Язвенный колит по мкб 10: Ошибка 404. Файл не найден

Содержание

МКБ-10 код K51.9 | Язвенный колит неуточненный

ICD-10

ICD-10 is the 10th revision of the International Statistical Classification of Diseases and Related Health Problems (ICD), a medical classification list by the World Health Organization (WHO).

It contains codes for diseases, signs and symptoms, abnormal findings, complaints, social circumstances, and external causes of injury or diseases.

ATC

The Anatomical Therapeutic Chemical (ATC) Classification System is used for the classification of active ingredients of drugs according to the organ or system on which they act and their therapeutic, pharmacological and chemical properties.

It is controlled by the World Health Organization Collaborating Centre for Drug Statistics Methodology (WHOCC).

DDD

The defined daily dose (DDD) is a statistical measure of drug consumption, defined by the World Health Organization (WHO).

It is used to standardize the comparison of drug usage between different drugs or between different health care environments.

Публикации в СМИ

Неспецифический язвенный колит (НЯК) — хроническое воспалительное заболевание толстой кишки неизвестной этиологии, характеризующееся язвенно-некротическими изменениями её слизистой оболочки.

Заболевание всегда начинается с прямой кишки и распространяется в проксимальном направлении. Тотальное поражение толстой кишки встречается в 25% случаев. В тяжёлых случаях поражение может распространяться на подслизистую, мышечную и серозную оболочки кишечной стенки. Характерны образование язв в толстой и прямой кишках, кровотечения, абсцедирование крипт слизистой оболочки и воспалительный псевдополипоз. Заболевание часто вызывает анемию, гипопротеинемию и электролитный дисбаланс, с меньшей частотой может приводить к перфорации или образованию рака ободочной кишки.

Частота — 2–7:100 000. Два пика заболеваемости — 15–30 лет (больший пик) и 50–65 лет (меньший). Преобладающий пол — женский.

Классификация • По клиническому течению •• острая форма •• Хроническая рецидивирующая •• Хроническая непрерывная • По степени тяжести •• Лёгкая степень тяжести ••• Стул 4 р/сут и реже, кашицеобразный ••• Примесь крови в кале в небольшом количестве ••• Лихорадка, тахикардия, анемия нехарактерны; масса тела не меняется, СОЭ не изменена •• Тяжёлое течение ••• Стул 20–40 р/сут, жидкий ••• Кал в большинстве случаев содержит примесь крови ••• Температура тела 38 °С и выше ••• Пульс 90 в минуту и чаще ••• Уменьшение массы тела на 20% и более ••• Выраженная анемия ••• СОЭ более 30 мм/ч •• Средняя степень тяжести включает показатели, находящиеся между параметрами лёгкой и тяжёлой степеней.

Клиническая картина

• Начало заболевания может быть острым или постепенным.

• Основной признак — многократный водянистый стул с примесью крови, гноя и слизи в сочетании с тенезмами и ложными позывами на дефекацию. В период ремиссии диарея может полностью прекратиться, но стул обычно кашицеобразный, 3–4 р/сут, с незначительным включением слизи и крови.

• Схваткообразные боли в животе. Чаще всего это область сигмовидной, ободочной и прямой кишок, реже — область пупка и слепой кишки. Типично усиление боли перед дефекацией и ослабление после опорожнения кишечника. Локализация болей зависит от уровня поражения. Типично усиление боли перед дефекацией и ослабление после опорожнения кишечника.

• Возможно поражение других органов и систем •• Кожа и слизистые оболочки: дерматит, афтозный стоматит (5–10%), гингивиты и глосситы, узловатая (1–3%) и мультиформная эритема, гангренозная пиодермия (1–4%), язвы нижних конечностей •• Артралгии и артрит (в 15–20% случаев), в т.ч. и спондилит (3–6%) •• Офтальмологические осложнения (4–10%): эписклерит, увеит, иридоциклит, конъюнктивит, катаракта, ретробульбарный неврит зрительного нерва, язвы роговицы •• Печень: жировой гепатоз (7–25%), цирроз (1–5%), амилоидоз, первичный склерозирующий холангит (1–4%), хронический активный гепатит.

Лабораторные исследования • Анализ периферической крови •• Анемия (постгеморрагическая — в результате потери крови; реакция костного мозга на скрытое воспаление; нарушение всасывания железа, фолиевой кислоты, витамина В12) •• Лейкоцитоз различной степени выраженности •• Увеличение СОЭ •• Гипопротромбинемия •• Гипоальбуминемия вследствие мальабсорбции аминокислот •• Повышение содержания a1– и a2-глобулинов •• Гипохолестеринемия • Электролитные нарушения •• Гипокалиемия в результате снижения всасывания как непосредственно ионов, так и витамина D •• Гипомагниемия.

Специальные исследования • Ректороманоскопию в период обострения проводят без предварительной подготовки кишечника • Колоноскопию назначают после стихания острых явлений, т.к. при тяжёлом течении болезни возможна перфорация язвы или токсическая дилатация •• НЯК лёгкой степени — зернистость слизистой оболочки •• НЯК умеренной степени тяжести — слизистая оболочка кровоточит при контакте, присутствуют язвенные поражения и слизистый экссудат •• НЯК тяжёлой степени — спонтанные кровотечения из слизистой оболочки кишки, обширные язвенные поражения и образование псевдополипов (покрытая эпителием грануляционная ткань) • Ирригография •• Уменьшение выраженности или отсутствие гаустрации •• Равномерное сужение просвета кишки, её укорочение и ригидность стенок (вид «водопроводной трубы») •• Продольная ориентация складок слизистой оболочки с изменением структуры их по типу мелкой и крупной сетчатости •• Зазубренность и нечёткость контуров кишечной трубки, обусловленные наличием язв и псевдополипов (в фазу обострения) •• Процедура противопоказана при развитии токсического мегаколона • Обзорная рентгенография органов брюшной полости особенно важна в случаях тяжёлого НЯК, когда колоноскопия и ирригография противопоказаны •• Укорочение толстой кишки •• Отсутствие гаустрации •• Неровность слизистой оболочки •• Расширение толстой кишки (токсический мегаколон) •• Свободный газ под куполом диафрагмы при перфорации.

Дифференциальная диагностика • Острая дизентерия • Болезнь Крона • Туберкулёз кишечника • Диффузный семейный полипоз толстой кишки • Ишемический колит.

ЛЕЧЕНИЕ

Диета. Различные варианты диеты №4. Следует избегать употребления сырых фруктов и овощей с целью механического щажения воспалённой слизистой оболочки ободочной кишки. У некоторых пациентов безмолочная диета позволяет снизить выраженность клинических проявлений, но при неэффективности от неё следует отказаться.

Тактика ведения

• При внезапных обострениях показана разгрузка кишечника с внутривенным введением жидкостей в течение короткого периода времени. Полностью парентеральное питание позволяет обеспечить длительный отдых для кишечника.

• Салицилосульфаниламидные препараты эффективны при всех степенях тяжести заболевания, вызывая ремиссию и снижая частоту обострений •• Сульфасалазин по 0,5–1 г 4 р/сут до стихания клинических проявлений, затем по 1,5–2 г/сут длительно (до 2 лет) для профилактики рецидивов, или •• Салазодиметоксин по 0,5 г 4 р/сут в течение 3–4 нед, затем по 0,5 г 2–3 р/сут в течение 2–3 нед •• Месалазин — по 400–800 мг 3 р/сут внутрь в течение 8–12 нед; для профилактики рецидивов — по 400–500 мг 3 р/сут при необходимости в течение нескольких лет. Препарат следует принимать после еды, запивая большим количеством воды. При левостороннем НЯК препарат можно применять ректально (свечи, клизма). Показан при недостаточной эффективности и плохой переносимости сульфасалазина.

• ГК — при острых формах заболевания, тяжёлых рецидивах и среднетяжёлых формах, резистентных к другим ЛС •• При дистальных и левосторонних колитах — гидрокортизон по 100–250 мг 1–2 р/сут ректально капельно или в микроклизмах. При эффективности препарат следует вводить ежедневно в течение 1 нед, затем через день 1–2 нед, затем постепенно, в течение 1–3 нед, препарат отменяют •• Преднизолон внутрь 1 мг/кг/сут, в крайне тяжёлых случаях — 1,5 мг/кг/сут. При остром приступе возможно назначение в/в по 240–360 мг/сут с последующим переходом на пероральным приём. Через 3–4 нед после достижения клинического улучшения дозу преднизолона постепенно снижают до 40–30 мг, затем можно присоединить сульфасалазин, в дальнейшем продолжают снижение до полной отмены.

• В качестве вспомогательного средства в сочетании с сульфасалазином или ГК — кромоглициевая кислота в начальной дозе 200 мг 4 р/день за 15 мин до еды.

• При лёгких или умеренных проявлениях без признаков токсического мегаколона осторожно назначают закрепляющие (например, лоперамид 2 мг) или антихолинергические препараты. Однако применение средств, активно тормозящих перистальтику, может привести к развитию токсической дилатации толстой кишки.

• Иммунодепрессанты, например меркаптопурин, азатиоприн, метотрексат (25 мг в/м 2 р/нед), гидроксихлорохин.

• При угрозе развития анемии — препараты железа внутрь или парентерально; при массивных кровотечениях — гемотрансфузии.

• При токсическом мегаколоне •• Немедленная отмена закрепляющих и антихолинергических препаратов •• Интенсивная инфузионная терапия (0,9% р-р натрия хлорида, калия хлорид, альбумин) •• Кортикотропин 120 ЕД/сут или гидрокортизон 300 мг/сут в/в капельно •• Антибиотики (например, ампициллин 2 г или цефазолин 1 г в/в каждые 4–6 ч).

Противопоказания • Сульфасалазин противопоказан при гиперчувствительности, печёночной или почечной недостаточности, болезнях крови, порфирии, недостаточности глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы, кормлении грудью • Месалазин противопоказан при гиперчувствительности к салицилатам, болезнях крови, печёночной недостаточности, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, детям до 2 лет, кормлении грудью.

Хирургическое лечение •

Показания •• Развитие осложнений ••• Токсический мегаколон при неэффективности интенсивной медикаментозной терапии в течение 24–72 ч ••• Перфорация ••• Обильное кровотечение при безуспешной консервативной терапии (редко) ••• Карцинома ••• Подозрение на карциному при стриктурах кишечника •• Отсутствие эффекта от консервативной терапии, быстрое прогрессирование заболевания •• Задержка роста у подростков, не корригируемая консервативным лечением •• Дисплазия слизистой оболочки •• Давность заболевания более 10 лет (повышенный риск возникновения рака) • Различают следующие группы оперативных вмешательств •• Паллиативные (операции отключения) — наложение двуствольной илео- или колостомы •• Радикальные — сегментарная или субтотальная резекция ободочной кишки, колэктомия, колопроктэктомия •• Восстановительно-реконструктивные — наложение подвздошно-прямокишечного или подвздошно-сигмовидного анастомоза конец в конец.

Осложнения • Острая токсическая дилатация (токсический мегаколон) ободочной кишки (до 6 см в диаметре) развивается в 3–5% случаев. Обусловлена, вероятно, тяжёлым воспалением с поражением мышечной оболочки ободочной кишки на большом протяжении и нарушением нервной регуляции функций кишечника. Определённая роль принадлежит неадекватному назначению холинолитиков и закрепляющих препаратов. Состояние обычно тяжёлое, с высокой лихорадкой, болью в животе, значительным лейкоцитозом, истощением, возможен летальный исход. Лечение — интенсивная медикаментозная терапия в течение 48–72 ч. Отсутствие ответа на проводимое лечение — показание к немедленной тотальной колонэктомии. Летальность составляет около 20% с более высоким уровнем среди больных старше 60 лет • Массивные кровотечения. Основной симптом НЯК — выделение крови из прямой кишки (до 200–300 мл/сут). Массивным кровотечением считают кровопотерю не менее 300–500 мл/сут • Перфорация язв толстой кишки при НЯК возникает приблизительно в 3% случаев и часто приводит к смерти • Стриктуры при НЯК — 5–20% случаев • Рак толстой кишки. У больных с субтотальным или тотальным поражением ободочной кишки и продолжительностью заболевания более 10 лет повышен риск возникновения рака толстой кишки (через 10 лет риск карциномы составляет 10% и может возрасти до 20% через 20 лет и до 40% через 25–30 лет) •• Рак толстой кишки, возникающий на фоне НЯК, как правило, многоочаговый и агрессивный •• У больных с НЯК давностью более 8–10 лет следует проводить ежегодные колоноскопические исследования с биопсией через каждые 10–20 см. При наличии дисплазии высокой степени необходимо рассмотреть возможность профилактической тотальной колонэктомии.

Синонимы • Колит язвенно-геморрагический неспецифический • Колит язвенный идиопатический • Колит язвенно-трофический • Проктоколит язвенный • Ректоколит язвенно-геморрагический • Ректоколит геморрагический гнойный.

Сокращение. НЯК — неспецифический язвенный колит.

МКБ-10 • K51 Язвенный колит

Язвенный колит

ЯЗВЕННЫЙ КОЛИТ

Шифр МКБ-10: К51

 

НАЗВАНИЯ УСЛУГ

(диагностика, консультация специалистов)

Назначение

Показания

Кратн.

 

1

2

3

ЛАБОРАТОРНЫЕ ПРОЦЕДУРЫ, ИССЛЕДОВАНИЯ

Определение общего белка в сыворотке крови **

+

2

Определение белковых фракций крови **

+

2

Определение билирубина и его фракций в сыворотке крови *

+

2

Определение холестерина в сыворотке крови **

+

2

Определение натрия и калия в сыворотке и плазме крови **

+

2

Клинический анализ мочи *

+

2

Обнаружение скрытой крови в кале *

+

3

Общий анализ кала *

+

2

Посев кала на кишечную микрофлору с определением чувствительности к препаратам

+

2

Определение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови *

+

2

Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови *

+

2

Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови **

+

2

Выделение и идентификация возбудителей в кале ***

+

2

Анализ крови клинический *

+

3

Определение основных групп крови **

+

2

Определение резус-фактора **

+

2

Определение глюкозы в сыворотке крови *

±

 

Коагулограмма **

±

 

Рентгенография толстой кишки с контрастной клизмой (ирригоскопия) ***

±

2

Ультразвуковое исследование печени с желчным пузырем **

±

2

Ультразвуковое исследование поджелудочной железы **

±

2

Ректороманоскопия ***

+

2

Колоноскопия с биопсией ***

±

 

КОНСУЛЬТАЦИИ СПЕЦИАЛИСТОВ. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕДУРЫ

Консультация гастроэнтеролога, гепатолога**

+

2

Консультация врача-хирурга, гинеколога ***

+

2

 

ФАРМАКОТЕРАПИЯ

Наименование фармгрупп

2

СУЛЬФАНИЛАМИДНЫЕ ПРЕПАРАТЫ САЛАЗАПИРИДАЗИНОВОГО РЯДА (САЛОФАЛЬК, МЕСАЛАЗИН) ***

Гормоны их аналоги ***

Гормоны коры надпочечников и их аналоги ***

Иммуномодуляторы ***

Опиоидные пептиды ***

НЕЙРОЛЕПТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА И ТРАНКВИЛИЗАТОРЫ ***

Транквилизаторы ***

ВИТАМИНЫ ГРУППЫ В, ФОЛИЕВОЙ КИСЛОТЫ И ИХ АНАЛОГИ ***

ФЕРМЕНТНЫЕ ПРЕПАРАТЫ И ИНГИБИТОРЫ ФЕРМЕНТОВ ***

 

ИСХОД ЛЕЧЕНИЯ:

Клинические критерии улучшения состояния больного:

Улучшение (исчезновение) клинических симптомов (болевой синдром, диспептические явления). Нормализация лабораторных показателей.

 

Примечание:

* проводится на уровне СВП , ЦРБ/ЦГБ и специализированных мед. учреждений .

** проводится на уровне ЦРБ/ЦГБ и специализированных мед. учреждений.

*** проводится на уровне специализированных мед. учреждений.

± – проводится по показаниям.

+ – проводится обязательно

 


A Рандомизированное, плацебо-контролируемое исследование фазы 2b

Abstract

Предпосылки и цели:

Интерферон-γ-индуцируемый белок-10 [IP-10] опосредует перенос иммунных клеток из кровотока в воспаленную толстую кишку и снижает эпителиальную активность кишечника. выживания клеток. Экспрессия IP-10 повышена у пациентов с язвенным колитом [ЯК]. Мы сообщаем о результатах исследования эффективности и безопасности индукции элделумаба, полностью человеческого моноклонального антитела к IP-10, в зависимости от дозы, при умеренной и тяжелой активности ЯК.

Методы:

В общей сложности 252 взрослых с ЯК [оценка Мейо ≥ 6 и эндоскопическая подшкала ≥ 2] были рандомизированы в соотношении 1:1:1 для получения плацебо или элделумаба в дозе 15 или 25 мг/кг внутривенно в 1-й и 8-й дни и каждый день. другая неделя после этого. Первичной конечной точкой была клиническая ремиссия [по шкале Мейо ≤ 2; нет индивидуальной подшкалы > 1] на 11-й неделе. Ключевые вторичные конечные точки включали клинический ответ по шкале Мейо и заживление слизистой оболочки на 11-й неделе.

Результаты:

пациенты, достигшие 11-й недели клинической ремиссии.Частота ремиссии и ответа составила 17,6% и 47,1% при применении элделумаба в дозе 25 мг/кг, 13,1% и 44,0% при применении элделумаба в дозе 15 мг/кг и 9,6% и 31,3% при применении плацебо. Частота клинической ремиссии и ответа была выше у пациентов, ранее не получавших анти-фактор некроза опухоли [ФНО], получавших элделумаб, по сравнению с плацебо. Лечение элделумабом хорошо переносилось, иммуногенности не наблюдалось.

Выводы:

Первичная конечная точка не была достигнута при индукционной терапии элделумабом в дозе 15 или 25 мг/кг у пациентов с ЯК.Тенденции к клинической ремиссии и ответу наблюдались в общей популяции и были более выражены у пациентов, ранее не получавших анти-ФНО. Сигналы безопасности элделумаба соответствовали тем, о которых сообщалось ранее [номер ClinicalTrials.gov, {“type”:”clinical-trial”,”attrs”:{“text”:”NCT01294410″,”term_id”:”NCT01294410″}}NCT01294410] .

Ключевые слова: Воспалительные заболевания кишечника, язвенный колит

1. Введение

Язвенный колит [ЯК] представляет собой хроническое рецидивирующе-ремиттирующее воспалительное заболевание слизистой оболочки толстой кишки, связанное с аномальным иммунным ответом. 1 Глобальная распространенность ЯК составляет около 8 миллионов, 2,3 , и как заболеваемость, так и распространенность увеличиваются. 4 Пациенты с язвенным колитом отмечают частоту симптомов, связанную с ними психологическую нагрузку и нарушение повседневной деятельности как факторы, оказывающие наибольшее влияние на качество их жизни. 5,6,7 Несмотря на недавние успехи в лечении язвенного колита, как «обычные» стандартные препараты 8,9,10 , так и антагонисты фактора некроза опухоли [TNF] [анти-TNF] имеют низкую длительную частота ремиссий, 11,12,13 и/или токсичность, ограничивающая лечение. 10,14 Следовательно, требуются новые варианты лечения. Антиадгезионные молекулы, которые предотвращают проникновение лимфоцитов в слизистую оболочку кишечника, являются недавно одобренным новым классом препаратов для лечения язвенного колита. 15

Интерферон-γ-индуцируемый белок-10 [IP-10; также называемый CXCL10] опосредует перенос иммунных клеток из кровотока в воспаленную толстую кишку и снижает выживаемость эпителиальных клеток кишечника. 16 Экспрессия IP-10 повышена у пациентов с ЯК 17 , и было показано, что блокада IP-10 способствует выживанию клеток крипт, защищает от изъязвления эпителия и снижает интенсивность воспаления в in vivo моделях ЯК. 18,19,20 Таким образом, IP-10 может быть новой терапевтической мишенью при ЯК.

Элделумаб [BMS-936557], полностью человеческое моноклональное антитело к IP-10, исследовали для лечения умеренно-тяжелого активного ЯК в рамках рандомизированного, двойного слепого, плацебо-контролируемого, 8-недельного исследования фазы IIa, с использованием дозы 10 мг/кг каждые две недели [EOW]. 21 Это исследование выявило взаимосвязь экспозиция-реакция для элделумаба: частота ответа составила 88% у пациентов с самой высокой минимальной терцильной концентрацией элделумаба (минимальная концентрация в плазме в равновесном состоянии [C minss ], от 108 до 235 мкг/мл, 53 % при наименьшей минимальной концентрации элделумаба, терцильной [26.от 4 до 78,6 мкг/мл] и 37% в группе плацебо [ p <0,001 для наивысшего терциля по сравнению с плацебо]. Элделумаб хорошо переносился, и у пациентов с C minss ≥ 100 мкг/мл были результаты по безопасности, сравнимые с общей исследуемой популяцией. Таким образом, 100 мкг/мл считалась минимальной целевой концентрацией для эффективности в данном индукционном исследовании фазы IIb с диапазоном доз для оценки клинической эффективности и безопасности двух доз элделумаба у пациентов с активным ЯК средней и тяжелой степени.

2. Методы

2.1. Дизайн исследования и пациенты

Это было рандомизированное плацебо-контролируемое исследование фазы IIb элделумаба, проведенное в 75 центрах в 14 странах [Австралия, Австрия, Бельгия, Бразилия, Канада, Франция, Германия, Венгрия, Италия, Мексика, Нидерланды, Польша, Южная Африка и США] в период с 27 марта 2011 г. по 15 января 2013 г. Исследование включало 11-недельный индукционный период [] и 12-месячный исследовательский период [номер ClinicalTrials.gov {“тип” :”клиническое испытание”,”атрибуты”:{“текст”:”NCT01294410″,”term_id”:”NCT01294410″}}NCT01294410].Здесь доступны только результаты индукционного периода. Все пациенты дали письменное информированное согласие, а исследование было одобрено местными комитетами по этике и проводилось в соответствии с рекомендациями по надлежащей клинической практике и Хельсинкской декларацией. Все авторы имели доступ к данным исследования и рассмотрели и одобрили окончательный вариант рукописи.

Дизайн исследования. Звездочка означает отсутствие ответа, недостаточный ответ или потерю ответа. Индукционный период стратифицирован по недостаточности анти-фактора некроза опухоли [ФНО] и сопутствующему применению иммунодепрессантов.Планируемое количество пациентов в группе составляло 91. Исследование было изменено, чтобы изменить первичную конечную точку на 11-ю неделю после того, как 53 пациента завершили индукцию на 7-й неделе. 5-АСК, 5-аминосалициловая кислота; 6-МП, 6-меркаптопурин; АЗА, азатиоприн; в/в, внутривенно.

Подходящие пациенты были в возрасте ≥ 18 лет и имели умеренную или тяжелую активную форму ЯК [подтверждено эндоскопическими данными; ≥ 6 баллов по шкале Мейо и ≥ 2 баллов по эндоскопической шкале Мейо в течение 2 недель до введения исследуемого препарата] 22 продолжительностью ≥ 6 месяцев.Подшкалы эндоскопии определялись местным исследователем, который не знал о назначении лечения; центральное чтение не использовалось. Зарегистрированные пациенты имели неадекватный ответ на один или несколько пероральных аминосалицилатов, преднизолон, иммунодепрессанты, внутривенный [в/в] гидрокортизон или анти-ФНО агент; были нетерпимы к одному или нескольким из вышеперечисленных; и/или в настоящее время получали пероральные аминосалицилаты, преднизолон или азатиоприн, или 6-меркаптопурин.

Ключевые критерии исключения: диагноз болезни Крона или неопределенного колита; ЯК, ограниченный прямой кишкой; или текущие признаки молниеносного колита, токсического мегаколона или перфорации кишечника.Дополнительными критериями исключения были: предстоящая потребность в колостомии или илеостомии; предшествующая тотальная или субтотальная колэктомия; токсин Clostridium difficile , присутствующий в стуле [включение в исследование пациентов с положительным результатом теста на C. difficile было разрешено после отрицательного повторного теста после завершения лечения]; анти-ФНО-терапия или любое моноклональное антитело или слитый белок на основе иммуноглобулина в течение 8 недель до исследуемого лечения, или любая экспериментальная терапия в течение 4 недель до введения элделумаба.

2.2. Рандомизация, лечение и доза

Были выбраны дозы элделумаба 15 и 25 мг/кг, поскольку ожидалось, что целевая C minss 100 мкг/мл будет достигнута у 75% и от 96% до 99% пациентов соответственно. предполагая пропорциональную дозе фармакокинетику.

Номера рандомизации были присвоены в том порядке, в котором пациенты подходили для лечения; центральная система рандомизации, принадлежащая спонсору, назначала лечение на основе этих цифр. Рандомизация была стратифицирована по сопутствующему применению иммунодепрессантов и предыдущему применению анти-ФНО и проводилась централизованно с использованием динамического распределения лечения.Назначение лечения было слепым для пациентов и персонала исследовательского центра; ослепление сохранялось на протяжении всего исследования. Были использованы две разнесенные по времени когорты из восьми пациентов, чтобы гарантировать, что по крайней мере шесть пациентов достигли критериев безопасности повышения дозы для элделумаба 15 и 25 мг/кг внутривенно к 15-му дню соответственно. Повышение дозы было включено для подтверждения безопасности препарата. повышенная доза элделумаба. 21 Повышение дозы для следующей когорты будет остановлено, если у двух пациентов возникнут одинаковые связанные с лечением нежелательные явления [НЯ]/нарушения лабораторных параметров во время обзора предварительных слепых данных по безопасности.После проведения углубленного обзора безопасности исследование можно было продолжить, как и планировалось, или можно было раскрыть данные для одного или нескольких пациентов. Поскольку пациенты в двух предварительных когортах достигли заранее определенных критериев безопасности лечения, группа после внесения поправок (примерно 270 пациентов) была рандомизирована 1:1:1 для лечения плацебо или элделумабом 15 или 25 мг/кг.

Пероральный прием 5-аминосалициловой кислоты, эквивалентной преднизолону дозы ≤ 30 мг, азатиоприна и 6-меркаптопурина продолжали принимать в стабильных дозах в течение всего периода индукции.Исследуемые препараты вводили в виде внутривенной [в/в] инфузии в течение 90 минут в дни 1, 8 и после этого EOW.

В конце индукционного периода все пациенты, достигшие ответа, были включены в рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое поддерживающее исследование продолжительностью до 2 лет.

2.3. Конечные точки эффективности

2.3.1. Первичная конечная точка

Первичной конечной точкой была доля пациентов в каждой группе лечения в состоянии клинической ремиссии, определяемая как оценка по шкале Мейо <2 баллов без индивидуальной подшкалы >1 балла на 11-й неделе.Хотя ослепление было сохранено, была выпущена поправка для изменения временных рамок первичной конечной точки с 7-й недели на 11-ю неделю после того, как 53 пациента завершили 7-недельный индукционный период. Это изменение было основано на слепом обзоре совокупных данных об эффективности в двух когортах с предварительным повышением дозы: клиническое улучшение продолжалось у пациентов в предварительных когортах, которые были включены в фазу открытой терапии после того, как не удалось продемонстрировать клинический ответ к 7-й неделе лечения. индукционный период.Кроме того, эффективность элделумаба при НЯК может быть частично опосредована ингибированием IP-10-индуцированного апоптоза эпителиальных клеток, 16,19 эффект, для проявления которого может потребоваться время, что позволяет предположить, что 11-недельная конечная точка может быть более подходящей для демонстрации оптимального эффективность. В настоящей публикации сообщается о первичном анализе пациентов, завершивших индукционный период на 11-й неделе. Данные об эффективности и безопасности пациентов, оцененных в соответствии с исходным графиком первичной конечной точки [7-я неделя], были проанализированы отдельно от общей популяции [данные группы до внесения поправок]. .

2.3.2. Вторичные и исследовательские конечные точки

Ключевыми вторичными конечными точками на 11-й неделе были клинический ответ [снижение по сравнению с исходным уровнем ≥ 3 баллов и ≥ 30% по шкале Мейо, снижение ≥ 1 по подшкале ректального кровотечения или абсолютное ректальное кровотечение по подшкале ≤ 1], заживление слизистой оболочки [ подшкала эндоскопии ≤ 1] и ответ на вопросник по воспалительным заболеваниям кишечника [IBDQ] [изменение на ≥ 16 баллов по сравнению с исходным уровнем]. Дополнительные вторичные конечные точки и субанализы включали анализ подгрупп ответа/ремиссии/заживления слизистой оболочки на 11-й неделе в соответствии с предыдущим статусом анти-ФНО, сопутствующим применением иммунодепрессантов [например, азатиоприн или 6-меркаптопурин], исходным значением высокочувствительного С-реактивного белка [вчСРБ] и географический регион.Дополнительные оценки включали изменение частичной оценки Мейо по сравнению с исходным уровнем с течением времени; изменения концентрации фекального кальпротектина и вчСРБ в сыворотке от исходного уровня к 11-й неделе; доля пациентов, достигших гистологической ремиссии [индекс Гебоеса < 2,0] на 11-й неделе; и фармакокинетика элделумаба и зависимость экспозиция–реакция на 11-й неделе.

2.3.3. Оценки эффективности

Шкала Мейо представляет собой составной индекс четырех переменных заболевания [частота стула, ректальное кровотечение, результаты эндоскопии и общая оценка врачом], каждая из которых оценивается по шкале от 0 до 3, причем более высокие баллы указывают на большую частоту или тяжесть заболевания [1]. общий балл: от 0 до 12]. 22 Частичная шкала Мейо [подшкала эндоскопии опущена] варьируется от 0 до 9. Шкала Мейо [включая эндоскопию] оценивалась исходно и на 11-й неделе; Частичные баллы по шкале Мейо регистрировались на 1, 2, 5, 7 и 9 неделе. Дневники пациентов использовались для облегчения расчета баллов по шкале Мейо.

IBDQ представляет собой анкету, состоящую из 32 пунктов, которую заполняют самостоятельно и которая оценивает качество жизни по четырем параметрам [кишечник, системные симптомы, эмоциональная функция и социальная функция] с ответами от 1 [тяжелое воздействие] до 7 [нормальное состояние здоровья]. .Общий балл IBDQ варьируется от 32 до 224, причем более высокие баллы указывают на лучшее качество жизни. 23,24 IBDQ вводили в начале исследования и на 11-й неделе. Ответ на IBDQ определяли как увеличение IBDQ на ≥ 16 баллов.

Кровь для оценки вчСРБ брали исходно и на 1, 3, 5, 7, 9 и 11 неделе. Фекальный кальпротектин определяли в образцах стула исходно и на 11 неделе. Гистологическую оценку слизистой оболочки кишечника после биопсии проводили с помощью Индекс Гебо, семикомпонентный индекс, где 0 [отсутствие архитектурных изменений или других гистологических аномалий] указывает на наименее серьезное повреждение, а 4 [разрушение крипты] указывает на наиболее серьезное повреждение.

2.3.4. Фармакокинетические оценки

В группе после внесения поправок образцы венозной крови брали на 1-й и 8-й дни [до введения дозы и в конце инфузии], а также на 3-ю и 7-ю недели [до введения дозы], на 5-ю неделю [до введения дозы и в конце инфузии]. конец инфузии] и 11-я неделя. Результаты по элделумабу в сыворотке человека анализировали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа.

2.4. Конечные точки безопасности

Частота и тяжесть нежелательных явлений [НЯ] и их связь с исследуемым препаратом, включая НЯ, которые ухудшились по сравнению с состоянием до лечения, и все НЯ, связанные с лечением, отслеживались на протяжении всего исследования и на срок до 56 дней. после последней дозы исследуемого препарата.НЯ, связанные с лечением, были определены как возможно, вероятно или определенно связанные с исследуемым препаратом, при этом отсутствующие связи предполагались как «связанные». Реакции на инфузию определялись как любые нежелательные явления, которые потенциально могли представлять собой реакцию на инфузию и возникали в течение 1 часа после завершения инфузии. Обычная профилактическая премедикация не проводилась, если только на это не указывает предшествующий опыт инфузионных реакций у отдельного пациента. Мониторинг основных показателей жизнедеятельности, клинические лабораторные анализы и физикальное обследование проводились в каждый момент времени.Лабораторные нарушения определялись как результаты лабораторных анализов, которые были клинически значимыми или соответствовали определению серьезного НЯ, требовали прекращения или прерывания приема исследуемого препарата или требовали лечения специфической терапией.

2.5. Иммуногенность

Утвержденный электрохемилюминесцентный мостиковый иммуноанализ [платформа Meso-Scale Discovery; Rockville, MD, USA] использовали для скрининга, подтверждения и измерения титров антител против эльделумаба в сыворотке. Иммуноанализ проводили в начале исследования и на 11-й неделе.

2.6. Статистический анализ

Введение исследуемого препарата 81 пациенту в каждой группе лечения было рассчитано как достаточное для обеспечения 85% мощности, чтобы продемонстрировать превосходство элделумаба с точки зрения достижения клинической ремиссии на 11-й неделе, с поправкой Бонферрони для первичной конечной точки, которая дал уровень значимости p = 0,025 для каждого сравнения с двусторонним тестом. Разделение α таким образом означало, что первичная конечная точка будет достигнута только в том случае, если по крайней мере одно из двух дозовых плеч достигнет значения p <0.025. Для расчета необходимого размера выборки использовались частота ремиссии плацебо, равная 15%, и разница в лечении для доли пациентов, достигших ремиссии 24% между элделумабом и плацебо. Значения были основаны на предыдущей фазе IIa исследования элделумаба [Medarex, данные в файле, 2013].

Популяция, предназначенная для лечения [популяция с первичной эффективностью], включала всех рандомизированных пациентов, которые получали какое-либо исследуемое лекарство. Популяция безопасности включала всех пациентов, получивших хотя бы одну дозу исследуемого препарата или плацебо до конца индукционного периода.

Для бинарных конечных точек ответа, ремиссии и заживления слизистой оболочки пациенты, которые преждевременно прекратили лечение, считались не ответившими на первичный анализ эффективности. Критерий хи-квадрат Кокрана-Мантеля-Хензеля использовали для первичного анализа с предшествующим применением анти-ФНО терапии и сопутствующим применением иммунодепрессантов в качестве факторов стратификации. Первичную конечную точку [ремиссию] и ключевые вторичные конечные точки [ответ и заживление слизистой оболочки] тестировали по порядку с использованием иерархической процедуры тестирования в каждой дозовой группе; только если предыдущая конечная точка была статистически значимой, тестировалась следующая конечная точка, в противном случае тестирование прекращалось.Модель линейной логистической регрессии использовалась для оценки взаимосвязи экспозиция-реакция между средним C minss в сыворотке с 5-й по 11-ю недели и конечными точками эффективности [клинический ответ, клиническая ремиссия и заживление слизистой оболочки], за исключением плацебо.

3. Результаты

3.1. Распределение пациентов и демографические характеристики

В общей сложности 252 пациента были рандомизированы и пролечены в течение 11-недельного индукционного периода [группа после поправки; ]; примерно 85% пациентов завершили эту часть исследования.Прекращение лечения из-за НЯ было сопоставимо в трех группах лечения. Исходные демографические характеристики и характеристики заболевания были сопоставимы между группами в группе после поправки [], с немного более высоким процентом мужчин в группе элделумаба 15 мг/кг по сравнению с другими группами лечения [64,3% против 51,8% как для плацебо, так и для элделумаба 25 мг/кг]. Средняя [медианная] продолжительность ЯК была самой низкой в ​​группе элделумаба 25 мг/кг (6,5 [5,0] лет). Сопутствующее применение иммунодепрессантов и неадекватная реакция/непереносимость анти-ФНО наиболее часто встречались в группе элделумаба в дозе 25 мг/кг [43.5% и 44,7% больных соответственно]. Базовые характеристики группы до внесения поправок показаны в дополнительной таблице 1 [доступны в качестве дополнительных данных по адресу ECCO-JCC онлайн].

Размещение больных. Пациенты были классифицированы как ответившие или не ответившие на основе конечной точки клинического ответа.

Таблица 1.

Исходные демографические данные и характеристики заболеваний.

3 Eldelumab 15 мг / кг [

N = 84]3 ELDELUMAB 25 мг / кг [ N = 85]3 252] [15.1] [18-77]

5 43 [51,8]

Median [Range] [34,9] 95 [37.7] 95 [37.7] 54 [65.1] 55 [65.5] [35.7] 98 [38.9] 155 [61.1] 9.3 [1.5]
Параметр Placebo [ N = 83]
Возраст, лет
 Среднее [СО] 42.7 [14.2] 40,8 [15.1] 39.0 [12.7] 40,8 [14.1]
Медиана [диапазон] 41,0 [18-73] 39,0 [20-77] 37,0 [ 19-77] 39.0 [18-77]
Мужской, N [%]

6 [%]

54 [64.3] 44 [51,8] 141 [56.0]
Географический регион, n [%]
 Северная Америка 16 [19.3] 23 [27.4] 23 [27.4] 19 [22.4] 58 [23.0] 58 [23.0]
Южная Америка 11 [13.3] 13 [15.5] 15 [17.6] 39 [15.5]
Европа 48 [57.8] 43 [50.6] 133 [52.8]
Отдых мира 8 [9.6] 6 [7.1 ] 8 [9,4] 22 [8,7]
Продолжительность ЯК, лет
 Среднее [SD] 7.9 [7.4] 6.8 [7.2] 6.5 [5.6] 6.5 [5.6] 7.1 [6.8]
5.7 [0.5-31.2] 3.9 [0.5-39.6] 5.0 0,5–27,0] 4,7 [0,5–39,6]
Степень заболевания, n [%]
Левосторонний только 46 [55.4] 41 [48.8] 41 [48.8] 47 [55.3] 134 [53.2]
Обширное заболевание 37 [44.6] 43 [51,2] 38 [44,7] 118 [46,8]
Одновременное применение иммунодепрессантов b 18 [60049 0 08]
Да 29 [34,9] 29 [34,9] 29 [34.5] 37 [43.5] 37 [43.5]
48 56,5] 157 [62,3]
Одновременное применение кортикостероидов, n [%]
 Метилпреднизолон 4 [4.8] 6 [7.1] 6 [7.1] 4 [4.7] 16 [6.3]
Преднизолон 12 [14.5] 6 [7.1] 8 [9.4] 26 [10.3]
26 [31.3] 31 [36.9] 23 [27.1] 80 [31.7]
Предыдущий неадекватный ответ / непереносимость против TNFS, N [%]
 Да 30 [36.1] 30 [35.7] 38 [44.7] 98 [38,9]
53 [63,9] 54 [64.3] 48 [56.5]
Средняя оценка майонеза [SD] 80186 8.6 [1.7] 8.3 [1.5] 8.5 [1.7] [1.7] 8.5 [1.7]
Средняя оценка частичного майонеза [SD] 6.1 [1.5] 5,8 [1,4] 6,0 [1,5] 5,9 [1,5]
  Показатель ректального кровотечения [SD] 1.4 [0,9] 1.3 [0.8] 1.5 [0,9] NR NR
Частота стула [SD] 29 [0,7] 2.3 [0,8] 2.4 [0,8] NR
Среднее фекал Calprotectin, мкг / г [SD] 562.2 [535.9] 553,4 [297.6] 688,4 [302.7] NR
Средняя сыворотка HSCRP, мг / л [SD] 12,9 [19,7] 13,9 [24,6] 9,8 [15,7] 12.2 [20.2]

3.2. Первичная конечная точка

Первичная конечная точка не достигнута. Лечение ни элделумабом в дозе 15 мг/кг, ни элделумабом в дозе 25 мг/кг не приводило к достоверному отличию от плацебо в доле пациентов, достигших клинической ремиссии на 11-й неделе []. Разница в лечении (97,5% доверительный интервал [ДИ]) по сравнению с плацебо составила 3,1% [от -8,3% до 14,5%] для элделумаба 15 мг/кг и 7,6% [от -3,9% до 19,2%] для элделумаба 25 мг/кг.

[A] Частота клинической ремиссии* на 11-й неделе [анализ намерения лечить [ITT]]; [B] частота клинического ответа по шкале Мейо на 11-й неделе [анализ ITT]; [C] заживление слизистой оболочки на 11-й неделе [анализ ITT]; и [D] скорректированное среднее изменение частичной оценки Мейо по сравнению с исходным уровнем с течением времени [согласно наблюдаемому анализу].* Ремиссия определяется как оценка по шкале Мейо ≤ 2 без индивидуальной подшкалы > 1; ответ определяется как снижение по сравнению с исходным уровнем ≥ 3 и ≥ 30% по шкале Мейо, снижение ≥ 1 по подшкале ректального кровотечения или абсолютное ректальное кровотечение по подшкале ≤ 1; определяется как суббалл по эндоскопии ≤ 1. Столбики погрешностей представляют 95% доверительные интервалы.

3.3. Ключевые вторичные конечные точки

В соответствии с процедурой иерархического тестирования клинический ответ и заживление слизистой не оценивались статистически по сравнению с плацебо, поскольку первичная конечная точка не была достигнута; однако номинальные значения p были предоставлены.Доля пациентов, у которых был достигнут клинический ответ на 11-й неделе, существенно не различалась в группах лечения элделумабом и плацебо []. Различия в лечении [97,5% ДИ] по сравнению с плацебо составили 12,4% [от -4,2% до 29,0%] и 16,6% [от -0,2% до 33,3%] в группах элделумаба 15 и 25 мг/кг соответственно.

Аналогичная доля пациентов достигла заживления слизистой оболочки в группах элделумаба 15 и 25 мг/кг и плацебо []: разница в лечении по сравнению с плацебо [97,5% ДИ] составила 1,7% [от –14,0% до 17.3%] при применении элделумаба в дозе 15 мг/кг и 3,9% [от –11,4% до 19,2%] при применении элделумаба в дозе 25 мг/кг. Частота ремиссий, ответ и результаты заживления слизистой оболочки в группе до внесения поправок были схожими [Дополнительная таблица 2, доступная в качестве дополнительных данных по адресу ECCO-JCC онлайн].

Частота ответа IBDQ [95% ДИ] на неделе 11 была выше в группах лечения элделумабом 15 и 25 мг/кг по сравнению с плацебо (45,2% [от 34,6% до 55,9%], 51,8% [от 41,1% до 62,4%] и 38,6% [от 28,1% до 49,0%] соответственно). Среднее скорректированное изменение по сравнению с исходным уровнем составило 25.5, 27,4 и 13,2 балла в группах элделумаба 15 и 25 мг/кг и плацебо соответственно [номинальное значение p -значения: 0,0328 и 0,0152 для элделумаба 15 и 25 мг/кг соответственно по сравнению с плацебо].

3.4. Другие конечные точки

С течением времени при применении элделумаба в дозе 15 мг/кг по сравнению с плацебо наблюдалось более выраженное снижение компонентов частичной шкалы Мейо [частота стула, ректальное кровотечение и общая оценка врача] по сравнению с плацебо уже на 36-й день [5-я неделя] и сохранялось до дня 64 [Неделя 9] до выравнивания в День 78 [Неделя 11; ].Частичное снижение по шкале Мейо при применении элделумаба в дозах 15 и 25 мг/кг было сопоставимо на 78-й день. 74,5 [782,0] и -3,0 [439,0] мкг/г соответственно]. В течение всего периода индукции среднее снижение концентрации вчСРБ в сыворотке было наибольшим у пациентов, получавших плацебо. На 11-й неделе среднее изменение [стандартная ошибка] по сравнению с исходным уровнем в вчСРБ с элделумабом 15 и 25 мг/кг и плацебо составлял –0.6 [1,9], –1,4 [1,7] и –4,6 [2,2] мг/л соответственно.

Повышение минимальной концентрации элделумаба в плазме [C мин ] было приблизительно пропорциональным дозе. На 11-й неделе у 78,6% и 97,0% пациентов в группах 15 и 25 мг/кг концентрация элделумаба в плазме крови была ≥ 100 мкг/мл. Среднее геометрическое C мин. элделумаба увеличилось со 120 мкг/мл на 8-й день до 144 мкг/мл на 11-й неделе в группе, принимавшей 15 мг/кг, и со 195 мкг/мл до 293 мкг/мл в группе, принимавшей 25 мг. /кг группы. C мин. профилей с течением времени показали, что устойчивое состояние было достигнуто на 3-й неделе.Не было значимых различий в C minss у пациентов с или без сопутствующего применения иммунодепрессантов [данные не показаны].

Клиническая ремиссия, ответ и заживление слизистой оболочки были умеренно увеличены с увеличением C minss с 5-й по 11-ю неделю. При 2,0-кратном увеличении воздействия элделумаба клиническая ремиссия, ответ и заживление слизистой [95% ДИ] увеличивались примерно в 2,0 раза [от 1,0 до 4,0], в 1,4 раза [от 0,9 до 2,2] и в 2,1 раза [от 1,2 до 3,6] соответственно по сравнению с более низким C minss .

Гистологическая ремиссия [индекс Гебоэса < 2,0; оценено у 150 пациентов] был достигнут у сопоставимого процента [95% ДИ] пациентов в каждой группе лечения: элделумаб 15 мг/кг, 28,6% [от 16,7% до 40,4%]; элделумаб 25 мг/кг, 19,1% [от 7,9% до 30,4%]; и плацебо, 23,4% [от 11,3% до 35,5%].

Случаев иммуногенности по данным анализа антител к эльделумабу не наблюдалось.

3.5. Анализ подгрупп

У пациентов, ранее не получавших анти-ФНО, сообщалось о более высоких показателях ремиссии, ответа и заживления слизистой оболочки при применении элделумаба в дозах 15 и 25 мг/кг по сравнению с плацебо [].

Анализы подгрупп в соответствии с: [A] статусом фактора некроза опухоли [TNF]*; [B] одновременным применением иммунодепрессантов; [C] исходное значение высокочувствительного С-реактивного белка [hsCRP]; и [D] географический регион. § *Количество групп, ранее не получавших анти-ФНО, и групп, не получавших анти-ФНО, составило 155 и 97 соответственно. Разрешенными сопутствующими иммунодепрессантами были азатиоприн или 6-меркаптопурин. N , номера для отсутствия сопутствующего применения иммунодепрессантов и одновременного применения иммунодепрессантов были 157 и 95 соответственно. N , числа для вчСРБ ≤ 3, > 3 до 10 и > 10 мг/л составили 81, 79 и 74 соответственно. § Результаты заживления слизистой оболочки аналогичны результатам ремиссии и ответа, но не показаны из-за нехватки места. N , номера для Северной Америки, Южной Америки, Западной Европы, Восточной Европы и остального мира были 58, 39, 79, 54 и 22 соответственно. Столбики погрешностей представляют собой 95% доверительные интервалы.

Среди пациентов, получавших сопутствующие иммунодепрессанты [азатиоприн или 6-меркатопурин], доля пациентов, достигших клинической ремиссии, была выше при применении элделумаба в дозе 25 мг/кг, чем при применении элделумаба в дозе 15 мг/кг или плацебо [].Среди тех, кто получал сопутствующие иммунодепрессанты, больше пациентов в группах элделумаба 15 и 25 мг/кг достигли клинического ответа и заживления слизистой оболочки по сравнению с группой плацебо [].

Не наблюдалось четких закономерностей влияния элделумаба на ремиссию, ответ и заживление слизистой в зависимости от исходного уровня маркеров воспаления [].

Частота ремиссии и ответа на плацебо была самой низкой в ​​Восточной Европе, а различия в лечении элделумабом 25 мг/кг для обеих этих конечных точек были самыми высокими в этом регионе по сравнению с Северной Америкой, Южной Америкой или Западной Европой [].

3.6. Безопасность

Данные по безопасности для группы после поправки в течение вводного периода обобщены в [данные по безопасности для группы до поправки приведены в дополнительной таблице 3 [доступны в качестве дополнительных данных по адресу ECCO-JCC онлайн]]. Во время исследования летальных исходов не было. В период индукции было зарегистрировано три серьезных НЯ, связанных с лечением: одно в группе элделумаба 15 мг/кг [ЯК] и два в группе элделумаба 25 мг/кг [гиперчувствительность и реакция, связанная с инфузией].В группе после поправки 32,1% [27/84], 38,8% [33/85] и 19,3% [16/83] пациентов в группах элделумаба 15 и 25 мг/кг и плацебо, соответственно, имели НЯ, связанные с лечением. Связанные с лечением нежелательные явления, о которых чаще всего сообщалось в группах элделумаба 15 и 25 мг/кг и плацебо, включали головную боль [7,1%, 11,8% и 2,4% соответственно], гиперчувствительность [4,8%, 7,1% и 1,2%]. и тошнота [3,6%, 2,4% и 2,4%].

Таблица 2.

Общая сводка нежелательных явлений.

1 Placebo [ N = 83]

3 Eldelumab 25 мг / кг [

N = 85] [66.7] [70.6] 9 [19.3] [32.1] 90 [17.9]
категория, N [%] N [%] Eldelumab 15 мг / кг [ N = 84]
Всего НЯ 57 [68.7] 56 [66.7] 60 [70.6]
AEс, связанные с лечением 27 [32.1]
Общая серьезный AES 8 [9.6] 4 [4.8] 9 [4.8] 4 [4.7]
, связанные с лечением Серьезные AES 0 1 [1.2] 2 [2.4]
Прекращение Благодаря AES 4 [4,8] 5 [6,0] 4 [4.7]
Прерывание вследствие серьезных AES 4 [4.8] 2 [2.4] 2 [2.4]
Deathers 0 0 0
Серьезные инфекции 1 [1.2] 0 0 0
Инфекции и заражения 15 [18.1] 22 [25.9]
Инфузия реакция A 4 [4 .8] 12 [14,3] 16 [18,8]

Более высокая доля пациентов [25,9%] в группе элделумаба 25 мг/кг имели инфекции/инвазии по сравнению с элделумабом 15 мг/кг кг [17,9%] и плацебо [18,1%]. Наиболее частым типом инфекции был назофарингит [10,6%, 3,6% и 3,6% соответственно]. В группе плацебо была одна серьезная инфекция [тяжелый цитомегаловирусный колит], и ни одной в группе элделумаба. По сравнению с группой плацебо у большего числа пациентов, получавших элделумаб в дозах 15 и 25 мг/кг, возникали инфузионные реакции (4 [4.8%], 12 [14,3%] и 16 [18,8%] соответственно). Большинство случаев инфузии были легкими или умеренными; у одного пациента в каждой группе элделумаба развилась тяжелая острая инфузионная реакция [15 мг/кг: рвота и крапивница; 25 мг/кг: одышка, головокружение, рвота и тахикардия]. Обе тяжелые острые инфузионные реакции возникли во время первой инфузии и разрешились при лечении кортикостероидами и антигистаминными препаратами. Ни у одного из пациентов с острыми инфузионными реакциями не было выявлено антител к элделумабу. Частота выраженных лабораторных отклонений была сопоставима в разных группах лечения.

4. Обсуждение

В этом 11-недельном, фазе IIb, индукционном исследовании с диапазоном доз при ЯК средней и тяжелой степени, частота ремиссий на 11-й неделе для элделумаба в дозах 15 и 25 мг/кг не была значительно выше по сравнению с плацебо, а исследование не достигло своей первичной конечной точки. 11-недельный индукционный период, вероятно, имел достаточную продолжительность для оценки частоты ремиссии при ЯК, и маловероятно, что дальнейшее продление конечной точки исследования привело к другому исходу. Увеличение продолжительности исследования на момент внесения поправок было подтверждено частичной шкалой Мейо с течением времени для обеих доз элделумаба, которая достигла плато на 78-й день.Субъекты, рандомизированные до внесения поправки для увеличения продолжительности исследования, не были включены в первичный анализ эффективности и, следовательно, маловероятно, что это привело к какой-либо систематической ошибке в результатах исследования.

В течение 11-недельного индукционного периода большее количество пациентов в группах лечения элделумабом, чем в группе плацебо, достигли клинического ответа, тогда как скорость заживления слизистой оболочки была сопоставима в трех группах. Кроме того, при применении элделумаба наблюдалось значительное улучшение качества жизни по сравнению с плацебо.Влияние элделумаба на биомаркеры воспаления было непостоянным; элделумаб приводил к большему снижению концентрации кальпротектина в фекалиях по сравнению с исходным уровнем по сравнению с плацебо, но не наблюдалось различий в изменении концентрации вчСРБ в сыворотке между группами лечения.

В соответствии с наблюдениями в других исследованиях воспалительных заболеваний кишечника, 15,25,26,27 эффективность была более устойчивой у пациентов, ранее не получавших анти-ФНО. Среди пациентов, получавших иммунодепрессанты, частота ремиссий была выше у пациентов, получавших элделумаб в дозе 25 мг/кг, чем в других группах лечения, тогда как частота клинического ответа и заживления слизистой оболочки была выше у пациентов, получавших любую дозу элделумаба по сравнению с плацебо.Сопутствующее применение иммунодепрессантов, по-видимому, не увеличивало экспозицию элделумаба до такой степени, которая могла бы объяснить более высокую эффективность, наблюдаемую в этой подгруппе. Скорее, более высокие показатели эффективности при применении элделумаба и сопутствующих иммунодепрессантов могли быть связаны с механистическим синергизмом, что требует дальнейшего изучения.

Плацебо Показатели ремиссии, ответа и заживления слизистой оболочки были высокими [9,6%, 31,3% и 27,7% соответственно] и могли быть снижены за счет центрального чтения эндоскопии, чтобы предотвратить вариабельность оценок между исследовательскими центрами; тем не менее, текущие результаты были сопоставимы с показателями плацебо, о которых сообщалось в других недавних исследованиях индукционной терапии при ЯК. 15,28,29 Мета-анализ показал, что частота ремиссии и ответа на плацебо сильно различается при ЯК и зависит от факторов, включающих страну, в которой проводилось исследование, продолжительность исследования, количество посещений, а также строгость и объективность конечных точек исследования. 30,31 Механизмы, определяющие географические различия в ответе на плацебо, остаются неясными, 28 , хотя в текущем исследовании небольшие размеры выборки в региональных анализах эффективности могли привести к случайным различиям в ответе на плацебо.В настоящем исследовании пациенты из Восточной Европы имели самые низкие показатели ремиссии и ответа на плацебо и самые большие размеры эффекта. Больший размер эффекта мог быть частично обусловлен более высоким процентом пациентов, получающих сопутствующие иммунодепрессанты в Восточной Европе. Эти данные свидетельствуют о том, что контроль факторов, влияющих на плацебо-ремиссию и частоту ответа, при соответствующем дизайне исследования может повысить чувствительность в исследованиях ЯК. Интересно, что пациенты в Восточной Европе также продемонстрировали самые высокие показатели клинической ремиссии по сравнению с другими регионами при оценке в недавнем исследовании этролизумаба в качестве индукционной терапии при ЯК, хотя эта разница не достигла статистической значимости из-за небольшого числа пациентов из Восточной Европы. 32

Это было мощное исследование фазы IIb, разработанное с целевым воздействием лекарственного средства для эффективности на основе более раннего исследования. Целевая C minss , равная 100 мкг/мл, была достигнута в обеих группах элделумаба во время индукционного периода, и увеличение C minss было приблизительно пропорциональным дозе. Анализ воздействия-реакции показывает, что оптимальное воздействие [т.е. связанное с наивысшей эффективностью] было достигнуто при тестировании доз от 15 до 25 мг/кг. Несмотря на то, что целевое воздействие было достигнуто и элделумаб продемонстрировал признаки активности, он не показал надежной эффективности, несмотря на тщательно продуманный дизайн исследования.

Лечение элделумабом хорошо переносилось, и не было выявлено новых сигналов безопасности по сравнению с завершенным исследованием ЯК. 21 Частота инфекций была немного выше в группе элделумаба 25 мг/кг по сравнению с группами элделумаба 15 мг/кг и плацебо, хотя частота серьезных инфекций не различалась между группами лечения. Настоящее исследование подтвердило сигнал безопасности острой инфузионной реакции; Реакции средней и тяжелой степени чаще возникали в группе, получавшей высокие дозы элделумаба, и чаще встречались в начале схемы лечения.

В заключение, это 11-недельное индукционное исследование не достигло своей основной конечной точки более высокой клинической ремиссии при применении элделумаба по сравнению с плацебо. Тем не менее, наблюдалась постоянная тенденция, указывающая на активность элделумаба, которая измерялась клиническим ответом, качеством жизни и снижением уровня биомаркера фекального кальпротектина; хотя были несоответствия через фармакокинетические параметры. Эффективность элделумаба была более выражена в подгруппах пациентов, ранее не получавших анти-ФНО или получавших сопутствующие иммунодепрессанты.Новых проблем с безопасностью не возникло.

Финансирование

Это исследование спонсировалось компанией Bristol-Myers Squibb. Спонсор исследования также отвечал за дизайн исследования, проведение исследования и анализ данных. Помощь в редактировании этой рукописи была предоставлена ​​Джейн Брайант, доктором философии, из Caudex, и финансировалась Bristol-Myers Squibb.

Конфликт интересов

WS получила оплату за консультации от Abbott, ActoGeniX NV, AGI Therapeutics Inc., Alba Therapeutics Corp., Albireo, Alfa Wassermann, Amgen, AM-Pharma BV, Anaphore Inc., Astellas, Athersys Inc., Atlantic Healthcare Ltd, Aptalis, BioBalance Corp., Boehringer-Ingelheim, Bristol-Myers Squibb, Celgene, Celek Pharmaceuticals, Cellerix SL, Cerimon Pharmaceuticals, ChemoCentryx, CoMentis Inc., Cosmo Technologies, Coronado Biosciences, Cytokine Pharmasciences, Eagle Pharmaceuticals Inc., EnGene Inc., Eli Lilly, EnteroMedics Inc., Exagen Diagnostics Inc., Ferring Pharmaceuticals, Flexion Therapeutics Inc., Funxional Therapeutics Ltd, Genzyme Corp., Gilead Sciences, Given Imaging, GlaxoSmithKline, Human Genome Sciences , Ironwood Pharmaceuticals, Janssen Pharmaceutical Research & Development, LLC, KaloBios Pharmaceuticals, Lexicon Pharmaceuticals, Lycera Corp., Meda Pharmaceuticals Inc., Merck Research Laboratories, Merck Serono, Millennium Pharmaceuticals, Nisshin Kyorin Pharmaceuticals, Novo Nordisk, NPS Pharmaceuticals, Optimer Pharmaceuticals, Orexigen Therapeutics Inc., PDL Biopharma Inc., Pfizer, Procter and Gamble, Prometheus Laboratories, ProtAb Ltd. , Purgenesis Technologies Inc., Relypsa Inc., Roche, Salient Pharmaceuticals, Salix Pharmaceuticals Inc., Santarus Inc. [дочерняя компания Salix Pharmaceuticals Inc.], Schering Plough, Shire Pharmaceuticals, Sigmoid Pharma Ltd, Sirtris Pharmaceuticals Inc., SLA Pharma UK Ltd, Targacept Inc., Teva Pharmaceuticals, Therakos Inc., Tilliotts Pharma AG, TxCell SA, UCB Pharma, Viamet Pharmaceuticals Inc., Vascular Bioogenics Ltd, Warner Chilcott UK Ltd и Wyeth; исследовательские гранты от Abbott Laboratories, Bristol-Myers Squibb, Genentech, GlaxoSmithKline, Janssen Pharmaceutical Research & Development, LLC, Millennium Pharmaceuticals, Novartis, Pfizer, Procter and Gamble, Shire Pharmaceuticals и UCB Pharma; оплата лекций/контор спикеров от Abbott Laboratories, Bristol-Myers Squibb и Janssen Pharmaceutical Research & Development, LLC.J-FC был консультантом или членом консультативного совета для AbbVie, ABScience, Amgen, Bristol-Myers Squibb, Celltrion, Danone, Ferring, Genentech, Giuliani SPA, Given Imaging, Janssen, Immune Pharmaceuticals, Medimmune, Merck & Co., Millennium. Pharmaceuticals Inc., Neovacs, Nutrition Science Partners Ltd., Pfizer Inc., Prometheus Laboratories, Protagonist, Receptos, Sanofi, Schering Plough Corporation, Second Genome, Shire, Takeda, Teva Pharmaceuticals, Tigenix, UCB Pharma, Vertex, Dr. August Wolff ГмбХ и Ко; и в качестве спикера для AbbVie, Ferring, Janssen, Merck & Co., Nutrition Science Partners Ltd и Takeda. SG получала гонорары за консультации и/или лекции от компаний AbbVie, Shire, Pfizer, Bristol-Myers Squibb, Janssen и Merck; работал в консультативном комитете или экспертной группе компаний AbbVie и Merck; и получил исследовательскую поддержку от AbbVie. BS получила гонорары за консультационную деятельность в качестве члена консультативного совета компаний AbbVie, Bristol-Myers Squibb, Forest Research Institute, Janssen Research and Development, Luitpold Pharmaceuticals, Millennium Pharmaceuticals, Pfizer, Salix, Shire, Takeda и Vedanta Biosciences.GD получил финансирование для работы в качестве спикера, консультанта или члена консультативного совета для AbbVie, Entera Health, Forest/Ironwood, Salix и Takeda; и получил исследовательскую поддержку от AbbVie, Bristol-Myers Squibb, Coronado Biosciences, Genentech, Janssen, Johnson & Johnson, Takeda и Millennium. XH получил финансирование для консультативной деятельности в качестве члена консультативного совета от AbbVie, Baxter, Fresenius Kabi, Nestlé Health Sciences и Takeda, а также для образовательной деятельности от AbbVie, ARARD, Mayoli-Spindler, MSD, Nestlé Health Sciences, Norgine, Нутриция и Вифор.Р.Л. был спикером и/или членом консультативного совета компаний AbbVie, Aspen, Ferring, Hospira, Janssen и Takeda. ББ выступал в качестве спикера, консультанта и/или члена консультативного совета в компаниях AbbVie, Amgen, AstraZeneca, Boehringer Ingelheim, Bristol-Myers Squibb, Celltrion, Ferring, Genentech, Gilead, Janssen, Millennium, Qu Biologics, Pfizer, Robarts Clinical. Триал, Шире и Такэда. TU получил исследовательскую поддержку от Genentech и выступал в качестве консультанта для Takeda и Janssen. PL был спикером и/или членом консультативного совета для AbbVie, EGIS, Falk Pharma GmbH, Ferring, Hospira, Kyowa Hakko Kirin Pharma, Mitsubishi Tanabe Pharma Corp., MSD, Pharmacosmos и Takeda; и получил исследовательские гранты от AbbVie, MSD и Hospira. WR выступал в качестве спикера, консультанта и/или члена консультативного совета для Abbott Laboratories, AbbVie, Aesca, Amgen, AM Pharma, Aptalis, Astellas, AstraZeneca, Avaxia, Bioclinica, Biogen Idec, Bristol-Myers Squibb, Cellerix, Chemocentryx, Celgene, Centocor, Danone Austria, Elan, Falk Pharma GmbH, Ferring, Galapagos, Genentech, Grünethal, Janssen, Johnson & Johnson, Kyowa Hakko Kirin Pharma, Lipid Therapeutics, Millennium, Mitsubishi Tanabe Pharma Corp., MSD, Novartis, Ocera, Otsuka, PDL, Pharmacosmos, Pfizer, Procter & Gamble, Prometheus, Robarts Clinical Trial, Schering-Plough, SetPoint Medical, Shire, Takeda, Therakos, Togenix, UCB, Vifor, Yakult, Zyngenia и 4SC . L-AX является сотрудником Bristol-Myers Squibb и владеет акциями Bristol-Myers Squibb. AL ранее был сотрудником Bristol-Myers Squibb и владеет акциями Bristol-Myers Squibb.

Простое резюме

1. Введение

Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК) являются одной из самых серьезных проблем со здоровьем во всем мире, по данным ВОЗ.Язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона (БК) являются двумя основными типами ВЗК [1]. ВЗК стало глобальной проблемой здравоохранения, затрагивающей миллионы пациентов [2]. ЯК характеризуется накоплением нейтрофилов в слизистой оболочке толстой кишки и образованием микроабсцессов, которые вызывают воспаление слизистой оболочки и язвы [3]. Перепроизводство активных форм кислорода (АФК) вызывается хроническим воспалением, которое связывают с развитием рака толстой кишки [4]. Окислительный стресс играет видную роль в патогенезе ЯК посредством образования АФК, инфильтрации нейтрофилов и секреции провоспалительных цитокинов [5].Наиболее распространенными цитокинами, участвующими в патогенезе ЯК, являются фактор некроза опухоли (TNF)-α, интерлейкин (IL-1β) и интерлейкин (IL)-6 [6].

Перекисное окисление липидов вызывается дисбалансом между окислительным стрессом и антиоксидантными системами при ВЗК, что может нарушать антиоксидантную способность клеток, приводя к выраженному воспалению слизистой оболочки кишечника и прогрессированию ЯК [7,8]. Клинически было обнаружено, что АФК и формы азота (RNS) избыточно вырабатываются у пациентов с колитом, что приводит к ПОЛ мембран и разрушению ДНК и тканевых белков [9].Nrf2, фактор 2, связанный с ядерным эритроидным 2, является важнейшим фактором транскрипции, который способствует клеточному гомеостазу за счет повышения экспрессии генов антиоксидантов и, следовательно, противодействует образованию АФК и провоспалительному ответу при ВЗК [10]. ЯК связан с подавлением сигнального пути Keap1/Nrf2 и экспрессией их генов-мишеней [11]. При воздействии окислительного стресса комплекс KEAP1-Nrf2 изолирует неактивный Nrf2 в цитоплазме, который затем перемещается в ядро ​​и опосредует экспрессию антиоксидантных генов путем связывания с элементами антиоксидантного ответа (ARE), такими как NAD(P)H хинонредуктаза. 1 (NQO1), глутатион-s-трансферазу (GST) и гемоксигеназу (HO-1) [12].Следовательно, фармакологическая активация пути Nrf2/ARE может быть потенциальным вариантом лечения ЯК.

Неспецифический язвенный колит, вызванный уксусной кислотой (АК), является широко используемой моделью на животных, которая точно имитирует патогенез колита у человека. Эта модель характеризуется инвазией воспалительных клеток в ткань кишечника, массивным некрозом тканей слизистой и подслизистой оболочек, отеком, расширением сосудов и изъязвлением подслизистой оболочки [13].

Что касается целевой популяции, в нескольких исследованиях указывалось на влияние лекарственно-индуцированного колита, связанного с препаратами, часто назначаемыми для лечения сердечно-сосудистых и других связанных заболеваний, такими как нестероидные противовоспалительные препараты.Кроме того, пациенты, получающие химиотерапию, более подвержены развитию язвенного колита [14]. Поэтому рекомендуются дальнейшие исследования по применению миконазола в качестве превентивной стратегии развития язвенного колита в этих случаях, а также комбинированной терапии с сульфасалазином, который используется для лечения ревматоидного артрита, язвенного колита и болезни Крона и вероятно развитие нежелательных побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта [15].

Миконазол, (±)-1-(2-(2,4-дихлорбезилокси)-2-(2,4-дихлорфенил)этил)-1H-имидазол, является противогрибковым препаратом, принадлежащим к семейству препаратов, называемых азолами. семья [16]. Миконазол является противогрибковым препаратом, который фармакологически ингибирует стеролдеметилазу и продукцию клеточной стенки, присоединяясь к специфическому для грибка сайту связывания, препятствуя биосинтезу эргостерола [17]. Его использовали в качестве адъювантной терапии для снижения смертности у онкологических больных с нейтропенией [18]. Кроме того, миконазол проявляет защитные свойства против окислительного стресса, а также химиопрофилактические свойства при раке молочной железы и мочевого пузыря посредством активации пути Nrf2 [19].Эти данные указывают на то, что миконазол может быть одним из подходящих кандидатов для противодействия язвенному колиту после инъекции уксусной кислоты (АК). Таким образом, это исследование было разработано для оценки эффективности миконазола против АК, вызванного язвенным колитом у крыс, и изучения некоторых задействованных механизмов.

2. Материалы и методы 2.1. Животные

Получено одобрение протокола экспериментов на животных Комитетом по этике медицинских исследований Национального исследовательского центра Египта (номер разрешения: MREC-44121).Около сорока двух взрослых самцов крыс Sprague Dawley весом 150–200 г были приобретены в Центре животных Национального исследовательского центра Египта. Животных содержали в стандартных клетках в условиях, свободных от патогенов, и содержали при контролируемой комнатной температуре и при нормальных циклах темно-световой. Животным давали стандартный корм (коммерческий гранулированный корм от Al-Marwa for Animals Feed Manufacturing, Каир, Египет) и воду без ограничения. Крысам давали возможность адаптироваться к этим условиям в течение 2 недель перед началом экспериментального протокола.Эксперименты проводились в соответствии с Национальными правилами защиты животных и Институциональным комитетом по этике животных (IAEC).

2.2. Лекарства и химикаты

Уксусная кислота (АК) была получена от CID Pharmaceutical Co. (Гиза, Египет). Миконазол был получен от Amriya Pharmaceutical Industries (Александрия, Египет), а сульфасалазин был приобретен от Minapharm Co. (Каир, Египет). Все остальные реагенты были высшей степени чистоты и аналитической чистоты. Наборы для твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) для определения ФНО-α, ИЛ-6, ИЛ-10, С-реактивного белка (СРБ), малонового диальдегида (МДА), супероксиддисмутазы (СОД) и восстановленного глутатиона (GSH) были приобретено у R&D Systems, Inc.(Миннеаполис, Миннесота, США).

2.3. Индукция колита

Колит вызывали введением 2 мл 4% АК в прямую кишку через полиуретановую трубку для энтерального питания (диаметром 2 мм), введенную на глубину 4,5 см. Для предотвращения подтекания раствора крыс удерживали в положении Тренделенбурга на протяжении всей ректальной инстилляции и в течение 1 мин после инстилляции [20].

2.4. Схема эксперимента

После периода акклиматизации крыс разделили на шесть групп (семь крыс в группе) следующим образом; 1-я группа служила в качестве отрицательного контроля крысам, которым перорально вводили носитель (DW).2-я группа представляла собой нелеченую группу, индуцированную язвенным колитом, в которой крысам интраректально вводили уксусную кислоту (АК) (2 мл 4% (об./об.) в 0,9% NaCl) на 8-й день. группы были распределены как крысы, индуцированные язвенным колитом, которым перорально вводили миконазол в дозах 20 и 40 мг/кг, соответственно, ежедневно в течение 7 дней, а затем интраректально вводили АК (2 мл 4% (об./об.) в 0,9 % NaCl) на 8-й день. 5-я группа представляла крыс, индуцированных язвенным колитом, которым перорально вводили сульфасалазин в качестве препарата сравнения (100 мг/кг/сут; перорально) в течение 7 дней, а затем интраректально вводили АК (2 мл 4% (об./об.) в 0.9% NaCl) на 8-й день. 6-я группа представляла собой крыс, индуцированных язвенным колитом, которым перорально вводили 20 мг/кг миконазола и сульфасалазина (50 мг/кг/день; перорально) в течение 7 дней, а затем внутримышечно вводили АК. ректально (2 мл 4% (об./об.) в 0,9% NaCl) на 8-й день.

2.4.1. Сбор образцов

Крыс анестезировали тиопенталом натрия (40 мг/кг) через 48 ч после внутрикишечной инстилляции уксусной кислоты. Сегменты толстой кишки были взяты, очищены от жировой ткани и промыты холодным физиологическим раствором, после чего был выполнен соответствующий срез толстой кишки для макроскопической оценки.Другие части были использованы для извлечения гомогенатов толстой кишки, которые были сохранены при -80 ° C для биохимических исследований, а третья часть сегментов толстой кишки была сохранена в 10% нейтральном забуференном формалине для гистологических и иммуногистохимических исследований.

2.4.2. Colonic Wet Weight Assay

Оценка степени отека и тяжести колита проводилась путем регистрации веса дистальных 8 см толстой кишки крыс [21]. Относительный вес толстой кишки каждой крысы рассчитывали в соответствии с El-Alfy et al.[22], используя следующую формулу: «Относительная масса органа (г) = [масса органа (г)/масса тела (г)] × 100». Также рассчитывали соотношение влажного веса и длины образца толстой кишки (г/см).

2.4.3. Оценка макроскопического повреждения толстой кишки

Для макроскопического исследования поражений слизистой оболочки ткани толстой кишки были разделены в продольном направлении. Макроскопические данные слизистой оболочки толстой кишки подсчитывали по шкале от 0 до 4 [23]: (0)

. В макроскопических данных изменений не было.

(1)

Эритема слизистых оболочек является единственным симптомом.

(2)

Наличие легкого отека слизистой оболочки, незначительное кровотечение или небольшие эрозии.

(3)

Кровоточащие язвы или эрозии, а также умеренный отек.

(4)

Некроз, отек и сильное изъязвление/эрозия ткани.

2.5. Оценка медиаторов воспаления толстой кишки

Уровни провоспалительного цитокина (ИЛ-6, ФНО-α), противовоспалительного цитокина (ИЛ-10) и С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови были проанализированы в гомогенатах толстой кишки с использованием наборов ELISA, согласно к инструкциям производителя.

2.6. Оценка маркеров окисления толстой кишки Содержание малонового диальдегида (МДА), активность супероксиддисмутазы (СОД) и восстановленная концентрация глутатиона (GSH) оценивались в соответствии с инструкциями производителя.

2.7. Количественная полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (RT-qPCR)

Тотальную РНК экстрагировали из образцов ткани толстой кишки с использованием реагента TRIzol (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc., Уолтем, Массачусетс, США), следуя инструкциям, предоставленным [24], и обрабатывали ДНКаза I (Invitrogen).Концентрацию и чистоту РНК оценивали с помощью УФ-спектрофотометра. Затем выполняли обратную транскрипцию с использованием набора для синтеза кДНК SuperScript и праймера oligo dT (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.). ПЦР в реальном времени проводили с использованием SYBR Green Master Mix (Thermo Fischer Scientific). Реакции амплификации КПЦР проводили следующим образом: 10 мин при 95°С, затем 40 циклов по 10 с при 95°С и 15 с при 56°С. Для каждой реакции количественной ПЦР применяли три повтора. Олигонуклеотидные праймеры, используемые для количественной ПЦР, перечислены в таблице 1.Кратность изменения относительной экспрессии мРНК генов рассчитывали по методу 2-ΔΔCt [25] после нормализации на β-актин.

2.8. Гистопатологическое исследование ткани толстой кишки

Собранные ткани толстой кишки фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 24 часов, промывали водопроводной водой, обезвоживали, очищали в ксилоле, готовили обычным образом для получения срезов толщиной 5–6 микрон, залитых в парафин, и окрашивали Окраска H&E для световой микроскопии [26]. Гистопатологическую систему оценки толстой кишки проводили по методике, описанной [27], в средней части толстой кишки для оценки зон воспаления, повреждения крипт, изъязвления и наличия отека, как описано в таблице 2, а затем суммировали предыдущие поражений подсчитано.

Для иммуногистохимии срезы толстой кишки разных групп депарафинизировали в ксилоле и регидратировали в спирте разной степени очистки [28,29]. Антигенный поиск и блокировку неспецифического фона проводили по методике Abu-Elala et al. [30]. Срезы толстой кишки трижды промывали трис-буферным солевым раствором (TBS), а затем инкубировали с одним из следующих первичных антител: кроличьи поликлональные антитела против INOS (ab15323, Abcam, Кембридж, Великобритания) в разведении 1:100; мышиное моноклональное антитело против COX2 (sc-19999, Santa Cruz Biotech, TX, USA) в соотношении 1:50; мышиное моноклональное антитело против каспазы-3 (sc-56053, Santa Cruz Biotech, Dallas, TX, USA) в соотношении 1:50.Первичную антисыворотку заменяли на 1 мг/мл BSA (Sigma, Омаха, Небраска, США) для предметных стекол с отрицательным контролем. Для удаления избытка антител выполняли три промывания TBS. Срезы тканей инкубировали с биотинилированными козьими антикроличьими и мышиными антителами (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) в течение 10 мин. Снова выполняли три промывки TBS для удаления избытка антител с последующей инкубацией с комплексом вторичных антител с пероксидазой хрена (Agilent DAKO, Санта-Клара, Калифорния, США).DAB (3,3-диаминобензидин) использовали в качестве хромогена для визуализации иммуноокрашенных клеток. Срезы ткани окрашивали гематоксилином Майера и монтировали. Экспрессию белков INOS, COX2 и Caspase-3 измеряли и анализировали в окрашенных областях в 7 случайных полях на группу с помощью программного обеспечения для анализа изображений (Image J, версия 1.46a, NIH, Bethesda, MD, USA) [31].

2.9. Статистический анализ

Все результаты выражены в виде средних значений ± стандартная ошибка. Весь анализ тканей был проведен на 7 образцах, за исключением анализа экспрессии генов, который был проведен на 5 образцах.Множественные сравнения групп были выполнены с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим тестом Тьюки при p ≤ 0,05, за исключением оценки поражений, которая проводилась с использованием теста Крускала-Уоллиса с последующим тестом Манна-Уитни. Статистические данные и графические представления были созданы с использованием программного обеспечения GraphPad prism ® (версия 6.00 для Windows, Сан-Диего, Калифорния, США).

3. Результаты 3.1. Миконазол снижает вес толстой кишки при колите, вызванном АК

Уксусная кислота (АК) повышает относительную массу толстой кишки по сравнению с группой отрицательного контроля и значительно увеличивает соотношение сырой массы/длины в группе ЯК, сравнимое с крысами отрицательного контроля.Лечение миконазолом (40 мг/кг/день), сульфасалазином и их комбинацией значительно снижало отношение сырой массы тела к длине тела по сравнению с группой с ЯК (таблица 3). В то же время лечение миконазолом в дозе 20 мг/кг/сутки не оказало существенного влияния на соотношение сырой массы и длины по сравнению с группой ЯК (табл. 3).

3.2. Миконазол ослабил макроскопические изменения при колите, вызванном AA

По сравнению с крысами из отрицательного контроля уксусная кислота вызывала тяжелое отечное воспаление в толстой кишке с гораздо более высокой макроскопической оценкой повреждения толстой кишки.Слизистая оболочка была изъязвлена, отечна и геморрагична (рис. 1, табл. 3). Между тем, группы, получавшие миконазол (20 и 40 мг/кг/день), сульфасалазин (100 мг/кг/день) и комбинированную терапию, заметно облегчили тяжесть макроскопического поражения по сравнению с группой ЯК (рис. 1). Кроме того, самый высокий защитный эффект был показан в группе комбинированного лечения. Макроскопически наименее пораженными группами были группы, получавшие миконазол 40 мг/кг/день и сульфасалазин 100 мг/кг/день, без заметной разницы между ними (рис. 1).

3.3. Миконазол снижает окислительный стресс при колите, вызванном АК

Содержание малонового диальдегида (МДА) определяли в качестве маркера перекисного окисления липидов в толстой кишке всех крыс. Уровень МДА толстой кишки был заметно повышен в группе ЯК по сравнению с контрольной группой (таблица 4). Однако предварительное лечение крыс миконазолом, сульфасалазином и комбинированная терапия показали заметное снижение содержания МДА в гомогенатах толстой кишки крыс по сравнению с группой ЯК. Содержание восстановленного глутатиона (GSH) и активность супероксиддисмутазы (СОД) были заметно снижены в группе с ЯК по сравнению с крысами из группы отрицательного контроля (таблица 4).Интересно, что ткани толстой кишки предварительно обработанных групп значительно восстановили содержание GSH и активность СОД по сравнению с группой ЯК. Улучшения этих параметров были значительными в группе комбинированного лечения среди групп, получавших предварительное лечение.

3.4. Миконазол подавляет провоспалительные и активирует противовоспалительные медиаторы при колите, индуцированном АА в провоспалительных цитокинах TNF-α и IL-6 в толстой кишке крыс по сравнению с группой отрицательного контроля (IL-10; TNF-α; IL-6; таблица 5).В то же время предварительное лечение миконазолом (40 мг/кг), сульфасалазином и их комбинацией значительно повышало уровень противовоспалительного цитокина ИЛ-10 и снижало продукцию провоспалительных цитокинов по сравнению с группой ЯК (ФНО-α; ИЛ -6), как показано в Таблице 5. Кроме того, между этими параметрами в комбинированной группе наблюдалась незначительная связь по сравнению с контрольной группой. Аналогичным образом, уровень ФНО-α заметно снизился в группе, получавшей сульфасалазин, по сравнению с контролем ЯК, с незначительной разницей по сравнению с контролем НЯ.Улучшение этих воспалительных медиаторов было значительно продемонстрировано в комбинированной группе среди других предварительно обработанных групп.

3.5. Миконазол повышает экспрессию Nrf2 и гемоксигеназы-1 (HO-1) и снижает экспрессию CRP при колите, индуцированном AA

Рисунок 2А-С). Оба препарата, миконазол и сульфасалазин, а также их комбинация, значительно улучшали уровни HO-1 и Nrf2 и значительно снижали уровни СРБ по сравнению с группой ЯК.По сравнению с группой отрицательного контроля не было существенной разницы в уровнях СРБ в группах сульфасалазина и комбинации.

3.6. Миконазол исправил гистопатологические изменения при колите, индуцированном АА

Гистопатологическое исследование толстой кишки в различных экспериментальных группах показало, что толстая кишка группы NC демонстрировала нормальную гистологическую структуру слизистой, подслизистой и мышечной оболочки (рис. 3А). Крипты толстой кишки были выстланы абсорбирующим столбчатым эпителием с многочисленными бокаловидными клетками, а собственная пластинка содержала несколько мононуклеарных воспалительных клеток.С одной стороны, в группе ЯК наблюдались выраженные гистопатологические изменения в виде типичной картины язвенного колита (рис. 3Б-Г). Имелись множественные участки эрозий и изъязвлений с полным некрозом слизистой, подслизистой и мышечной оболочки стенки кишки. Язвы находились на разных стадиях заживления; часть язв полностью замещена грануляционной тканью, в подслизистой основе образуются пиогранулемы. Оставшаяся слизистая и подслизистая оболочка толстой кишки демонстрировали значительное искажение крипт с апоптозом и некрозом эпителия выстилки с заметной потерей бокаловидных клеток, а собственная пластинка и подслизистая оболочка были массивно инфильтрированы нейтрофилами и мононуклеарными клетками с явным подслизистым отеком и кровоизлиянием.С другой стороны, группы, получавшие MIC-40, SSZ-100 и MIC + SSZ, продемонстрировали значительное снижение образования язв, повреждения слизистой оболочки и воспаления толстой кишки, вызванного АК, в то время как MIC-20 не оказал значительного эффекта, как показано на рисунке 3E- ЧАС. Группа MIC-20 показала некроз некоторых крипт с умеренной воспалительной реакцией в слизистой и подслизистой оболочках (рис. 3Е). Однако в группах, получавших MIC-40 и MIC + SSZ, наблюдалась минимальная воспалительная реакция в слизистой оболочке и подслизистой оболочке без каких-либо признаков разрушения тканей (рис. 3F, H).Кроме того, крипты имели нормальную архитектуру с интактными вакуолизированными бокаловидными клетками и менее апоптозным или некротизированным столбчатым эпителием. Что касается гистопатологической оценки поражений язвенного колита, группа ЯК показала значительное повышение всех параметров, а также общий балл по сравнению с группой НЦ, а группы МИК-40, SSZ-100 и МИК + SSZ показали значительное снижение такие параметры по сравнению с группой ЯК (рис. 4). Лечение MIC-20 не оказало существенного влияния ни на один из исследованных параметров по сравнению с группой ЯК (рис. 4).

3.7. Миконазол подавляет экспрессию белков INOS, COX2 и каспазы-3 при колите, индуцированном AA

. Как показано на рисунке 5, INOS экспрессируется в воспалительных клетках с небольшой экспрессией в эпителии выстилки. COX2 экспрессировался в основном в эпителиальной выстилке и мононуклеарных воспалительных клетках в собственной пластинке (рис. 6). Каспаза-3 экспрессировалась в эпителии выстилки и внутренних криптах и ​​оценивалась в неязвенных областях (рис. 7). Значительное повышение экспрессии белков INOS, COX2 и каспазы-3 было зарегистрировано в группе, получавшей UC, по сравнению с группой NC, а значительное снижение этих экспрессий наблюдалось в группах MIC-20, MIC-40, SSZ-100 и Группы MIC + SSZ по сравнению с группой UC (рис. 8).

3.8. Миконазол активирует передачу сигналов Nrf2/HO-1 при колите, вызванном AA

Учитывая, что активация передачи сигналов Nrf2/HO-1 может ослаблять аллергические реакции, связанные с язвенным колитом [32,33], мы обнаружили экспрессию генов, связанных с путем Nrf2, в ткани толстой кишки с помощью RT-qPCR. Согласно результатам (рис. 9), экспрессия мРНК Nrf2 в толстой кишке значительно ухудшилась в группе модели НЯК примерно до 31% по сравнению с нормальной контрольной группой. Предварительное лечение MIC, SSZ-100 или их комбинацией значительно обращало вспять индуцированное AA снижение экспрессии Nrf-2 в толстой кишке.Интересно, что в группах, получавших MIC-20, MIC-40, SSZ-100 и MIC + SSZ, экспрессия Nrf2 значительно повышалась до 91%, 148%, 128% и 134% соответственно от его нормального уровня экспрессии. (Рисунок 9).

Аналогичным образом экспрессия HO-1, Keap-1 и NOQ1 в толстой кишке значительно снизилась в группе с ЯК примерно до (0,22), (0,14) и (0,35) их нормальной экспрессии соответственно (рис. 9). С другой стороны, полученные результаты показывают, что предварительная обработка MIC, SSZ-100 или их комбинацией эффективно повышала экспрессию мРНК Nrf2-зависимых генов у крыс с ЯК, где уровень экспрессии HO-1 увеличивался на 53%, 79%. , 130% и 139% от нормальной экспрессии в группах, подвергнутых обработкам MIC-20, MIC-40, SSZ-100 и MIC + SSZ, соответственно (фиг. 9).Группы MIC-20, MIC-40, SSZ-100 и MIC + SSZ показали повышенный уровень экспрессии Keap-1 на 43%, 146%, 115% и 145% и NOQ1 на 49%, 69%, 58% и 56% от нормальных уровней экспрессии соответственно (фиг. 9).

4. Обсуждение

Язвенный колит (ЯК) классифицируется как одна из основных форм ВЗК, в инициировании и развитии которого участвуют иммунные, генетические факторы и факторы окружающей среды [34]. Доступные в настоящее время средства для лечения ВЗК, включая кортикостероиды, 5-аминосалицилаты и иммунодепрессанты, не совсем эффективны, а также имеют несколько побочных эффектов, которые ограничивают их долгосрочное использование [35].Следовательно, существует очевидная потребность в новых терапевтических агентах, обладающих большей эффективностью и меньшими побочными эффектами. Настоящее исследование впервые выявило защитную роль миконазола против экспериментально индуцированной модели язвенного колита путем активации пути Keap1/Nrf2.

Действительно, миконазол является азольным противогрибковым средством широкого спектра действия против кандидоза, с некоторой активностью также против грамположительных бактерий [17]. Имеется несколько сообщений о влиянии противогрибковых препаратов на морфологию слизистой оболочки кишечника, микробиоту кишечника и иммунитет [36].Поэтому необходимы дальнейшие исследования для оценки влияния противогрибкового миконазола на микробиоту кишечника и иммунную систему.

Несколько исследований показали, что модель НЯК на крысах с помощью интраректальной инъекции АК может точно имитировать патогенез и гистологические особенности ЯК человека [37,38]. В этом исследовании масса толстой кишки крыс заметно увеличилась после интраректальной инъекции АК, и это увеличение сопровождалось тяжелыми макроскопическими поражениями и изъязвлением ткани толстой кишки.Кроме того, АА вызывал сильное воспаление толстой кишки с отеком, что сопровождалось значительным макроскопическим подсчетом поражений толстой кишки по сравнению с отрицательным контролем. Как было подтверждено гистопатологическим исследованием, после введения АК были выявлены ухудшение состояния, изъязвление, эрозия, гиперемия, воспалительная клеточная инфильтрация, некроз и гиперплазия бокаловидных клеток всей слизистой оболочки толстой кишки.

Результаты текущего исследования согласуются с данными, полученными в предыдущих исследованиях с использованием модели крысиного язвенного колита, индуцированного АК [39,40].Было показано, что предварительное лечение миконазолом в двух различных дозах (20 или 40 мг/кг/день) в течение 7 дней восстанавливает гистопатологическое ухудшение ткани толстой кишки по сравнению с крысами, страдающими колитом, и заметно снижает тяжесть общей оценки поражения по сравнению с крысами, страдающими колитом. группа UC (рис. 1).

Одним из ключевых процессов, вовлеченных в патофизиологию ВЗК, является окислительный стресс, который является одной из иммунорегуляторных переменных [41]. Было признано, что перепроизводство как АФК, так и АФК, а также дисбаланс между образованием и элиминацией этих свободных радикалов через антиоксидантную систему связаны с инициацией и прогрессированием ЯК [5].Окислительный стресс приводил к снижению уровня антиоксидантов ферментативной супероксиддисмутазы (СОД) и неферментативного глутатиона (GSH), которые вызывают перекисное окисление липидов [42]. GSH считается поглотителем свободных радикалов или ингибитором клеточного окисления, а истощение содержания GSH является маркером окислительного стресса [43]. Соответственно, снижение GSH напрямую приводило к повышению уровня MDA, конечного продукта перекисного окисления липидов, что приводило к деградации полиненасыщенных липидов [44]. СОД улавливает свободные радикалы и контролирует окислительный стресс различными путями [45].СОД обладает способностью превращать супероксидные радикалы в пероксиды водорода (H 2 O 2 ) и молекулярный кислород, а каталаза и пероксидазы способны превращать H 2 O 2 в воду [46]. В текущем исследовании на модели колита наблюдался повышенный окислительный стресс, что подтверждалось повышенным уровнем МДА, а также сниженным содержанием GSH и активностью СОД в тканях толстой кишки. Эти результаты согласуются с предыдущими выводами [9,47].В настоящем исследовании предварительное лечение миконазолом, особенно высокой дозой, или его комбинацией с сульфасалазином крыс, вызванных АК, было способно защитить слизистую оболочку за счет снижения уровня МДА и восстановления содержания GSH и активности СОД в тканях толстой кишки. В соответствии с выводами настоящей работы, антиоксидантная эффективность миконазола была показана в предыдущем исследовании [19], который показал, что защитные свойства миконазола могут быть связаны с активацией Nrf2 путем стимуляции экспрессии антиоксидантных генов и ингибирования генерация свободных радикалов.

Кроме того, миконазол значительно ингибировал окислительный стресс и воспалительные реакции в толстой кишке после введения АК дозозависимым образом. Эффект предварительного лечения миконазолом (40 мг/кг/день) был аналогичен эффекту группы, получавшей сульфасалазин. Интересно, что комбинированная терапия миконазолом и сульфасалазином оказывала более выраженное защитное действие на ЯК, чем применение каждого из препаратов по отдельности.

О значительной роли воспалительных цитокинов в патогенезе ЯК сообщалось в многочисленных исследованиях.Дисбаланс между секрецией провоспалительных (ФНО-α, ИЛ-6, ИЛ-12, ИЛ-23 и др.) и противовоспалительных цитокинов стимулирует повреждение ткани толстой кишки и, как следствие, прогрессирование ЯК. При иммунологической дисрегуляции фактор некроза опухоли-α (TNF-α), известный как медиатор воспаления, продуцировал и стимулировал апоптоз, что, в свою очередь, приводило к секреции IL-1 и IL-6 [48]. У пациентов с ЯК имеются убедительные доказательства того, что повышенный уровень ИЛ-6 в сыворотке играет роль в запуске и поддержании воспалительной реакции кишечника [49].Провоспалительные цитокины (ФНО-α, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-9, ИЛ-13 и ИЛ-33) играют важную роль в усилении прогрессирования ЯК, в то время как противовоспалительные цитокины (трансформирующие факторы роста – β, IL-10 и IL-37) играют заметную роль в его подавлении. ИЛ-10 представляет собой плейотропный иммунорегуляторный цитокин, играющий ключевую роль в противовоспалительном эффекте, связанном с восстановлением тканей [50]. Изучение этих иммуновоспалительных путей ЯК может привести к разработке новой терапии, которая может быть более эффективной [51].Данные текущего исследования показывают, что уровни воспалительных маркеров, включая IL-6, TNF-α и сывороточный С-реактивный белок, были значительно повышены в тканях толстой кишки экспериментальных крыс с ЯК. Кроме того, уровень IL-10 был значительно снижен после индукции ЯК по сравнению с крысами из отрицательного контроля. Эти данные свидетельствуют о том, что толстая кишка группы ЯК была воспалена, что было подтверждено результатами гистопатологического исследования. Кроме того, лечение миконазолом значительно снижало повышенные уровни воспалительных маркеров, включая IL-6, TNF-α и сывороточный С-реактивный белок, и увеличивало выработку противовоспалительного цитокина IL-10 в тканях толстой кишки крыс с ЯК.Эти результаты согласуются с предыдущими исследованиями [52], которые подтвердили, что миконазол обладает противовоспалительной активностью. Параллельно с результатами исследования [53] было обнаружено, что лечение миконазолом может снижать степень продукции провоспалительных цитокинов и повышать уровень цитокина IL-10 в мышиной модели повреждения седалищного нерва [53]. Кроме того, миконазол подавлял нейровоспаление в мышиной модели потери памяти, вызванной ЛПС, путем ингибирования активации NF-κB, фактора транскрипции, который стимулирует секрецию воспалительных цитокинов, таких как TNF-α, IL-1β и IL-6, в мозг [54].

Примечательно, что основным регулятором эндогенной антиоксидантной системы является Nrf2, который защищает клетки от агентов окислительного стресса [55]. В нормальных условиях Nrf2 связывается с Kelch-подобным ECH-ассоциированным белком 1 (keap1), который ингибирует транслокацию Nrf2 в ядро ​​[56]. Следовательно, избыточное образование свободных радикалов диссоциирует комплекс keap1-Nrf2, и свободный Nrf2 перемещается в ядро, где он связывается с малыми белками Maf (sMaf) [57]. Гетеродимер связывается с генами-мишенями элемента антиоксидантного ответа (ARE), способствуя экспрессии нескольких генов, связанных с антиоксидантами, включая GSH, SOD и HO-1 [56].Исходя из этого, Nrf2 является ключевым медиатором системы антиоксидантной защиты, а также важной мишенью для лечения ЯК [58,59]. Гемоксигеназа-1 (HO-1) экспрессируется в эпителиальных клетках, чтобы ослабить провоспалительные факторы и окислительный стресс в моделях кишечных заболеваний [60]. В этом исследовании сигнальный путь Nrf2/HO-1 был значительно снижен в группе ЯК и активизирован в группах, получавших предварительное лечение, что указывает на то, что сигнальный путь Nrf2/HO-1 участвует в облегчении патогенеза ЯК.Эти результаты согласуются с предыдущими выводами [19], которые показали, что миконазол может способствовать активации Nrf2 через неканонический путь p62-KEAP1, а также посредством ингибирования экспрессии белка Keap1. Лечение миконазолом, особенно в высоких дозах, или комбинированная терапия миконазолом с сульфасалазином была более эффективной в усилении пути Nrf2/HO-1.

Подводя итог, можно сказать, что ослабление воспалительных реакций в группах, получавших миконазол, может быть связано с активацией пути Nrf2.Эта гипотеза была подтверждена в предыдущих исследованиях [11, 61], которые показали, что активация Nrf2 может ослаблять воспалительную сигнализацию посредством ингибирования транслокации NF-κB в ядро. Многочисленные исследования подтвердили критическую роль фактора транскрипции NF-κB как в иммунных, так и в воспалительных реакциях. Таким образом, активированные факторы транскрипции NF-κB стимулируют экспрессию генов многочисленных цитокинов, включая IL-6 и TNF-α [62,63]. Таким образом, мы подтвердили, что миконазол, особенно в высоких дозах, и его комбинация с сульфасалазином уменьшали окислительный стресс и воспаление при экспериментальном ЯК за счет активации пути Nrf2.

В целом, текущее исследование убедительно доказывает потенциальную защиту, обеспечиваемую MIC против вызванного АК UC у крыс, благодаря его антиоксидантному и противовоспалительному действию. Тем не менее, ограничения нашего исследования включают использование только двух доз МИК, поэтому отсутствует минимальное количество доз, которое могло бы быть полезным для целей клинического исследования и для расчета доза-реакция. Во-вторых, в этом расследовании не учитывался временной курс управления МПК. Кроме того, то, как MIC регулирует экспрессию белков, связанных с путем Nrf2, также нуждается в дальнейшем изучении.

Постдокторант | EURAXESS Польша

Исследовательская группа биоинформатики (под руководством Павла Лабая, PhD, DSc) в Малопольском центре биотехнологии Ягеллонского университета (Краков, Польша) ищет целеустремленного постдока, который хочет применять методы науки о данных для понимания микробной внутренней -общественная синергия. Вакансия доступна с начала 2022 г. при финансировании проекта как минимум до декабря 2024 г.
Проект

Расширенная характеристика микробиома путем использования синергии микробов внутри сообщества — для лучшего понимания Exposome

В последние годы все больше внимания уделяется экспозоме человека и тому, как она влияет на здоровье и благополучие человека.Экспозома, понимаемая как набор воздействий окружающей среды человека (дополняющих геном) с момента зачатия и далее, включает: общую внешнюю среду, конкретную внешнюю среду и факторы внутренней среды. Во всех трех категориях живой частью экспосомы являются разные микробиомы, т.е. городской микробиом, микробиом кожи, микробиом кишечника.

Во всем мире предпринимается много усилий для изучения множества различных типов микробиомов и извлечения информации непосредственно из метагеномов.Такие проекты, как MetaHIT, Human Microbiome Project или American Gut Project/Microsetta Initiative, привели к росту информации о множестве заболеваний, связанных с кишечником, таких как ожирение, воспалительный синдром кишечника или язвенный колит. Аналогичное понимание было получено в рамках проектов, посвященных микробиоте кожи (Проект микробиома кожи человека), микробиому окружающей среды (Проект микробиома Земли) , микробиомам городов и метро (Международный консорциум MetaSUB ) и многим другим.Однако лишь немногие из них также считали одной из основных целей установление взаимодействия микроорганизмов между собой, с окружающей средой и с человеком.

Микробиомы представляют собой разнообразные, динамичные и сложные части экспосом, которые имеют решающее значение для определения здоровья. Состав этих биомов по своей природе тесно связан с экологической нишей, которую они занимают, и, таким образом, синергия и анергия являются здесь доминирующими факторами. Таким образом, цель проекта состоит в том, чтобы расширить наши знания о взаимодействиях внутри и между функциями, возникающими в трех взаимодополняющих взглядах на микробиом: взгляд через призму композиционного/таксономического профиля (т.т. е. обилие микробных видов), просмотр через призму функциональных возможностей, связанных с изучаемыми явлениями, и просмотр с использованием переменных, полученных непосредственно из образцов (т. е. последовательностей, полученных из образца). Где, в последнем представлении, не используются предварительные знания о микробных геномах и последовательностях функциональных белков.

В частности, мы хотим исследовать синергетические взаимодействия между признаками и тем самым выйти за рамки доступных в настоящее время подходов, которые плохо подходят для анализа метагеномных данных, поскольку они не используют существование этих отношений.

В частности, мы будем исследовать синергию в трех случаях использования, связанных с экспозомами:

• Обнаружение аномалий в микробиомах – идентификация резистомов для исследований УПП,

• Стратификация пациентов – использование профилей микробиоты для установления состояния здоровья пациента,

• Расчет расстояний между микробиомами – предсказание географического происхождения образца.

Предлагаемый тип анализа в контексте выбранных вариантов использования может привести к открытию новых функций или новых видов, имеющих отношение к интересным явлениям.

Роль

Ваша работа будет сосредоточена на биоинформатическом анализе имеющихся и недавно полученных данных метагеномного микробиома в определенных случаях использования, чтобы использовать синергию микробов внутри сообщества. Вы будете тесно сотрудничать с нашими партнерами из Белостокского университета, ответственными за разработку решения для многомерного выбора признаков (MDFS), способного выявлять синергизм микробов. Вы также будете нести ответственность за последующий анализ на основе машинного обучения и поддержку в контекстуализации результатов.Вы будете тесно сотрудничать с аспирантами и другими членами группы, участвующими в этом проекте.

Поскольку данные поступают от различных объединений/консорциумов/проектов, вы будете также активно сотрудничать с этими , особенно с международным консорциумом MetaSUB.

Позиция будет финансироваться программой Национального научного центра SONATA BIS 10.

ПОЖАЛУЙСТА, ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ: из-за правил NCN мне не разрешено нанимать постдоков, получивших докторскую степень в Ягеллонском университете.Для получения дополнительной информации о причине этого или поделиться своим мнением, пожалуйста, свяжитесь с агентством по электронной почте: [email protected]

Группа

Мы — молодая биоинформатическая группа, чьи исследовательские интересы охватывают методологические достижения в науке о данных и их применение для решения актуальных биомедицинских задач с упором на развитие транскриптомики и метагеномики на пути к точной медицине.

Таким образом, мы играли ведущую роль в консорциуме SEQC, координируемом U.S. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) за сравнительный анализ крупномасштабных технологий профилирования экспрессии генов, включая RNA-Seq. В настоящее время на втором этапе SEQC мы изучаем комплементарность целевой РНК-Seq и секвенирования генома для точной диагностики рака.

Мы также принимаем активное участие в Международном консорциуме MetaSUB, где мы занимаемся внедрением экологических метагеномных анализов в здравоохранении, а также обеспечением возможности использования анализа микробиома окружающей среды в судебно-медицинских целях.

Мы также активно сотрудничаем с местными и международными исследовательскими группами и компаниями, чтобы развивать и проводить передовые, открытые и воспроизводимые исследования, которые будут служить обществу.

Институт

Малопольский центр биотехнологии (MCB) является ведущим биотехнологическим институтом Южной Польши и одним из самых перспективных биомедицинских институтов в Центральной/Восточной Европе. Он является частью Ягеллонского университета, и его превосходство основано на трех основных областях: вычислительной биологии, структурной биологии и биологии растений.Первая область, вычислительная биология, в последнее время переживает бурный рост, с недавним началом нескольких групп, включая микробную геномику (д-р Рафал Мостовой), структурную и функциональную геномику (д-р Томаш Костик) и транскриптомику/метагеномику (я) . Институт также получит прибыль от взаимодействия с близлежащей промышленностью (Ардиген). Микробиом – это зарождающаяся область в Центральной / Восточной Европе, и в настоящее время Краков, особенно MCB с 3 группами, ориентированными на различные аспекты исследований микробиома, становятся лидерами в этой области.

MCB предлагает международную среду для совместной работы с доступом к современной инфраструктуре как в экспериментальной, так и в вычислительной биологии. В MCB работает множество исследовательских групп мирового класса, в том числе Исследовательская группа Макса Планка в области структурной биологии (Glatt Lab), Группа бионауки и биохимии (Heddle Lab), Группа молекулярной биологии растений (Yamada Lab) или Группа вирусогенетики и вирусологии (Pyrć). лаборатории).

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.