивания и улучшения путем обрезки) области ITS2 репрезентативной выборки из всего четырех образцов был проведен с помощью метода BI для подтверждения вида среди современные и современные O. viverrini sl и другие описторхиса видов.Остальные таксоны описторхов и гетерофидов рассматривались как внешние группы, наряду с изучением их взаимоотношений. Байесовская филограмма (рис. 5) установила монофилетическую группу нынешних O. viverrini (OVCLLK18) и современных O. viverrini s.l. (см. Таблицу 1 и Рис. 5) с максимальным значением поддержки (BPP = 1), что филогенетически подтверждает, что OVCLLK18 принадлежит к O. viverrini s.l. разновидность.

    Рис. 5

    Филогенетическое дерево на основе байесовского анализа последовательностей ITS2.Выделенный жирным шрифтом таксон (OVCLLK18) представляет Opisthorchis viverrini s.l. cercariae в этом исследовании. Числа в каждом узле отображают значение апостериорной байесовской вероятности. Длина разветвления указывается шкалой, измеряющей количество нуклеотидных замен на сайт.

    Обсуждение

    Вифиния с. siamensis не были обнаружены в пяти участках BMR, хотя BMR CNS предоставляет множество мест обитания и маршрутов распространения для водных животных.Городская среда южного и центрального Бангкока может не соответствовать образу жизни г. до н.э. siamensis [56]. Согласно нашим наблюдениям, сильные волны, создаваемые частыми высокоскоростными моторными лодками в Пак Крет, могут значительно нарушить рост, воспроизводство и жизненный цикл B. s. siamensis [19]. В Пхра Самут Чеди и Муанг Самут Пракан, г. до н.э. siamensis может оказаться не в состоянии выдержать воду с высокой соленостью, вызванную вторжением морской воды из Сиамского залива [51].Они показывают значительно низкий риск заражения O. viverrini s.l. заражения рыб-хозяев, а затем и людей в этих четырех местах. Интересно, что в четырех обнаруженных участках O. viverrini s.l. высокая частота встреч с улитками, что может указывать на риск встречи между хозяином улитки и O. viverrini s.l. яйца [48].

    Интересно, что распространенность O. viverrini s.l. инфекции в Bithynia улиток из ЦНС в BMR этого исследования были ниже, чем в предыдущих исследованиях.1,6% O. viverrini s.l. распространенность в Б. с. siamensis из стоячих водоемов в Бангна, Бангкок, было зарегистрировано четыре десятилетия назад [59]. Однако большинство районов Бангна превратились из сельскохозяйственных земель в урбанизированные [10], что может не подходить для B. s. siamensis . Диапазоны средней, общей и общей распространенности O. viverrini s.l. инфекции Bithynia spp. из различных местообитаний стоячей воды на северо-востоке Таиланда, Камбодже, Лаосской Народно-Демократической Республике и Южном Вьетнаме – 1.39–3,04%, 0,0–6,8% и 0,11–1,73% соответственно [7, 9, 17, 27, 28, 30, 32, 35, 59]. Что касается популяций, проживающих в этих эндемичных по описторхозу районах, их образ жизни может быть связан с более высокими причинами распространенности, чем в настоящем исследовании. Сообщалось о негигиеничной дефекации и употреблении недоваренной рыбы в некоторых популяциях, наряду с высоким содержанием O. viverrini s.l. распространенность в этих ранее изученных областях [16, 32, 40, 60]. Интересно, что, по-видимому, наблюдается постоянство среди относительно высоких значений O.viverrini s.l. инфекции в Вифинии улиток, карповых рыб и людей в северном и северо-восточном Таиланде [27, 36, 41, 55], Камбодже [7, 12, 32], Лаосской Народно-Демократической Республике [11, 27, 60] и Вьетнаме [16 , 17]. Более того, от высокого до очень высокого O. viverrini s.l. распространенность (30,92–53,1%) была зарегистрирована у кошек в этих регионах [2, 60]. Эти факторы, возможно, приводят к постоянной передаче и накоплению O. viverrini s.l. в экосистемах, что может быть отражено высоким уровнем инфицированности улиток Bithynia , улиток.Аналогичным образом, в BMR антисанитарное выделение кошек и собак почти не сообщалось [21, 52], наряду с более низкими показателями инфицирования (1,6%) [21] и очень низкой распространенностью среди людей, которая неуклонно снижается [55].

    Другая причина очень низкого уровня O. viverrini s.l. Инфекция в этом исследовании может быть связана с уникальной характеристикой внутренних водных экосистем, обладающих ЦНС в BMR. Самый высокий O. viverrini s.l. распространенности в Б. с. goniomphalos , собранные в местах обитания со стоячей водой, были зарегистрированы в прохладно-сухой сезон на северо-востоке Таиланда [9, 28, 35], что может быть связано с пониженным содержанием воды, что привело к высокой плотности улиток [54] и O.viverrini s.l. яйца одновременно [35]. Напротив, подобная ситуация вряд ли может возникнуть в ЦНС в BMR, поскольку она постоянно поддерживается огромными водными массами из верхних и средних систем реки Чао Прайя [33, 50]. Хотя самая высокая распространенность среди улиток была зарегистрирована в сезон дождей на северо-востоке Таиланда [13], большее количество воды, поступающей в ЦНС [33, 50] из-за сильных дождей в BMR [31], может привести к разбавлению O. viverrini сл яйца и церкарии, что снижает вероятность появления O.viverrini s.l. проглатывание икры и успешное обнаружение церкарий. Более того, водные потоки в ЦНС могут подтолкнуть O. viverrini s.l. яйца и церкарии от B. s. siamensis [37, 58] и рыб-хозяев [6, 64], особенно в сезон дождей, когда скорость течения воды увеличивается [22, 43]. Более того, спонтанные водные течения могут затруднить поиск хозяина [20] и сократить продолжительность жизни O. viverrini s.l. cercariae [6], и может убить их на высокой скорости из-за высокой сдвиговой турбулентности [64].Эти факторы могут нарушить жизненный цикл и накопление O. viverrini s.l. в экосистемах, что может в конечном итоге привести к снижению частоты встреч и заражения O. viverrini s.l. в г. siamensis в ЦНС BMR [6, 22, 31, 33, 43, 58, 64].

    В Таиланде в BMR самая высокая доля (35,79%) трудящихся-мигрантов [5]. Высокая O. viverrini s.l. о распространенности сообщалось среди рабочих, которые мигрировали из северо-восточного Таиланда [53], Лаосской Народно-Демократической Республики и Камбоджи [25].Что касается рабочих-мигрантов, то, возможно, есть мигранты, заражающие O. viverrini s.l. в BMR. Однако модель O. viverrini s.l. заболеваемость в Б. с. siamensis в ЦНС в BMR может оставаться очень низким из-за разбавления [37, 58] и эффектов удаления [22, 43] из вод канала на O. viverrini s.l. яйца. Точно так же характер работ в основных секторах экономики, таких как строительный сектор [5], которые часто перемещаются, может вызвать прерывистую передачу O.viverrini s.l., приводя к очень низкой частоте инфицирования у B. s. siamensis в BMR.

    Распространенность O. viverrini s.l. cercariae относительно ниже, чем Xiphidiocercariae и Cercariaeum cercariae, возможно, потому что у этих двух промежуточных и окончательных хозяев есть одна и та же экосистема [39, 45, 49]. Напротив, на основании наших наблюдений небольшое количество появившихся цистофорных церкарий у улиток (вероятно, из-за слишком большого размера паразита: ~ 2500 мкм) может снизить заражение хищных хозяев, в отличие от O.viverrini s.l., параплевролофоцеркозный, пушистый и моностомный церкариальный типы, промежуточные и окончательные хозяева которых существуют в разных экосистемах [23, 39, 45].

    Идентификация образцов в этом исследовании на основе морфологического описания [23, 63] и обнаружение с использованием видоспецифичных праймеров [62], которые использовались в предыдущих исследованиях [7, 13, 28–30, 35, 42, 57] , а филогенетический анализ с использованием доступной последовательности ДНК (т.е. области ITS2) [7, 30, 57] предоставил согласованные виды.Интересно, что в пределах O. viverrini s.l. clade, филогенетическое родство O. viverrini s.l. в Кхон Каене на северо-востоке Таиланда находится ближе к O. viverrini s.l. в Лаосской Народно-Демократической Республике и Вьетнаме, чем O. viverrini s.l. в BMR, несмотря на то, что BMR и Кхон Каен находятся в одной стране.

    Модель O. viverrini s.l. cercariae из этого исследования оказались неотличимыми по качественным морфологическим характеристикам O.viverrini s.l. cercariae из B. s. гониомфалос [63]. Однако количественные морфологические характеристики O. viverrini s.l. cercariae из этого исследования имеют большинство структур, которые были немного длиннее и шире, чем в большинстве предыдущих исследований [36, 47, 63], и больше, чем те, которые описаны Boonmekam et al. [7] примерно 2–4 раза. Последнее различие может быть связано с тем, что O. viverrini s.l. церкарии – незрелая стадия [14]. Первые вариации, возможно, отражают адаптацию паразитов в разных типах среды обитания и отношения к генетической изменчивости [4, 46].Данные о дополнительно измеренных количественных морфологических характеристиках и качественных морфологических характеристиках в этом исследовании могут облегчить видовую идентификацию O. viverrini s.l. церкарии.

    В заключение, это исследование является первым, в котором сообщается о O. viverrini s.l. инфекции у любого хозяина улитки в неисследованной среде обитания для любых дигенеевых инфекций в Таиланде, например, сетевая система проточных водоемов (то есть ЦНС). Кроме того, он первым представил всесторонний обзор BMR и выявил очень низкий уровень O.viverrini s.l. распространенность. В исследовании также представлены проверенные на молекулярном уровне качественные и количественные морфологические описания и методические указания по метрическим измерениям для идентификации O. viverrini s.l. церкарии. Данные по окружающей среде, которые могут коррелировать с O. viverrini s.l. инфекции, необходимо дополнительно провести всестороннюю оценку для применения в разработке приложений для профилактики описторхоза в будущем.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов, связанного с этой статьей.

    Благодарности

    Это исследование было поддержано программой стипендий для выпускников аспирантуры Университета Касетсарт, Научно-исследовательского института Университета Касетсарт (KURDI), Центра передового опыта в области биоразнообразия (BDC-PG2-161004) и Департамента зоологии факультета естественных наук. Kasetsart University. Авторы благодарят г-жу Монтишу Чайясенг за ее помощь в молекулярном анализе и Asst. Проф. Д-р Апипорн Думхамроп Суваннатрай и проф.Доктору Тидаруту Бунмарсу из отделения паразитологии медицинского факультета Кхон Каенского университета за помощь в координации запроса образцов O. viverrini s.l. взрослых особей и за любезно предоставленные взрослые особи O. viverrini s.l. соответственно.

    Список литературы

    1. Anucherngchai S, Tejangkura T., Chontananarth T. 2016. Эпидемиологическая ситуация и молекулярная идентификация церкариальной стадии у пресноводных улиток в бассейне Chao-Phraya, Центральный Таиланд.Азиатско-Тихоокеанский журнал тропической биомедицины, 6 (6), 539–545. [Google Scholar]
    2. Aunpromma S, Kanjampa P, Papirom P, Tangkawattana S, Tangkawattana P, Tesana S, Boonmars T, Suwannatrai A, Uopsai S., Sukon P, Sripa B. 2016. Распространенность и факторы риска заражения Opisthorchis viverrini среди кошек и собак в шести районах вокруг плотины Уболратана, эндемичного района по описторхозу человека на северо-востоке Таиланда.Журнал тропической медицины и общественного здравоохранения Юго-Восточной Азии, 47, 1153–1159. [Google Scholar]
    3. Парикмахер К.Е., Мкоджи Г.М., Локер Е.С. 2000. ПЦР-ПДРФ-анализ области ITS2 для идентификации Schistosoma haematobium и S. bovis из Кении.Американский журнал тропической медицины и гигиены, 62 (4), 434–440. [CrossRef] [Google Scholar]
    4. Барнетт LJ, Миллер TL.2018. Фенотипическая пластичность шести необычных церкарий у нассариидных брюхоногих моллюсков и их связь с Acanthocolpidae и Brachycladiidae (Digenea). Parasitology International, 67 (2), 225–232. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    5. Бенджамин Х.2019. Отчет о миграции в Таиланде за 2019 год, Бенджамин Х., редактор. Тематическая рабочая группа ООН по миграции в Таиланде: Бангкок, Таиланд. [Google Scholar]
    6. Боденштайнер Л. Р., Шихан Р. Дж., Уиллс П. С., Бранденбург А. М., Льюис В. М..2000. Проточная вода: эффективное лечение ихтиофтириоза. Журнал здоровья водных животных, 12 (3), 209–219. [Google Scholar]
    7. Бунмекам Д., Намчоте С., Мацуда Х., Кириноки М., Миямото К., Синуон М., Крайлас Д. 2017.Морфологическая и молекулярная идентификация печеночного двуустки Opisthorchis viverrini в первом промежуточном хозяине улиток Bithynia и его распространенность в провинции Кампонгтям, Камбоджа. Parasitology International, 66 (3), 319–323. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    8. Брандт RAM.1974. Неморские водные моллюски Таиланда. Archiv für Molluskenkunde, 105, 1–423. [Google Scholar]
    9. Брокельман В. Ю., Упатам Е. С., Виянант В., Ардсунгноен С., Чантанават Р. 1986. Полевые исследования передачи печеночного двуустки человека, Opisthorchis viverrini, на северо-востоке Таиланда: изменения популяции промежуточного хозяина улитки.Международный журнал паразитологии, 16 (5), 545–552. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    10. Университет Карнеги-Меллона СОЗДАТЬ лабораторию.2019. Google Earth Engine – замедленная съемка Google Планета Земля. [процитировано; Доступно по адресу: https://earthengine.google.com/timelapse/. [Google Scholar]
    11. Чай Дж. Й., Ли С. Х., Рим Х. Дж, Сон В. М., Фоммасак Б. 2019. Состояние заражения метацеркариями зоонозных трематод у рыб из Лаосской НДР.Acta Tropica, 199, 105100. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    12. Чай Дж-И, Сон В-М, На Би К, Йонг Т-С, Эом К.С., Юн Ч., Хоанг Э. Х, Чжон Х. Г., Сохит Д.2014. Зоонозные метацеркарии трематод у рыб из Пномпеня и Пурсата, Камбоджа. Корейский журнал паразитологии, 52 (1), 35–40. [CrossRef] [Google Scholar]
    13. Чайясенг М., Печди П., Серевонг С., Суваннатрай А., Лаха Т., Тесана С.2019. Влияние оледенения на выживаемость улиток Bithynia siamensis goniomphalos и заражение Opisthorchis viverrini на орошаемых площадях рисовых полей во влажный и сухой сезон. Acta Tropica, 192, 55–60. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    14. Коэльо – ЛХЛ, Гимарайнш – депутат, Лима – WS.2008. Влияние размера раковины Lymnaea columella на инфекционность и развитие Fasciola hepatica. Журнал гельминтологии, 82 (1), 77–80. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    15. Дэниэлс Р.А.2001. Непроверенные предположения: роль каналов в расселении морской миноги, алевки и других рыб в восточной части Соединенных Штатов. Экологическая биология рыб, 60 (4), 309–329. [Google Scholar]
    16. Дао TTH, Bui TV, Abatih EN, Gabriël S, Nguyen TTG, Huynh QH, Nguyen CV, Дорни П.2016. Инфекции, вызванные Opisthorchis viverrini, и связанные с ними факторы риска в низинной части провинции Биньдинь, Центральный Вьетнам. Acta Tropica, 157, 151–157. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    17. Дао HTT, Dermauw V, Gabriël S, Suwannatrai A, Tesana S, Nguyen GTT, Dorny P.2017. Инфекция Opisthorchis viverrini промежуточных хозяев улиток и рыб в Центральном Вьетнаме. Acta Tropica, 170, 120–125. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    18. Эш Г.В., Баргер М.А., Феллис К.Дж.2002. Передача дигенетических трематод: стиль, элегантность, сложность. Интегративная и сравнительная биология, 42 (2), 304–312. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    19. Габель Ф., Лоренц С., Штолль С.2017. Влияние судовых волн на водные экосистемы. Наука об окружающей среде в целом, 601–602, 926–939. [CrossRef] [Google Scholar]
    20. Хаас В., Гранцер М., Брокельман С.Р.1990. Opisthorchis viverrini: обнаружение и распознавание рыбы-хозяина по церкариям. Экспериментальная паразитология, 71 (4), 422–431. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    21. Хинц Э.1980. Кишечные гельминты у бангкокских бродячих собак и их роль в общественном здравоохранении. Zentralblatt für Bakteriologie, Mikrobiologie und Hygiene. 1. Abt. Оригинал B, Гигиена, 171, 79–85. [Google Scholar]
    22. Хименес Б. 2007. Удаление яйцеклеток гельминтов из сточных вод для повторного использования сельского хозяйства и аквакультуры.Наука о воде и технологии, 55, 485–493. [CrossRef] [Google Scholar]
    23. Kaewkes S.2003. Таксономия и биология печеночных двуусток. Acta Tropica, 88 (3), 177–186. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    24. Kaewpitoon N, Kaewpitoon SJ, Pengsaa P, Sripa B.2008. Opisthorchis viverrini: канцерогенный печеночный сосальщик человека. Всемирный журнал гастроэнтерологии, 14 (5), 666–674. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    25. Kaewpitoon SJ, Sangwalee W, Kujapun J, Norkaew J, Wakkhuwatapong P, Chuatanam J, Loyd RA, Pontip K, Ponphimai S, Chavengkun W., Padchasuwan N, Meererksom T, Tongtawee T., Kapimanmas L, Pan2018. Инфекция Opisthorchis viverrini среди рабочих-мигрантов в провинции Накхонратчасима, Таиланд, указывает на постоянную необходимость активного наблюдения. Тропическая биомедицина, 35 (2), 453–463. [PubMed] [Google Scholar]
    26. Khuntikeo N, Titapun A, Loilome W, Yongvanit P, Thinkhamrop B, Chamadol N, Boonmars T., Nethanomsak T., Andrews RH, Petney TN, Sithithaworn P.2018. Современные перспективы борьбы с описторхозом и выявления холангиокарциномы в Юго-Восточной Азии. Границы медицины, 5, 117. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    27. Kiatsopit N, Sithithaworn P, Saijuntha W., Boonmars T., Tesana S, Sithithaworn J, Petney TN, Andrews RH.2012. Исключительно высокая распространенность инфекции Bithynia siamensis goniomphalos, вызываемой Opisthorchis viverrini cercariae, на различных водно-болотных угодьях в Таиланде и Лаосской Народно-Демократической Республике. Американский журнал тропической медицины и гигиены, 86 (3), 464–469. [CrossRef] [Google Scholar]
    28. Kiatsopit N, Sithithaworn P, Kopolrat K, Andrews RH, Petney TN.2014. Сезонные закономерности появления церкарии Opisthorchis viverrini, заражающего Bithynia siamensis goniomphalos из провинции Вьентьян, Лаосская Народно-Демократическая Республика. Паразиты и переносчики, 7 (1), 551. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    29. Ким С.С., Эчаубар П., Суваннатрай А., Кеукес С., Уилкокс Б.А., Срипа Б.2016. Сезонное и пространственное влияние окружающей среды на промежуточных хозяев, численность и распространение Opisthorchis viverrini: понимание динамики передачи и устойчивого контроля. PLoS «Забытые тропические болезни», 10 (11), e0005121. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    30. Лаопром Н., Киацопит Н., Сититаворн П., Кополрат К., Намсанор Дж., Эндрюс Р. Х., Петни Т. Н..2016. Образцы появления черкария Opisthorchis viverrini sensu lato, заражающего Bithynia siamensis goniomphalos, из провинции Сакон-Накхон, Таиланд. Паразитологические исследования, 115 (9), 3313–3321. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    31. Лимджиракан С., Лимсакул А., Срибури Т.2009. Тенденции экстремальных температур и осадков в районе Бангкока, на 21-й конференции по изменчивости и изменению климата. Американское метеорологическое общество: Феникс, Аризона, США. п. 1–8. [Google Scholar]
    32. Миямото К., Кириноки М., Мацуда Х., Хаяси Н., Чигуса Й., Синуон М., Чуор С.М., Китикун В.2014 г. Полевое исследование было сосредоточено на инфекции Opisthorchis viverrini в пяти провинциях Камбоджи. Parasitology International, 63 (2), 366–373. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    33. Молле Ф.2002. Закрытие бассейна реки Чао Прайя в Таиланде: его причины, последствия и политические последствия для ирригации в Азии в переходный период – ответы на предстоящие вызовы, семинар 22–23 апреля 2002 года. Азиатский технологический институт: Бангкок, Таиланд, стр. 1–16. [Google Scholar]
    34. Майерс Б.2018. Воздействие засухи на пресноводные экосистемы в Карибском бассейне США. [цитировано 23 сентября 2020 г.]; Доступно по адресу: https://www.usgs.gov/land-resources/climate-adaptation-science-centers/daught-impacts-freshwater-ecosystems-us-car Caribbean. [Google Scholar]
    35. Намсанор Дж., Сититхаворн П., Кополрат К., Киацопит Н., Питаксакулрат О., Тесана С., Эндрюс Р. Х., Петни Т. Н..2015. Сезонная передача Opisthorchis viverrini sensu lato и лецитодендриидных трематод у улиток Bithynia siamensis goniomphalos на северо-востоке Таиланда. Американский журнал тропической медицины и гигиены, 93 (1), 87–93. [CrossRef] [Google Scholar]
    36. Нгерн-Клун Р., Суконтасон К.Л., Тесана С., Шрипакди Д., Ирвин К.Н., Суконтасон К.2006. Полевые исследования Bithynia funiculata, промежуточного хозяина Opisthorchis viverrini в северном Таиланде. Журнал тропической медицины и общественного здравоохранения Юго-Восточной Азии, 37 (4), 662–672. [Google Scholar]
    37. Нгоен-клан Р., Пиангджай С., Сомванг П., Моупаяк К., Суконтасон К., Суконтасон К.Л., Сэмпсон М., Ирвин К.2010. Новые гельминтозы у улиток и карповых рыб в водно-болотных угодьях для очистки сточных вод в Камбодже. Азиатский журнал воды, окружающей среды и загрязнения, 7, 13–21. [Google Scholar]
    38. Оливье Л., Шнайдерман М. 1956.Метод оценки плотности популяций водных улиток. Экспериментальная паразитология, 5 (2), 109–117. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    39. Olsen OW.1974. Паразиты животных: их жизненные циклы и экология. Нью-Йорк, США: Dover Publications Inc. 564 стр. [Google Scholar]
    40. Pengput A, Schwartz DG. 2020. Факторы риска инфекции Opisthorchis viverrini: систематический обзор.Журнал инфекции и общественного здравоохранения, 13 (9), 1265–1273. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    41. Пинлаор С., Онсуратум С., Бунмарс Т., Пинлаор П., Хонгсричан Н., Чейди А., Хаонон О, Лимвирой В., Тесана С., Каукес С., Сититхаворн П.2013. Распространение и численность метацеркарий Opisthorchis viverrini у карповых рыб в Северо-Восточном Таиланде. Корейский журнал паразитологии, 51 (6), 703–710. [CrossRef] [Google Scholar]
    42. Prasopdee S, Kulsantiwong J, Piratae S, Khampoosa P, Thammasiri C, Suwannatrai A, Laha T, Grams R, Loukas A, Tesana S.2015. Температурная зависимость инфекции Opisthorchis viverrini у улитки-первого промежуточного хозяина, Bithynia siamensis goniomphalos. Acta Tropica, 141, 112–117. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    43. Рейносо Р., Торрес Л.А., Бекарес Э.2008. Эффективность природных систем удаления бактерий и патогенных паразитов из сточных вод. Наука об окружающей среде в целом, 395 (2–3), 80–86. [CrossRef] [Google Scholar]
    44. Саша С., Сувит Т., Ладаван К., Сурапол П.2001. Водное видение Таиланда: тематическое исследование. [цитировано 23 сентября 2020 г.]; Доступно по адресу: http://www.fao.org/3/AB776E/ab776e04.htm. [Google Scholar]
    45. Schell SC. 1970. Как узнать трематод. Дубьюк, Айова: Умм. C. Brown Company.354 с. [Google Scholar]
    46. Шнайдер Р.Ф., Мейер А. 2017. Как пластичность, генетическая ассимиляция и скрытые генетические вариации могут способствовать адаптивным излучениям. Молекулярная экология, 26 (1), 330–350. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    47. Шольц Т., Дитрих О., Гибода М.1992. Изучение морфологии поверхности стадий развития печеночной двуустки Opisthorchis viverrini (Trematoda: Opisthorchiidae). Annales de Parasitologie Humaine et Comparée, 67, 82–90. [CrossRef] [Google Scholar]
    48. Шульце Т.Л., Джордан Р.А., Шульце С.Дж., Миксон Т., Паперо М.2005. Относительная частота встреч и распространенность отдельных инфекций Borrelia, Ehrlichia и Anaplasma у клещей Amblyomma americanum и Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae) из Центрального Нью-Джерси. Журнал медицинской энтомологии, 42 (3), 450–456. [PubMed] [Google Scholar]
    49. Симадзу Т.2016. Дигенеи, паразитирующие у пресноводных рыб (Osteichthyes) Японии VI. Lissorchiidae. Вестник Национального музея природы и науки. Серия А, Зоология, 42 (1), 1–22. [Google Scholar]
    50. Сурис М. 2018. Реки и ручьи Таиланда.Марсель, французский: Институт исследований в области развития (IRD). [Google Scholar]
    51. Стокер Ф., Бабель М.С., Гупта А.Д., Ривас А.А., Эверс М., Казама Ф., Накамура Т. 2013. Гидрогеохимические и изотопные характеристики засоления грунтовых вод в системе водоносных горизонтов Бангкока, Таиланд.Науки об окружающей среде, Земля, 68 (3), 749–763. [Google Scholar]
    52. Sukthana Y, Kaewkungwal J, Jantanavivat C, Lekkla A, Chiabchalard R, Aumarm W. 2003. Антитела Toxoplasma gondii у тайских кошек и их владельцев. Журнал тропической медицины и общественного здравоохранения Юго-Восточной Азии, 34 (4), 733–738.[Google Scholar]
    53. Suwannahitatorn P, Klomjit S, Naaglor T, Taamasri P, Rangsin R, Leelayoova S, Mungthin M. 2013. Последующее исследование инфекции Opisthorchis viverrini после реализации программы контроля в сельской местности в центральном Таиланде.Паразиты-переносчики, 6, 188. [CrossRef] [Google Scholar]
    54. Suwannatrai A, Suwannatrai K, Haruay S, Piratae S, Thammasiri C, Khampoosa P, Kulsantiwong J, Prasopdee S, Tarbsripair P, Suwanwerakamtorn R, Sukchan S, Boonmars T, Malone JB, Kearney MT, Tesana S.2011. Влияние поверхностной соли почвы на плотность и распространение улитки Bithynia siamensis goniomphalos на северо-востоке Таиланда. Геопространственное здоровье, 5 (2), 183–190. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    55. Suwannatrai A, Saichua P, Haswell M.2018. Глава вторая – эпидемиология инфекции Opisthorchis viverrini. Успехи в паразитологии, 101, 41–67. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    56. Tchakonte S, Ajeagah GA, Diomande D, Camara AI, Ngassam P.2014. Разнообразие, динамика и экология пресноводных улиток, связанные с факторами окружающей среды в городских и пригородных ручьях в Дуала-Камерун (Центральная Африка). Водная экология, 48 (4), 379–395. [Google Scholar]
    57. Тхэнкхам У., Блэр Д., Нава Й., Вайкагуль Дж.2012. Семейства Opisthorchiidae и Heterophyidae: отличаются ли они? Parasitology International, 61 (1), 90–93. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    58. Тиев В., Монгтоын Ю., Санет В., Ким И., Таммарат К.2010. Эффективность естественных водно-болотных угодий Пномпеня по очистке сточных вод. Азиатский журнал воды, окружающей среды и загрязнения, 7 (3), 39–48. [Google Scholar]
    59. Упатам Е.С., Сукхапант Н. 1980. Полевые исследования биономики Bithynia siamensis siamensis и передачи Opisthorchis viverrini в Бангне, Бангкок, Таиланд.Журнал тропической медицины и общественного здравоохранения Юго-Восточной Азии, 11 (3), 355–358. [Google Scholar]
    60. Vonghachack Y, Odermatt P, Taisayyavong K, Phounsavath S, Akkhavong K, Sayasone S. 2017. Передача Opisthorchis viverrini, Schistosoma mekongi и гельминтов, передающихся через почву, на островах Меконг, Южный Лаос.Инфекционные болезни бедности, 6 (1), 131. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    61. Westcot DW.1997. Контроль качества сточных вод при производстве орошаемых культур. Глава 2 – Риски для здоровья, связанные с использованием сточных вод, 1997 г. [Доступно по адресу: http://www.fao.org/3/w5367e/w5367e04.htm]. Дата обращения: 23 сентября 2020 г. [Google Scholar]
    62. Wongratanacheewin S, Pumidonming W, Sermswan RW, Maleewong W.2001. Разработка метода на основе ПЦР для обнаружения Opisthorchis viverrini у экспериментально зараженных хомяков. Паразитология, 122 (Pt 2), 175–180. [CrossRef] [PubMed] [Google Scholar]
    63. Wykoff DE, Harinasuta C, Juttijudata P, Winn MM.1965. Opisthorchis viverrini в Таиланде – жизненный цикл и сравнение с O. felineus. Журнал паразитологии, 51, 207–214. [CrossRef] [Google Scholar]
    64. Сюэ З., Гебремайкл М., Ахмад Р., Велду М.Л., Багтзоглу А.С.2011. Влияние температуры и осадков на распространение кишечного шистосомоза в орошаемом регионе Эфиопии: пригодность наборов спутниковых данных. Тропическая медицина и международное здравоохранение, 16 (9), 1104–1111. [CrossRef] [Google Scholar]

    Цитируйте эту статью как : Rachprakhon P & Purivirojkul W.2021. Очень низкая распространенность Opisthorchis viverrini s.l. cercariae в Bithynia siamensis siamensis улиток из системы сети каналов в Бангкокском столичном регионе, Таиланд. Паразит 28 , 2.

    Все таблицы

    Таблица 1

    номеров доступа GenBank данных последовательностей ITS2, используемых для филогенетического анализа.

    Таблица 2

    Встречаемость Bithynia siamensis siamensis и Opisthorchis viverrini s.l. и распространенность O.viverrini s.l. инфекция в каждом месте отбора проб в столичном регионе Бангкока, Таиланд.

    Таблица 3

    Распространенность других церкариальных типов, обнаруженных в этом исследовании у улиток Bithynia siamensis siamensis .

    Таблица 4

    Сравнение измеренных метрических данных (в мкм) Opisthorchis viverrini s.l. cercariae из разных таксонов улиток-хозяев в разных средах обитания в разных районах между настоящим исследованием и предыдущими исследованиями.

    Все рисунки

    Рисунок 1 Карта

    исследуемой территории в столичном регионе Бангкока, Таиланд.Небесно-голубое пятно, желтое пятно и красное пятно представляют: (1) место отбора проб без распределения улиток Bithynia siamensis siamensis , (2) место отбора проб с B. s. siamensis , но не обнаружено Opisthorchis viverrini s.l., и (3) местонахождение с B. s. siamensis и обнаружено O. viverrini s.l. соответственно.

    По тексту
    Рисунок 2 Агарозный гель

    (2%), показывающий специфические полосы длиной 330 п.н., достигнутые с помощью праймеров pOV-A6 для Opisthorchis viverrini s.л. Дорожка M: ДНК-маркеры 100 п.н., полоса P: O. viverrini для взрослых (положительный контроль), полоса C: O. viverrini s.l. церкария из улиток Bithynia siamensis siamensis и полоса N: сверхчистая вода (отрицательный контроль).

    По тексту
    Рисунок 3

    (A) живая улитка Bithynia siamensis siamensis и (B) неокрашенная живая свободно плавающая O. viverrini s.l. церкарии в изогнутой табачной трубке в периоды покоя и кратковременного подвешивания.

    По тексту
    Рисунок 4

    Морфология Opisthorchis viverrini s.l. церкарии. (A) Микрофотография неокрашенных церкарий, зафиксированных в 10% NBF, (B) чертежное изображение, (C) измеренные морфологические признаки. Сокращения в (A) и (B): os = оральная присоска, pa = глотка, es = глазное пятно, pg = проникающая железа, ivs = незаметная вентральная присоска, eb = выделительный пузырь, sh = сенсорные волосы, tst = поперечно-полосатая оболочка , ta = хвост, df = спинно-вентральная плавниковая складка.Определение сокращений в (C) показано в первом столбце таблицы 4. Общая длина = длина фиолетовой пунктирной стрелки + TL + длина оранжевой стрелки (в позиции, следующей за концом хвоста).

    По тексту
    Рис. 5

    Филогенетическое дерево на основе байесовского анализа последовательностей ITS2. Выделенный жирным шрифтом таксон (OVCLLK18) представляет Opisthorchis viverrini s.l. cercariae в этом исследовании.Числа в каждом узле отображают значение апостериорной байесовской вероятности. Длина разветвления указывается шкалой, измеряющей количество нуклеотидных замен на сайт.

    По тексту
    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *