Противовирусный препарат при ротовирусе: Портал муниципальных образований РТ

Содержание

Противовирусные средства Фармстандарт-Лексредства Арбидол - «Арбидол при лечении ротавируса. История течения болезни с арбидолом и без. Что такое ротавирус и как с ним бороться? »

Как то у нас зашел спор среди родителей в чате нашего детского садика. Вопрос был наболевшим - детки только начали ходить в сад и без конца болели и не просто болели, а с осложнениями. Ситуацию усугубляли недолеченные дети в группе. И суть спора была в том - как и где можно подцепить вирус. одни говорил что только напрямую от больного человека, другие утверждали, что можно заразиться и в подъезде и в лифте.

Поэтому я залезла в инет и почитала. А что же такое вирус, и как им можно заразиться. Итак, краткое резюме на тему - а что такое вирус?

ЧТО ТАКОЕ ВИРУС

Вирус - это нечто среднее между живым и неживым организмом, это цепочка ДНК в оболочке. Вне живого организма они не могут размножаться. Попасть в организм они могут несколькими способами: воздушно-капельным, контактным, через кровь. Попав в организм, они ищут излюбленное местечко (например вирус паротита поражает заушные железы, респираторные вирусы - горло, нос. Найдя его, они внедряются в клетку и там уже размножаются. Потом клетка погибает.

Многие вирусы, вызывающие респираторные заболевания, выделяются с чиханием и кашлем и могут оставаться оставаться в воздухе и на поверхностях некоторое время.

Некоторые могут даже курсировать по воздушному пространству, передвигаясь через вентиляционные отверстия. Поэтому вполне можно заразиться и в лифте и в подъезде. Примеров на моем опыте было достаточно, например когда ребенок сидя дома и гуляя только на улице, умудрился заболеть, хотя дома никто не болел. Или когда все дети в одном подъезде заболели ротавирусом, хотя вместе не пересекались.

Лечение вируса в основном симптоматическое, то есть в основном организм справляется сам, а мы лишь облегчаем его состояние - снимаем жар, облегчаем кашель, пшикаем в нос и т п....

Помимо этого принимаем иногда всякие иммуномодулирующие, противовирусные и прочее.

Про иммуномодуляторы и мое отношение к ним я подробно расписала тут и тут. Кому интересно, прошу)

Арбидол относится же к противовирусным препаратам. Читала, что вирус уничтожить лекарствами крайне сложно, ведь вирус прячется в клетках, а туда не залезешь...

Википедия свидетельствует, что Арбидол – это противовирусное лекарство. В организме он подавляет активность вирусов гриппа А и В, а также коронавируса, ассоциированного с тяжелым респираторным синдромом.

Благодаря особому механизму воздействия препарат специфически влияет на вирусы, демонстрирует интерферон индуцирующую активность (то есть способствует продукции в организме интерферона). Активное вещество обеспечивает стимуляцию гуморальных и клеточных реакций иммунитета, что способствует повышению устойчивости к воздействию вирусных инфекций. Препарат, с учетом его механизма действия, является ингибитором слияния. Он взаимодействует с гемагглютинином вируса, не допуская слияния липидной оболочки вируса и мембран клеток.

Арбидол уменьшает частоту проявления осложнений, которые связаны с воздействием вирусных инфекций, а также понижает частоту проявления обострений бактериальных болезней с хроническим течением.

Арбидол уменьшает выраженность состояния общей интоксикации и симптомов, уменьшает продолжительность течения заболевания. Отмечается его умеренное иммуномодулирующее влияние.

 

ЧТО ТАКОЕ РОТОВИРУС

Вирусы бывают самы разные, это и всякие аденовирусы, короновирусы, вирусы гриппа, кори, паротита, СПИДА и прочие ужасы.

Отличаются они тем, как и что поражают в первую очередь. Некоторые атакуют горло и нос, другие устремляются в легкие, желудок, кишечник, нервные клетки и прочее....вирус СПИДА атакует иммуные клетки. Ротовирус поселяются в клетках эпителия кишечника и в желудке.

Ротовирус характеризуется поносом, рвотой, повышением температуры тела. Иногда может добавиться кашель и насморк. Возникает внезапно, до этого ребенок может весело бегать и прыгать и вот через минуту ему уже хреново...Количество и тяжесть симптомов у всех людей разная, и определяется уровнем иммунитета человека. Дети до 6 лет болеют чаще и тяжелее. Взрослые почти не болеют либо болеют в легкой форме. Иммунитет к нему вырабатывается, но не надолго, на несколько месяцев. Существуют вакцины от ротовируса.

*******************

Итак научная часть изложена, теперь к делу. Заболел мой сын этим ротовирусом. Вначале мы даже не поняли, что он заболел. Как уже говорилось выше, возникает вирус на фоне внешнего благополучия. Началось все с рвоты. Мы решили, что это что то с желудком - съел не того. Но когда на следующий день его снова вырвало, плюс к тому он потерял аппетит - мы поняли, что он заболел.

С этого момента я начала ему давать Арбидол и Зиртек (как аллергику, при болезни ему всегда даю антигистаминное). Так как в аптеке не было сиропа, взяла таблетки. Давала по 4 таблетки в день. так как ребенок таблетки глотать еще не умеет, то растирала их, капала воду и так давала. Честно, они в таком виде гадость, приготовьтесь чем то запивать и заедать.

Также давала периодически мотилиум в качестве противорвотного. Когда началась диарея, то пару раз давала энтерефурил и 5 дней пропивали линекс форте. Так как диарея при ротовирусе носит вирусный характер, то пить антибиотики нет смысла. Энтерефурил является противомикробным препаратом узкого спектра действия, на собственную микрофлору не влияет, его часто назначают при ротовирусе, для избежания присоединения бактериальной инфекции.

Но на своем опыте могу сказать, что нам вполне хватило Линекса для восстановления своей микрофлоры.

Теперь по дням и подробно.

СУББОТА - день 1-ый

Первый раз вырвало, других симптомов кроме маленького аппетита не было

ВОСКРЕСЕНЬЕ - день 2-ой

Вырвало второй раз, уже стал капризничать, появилась слабость, постоянно ложился поспать и полежать. Стала давать Арбидол и мотилиум. Были еще эпизоды рвоты. Обильное питье и покой. При ротовирусе больше осложнений идет от обезвоживания, чем от самого вируса, поэтому пить, пить и пить через не хочу маленькими глоточками. Почти не ест. При ротовирусе, теряется аппетит, слизистая желудка и кишечника воспалена, пища толком не может усваиваться. Не надо заставлять кушать, пусть лучше посидит голодный, так организм быстрее справится с болезнью. Проверено на опыте. Обязательно только питье. При болезни необходимо соблюдать диету, есть только каши на воде, простые супы, хлеб. Никакой молочки и сырых овощей, фруктов, сладостей, сдобы.

ПОНЕДЕЛЬНИК - день 3-ий

Один раз жидкий стул, больше не рвало, появились температура, колебалась от 37 до 37,8 С. Добавила Линекс и Энтерефурил (пару раз давала) Температуру не сбивала.

ВТОРНИК - день 4 -ый, не рвет и не поносит, держится температура, не выше 38. Дополнительно заболеваю я)

СРЕДА - день 5-ый бегает как антилопа, стоит на ушах

Допиваем арбидол и линекс.

Наша подружка по группе в тот же день, что и мы, заболела ротовирусом. Симптомы были один в один, даже эпизоды рвоты были одинаковы по количеству, мы с ее мамой созванивались и уточняли, кто в каком состоянии Но только ее мама стала давать ей оцилококциллум. В среду, когда у нас уже не осталось никаких симптомов, ее дочка еще кашляла и сопливилась. У сына же ни кашля ни соплей не было. В следующий вторник мы выходим на елку в садик здоровые, а она еще кашляет...иммунитет у них практически одинаковый, мы болеем даже чаще и тяжелее.

Я тоже разболелась, но ничего почти не принимала, так как кормлю грудью дочку, болела по длительности столько же, но добавился тоже кашель и сопли, которые вылечила Мукалтином и промыванием носа.

ВЫВОД

Арбидол помог сыну быстро справиться с болезнью без осложнений. Сын часто болеет с осложнениями, поэтому в начале болезни всегда даю либо Эргоферон либо Арбидол, я считаю это лучше, чем потом давать антибиотики.

********************************************

Теперь о самом препарате. Выпускается он в упаковках по 10 и 20 таблеток. Также бывает в виде сиропа для детей. Если берете для профилактики - то можно 10 взять, если для лечения - то 20 шт в пачке.Нам как раз потребовалось 20 таблеток. Противовирусные пьют минимум 5 дней, даже если исчезли симптомы.

ИНСТРУКЦИЯ

Всегда внимательно читаю инструкции к препаратам. И не только раздел показания и дозировку, но и все остальное. Я конечно не медик, но знание, что это за препарат не раз мне помогало.

В составе арбидола идет препарат умифеновир. Также расписана его химическая формула, ому интересно.

Расписано его действие на вирусы.

Показания к применению

Дозировка. На курс потребуется приличное количество таблеток. Побочные действия. Арбидол относят к малотоксичным препаратам, и из побочек на него могут только иногда возникнуть аллергические реакции. И хотя арбидол не рекомендован детям до 3 лет, но его как раз то и дают детям и до 3 лет. На этом я убедилась, когда мой сын еще маленький подхватил ротовирус и врач прописала как раз арбидол. Вначале я этого не знала, пошла в аптеку, купила препарат и, начав читать инструкцию, (вот она привычка читать ее в любом случае!) обнаружила это указание. Телефона врача у меня не было. Стала звонить своей золовке, фармацевту, спрашивать у нее. Она меня успокоила, сказав, что его спокойно дают детям в детской больнице, когда там начинается тоже ротовирус.

При беременности возможен прием, но только со второго и третьего триместра и то - по назначению врача. При кормлению грудью противопоказан.

ИТОГИ

Выводы можете сделать сами. Сын пил арбидол и болел меньше недели, я и наша подружка не пили - и к болезни добавился кашель с насморком еще на неделю.

РЕКОМЕНДУЮ

*******************************

Спасибо, что дочитали до конца!

Будьте здоровы!

Добро пожаловать на мою страничку)

«Триазавирин» представлен на 4-й Российской конференции «МедХим-Россия 2019»

С 9 по 14 июня 2019 года в Екатеринбурге состоялась 4-я Российская конференция по медицинской химии с международным участием «МедХим-Россия 2019», на которой были представлены результаты исследований в области применения оригинального противовирусного препарата «Триазавирин» в лечении и профилактике вирусных заболеваний. Основной целью этой международной серии конференций является глубокий анализ актуальных разработок, новых подходов и передовых технологий в области медицинской химии и разработки лекарств.

 

Торжественное открытие конференции на площадке Уральского федерального университета им. первого Президента России Б.Н. Ельцина совпало с юбилеем д.х.н., академика РАН, научного руководителя Института органического синтеза УрО РАН Чупахина О.Н. – разработчика оригинального класса азолоазинов, первый представитель которого (противовирусный препарат «Триазавирин») был успешно внедрен в реальную клиническую практику несколько лет назад. На открытии с докладом «Уральская школа химиков-органиков. Основные вехи. День настоящий» выступил чл.-корр. РАН, д.х.н., профессор Салоутин В.И., в котором представил «Триазавирин» как один из препаратов, созданных уральской химической школой совместно с Институтом гриппа Минздрава РФ и ООО «Завод Медсинтез». Препарат эффективен для лечения и профилактики вирусных инфекций на любой стадии заболевания, включая вирус гриппа любой этиологии. Уникальность препарата состоит в новом механизме противовирусного действия - он влияет на причину заболевания, а не на иммунитет.

Разработка институтов академий наук – РАН и РАМН была удостоена самой престижной премии в области фармацевтики Prix Galien Russia. Химической частью разработки занимались Уральский политехнический институт и Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН. Последующие стадии масштабирования технологии, клинические испытания и коммерциализация были проведены на базе Уральского центра биофармацевтических технологий (резидента Фонда «Сколково»). «Триазавирин» является ярким примером доведения российской научной идеи до производства и выхода препарата на фармацевтический рынок.

- Исследование было сделано не только учеными из университета, но и благодаря тому, что нами создана единая научная школа с Институтом органического синтеза. Молекула была получена, а далее следовал очень важный период – его исследования в связке с «Научно-исследовательским институтом гриппа», после чего проходили органические исследования в медицинских учреждениях. Важным моментом было найти инвестора, кто готов был вложиться в то, чтобы эта новая молекула была признана важным и малотоксичным средством для лечения вирусных инфекций, в частности, в настоящее время «Триазавирин» производится на «Заводе Медсинтез». И, безусловно, в дальнейшем есть все предпосылки для того, чтобы мы развивали связку с ведущими предприятиями реального сектора экономики, - говорит директор Химико-технологического института Вараксин М.В.

Препарат «Триазавирин» обладает широким спектром противовирусной активности, о чем в своем докладе «Внедрение в реальную медицинскую практику и опыт применения препарата Триазавирин в отношении РНК-геномных вирусных инфекций» на пленарных лекциях рассказал к.м.н., доцент кафедры инфекционных болезней и клинической иммунологии ГБОУ ВПО УГМУ Минздрава России Веревщиков В.К. По результатам клинических исследований препарат «Триазавирин» помогает даже при запоздалом начале лечения ОРВИ и гриппа, улучшает самочувствие уже в первые сутки, снижает вероятность осложнений; быстро купирует клинические признаки ротавирусной инфекции и предотвращает утяжеление заболевания; эффективно действует в отношении РНК-вирусных инфекций (лихорадка Денге, серозный менингит, клещевой энцефалит). Сокращает время до выздоровления и продолжительность клинических симптомов (интоксикации, лихорадки, катаральные явления) вне зависимости от времени начала приема препарата. Лечение хорошо переносится больными и не сопровождается развитием нежелательных явлений.

Благодаря прошедшей конференции было показано, что на Урале созданы прочные связи научно-исследовательских и образовательных учреждений, работающих в области органического синтеза и медицинской химии, с производственными фармацевтическими предприятиями, что позволяет решать стратегическую задачу обеспечения населения отечественными высокоэффективными лекарственными средствами.

 

Афлюдол инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Afludol таб., покр. пленочной оболочкой, 50 мг: 10, 20 или 40 шт. (47236)

Таблетки, покрытые пленочной оболочкой от белого до белого с кремовым оттенком цвета, круглые, двояковыпуклые, шероховатые, на изломе от белого до белого с зеленовато-желтоватым или кремовым оттенком цвета.

1 таб.
умифеновира гидрохлорид (в форме умифеновира гидрохлорида моногидрат)50 мг

Вспомогательные вещества: лактозы моногидрат, повидон К25 (поливинилпирролидон среднемолекулярный), кросповидон, кремния диоксид коллоидный (аэросил), магния стеарат.

Состав оболочки: Опадрай II белый [лактозы моногидрат, гипромеллоза, диоксид титана, макрогол 4000 (полиэтиленгликоль 4000)].

10 шт. - упаковки контурные ячейковые (1) - пачки картонные.
10 шт. - упаковки контурные ячейковые (2) - пачки картонные.
10 шт. - упаковки контурные ячейковые (3) - пачки картонные.
10 шт. - упаковки контурные ячейковые (4) - пачки картонные.


Таблетки, покрытые пленочной оболочкой от белого до белого с кремовым оттенком цвета, круглые, двояковыпуклые, шероховатые, на изломе от белого до белого с зеленовато-желтоватым или кремовым оттенком цвета.

1 таб.
умифеновира гидрохлорид (в форме умифеновира гидрохлорида моногидрат)100 мг

Вспомогательные вещества: лактозы моногидрат, повидон К25 (поливинилпирролидон среднемолекулярный), кросповидон, кремния диоксид коллоидный (аэросил), магния стеарат.

Состав оболочки: Опадрай II белый [лактозы моногидрат, гипромеллоза, диоксид титана, макрогол 4000 (полиэтиленгликоль 4000)].

10 шт. - упаковки контурные ячейковые (1) - пачки картонные.
10 шт. - упаковки контурные ячейковые (2) - пачки картонные.
10 шт. - упаковки контурные ячейковые (3) - пачки картонные.
10 шт. - упаковки контурные ячейковые (4) - пачки картонные.

ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ АРБИДОЛА В ЭПИДЕМИЧЕСКОМ ОЧАГЕ РОТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ | Малышев

1. Основы санитарной вирусологии / Г.А. Багдасарян [и др.]. – М.: Медицина, 1977. – 200 с.

2. Букринская А.Г. Ротавирусная инфекция / А.Г. Букринская, Н.М. Грачева, В.И. Васильева – М.: Медицина, 1989. – 223 с.

3. Васильев Б.Я. Острые кишечные заболевания. Ротавирусы и ротавирусная инфекция / Б.Я. Васильев, Р.И. Васильева, Ю.В. Лобзин – Серия «Мир медицины». – СПб.: Издательство «Лань», 2000. – 272 с.

4. Ворошилова М.К. Энтеровирусные инфекции человека / Ворошилова М.К. – М.: Медицина, 1979.- –360 с.

5. Лобзин Ю.В. Этиология и клинико-эпидемио логическая характеристика вирусных кишечных антропонозов в войсках / Ю.В. Лобзин, П.И. Огарков, В.В. Малышев, А.В. Семена // Воен.-мед. журн. – 2002. – Т. 323, №11. – С. 52–58.

6. Машилов В.П. Ротавирусный гастроэнтерит у взрослых. / В.П. Машилов // Эпидемиология и инфекционные болезни. –1997. – №5. – С. 51–54.

7. Малышев В.В. Клинико-эпидемиологическая и молекулярная характеристика ротавирусной инфекции у взрослых / В.В. Малышев, А.В.Семена // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. – 2004. – №2–3. – С. 87.

8. Малышев В.В. Молекулярно-эпидемиологическая характеристика вспышки ротавирусной инфекции в организованном коллективе / В.В. Малышев, А.В. Семена // Клиническая микробиология и антимикробная терапия. – 2005. – Т.7. – №2. – Пр.1. – С. 41.


Эффективность использования препарата Арбидол при ротавирусной инфекции у детей

Эффективность использования препарата Арбидол при ротавирусной инфекции у детей

Лёвин Д.Ю.

Кадура А.А.

Научный руководитель: д.м.н., проф. Михайлова Е.В.

ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава РФ

Кафедра детских инфекционных болезней

В России частота ротавирусного гастроэнтерита среди острых кишечных инфекций составляет 7-35%, а среди детей до 3-х лет превышает 60%. Вопросы терапии ротавирусных диарей по-прежнему остаются актуальными. Учитывая накопленные данные о персистенции ротавируса после перенесенной ротавирусной инфекции в катамнезе, необходим поиск препаратов, которые могут повысить эффективность элиминации ротавируса.

Цель нашего исследования заключалась в оценке эффективности применения препарата Арбидол  при ротавирусной инфекции у детей в возрасте 3-7 лет.

Было проведено комплексное клинико-лабораторное наблюдение за 70 детьми в возрасте 3-7 лет, находившихся на стационарном лечении в Областной детской инфекционной клинической больнице г.Саратова с диагнозом: Кишечная инфекция ротавирусной этиологии. 40 детей (1-ая группа) в составе терапии получали Арбидол в комбинации с базовым лечением. Группа сравнения (30 детей) получали только базовую терапию. Противовирусный препарат назначали перорально в дозировке 50 мг 4 раза в день в течение 5 дней. Лабораторную диагностику ротавирусной кишечной инфекции, а также оценку элиминации ротавирусов на фоне проводимой терапии выполняли посредством детекции антигенов ротавируса методом иммуно-ферментного анализа в остром периоде и во время лечения.

Установлено, что при средне-тяжелой форме заболевания клинический эффект препарата связан с уменьшением длительности диарейного синдрома (на 1,1 сутки меньше, чем в группе сравнения) (p<0,05). Лекарственное средство повлияло на продолжительность интоксикационного синдрома (достоверно меньше на 1,2 суток, чем в группе сравнения) (p<0,05). При средне-тяжелой форме ротавирусной инфекции на фоне применения противовирусного препарата процент положительных результатов детекции антигенов ротавируса по окончании терапии снижался в 3 раза (p<0,05), при тяжелой форме также была отмечена положительная динамика элиминации ротавируса.

Таким образом, включение в комплексную терапию препарата Арбидол способствует интенсификации лечения кишечных инфекций ротавирусной этиологии у детей: более быстрому регрессу симптомов интоксикации, достоверному уменьшению продолжительности диарейного синдрома, снижению длительности персистенции ротавируса (при средне- тяжелой форме в 3 раза, при тяжелой форме в 1,3 раза).

Как справиться с изжогой после ротавируса?| Мульти-пробиотик БАК-СЕТ

Ротавирусная инфекция — острое заболевание, которое по распространенности уступает только ОРВИ. Его возбудителем является ротавирус. Он сохраняет жизнеспособность на различных предметах и продуктах питания в течение 1 месяца.

Ротавирус может попасть в организм с зараженной водой, молочными продуктами, немытыми овощами и фруктами. Ротавирусной инфекции больше подвержены дети. В 80% случаев болезнь у них развивается в острой форме. У взрослых заболевание может протекать бессимптомно или со смазанной симптоматикой. К основным признакам инфицирования ротавирусом относят:

  • тошноту и рвоту,
  • диарею,
  • схваткообразные боли и урчание в животе,
  • насморк и боль в горле.

В терапии используют противовирусные препараты широкого спектра действия, иммуномодуляторы, жаропонижающие средства. При длительном приеме они могут вызвать дисбактериоз, изжогу и другие побочные эффекты.

Изжога после ротавируса обычно вызвана нарушением баланса кишечной флоры. Чувство жжения в пищеводе возникает при воспалении слизистых оболочек органов ЖКТ. Чтобы решить эту проблему, нужно вовремя принять меры.

Правильное питание и пробиотики для борьбы с изжогой

Изжога после лечения ротавируса может сохраняться несколько дней. Улучшить самочувствие поможет диета. В меню стоит включать:

  • рисовую и манную каши на воде без добавления соли и сливочного масла,
  • нежирные сорта мяса в отварном виде,
  • рыбу на пару без кожи и костей,
  • паровой омлет из 1-2 яиц,
  • вареные или печеные овощи — картофель, брокколи, кабачки, морковь.

Устранить изжогу и другие симптомы дисбактериоза после ротавируса помогут пробиотические препараты. Они содержат полезные бактерии для кишечника, которые:

  • уничтожают патогенную флору,
  • стимулируют рост лакто- и бифидобактерий.

При выборе препарата обращайте внимание на его состав. Пробиотики из линейки БАК-СЕТ содержат только безопасные штаммы лакто- и бифидобактерий. БАК-СЕТ Беби, обогащенный пребиотиком, можно давать младенцам с рождения, а БАК-СЕТ Форте предназначен для детей от 3 лет, взрослых, беременных и кормящих женщин.

Курсовой прием пробиотиков БАК-СЕТ способствует улучшению пищеварения, устранению изжоги и других признаков дисбактериоза, восстановлению нормальной микрофлоры кишечника. Спрашивайте пробиотики в аптеках. Перед применением ознакомьтесь с инструкцией.

Все статьи по теме

Чем ротавирус отличается от норовируса? | Вопрос-ответ

Ротавирусную и норовирусную инфекции в народе принято называть просто «кишечным гриппом». Отличить их могут только специалисты после соответствующих анализов, поскольку симптомы у обоих вирусов, которые, кстати, к гриппу отношения не имеют, практически одинаковые. "АиФ" выяснили у врача-инфекциониста, в чем разница между ротавирусом и норовирусом и как их лечить.

Кто чаще заболевает этими видами вирусов?

Ротавирусной инфекцией болеют в основном дети от шести месяцев до пяти лет. Особенно заражению подвержены дети до трех лет, у взрослых болезнь протекает со слабовыраженными симптомами. На долю же норовирусной инфекции приходится 5-27% среди всех кишечных инфекций.

Какие симптомы у ротавируса и норовируса?

Симптомы болезней очень похожи. «Они проявляются высокой температурой, выраженной интоксикацией, слабостью, болями в животе, вздутием, жидким стулом, тошнотой, многократной рвотой», — говорит врач-инфекционист София Русанова.

Инкубационный период при ротавирусе — от 15 часов до 7 суток. При ротавирусной инфекции человек часто испытывает схваткообразные боли внизу живота, у него могут начаться рвота (обычно она прекращается к концу первого дня острого периода) и диарея. Также могут присутствовать головная боль, слабость в мышцах, головокружение, у детей — лихорадка. Ротавирусная инфекция проявляется быстро: максимального развития симптомы достигают через 12-24 часа, а в целом болезнь может длиться от 3 до 10 дней.

При норовирусе первые симптомы проявляются спустя 15-48 часов после заражения. Это также острая диарея, тошнота и рвота, головная боль, могут быть еще лихорадка и симптомы ОРЗ. Заболевание начинается с резкого подъема температуры, затем появляются рвота и диарея. Признаки заболевания проходят спустя 12-72 часа.

В чем разница между ротавирусом и норовирусом?

Ротавирус — это род вирусов с двунитевой сегментированной РНК, принадлежащий к семейству реовирусов. Внешний вид вирусов напоминает колесо с широкой ступицей, короткими спицами и очерченным ободком, из-за чего они и получили такое название (от латинского «rota» — «колесо»). Всего известно девять видов ротавирусов, однако человек может инфицироваться лишь тремя: А, В и С.

Норовирус, в свою очередь, — одна из разновидностей энтеровирусов. Впервые он был выделен учеными из США в городе Норфолке в 1972 году, в связи с чем и получил название «норфолкский агент».

Как поясняет врач-инфекционист София Русанова, неспециалист ротавирус и норовирус не различит, поскольку проявляются они схожим образом. Однако у этих вирусов немного отличаются пути передачи. Норовирус передается фекально-оральным путем (часто посредством употребления немытых фруктов и овощей), контактно-бытовым путем, а также водным. В случае с ротавирусом это тоже фекально-оральный путь, то есть через грязные руки, предметы обихода и пищевые продукты. Возможна передача ротавируса воздушно-капельным путем.

Как лечить ротавирус и норовирус?

По словам врача, лечение у обоих вирусов одинаковое: симптоматическое. «Кишечная инфекция, если она вызывается вирусом, в 90% случаев лечится симптоматически. Я, как инфекционист, никогда не назначаю противовирусные препараты, если вижу, что передо мной пациент с ротавирусной или норовирусной инфекцией», — говорит Русанова.

В случае если пациент не может сам пить, назначается инфузионная терапия: внутривенно-капельное введение солевых растворов. Если человек может употреблять воду, то ему дают специальные солевые растворы, также могут назначаться абсорбенты. «Обоими вирусами чаще всего болеют маленькие дети, однако и взрослые, которые за ними ухаживают, тоже могут заразиться», — предупреждает врач.

Тиазолиды, новый класс противовирусных агентов, эффективных против ротавирусной инфекции, нацелены на морфогенез вирусов, ингибируют образование вироплазмы

Ссылки

1 января 1984 · Исследование вирусов · BL PetrieM K Estes

1 сентября 1996 г. Общая вирусология · I AfrikanovaO Burrone

11 августа 1998 г. · Журнал инфекционных заболеваний · F SupertiM G Santoro

20 ноября 1998 г. · Журнал общей вирусологии · I AfrikanovaO R Burrone

12 марта 1999 г. · The Journal of Общая вирусология · E FabbrettiO R Burrone

13 сентября 2000 г. · Международный журнал клинической фармакологии и терапии · J BroekhuysenJ F Rossignol

3 сентября 2003 г. · Вирусология · Mariela A Cuadras, Harry B. Greenberg

3 марта 2004 г. · The Журнал общей вирусологии · Кэтрин Эйхвальд, Оскар Р. Буррон,

, 29 июня 2004 г. · Журнал вирусологии, · Линн С. Сильвестри, Джон Т. Паттон,

,

, 16 октября 2004 г. · Экспертный обзор противоинфекционной терапии · Клинтон A White

16 апреля 2005 г. · Журнал общей вирусологии · Мишела Кампанья Оскар Р Буррон

20 августа 2005 г. · Kidney International.Приложение · Санджай К. Агарвал

11 июля 2006 г. · Ланцет · Жан-Франсуа РоссиньольМ Габриэлла Санторо

4 августа 2006 г. · Исследования рака · Антонио РоссиМ Габриэлла Санторо

4 ноября 2006 г. · Пищевая фармакология и терапия Эль-Гохари

13 декабря 2006 г. · Противомикробные препараты и химиотерапия · Пол С. Хоффман, Майкл Г. Мораш

22 декабря 2006 г. · Журнал вирусологии · Ф АрнольдиО Р. Буррон

25 сентября 2007 г. · Антивирусные исследования · Брент Э. Корба Жан-Франсуа Rossignol

19 февраля 2008 г. · Журнал тропической педиатрии · GJ Ebrahim

9 октября 2008 г. · Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки · Синди И Джао, Адриан Салик

17 декабря 2008 г. · Международный Журнал инфекционных заболеваний: IJID: официальное издание Международного общества инфекционных заболеваний · Карлос Дж. Теран Патриция Вильярроэль

13 января 2009 · Гастроэнтерология · Жан-Франсуа Россиньоль Эммет Б. Кифф

июн 26, 2009 · Журнал вирусологии · Камило Аяла-Бретон Сусана Лопес

30 июля 2009 · Журнал биологической химии · Жан Франсуа РоссиньольМ Габриэлла Санторо

12 августа 2009 · Гастроэнтерология · Менаше Элазар Джеффри С Гленн

· Журнал медицинской химии · Луис Педро С. де КарвальоКарл Натан

30 октября 2009 г. · Журнал иммунологии: Официальный журнал Американской ассоциации иммунологов · Стефани Дж. ДеВитт-ОррКарен Л. Моссман

27 февраля 2010 г. · Журнал Биологическая химия · Антонио РоссиМ Габриэлла Санторо

5 января 2011 г. · Тенденции в микробиологии · Сара М. Макдональд, Джон Т. Паттон

1 января 2000 г. · Методы молекулярной медицины · Дж. Т. Паттон Д. Чен

28 октября 2011 г. · The Lancet Infectious Болезни · Жаклин Э. Тейт НЕИЗВЕСТНО Координируемая ВОЗ Глобальная сеть эпиднадзора за ротавирусами

24 января 2012 г. · Nature Reviews.Микробиология · Шейн Д. ТраскДжон Т. Паттон

25 января 2012 г. · Биохимический журнал · Клаудиа БрунеллиМ Габриэлла Санторо

17 мая 2012 г. Journal of Infectious Diseases · Лютер А. Бартельт, Ричард Л. Герран

16 февраля 2016 г. · Клеточная химическая биология · Беатрис МеркореллиАрианна Лореджиан

12 августа 2014 г. · Противовирусные исследования · Жан-Франсуа Россиньоль

28 июня 2014 г. · Вирусология · Омодель AshiruTerry D Butters

13 июля 2014 г. · Исследование вирусов · Ульрих Дессельбергер

11 октября 2014 г.

12 ноября 2016 г. · Вакцины и иммунотерапевтические препараты для человека · Марион С. Тиссера Джим П Баттери

3 июня 2016 г. · Научные доклады · Дарья ТрабаттониМарио Клеричи

18 января 2017 г. · Труды Национального Академия наук Соединенных Штатов Америки · Ф. Мэтью Кульманн, Стивен М. Беверли,

, 9 августа 2017 г. · Журнал по педиатрическим инфекционным заболеваниям · Тим Флерлаге, Габриэла Марон,

, 10 апреля 2018 г. · Будущая медицинская химия · Эндрю Стахульски, Жан-Франсуа,

10 ноября 2017 г. · Nature Reviews.Праймеры для болезней · Сью Э. Кроуфорд, Мэри К. Эстес,

, 17 ноября 2017 г. · Журнал вирусологии · Кэтрин Эйхвальд, Франческа Арнольди,

, 3 декабря 2014 г.

15 августа 2018 г. · Противомикробные препараты и химиотерапия · Вэнь Дангцювэй Пан

8 августа 2018 г. · Журнал инфекционных заболеваний · Яна Ван ДайкеДжоана Роша-Перейра

12 июля 2018 г. · Научные доклады · Сара ПьячентиниМ 3 января 2020 г. · Архив фармацевтических исследований Научные отчеты · KA YamamotoM R Soares

16 августа 2019 г. · Вирусы · Hongzhuan ZhouBing Yang

30 июля 2019 г. · International Journal of Antimicrobial Agents · MJ TohméL R Delgui

9000 2 5 февраля 2021 г. · Границы физиологии · Ханг Лян Фаньчжэн Мэн

12 декабря 2020 г. · Коммуникации в области биохимических и биофизических исследований · Сильвия СантополМ Габриэлла Санторо

16 марта 2021 г. · Письма по химической физике · Вирулентность · Упаян ПатраМамта Чавла-Саркар

13 мая 2021 г. · MBio · Мария Джульета Томе, Лаура Рут Дельги

22 мая 2021 г. · Эндрю В. СтахульскиПол М О'Нил

28 августа 2021 г. · Микроорганизмы · Нанси Сантос-Феррейра Джоана Роча-Перейра


(PDF) Тиазолиды, новый класс противовирусных агентов, эффективных против ротавирусной инфекции, нацеленных на морфогенез вирусных форм, ингибирование морфогенеза вирусов

Наконец, мы ранее сообщали об исследовании, которое

показало, что нитазоксанид может быть эффективным при лечении ротави-

русской диареи (6).Совсем недавно нитазоксанид был подтвержден как вариант лечения ротавирусной диареи

в рандомизированном контролируемом исследовании

у детей в возрасте от 28 дней до

24 месяца (36). Теперь мы описываем, что тиазолиды в концентрациях

, достигаемых в крови и кишечнике человека после стандартной пероральной дозы

(37), проявляют мощную противовирусную активность против ротавирусов

посредством нового механизма, нацеленного на ротавирус

. морфогенез.Взятые вместе, эти наблюдения показывают

, что нитазоксанид и его производные могут представлять новый класс противовирусных препаратов

, эффективных против ротавируса гастроэнтер-

itis.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим Франко Руджери (Istituto Superiore di Sanitá, Рим, Италия) за

, предоставивший человеческий ротавирус Wa-G1P [8], и Карла Конзельмана (Lud-

wig-Maximilians Universität, Германия) для Мюнхенского университета, Германия. BSR-T7 / 5 клеток. Мы,

, также благодарим Елену Романо и Пальму Маттиоли (Римский университет Тор

Вергата) за помощь в конфокальной микроскопии и системе визуализации DeltaVision

.

Это исследование было поддержано Romark Laboratories LC, Тампа, Флорида, компанией

, которая владеет правами интеллектуальной собственности на нитазокс-

анид, и Министерством университетских и научных исследований Италии

(MIUR; проекты PRIN ). Ф. Арнольди был частично поддержан грантом FIRB

от МИУР.

Ж.-Ф. Россиньол является сотрудником и держателем акций Romark Laborato-

ries, LC.

ССЫЛКИ

1.Траск С.Д., Макдональд С.М., Паттон Дж. Т.. 2012. Структурное понимание связи

сборки вириона и репликации ротавируса. Nat. Ред. Микро-

биол. 10: 165–177.

2. Эстес М.К., Капикян З.А. 2007. Ротавирусы, стр. 1917–1974. In Knipe DM,

Howley PM, Grifn DE, Lamb RA, Martin MA, Roizman B, Straus SE

(ed), Fields virology, 5th ed, vol 2. Lippincott Williams & Wilkins, Phila-

delphia, PA .

3. Куадрас MA, Гринберг HB.2003. Инфекционные частицы ротавируса используют

липидных рафтов во время репликации для транспорта на клеточную поверхность in vitro и в

vivo. Вирусология 313: 308 –321.

4. Виддоусон М.А., Брези Дж. С., Генч Дж. Р., Гласс Р. И.. 2005. Ротавирус

Болезнь

и ее профилактика. Curr. Opin. Гастроэнтерол. 21:26 –31.

5. Тейт Дж. Э., Бертон А. Х., Боски-Пинто К., Стил А. Д., Дуке Дж., Парашар Ю. Д.,

Координируемая ВОЗ Глобальная сеть эпиднадзора за ротавирусами. 2012. 2008

оценка всемирной смертности от ротавирусной инфекции среди детей младше

, чем за 5 лет до введения всеобщей ротавирусной вакцинации

Программы: систематический обзор и метаанализ.Lancet Infect. Дис.

12: 136 –141.

6. Россиньол Дж. Ф., Абу-Зекри М., Хусейн А., Санторо МГ. 2006. Эффект

нитазоксанида для лечения тяжелой диареи при ротавирусном гастроэнтерите:

рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Ланцет 368: 124–129.

7. Россиньол Дж. Ф., Эль-Гохари Ю. М.. 2006. Нитазоксанид в лечении вирусного гастроэнтерита

: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое клиническое испытание

. Алимент.Pharmacol. Ther. 24: 1423–1430.

8. Эйхвальд С., Родригес Дж. Ф., Бурроне, штат Орегон. 2004. Характеристика взаимодействий NSP2 / NSP5 вируса рота-

и динамики образования вироплазмы.

J. Gen. Virol. 85: 625–634.

9. Росси А., Чафре С., Бальзамо М., Пиеримарчи П., Санторо М.Г. 2006.

Нацеливание на фактор теплового шока 1 с помощью РНК-интерференции: мощный инструмент

для повышения эффективности гипертермохимиотерапии при раке шейки матки. Рак

Res.66: 7678 –7685.

10. Африканова И., Фаббретти Е., Миоццо М.С., Бурроне, Орегон. 1998. Rotavirus

Фосфорилирование NSP5 активируется взаимодействием с NSP2. J. Gen.

Virol. 79: 2679 –2686.

11. Fabbretti E, Afrikanova I, Vascotto F, Burrone OR. 1999. Два структурных белка ротавируса, отличные от

, NSP2 и NSP5, образуют вироплазматические структуры in vivo. J. Gen. Virol. 80: 333–339.

12. Сэмбрук Дж., Фрич Э. Ф., Маниатис Т. 1989. Молекулярное клонирование, лабораторное руководство, 2-е изд.Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг

Харбор, Нью-Йорк.

13. Superti F, Amici C, Tinari A, Donelli G, Santoro MG. 1998. Ингибирование

репликации ротавируса простагландином А: свидетельство блокировки созревания вируса

. J. Infect. Дис. 178: 564–568.

14. Россиньоль Дж. Ф., Ла Фразия С., Чиаппа Л., Чуччи А., Санторо М. Г.. 2009.

Тиазолиды, новый класс противогриппозных молекул, нацеленных на вирусный гемагглютинин

на посттрансляционном уровне.J. Biol. Chem. 284:

29798 –29808.

15. Брунелли С., Амичи С., Анджелини М., Фракасси С., Белардо Г., Санторо М.Г.

2012. Нестероидный противовоспалительный препарат индометацин активирует

киназу eIF2␣ PKR, вызывая блокировку трансляции в раковых клетках

колоректального рака человека. Biochem. J. 443: 379–386.

16. Арнольди Ф., Кампанья М., Эйхвальд С., Дессельбергер У., Буррон, Орегон.

2007. Взаимодействие ротавирусной полимеразы VP1 с неструктурным белком

NSP5 сильнее, чем с NSP2.J. Virol. 81: 2128–2137.

17. Паттон Дж., Чижиков В., Тарапоревала З., Чен Д.Ю. 2000. Репликация вируса

, стр. 33–36, Грей Дж., Дессельбергер У. (ред.), Ротавирусы: методы и протоколы

. Humana Press, Тотова, Нью-Джерси.

18. Afrikanova I, Miozzo MC, Giambiagi S, Burrone OR. 1996. При использовании фосфор-

образуются различные формы ротавируса NSP5. J. Gen. Virol. 77:

2059–2065.

19. Росси А., Тротта Э, Брэнди Р., Аризи I, Кочча М., Санторо М.Г.2010.

AIRAP, новый ген теплового шока человека, регулируемый коэффициентом теплового шока 1. J.

Biol. Chem. 285: 13607–13615.

20. ДеВитт-Орр С.Дж., Мета Д.Р., Коллинз С.Е., Сутар М.С., Гейл М., младший, Мосс -

человек KL. 2009. Длинная двухцепочечная РНК индуцирует противовирусный ответ

независимо от регуляторного фактора 3 IFN, стимулятора промотора IFN-бета 1,

и IFN. J. Immunol. 183: 6545–6553.

21. Jao CY, Salic A. 2008. Изучение транскрипции и оборота РНК in vivo

с помощью химии щелчков.Proc. Natl. Акад. Sci. США. 105: 15779–15784.

22. Офит, штат Пенсильвания, Кларк Х.Ф., Уорд, Р.Л. 2003. Текущее состояние разработки

вакцин против ротавируса человека, стр. 345–356. В Desselberger U, Gray J (ed), Viral

гастроэнтерит. Elsevier Science BV, Амстердам, Нидерланды.

23. Петри Б.Л., Гринберг Н.Б., Грэм Д.Ю., Эстес М.К. 1984. Ультраструктурная

локализация ротавирусных антигенов с использованием коллоидного золота. Virus Res. 1: 133–

152.

24.Campagna M, Eichwald C, Vascotto F, Burrone OR. 2005. РНК интерференция

мРНК сегмента 11 ротавируса раскрывает важную роль NSP5 в репликативном цикле вируса

. J. Gen. Virol. 86: 1481–1487.

25. Сильвестри Л.С., Тарапоревала З.Ф., Паттон Дж. Т.. 2004. Репликация ротавируса:

плюс-смысловые матрицы для синтеза двухцепочечной РНК сделаны в плазме vi-

. J. Virol. 78: 7763–7774.

26. McDonald SM, Patton JT. 2011. Ассортимент и упаковка генома ротавируса, отмеченного сегментом

.Trends Microbiol. 19: 136 –144.

27. Аяла-Бретон С., Ариас М., Эспиноза Р., Ромеро П., Ариас К.Ф., Лопес С.

2009. Анализ кинетики транскрипции и репликации генома вируса рота-

с помощью РНК-интерференции. J. Virol. 83: 8819 - 8831.

28. White CA, Jr. 2004. Нитазоксанид: новое противопаразитарное средство широкого спектра действия

. Эксперт Rev. Anti Infect. Ther. 2: 43– 49.

29. De Carvalho LP, Lin G, Jiang X, Nathan C. 2009. Нитазоксанид убивает

реплицирующихся и не реплицирующихся Mycobacterium tuberculosis и уклоняется от устойчивости

.J. Med. Chem. 52: 5789 –5792.

30. Россиньол Дж. Ф., Эльферт А., Эль-Гохари Й, Киф Е.Б. 2009. Улучшенный вирусологический ответ

при хроническом гепатите С генотипа 4, получавшем нитазоксанид,

пегинтерферон и рибавирин. Гастроэнтерология 136: 856 - 862.

31. Россиньол Дж. Ф., Самудрала С., Хопперс М., Хафизулла Дж., Резник Х., Харт -

человек А, Комхейр С., Каррион М., Бардин М. 2011. Рандомизированный двойной -

слепое плацебо-контролируемое исследование нитазоксанида (NTZ) у взрослых

и подростков с острым неосложненным гриппом, abstr LB-35, стр. 46.

Abstr. 49-я годовщина. Встретиться. Заразить. Дис. Soc. Am., Бостон, Массачусетс.

32. Hoffman PS, Sisson G, Croxen MA, Welch K, Harman WD, Cremades

N, Morash MG. 2007. Противопаразитарный препарат нитазоксанид подавляет пиру-

ват-оксидоредуктазы Helicobacter pylori, отобранных анаэробных бактерий

и паразитов, а также Campylobacter jejuni. Противомикробный. Агенты Chemother.

51: 868 - 876.

33. Лам К.К., Чжэн Х, Форестьери Р., Балджи А.Д., Нодвелл М., Воллетт С.,

Андерсон Х.Дж., Андерсен Р.Дж., Ав-Гей Й., Роберж М.2012. Нитазоксанид

стимулирует аутофагию и подавляет передачу сигналов mTORC1 и внутриклеточную пролиферацию

Mycobacterium tuberculosis. PLoS Pathog. 8: e1002691.

DOI: 10.1371 / journal.ppat.1002691.

34. Корба Б.Э., Монтеро А.Б., Фаррар К., Гэй К., Мукерджи С., Айерс М.С.,

Россиньол Дж.Ф. 2008. Нитазоксанид, тизоксанид и другие тиазолиды - это

Тиазолиды ингибируют морфогенез ротавируса

Октябрь 2013 г. Том 87 Номер 20 jvi.asm.org 11105

, 10 июня 2014 г., guesth http://jvi.asm.org/ Загружено с сайта

Исследование стилбеноидов как потенциальных терапевтических агентов при ротавирусном гастроэнтерите

Ротавирусные инфекции (RV) вызывают тяжелую диарею у младенцев и детей раннего возраста. дети во всем мире. Вакцины доступны, но стоят непомерно дорого для многих стран и только уменьшают тяжелые симптомы. Вакцинированные младенцы продолжают выделять инфекционные частицы, и исследования показывают снижение эффективности вакцин против РВ в тропических и субтропических странах, где они больше всего необходимы.Продолжение эпиднадзора за новыми штаммами RV, оценка эффективности вакцины и разработка экономически эффективных противовирусных препаратов остаются важными аспектами исследований RV. Это исследование должно было определить эффективность антиоксидантных и противовоспалительных стильбеноидов в подавлении репликации правого желудочка. Культуры волосистых корней арахиса ( A. hypogaea ) индуцировали с образованием стильбеноидов, которые очищали с помощью высокоэффективной противоточной хроматографии (HPCCC) и анализировали с помощью ВЭЖХ. Клетки HT29.f8 инфицировали RV в присутствии стильбеноидов.Подсчет жизнеспособности клеток не показал цитотоксического действия на клетки HT29.f8. Титры вирусной инфекционности были рассчитаны и сравнительно оценены для определения эффектов обработки стильбеноидами. Два стильбеноида, транс-арахидин-1 и транс-арахидин-3, показывают значительное снижение титров инфекционности RV. Вестерн-блоттинг, проведенный на лизатах инфицированных клеток, дополнял титры инфекционности и указывал на значительное снижение репликации вируса. Эти исследования показывают терапевтический потенциал стильбеноидов против репликации правого желудочка.

1. Введение

Механизмы диареи, индуцированной ПЖ, являются многофакторными и включают как секреторный, так и мальабсорбтивный компоненты диареи. Несмотря на большие усилия, у нас нет полного понимания патофизиологии правого желудочка [1]. Стратегии вакцинации против RV-ассоциированной диареи направлены на стимуляцию иммунной системы с использованием либо ослабленных живых белков RV, либо RV [2]. В США есть две лицензированные вакцины против РВ: RotaTeq, производимая Merck, и Rotarix, производимая GlaxoSmithKline.Оба препарата эффективны для предотвращения тяжелой диареи у вакцинированных детей [3, 4]. Недавно была разработана новая вакцина против RV, Rotavac, с использованием штамма RV, который был выделен, произведен и испытан в Индии компанией Bharat Biotech International, Ltd. [5]. Эти вакцины предназначены для защиты от обычных штаммов RV и, следовательно, зависят от генетической стабильности вирусов. Повторная сортировка является обычным явлением и может привести к появлению новых вирулентных штаммов RV, которые нельзя предотвратить с помощью существующих вакцин [6].Точно так же зоонозная природа инфекций RV поддерживает аргумент в пользу продолжения исследования новых штаммов RV, возникающих в результате межвидовой передачи с потенциальной неудачей вакцины [7]. Упомянутые выше лицензированные вакцины против РВ менее эффективны в странах Африки к югу от Сахары и Юго-Восточной Азии, где они больше всего необходимы [8–11]. Более того, высокая стоимость, ограниченная доступность и плохая логистика для распределения вакцин представляют собой серьезные проблемы для развивающихся стран [3]. Следовательно, необходима разработка рентабельных, легко распространяемых, новых и ориентированных на хозяина парадигм противовирусных препаратов, которые влияют на широкий спектр штаммов RV и снижают бремя болезней, связанных с инфекциями RV.Использование преимуществ антиоксидантных и противовоспалительных свойств натурального продукта для лечения инфекций, вызванных RV, соответствует принципам новой терапевтической стратегии, обладающей противовирусным эффектом.

Стилбеноиды - это фенольные соединения, полученные в результате фенилпропаноидного / ацетатного пути. Среди этих соединений транс -ресвератрол (t-Res) является наиболее изученным стильбеноидом, который демонстрирует сильные антиоксидантные и химиопрофилактические свойства [12]. Кроме того, исследования ресвератрола и его производных продемонстрировали противовирусные свойства.Ресвератрол сильно подавляет репликацию вируса гриппа в клетках MDCK и улучшает выживаемость и снижает титры легочной вирусной инфекционности у мышей, инфицированных вирусом гриппа. Кроме того, ресвератрол не проявлял токсических эффектов in vitro или in vivo [13]. Однако в другом исследовании проверялось влияние 20 мк M и 40 M концентраций ресвератрола, инкубированных в течение 24 и 48 часов после инфицирования полиомавирусом в клетках 3T3 и HL60. Результаты показали цитотоксичность в зависимости от времени и дозы и ингибирование синтеза полиомавирусной ДНК.Цитотоксический эффект ни на одну из линий клеток при использовании только 0,02% диметилсульфоксида (ДМСО) не наблюдался [14]. Другое исследование выявило производные ресвератрола с сильной анти-HSV-1 и HSV-2 активностью. Некоторые тримерные и тетрамерные производные проявляли антигерпетическую активность при однозначных микромолярных концентрациях [15].

Стилбеноиды производятся группой растений, в которую входят виноград, арахис и некоторые ягоды [12, 16, 17]. транс -Пицеатаннол (t-PA) представляет собой гидроксилированный аналог ресвератрола, который содержится в винограде и в незначительных количествах в арахисе. транс -арахидин-1 (t-A1) представляет собой пренилированный (3-метил-1-бутенил) аналог пицеатаннола, тогда как транс -арахидин-3 (t-A3) является пренилированным (3-метил-1 -бутенил) аналог ресвератрола (рисунки 1 (а) –1 (г)). И t-A1, и t-A3 продуцируются в арахисе при заражении грибком. Эти стильбеноиды можно экстрагировать из некоторых растений, но они не подходят для многих применений в пищевой / фармацевтической промышленности из-за общей низкой концентрации стильбеноидов в растительных экстрактах. Чтобы получить продукт с высоким содержанием стильбеноидов, культуры волосистых корней арахиса ( A . hypogaea ) были установлены в системе биопродукции, которая продуцирует повышенные уровни стильбеноидов, включая t-A1 и t-A3, при лечении элиситорами [18, 19]. t-PA и t-Res коммерчески доступны, но t-A1 и t-A3 все еще находятся на экспериментальной стадии, что дает возможность исследовать новую противовирусную биологическую активность.

В этом исследовании оценивался терапевтический потенциал четырех стильбеноидов, t-Res, t-PA, t-A1 и t-A3 (рисунки 1 (a) –1 (d)), для подавления инфекций RV в культуре с использованием клонированного линия клеток кишечника человека, HT29.f8 [20]. Гипотеза для этой работы состоит в том, что стильбеноиды будут модулировать вирусную нагрузку RV, генерируемую во время инфекции. Были проведены две серии экспериментов, в которых оценивались различные концентрации стильбеноидов и две временные точки после заражения. Чтобы определить влияние стильбеноидов на количество вируса, продуцируемого во время инфекции, титры вирусной инфекционности определяли с использованием супернатантов для каждой из различных обработок (10 мкл М и 20 мк мкМ стильбеноидов), собранных в 12 и 24. часов после заражения (hpi).Титры вирусной инфекционности, полученные в клетках, обработанных стильбеноидами, с использованием анализа фокусообразующей единицы (FFU), сравнивали с титрами вирусной инфекционности, полученными только от инфекций RV и инфекций RV с 0,02% DMSO. Результаты были представлены в виде частиц инфекционного вируса / мл. Вестерн-блот-анализ с использованием клеточных лизатов, полученных в этих экспериментах, продемонстрировал присутствие неструктурного белка RV (неструктурный белок 4 NSP4), многофункционального вирусного белка, который необходим для репликации вируса и образования инфекционных вирусных частиц [21].

2. Материалы и методы
2.1. Клетки, вирус и реагенты

Целью исследования было проверить действие (я) четырех стильбеноидов на репликацию RV в клетках HT29.F8 с различными концентрациями стильбеноидов и разным временем сбора. Доза была основана на предыдущем исследовании, в котором оценивалось влияние 20 мкл M ресвератрола и 0,02% ДМСО на две клеточные линии, инфицированные полиомавирусами [13, 14]. В другом исследовании использовались различные концентрации ДМСО и более высокие концентрации ресвератрола (50, 100 и 200, мкл, М) на линии клеток, инфицированных вирусом гриппа А.Ресвератрол в концентрациях 50 и 100 мкМ М не был цитотоксичным для клеток [13, 14]. Основываясь на этих результатах, мы решили протестировать 10 концентраций мк M и 20 мк M каждого стильбеноида, солюбилизированного в DMEM с 0,02% ДМСО. На каждый стильбеноид было выполнено пять экспериментальных наборов. В первом экспериментальном наборе клетки были инфицированы SA114F RV при множественности инфицирования (MOI) 2, как сообщалось ранее [22]. Во втором наборе экспериментов к инфекции правого желудочка добавляли 0,02% ДМСО, чтобы доказать, что 0.02% ДМСО, использованный для солюбилизации стильбеноидов, не влиял на жизнеспособность клеток или продукцию RV. В третьем и четвертом наборах экспериментов 10 мкл M или 20 мкл M концентраций стильбеноидов, соответственно, солюбилизировали в 0,02% ДМСО в DMEM, добавляли к инокуляту RV и использовали для заражения клеток. Пятый набор представлял собой неинфицированные клетки HT29.f8, обработанные стильбеноидами. Шестой набор представлял собой неинфицированные клетки HT29.f8, обработанные 0,02% ДМСО, а седьмой набор представлял собой неинфицированные клетки HT29.только клетки f8 (рис. 2). Каждый экспериментальный набор был протестирован в четырех лунках 24-луночного планшета для культуры ткани (ТК). Среды из четырех лунок объединяли и центрифугировали, а супернатанты хранили при -80 ° C и использовали для определения титров вирусной инфекционности. Клетки собирали в PBS, замораживали, размораживали 3 раза и центрифугировали. Супернатанты собирали в виде клеточных лизатов и хранили при -80 ° C до использования в анализах вестерн-блоттинга. Титры вирусной инфекционности выполняли в трех повторностях с использованием двух анализов, анализов с фокусообразующими единицами (FFU) и с бляшкообразующими единицами (PFU).Равные количества клеточных лизатов использовали в анализах вестерн-блоттинга для разделения вирусных белков и зонда на RV NSP4.

2.2. Биопродукция и очистка стильбеноидов

Волосатые корни арахиса cv. Халла (линия 3) культивировали по крайней мере в двадцати 250-мл колбах, каждая из которых содержала 50 мл среды MSV, как описано ранее [18, 23]. На девятый день культивирования волосистых корней израсходованную среду из каждой колбы удаляли и заменяли средой для выявления (свежая среда MSV с 9 г / л метил- β -циклодекстрин (Cavasol W7 M)) и инкубировали в темноте при 28 ° C в течение дополнительных 72 часов, чтобы вызвать синтез и секрецию стильбеноидов в культуральную среду, как недавно описано [19].После периода возбуждения культуральную среду удаляли из каждой колбы и объединяли. Эту объединенную среду смешивали с равным объемом этилацетата в делительной воронке для экстракции стильбеноидов, как описано ранее [18]. Фазу этилацетата выделяли и сушили в роторном испарителе (Buchi), и t-A1 и t-A3 очищали из экстракта с помощью HPCCC следующим образом. Высушенный этилацетатный экстракт ресуспендировали в системе растворителей HPCCC (гексан: этилацетат: метанол: вода (4: 5: 3: 3)) и вводили в систему Spectrum (динамическая экстракция) HPCCC.Верхнюю фазу системы растворителей использовали в качестве стационарной фазы, и хроматографию контролировали при УФ 340 нм. Фракции собирали каждые 30 с, сушили в SpeedVac и анализировали с помощью ВЭЖХ.

Анализы ВЭЖХ выполняли в системе Dionex Summit, оснащенной детектором на фотодиодной матрице (PDA). Разделение проводили на колонке SunFire C 18 , 5 мкм, м, 4,6 × 250 мм (Waters) при 40 ° C и скорости потока 1,0 мл / мин. Подвижная фаза состояла из 2% муравьиной кислоты в воде (A) и метаноле (B).Метод начинался со 100% A в течение 1 мин. Затем был выполнен линейный градиент от 40% A и 60% B до 35% A и 65% B (от 1 до 20 минут), за которым следовал линейный градиент от 35% A и 65% B до 100% B (от 20 до 25 минут). мин). Затем колонку промывали 100% А в течение 5 мин (от 25 до 30 мин). Выявленные t-A1 и t-A3, полученные из семян арахиса, использовали в качестве эталонных стандартов [23].

Чистоту фракций, полученных после HPCCC, контролировали с помощью ВЭЖХ с использованием УФ-поглощения при 280, 320 и 340 нм. Выбранные фракции также проверяли на чистоту с помощью масс-спектрометрии с использованием системы ультравысокой жидкостной хроматографии (УВЭЖХ) UltiMate 3000 (Dionex, Thermo Scientific) в сочетании с масс-спектрометром с линейной ионной ловушкой LTQ XL (Thermo Scientific), как описано у Marsh et al.[24]. Фракции HPCCC, содержащие t-A1 и t-A3 с чистотой более 95% на основании анализа ВЭЖХ (УФ 340 нм), объединяли, сушили в потоке азота и использовали для вирусных анализов. Сухую массу очищенных стильбеноидов восстанавливали в 0,02% ДМСО с 1 мкл г / м трипсина (Worthington Biochemical, Lakewood, NJ) в среде DMEM. Чтобы сравнить результаты между непренилированными стильбеноидами (t-Res и t-PA) и их пренилированными аналогами (t-A3 и t-A1, соответственно), синтетический / коммерчески доступный t-Res (Sigma-Aldrich) и t-PA ( Alexis) были использованы в этом исследовании.

2.3. Клеточные линии и вирус
Клетки

MA104 были получены из ATCC (Rockville, MD), а клетки HT29.F8, линия спонтанно поляризующихся клеток, были получены из исходной кишечной линии аденокарциномы человека (HT29) [20]. Отсутствие контаминации микоплазмой в клеточных линиях подтверждали с помощью набора MycoFind mycoplasma PCR kit версии 2.0 (Clongen Laboratories, LLC). Клон 4F RV SA11 (генотип P [1] и G [3]) [25] выращивали и титровали в клетках MA104 и хранили при -80 ° C. Эффективность стильбеноидов против RV проверяли с помощью HT29.клетки f8.

2.4. Анализ жизнеспособности

Процент живых / мертвых клеток рассчитывали с использованием анализа исключения красителя трипанового синего, как описано ранее [26]. Вкратце, суспензию клеток из ~ 10 6 клеток / мл разбавляли 1: 1 0,4% раствором трипанового синего и загружали в гемоцитометр. Подсчитывали количество окрашенных клеток и общее количество клеток, и рассчитанный процент неокрашенных клеток выражали как процент жизнеспособных клеток. Чтобы определить, существует ли 0.02% ДМСО, который использовался для солюбилизации гидрофобных стильбеноидов, отрицательно повлиял на продолжительность жизни клеток HT29.F8, анализы жизнеспособности проводили только с RV, RV с 0,02% DMSO, клетками с 0,02% DMSO, только с клетками и RV с 0,02% ДМСО с 10 мк M и 20 мк M стильбеноидов с использованием анализа исключения клеток трипанового синего, как описано [26].

2,5. Количественное определение вирусов

Для тестирования биологической активности стильбеноидов в отношении инфекций RV были выполнены анализы как FFU, так и PFU, как описано ранее [27, 28].Клетки MA104 выращивали до 80% слияния в 24-луночных планшетах для культивирования тканей (Corning Life Sciences), подвергали голоданию фетальную бычью сыворотку за 12 ч до инфицирования, а затем инфицировали RV SA114F. Вкратце, запас SA114F RV обрабатывали ультразвуком (5 мин с использованием насадки для чашки и ледяной бани в Misonix Sonicator 3000, Misonix, Inc., Фармингдейл, штат Нью-Йорк) и инкубировали в бессывороточной среде DMEM с 1 мкл г / мл трипсина. (Worthington Biochemical, Лейквуд, Нью-Джерси) в течение 30 минут при 37 ° C. Активированный вирусный инокулят инкубировали с клетками в течение 1 ч при 37 ° C в 5% CO 2 при MOI 2.Посевной материал заменяли бессывороточной DMEM с добавлением 1 мкл мкг / мл трипсина и инкубировали в течение 12 и 24 часов на дюйм. Супернатанты собирали, осветляли при 300 × g в течение 5 минут и хранили при -80 ° C. Клетки промывали холодным PBS Дульбекко, 1X (Caisson Laboratories, Smithfield, UT), и высвобождали из планшетов, используя 0,25% раствор трипсина-EDTA (1X) (Caisson Laboratories, Smithfield, UT). После добавления DMEM с 5% FBS клетки ресуспендировали в холодном PBS и готовили разведения для подсчета живых / мертвых клеток (см. Раздел 2.4). Остаток клеток использовали для приготовления клеточных лизатов, подвергая их повторным три раза замораживанию-оттаиванию, осветляя при 300 × g в течение 10 мин. Среды (супернатант) собирали, осветляли при 300 × g в течение 10 мин и хранили при -80 ° C. И лизаты клеток, и супернатанты хранили при -80 ° C. Титры вирусной инфекционности определяли в трех повторностях путем непрямого иммунофлуоресцентного окрашивания монослоев MA104, инфицированных серийными разведениями супернатантов. Среднее количество флуоресцентных фокусов было рассчитано для трех лунок и использовано для определения количества фокусообразующих единиц / мл (FFU / мл) [29].Поскольку титры вирусной инфекционности RV имеют решающее значение для нашего вывода, были использованы два анализа. Данные FFU не показали различий в титрах вирусной инфекционности при 12 hpi при 10 мк M концентраций (данные не показаны). Поэтому мы решили выполнить анализы бляшкообразующих единиц (PFU), сравнивая два контроля, только RV и RV с 0,02% ДМСО с 20 мк M стильбеноидов при 24 hpi. Анализы образования бляшек проводили в трех повторностях, как указано выше для анализов FFU, за исключением 1-часового заражения; инокулят вируса заменяли 3 мл наложенной среды (смесь 1: 1 1.2% агарозы (агароза Apex с низкой точкой плавления, Genesee Scientific Inc.) и полный 2 × MEM, содержащий 0,5 мкг г / мл трипсина) и инкубировали при 37 ° C в 5% CO 2 в течение 3-4 дней или до стали видны бляшки. Нейтральный красный оверлей (смесь 1,2% агарозы 1: 1 с равным объемом бессывороточного 2 × MEM, содержащего 50 мкл г / мл нейтрального красного) был подготовлен и 2 мл на лунку наложения красителя было добавлено поверх первое наложение агарозы / среды. Шестилуночные планшеты инкубировали при 37 ° C до появления бляшек (приблизительно от 4 до 24 часов).Подсчитывали отдельные бляшки и рассчитывали титры следующим образом: количество бляшек × 1 / фактор разведения × 1 / (мл посевного материала) = БОЕ / мл.

2.6. Статистический анализ

Данные выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение, и сравнения были статистически оценены с помощью дисперсионного анализа (ANOVA) и теста Стьюдента с использованием Excel (уровень значимости ≤ 0,05).

2.7. Количественный анализ белка и вестерн-блоттинг

Анализ белка микробицинхониновой кислоты (BCA) использовали для количественной оценки концентрации белка с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта согласно протоколу производителя (Thermo Scientific Pierce).Один микрограмм общего белка из каждого образца отделяли с помощью 12,5% SDS-PAGE, наносили электроблоттинг на нитроцеллюлозные мембраны и зондировали пептид-специфическими антителами NSP4 [30, 31], и реактивные полосы визуализировали добавлением конъюгированных с HRP IgG и Super Хемилюминесцентный субстрат Signal West Pico (Pierce) с последующим воздействием на пленку Kodak X-OMAT [22, 32, 33].

3. Результаты и обсуждение
3.1. Биопродукция стильбеноидов в культурах волосатых корней арахиса

Для производства стильбеноидов t-A1 и t-A3 мы использовали нашу ранее установленную линию волосистых корней 3 из сорта арахиса.Корпус. Эти волосатые корни способны синтезировать и секретировать t-Res, t-A1 и t-A3 в культуральную среду после обработки элиситором ацетатом натрия [18]. В зависимости от периода лечения элиситором уровни и типы стильбеноидов, обнаруженных в среде, могут быть изменены [18]. Чтобы изучить влияние других элиситоров на продукцию t-A1 и t-A3, мы протестировали различные элиситоры, включая метил- β -циклодекстрин (CD). В предварительных экспериментах к культурам волосистых корней добавляли разные дозы ЦД на разные периоды времени от 0 до 96 ч (данные не показаны).72-часовая обработка 9 г / л ЦД была выбрана на основе производства наивысших уровней t-A1. Как показано на рисунках 3 (a) –3 (c), t-A1 и t-A3 были основными стильбеноидами, присутствующими в культуральной среде. t-Res присутствовал в этих экстрактах в очень малых количествах. Для очистки t-A1 и t-A3 из культуральной среды получали этилацетатные экстракты и подвергали HPCCC (высокоэффективной противоточной хроматографии). Система растворителей была адаптирована из ранее использовавшейся системы CPC (центробежной распределительной хроматографии), которая была эффективной при очистке t-A1 и t-A3 из экстрактов питательной среды волосистых корней [16].Единственные модификации заключались в замене гептана на гексан и этанола на метанол. Разделение было эффективным и сопоставимым с достигнутым ранее [16]. Таким образом были достигнуты высокие выходы высокоочищенных фракций t-A1 и t-A3, которые были использованы в противовирусных анализах.

3.2. Жизнеспособность клеток HT29.F8 в присутствии 0,02% ДМСО

Процент живых / мертвых клеток рассчитывали с использованием анализа с использованием эксклюзионного красителя трипанового синего (рисунки 2 (a) –2 (d)). Через 24 часа на дюйм жизнеспособность клеток во всех тестируемых группах (HT29.Клетки f8 с RV, клетки HT29.f8 с RV и 0,02% ДМСО, клетки HT29.f8 с RV и 10 μ M стильбеноидов, HT29.f8 клетки с RV и 20 μ M стильбеноидов, HT29.f8 клетки с 20 μ только M стильбеноидов, клетки HT29.f8 с 0,02% ДМСО и только клетки HT29.f8) статистически значимо не различались (). Эти данные показали, что добавление RV увеличивает гибель клеток, но незначительно в исследуемых временных рамках. Кроме того, добавление стильбеноидов в концентрациях 20 мкл М снижает жизнеспособность клеток, но незначительно, в то время как добавление 0.Добавление 02% ДМСО в культуральную систему не оказало отрицательного воздействия на жизнеспособность клеток HT29.f8 в культуре и не уменьшило репликацию вируса (Рисунки 2 (a) –2 (d) и 6). Эти данные демонстрируют, что клетки HT29.f8 не подвергались неблагоприятному воздействию RV, 0,02% ДМСО или концентраций до 20 мкМ M четырех протестированных стильбеноидов (t-Res, t-PA, t-A1 или t-A3. ).

3.3. Влияние стильбеноидов на продукцию инфекционных ротавирусных частиц

Титры вирусной инфекционности определяли с использованием анализов FFU из супернатантов инфицированного RV HT29.Клетки f8, обработанные стильбеноидами (10 мк M и 20 мк M t-Res, t-PA, t-A1 или t-A3). Супернатанты, собранные при 12 hpi, были эквивалентны контрольным клеткам, инфицированным RV (данные не показаны). Аналогичным образом, при 24 hpi концентрации 20 мк M непренилированных стильбеноидов, t-Res и t-PA оба, не продемонстрировали никаких изменений в титре вируса по сравнению с контролем, инфицированным RV (рисунки 4 (a) и 4 (б)). Однако при 24 hpi концентрации t-A1 10 мкл M вызывали десятикратное снижение титра инфекционности вируса по сравнению с контрольными супернатантами, инфицированными RV (), а концентрации t-A1 в 20 мкМ M вызывали 10-кратное снижение титра инфекционности вируса. Снижение титра инфекционности вируса в 25 раз по сравнению с контрольными супернатантами, инфицированными RV () (рис. 4 (c)). Однако статистическая разница между RV и RV с ДМСО с восьмикратным снижением титров инфекционности вируса с RV и ДМСО () (рис. 4 (d)).Концентрации t-A3 10 мкл M вызывали девятикратное снижение титра вируса по сравнению с контрольными супернатантами, инфицированными RV (), а концентрации t-A3 в 20 мкл M вызывали девяносто восьмикратное снижение вируса. титр по сравнению с контрольными супернатантами, инфицированными RV () (рис. 4 (d)).

Поскольку данные, полученные с помощью анализов FFU, имели решающее значение для проверки нашей гипотезы, были выполнены анализы единиц образования бляшек (анализы PFU), чтобы подтвердить результаты, полученные из анализов FFU.Анализы PFU проводили с использованием тех же супернатантов, которые использовали для анализов FFU. Подсчитывали бляшки и рассчитывали среднее значение трех экспериментов, которое отображали в виде БОЕ / мл (рисунки 5 (a) –5 (d)).


Данные, полученные с использованием анализов PFU, показали сходные кратные различия, как показано для анализов FFU (Рисунки 5 (a) –5 (d) и 4 (a) –4 (d), соответственно). Используя дисперсионный анализ и критерий Стьюдента, были рассчитаны и построены графики среднего и стандартного отклонения (рисунки 4 (а) –4 (г) и 5 ​​(а) –5 (г)).Эксперименты с PFU с использованием t-Pa и t-Res не показали статистических различий между контролями, только RV и RV с DMSO, RV с 10 μ M t-Pa / t-Res или RV с 20 μ M t -Pa / t-Res (Рисунки 5 (a) и 5 ​​(b)). Однако экспериментальные данные анализа t-A1 PFU продемонстрировали 57-кратное отличие от контроля, только ПЖ, и 49-кратное отличие от контроля, ПЖ с ДМСО, которое было статистически значимым (и 0,04, соответственно) (рис. 5 (в)). Аналогичным образом, экспериментальные данные из 20 анализов μ M t-A3 PFU продемонстрировали пятидесятипятикратное отличие от контроля, только ПЖ, и шестидесятикратное отличие от контроля, ПЖ с ДМСО, которое было статистически значимым (и 0.02, соответственно) (Рисунок 5 (d)). Оба анализа показывают значительное снижение титров инфекционности RV в присутствии 20 мкл M t-A3.

3.4. Вестерн-блоттинг (WB) анализирует наличие различий в репликации RV

Чтобы дополнить и визуализировать различия, продемонстрированные в титрах вирусной инфекционности между RV отдельно и RV с ДМСО, 20 μ M t-A1 и 20 μ M t- A3, Вестерн-блоттинг выполняли, как описано ранее [22, 32, 33]. Используя равные количества белка соответствующих клеточных лизатов, неструктурный вирусный белок 4, NSP4, был обнаружен во всех RV-инфицированных клеточных лизатах.Данные вестерн-блоттинга RV и RV с DMSO продемонстрировали относительно равные количества мультимерных форм и дигликозилированных (полностью гликозилированных), моногликозилированных и расщепляемых фрагментов NSP4 и предполагают, что 0,02% DMSO не влияет на количество NSP4, продуцируемого во время RV. инфекции (рис. 6, дорожки 1 и 2). Наличие мультимерных форм NSP4 изучалось ранее [34–36]. Результаты для RV с t-A1 и t-A3 показывают относительно небольшое количество полностью гликозилированной формы NSP4 (фиг. 6, дорожки 3 и 4).Это указывает на то, что на репликацию вируса отрицательно влияют 20 мк M как t-A1, так и t-A3. Лизаты клеток без RV (фиг. 6, дорожка 5) не обнаруживают полос и показывают специфичность антител против NSP4.

4. Выводы

Наши данные показывают зависимое от дозы и времени уменьшение вирусного потомства, когда RV и пренилированные стильбеноиды (t-A1 или t-A3) инкубировали с линией клеток кишечника человека HT29.F8. Присутствие неструктурного вирусного белка NSP4 в анализах вестерн-блоттинга подтверждает инфекцию RV и указывает, что вирус реплицируется в HT29.клетки f8. Пренилированные стильбеноиды t-A1 и t-A3 значительно более липофильны, чем непренилированные молекулы t-Res или t-PA. Пренилированная боковая цепь увеличивает липофильность молекул, к которым она присоединена. Следовательно, пренилирование способствует ассоциации и проникновению через клеточные мембраны. Повышение липофильности часто положительно коррелирует с повышенной биологической активностью в разных группах соединений схожей структуры [37, 38]. Несколько систем доставки, включая эмульсии и наночастицы, были протестированы на предмет доставки липофильных, биоактивных природных продуктов [39].В зависимости от области применения эти системы доставки могут быть применимы к t-A1 и t-A3 и должны быть протестированы для продвижения их разработки в качестве потенциальных терапевтических агентов.

Хотя молекулярные механизмы защитного действия t-A1 и t-A3 не известны, ингибирование вирусной репликации может быть связано с антиоксидантными и противовоспалительными свойствами составляющих стильбеноидов. В ранее опубликованной статье было показано, что t-A1 и t-A3 модулируют каннабиноидные рецепторы на микромолярных уровнях [40].Экспериментальные данные этого предыдущего исследования показывают, что t-A3 действует как конкурентный антагонист каннабиноидного рецептора 1 (CB1R), тогда как t-A1 противодействует агонистам CB1R как по конкурентным, так и по неконкурентным механизмам [40]. Интересно, что линия клеток HT29, родительская линия клеток HT29.f8, экспрессирует каннабиноидные рецепторы [41], и экспрессию рецепторов следует исследовать на клонированных клетках HT29.f8. Эти рецепторы являются частью эндоканнабиноидной сигнальной системы, которая, как хорошо известно, регулирует желудочно-кишечные функции, такие как опорожнение желудка, секреция и перистальтика кишечника [42, 43].Следовательно, разумно предположить связь между функциями каннабиноидных рецепторов и механизмом гастроэнтерита правого желудочка. В исследовании колоректального рака было показано, что агонисты каннабиноидных рецепторов (CB1 и CB2) влияют на апоптоз за счет увеличения производства церамидов, опосредованного TNF α [44]. Другое исследование рака молочной железы показывает, что агонисты рецепторов ингибируют активность аденилатциклазы, цАМФ и активность PKA, что приводит к подавлению транскрипции генов [45, 46].ЦАМФ-зависимый механизм PKA также, по-видимому, важен в патогенезе RV в линии клеток кишечника человека Caco2 [47].

Недавно антагонисты каннабиноидных рецепторов были предложены в качестве потенциальных терапевтических агентов против вируса гепатита С путем модуляции гомеостаза липидов [48]. Исследование Gaunt et al. [49] с использованием RV-инфицированных клеток MA104 демонстрирует дозозависимое снижение инфекционности вируса и продукции вирусной РНК при добавлении TOFA (5- (тетрадецилокси) -2-фурановой кислоты), ингибитора ферментного комплекса синтазы жирных кислот [ 49].Кроме того, инфекционность RV в клетках с нокдауном ACC1 была снижена в 8,5 раз (значительно) с siRNA, направленной против ACC1, гена, который кодирует фермент, катализирующий лимитирующую стадию пути синтеза пальмитоил-CoA. Это убедительно свидетельствует о том, что инфекционность RV опосредуется метаболизмом жирных кислот [49] или выбранными жирными кислотами.

В целом эти данные предполагают возможный противовирусный механизм для t-A1 и t-A3 за счет модуляции каннабиноидных рецепторов и последующего изменения метаболизма жирных кислот в клетке-хозяине.Необходимы дополнительные исследования, чтобы подтвердить и расширить наши знания о свойствах t-A1 и t-A3 уменьшать RV. Таким образом, эти соединения потенциально могут быть использованы для конструирования и разработки более эффективных терапевтических средств против RV.

Сокращения
634: Western 906CB 906CB 906EB 906 906CB 906CB 906CB6906
RV: Ротавирус
FFU: Блоки формирования фокуса
PFU: Блоки формирования зубного налета
Неструктурный белок 4
hpi: Часы постинфекции
ДМСО: Диметилсульфоксид
FBS: Фетальный
t-A1: trans -Arachidin-1
t-A3: trans -Arachidin-3
t-PA: transatan t-Rev: trans -Resveratrol
MOI: Множественность инфекций n
TC: Культура тканей
MSV: Модифицированная среда Мурашиге и Скуга.
Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в отношении публикации данной статьи.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантом Animal Formula Health Grant No. AH-9240 от Государственной кооперативной службы исследований, образования и распространения знаний Министерства сельского хозяйства США. Эта работа была поддержана Управлением исследований и спонсируемых программ Государственного университета Стивена Ф. Остина (экспериментальное исследование № 107552-26112-150).Эта работа была поддержана Национальным научным фондом-EPSCoR (грант № EPS-0701890; Центр промышленного производства-P3), Инициативой Арканзаса ASSET и Управлением науки и технологий штата Арканзас.

Тайна разгадана, ротавирус VP3 - это уникальная укупорочная машина - ScienceDaily

После ускользания от исследователей в течение более 30 лет белок ротавируса VP3 наконец раскрыл свою уникальную структуру и функцию группе ученых под руководством ученых из Медицинского колледжа Бейлора. .Исследователи обнаружили, что VP3 состоит из четырех молекулярных модулей, которые уникальным образом объединяют пять ферментативных активностей, необходимых для блокирования информационной РНК (мРНК), процесса, необходимого для синтеза вирусных белков и уклонения от иммунного ответа хозяина.

Исследователи сообщают в журнале Science Advances , что, помимо двух ранее известных ферментативных активностей, VP3 представляет еще две непредвиденные активности, в совокупности позволяющие этой укупорочной машине выполнять функцию, необходимую для репликации вируса.Полученные данные открывают возможности для разработки противовирусных препаратов для борьбы с ротавирусной инфекцией, наиболее частой причиной диареи у детей во всем мире, приводящей примерно к 200 000 смертей ежегодно.

«Вирусы не могут воспроизводиться сами по себе. Они берут на себя механизмы инфицированных клеток, чтобы производить вирусные частицы», - сказал соавтор-корреспондент д-р Б.В. Венкатарам Прасад, профессор Элвин Романски, председатель кафедры биохимии Верны и Маррса Маклина. и молекулярной биологии и профессор молекулярной вирусологии и микробиологии в Бейлоре.

Одна из стратегий, используемых вирусами для захвата клеток, в которые они вторгаются, включает кэппирование или подготовку вирусной мРНК, чтобы она имитировала кэпированную мРНК клеток-хозяев. Кэппирование мРНК - важный шаг для задействования клеточного аппарата, который синтезирует белки. Имитация покрытия клетки позволяет вирусу управлять механизмами хозяина для производства вирусных белков.

Эту стратегию используют несколько вирусов, но по-разному. В случае ротавируса было известно, что вирусный белок VP3 участвует в кэппировании, но более трех десятилетий определение структуры VP3 и понимание того, как он осуществляет кэппирование мРНК, было сложной задачей.

Белок Rotavirus VP3 - уникальная укупорочная машина

«Комбинируя криоэлектронную микроскопию, рентгеновскую кристаллографию и биохимические анализы, мы обнаружили, что VP3 обладает всеми ферментативными активностями, необходимыми для эффективного улавливания мРНК ротавируса. Мы также обнаружили, что в отличие от того, что было замечено во многих вирусах, имеющих индивидуальные белки. для каждой ферментативной активности ротавирус объединяет все ферментативные активности в виде модулей в один белок, VP3 », - сказал первый автор, д-р.Дилип Кумар, научный сотрудник лаборатории Prasad.

«Что отличает ротавирус от большинства других вирусов, так это то, что кэппинг происходит внутри плотных границ вирусного капсида, белковой оболочки вируса, находящейся внутри клетки. После того, как кэпирование завершено, вирусная мРНК покидает капсид через каналы и проникает в цитоплазму клетки, где задействует механизмы производства белков для производства вирусных белков », - сказала соавтор доктор Мэри К. Эстес, председатель фонда Каллена и заслуженный профессор молекулярной вирусологии и микробиологии в Baylor.

«Решение этой головоломки было очень увлекательным, - сказал Кумар. «Нам удалось изолировать VP3 и его модули и показать, что они самоорганизуются в стабильную молекулу, способную блокировать как минимум две мРНК одновременно, что делает процесс эффективным».

Решающее значение для этой работы имело сотрудничество с доктором Чжао Ван, доцентом кафедры биохимии и молекулярной биологии Верны и Маррсом Маклином и содиректором CryoEM Core в Бэйлоре, и его научным сотрудником доктором наук.Синьчжэ Ю, а также д-р Сью Кроуфорд, доцент кафедры молекулярной вирусологии и микробиологии ферментативных и функциональных анализов, и д-р Лия Ху, доцент кафедры биохимии и молекулярной биологии Верны и Маррса МакЛина, за моделирование крио-ЭМ-данные.

Следующие шаги

Знание структуры VP3 и того, как она работает, дает возможность разработать противовирусные препараты для предотвращения или лечения ротавирусной инфекции. Кроме того, это позволяет дополнительно исследовать роль VP3 в репликации ротавируса и то, как он влияет на иммунный ответ хозяина.

«В течение почти 30 лет моя лаборатория и лаборатория доктора Эстеса сотрудничали, чтобы разгадать сложную структуру ротавируса и лучше понять, как он работает», - сказал Прасад. «Определение структуры и функции VP3 - важная веха, открывающая новые двери для продолжения нашего сотрудничества».

Медикаментозное перепрофилирование нитазоксанида: может ли это быть эффективным средством лечения COVID-19? | Journal of Genetic Engineering and Biotechnology

Нитазоксанид и вирусные инфекции

Нитазоксанид (NTZ) показал многообещающую активность против широкого спектра вирусов, как показано в Таблице 1.

Таблица 1 Ингибирующее действие NTZ и тизоксанида (TIZ) в качестве противовирусных препаратов широкого спектра
Нитазоксанид и коронавирусы

Коронавирусы представляют собой ряд оболочечных, несегментированных вирусов с положительной РНК, характеризующихся размером генома, который очень велик. он колеблется от 27 до 34 кб. Респираторные инфекции, вызываемые человеческими штаммами, а именно HCoV-229E, HCoV-OC43, HCoV-NL63 и HCoV-HKU1, обычно легкие и проходят самостоятельно, например, простуда. С другой стороны, серьезные эпидемии и пандемии возникают, когда люди заражаются тремя высокопатогенными бета-коронавирусами, а именно SARS-CoV, MERS-CoV и новейшим SARS-CoV-2 [6].В настоящее время существует острая потребность в открытии новых лекарств для борьбы с инфекциями, вызванными коронавирусами, из-за отсутствия эффективных вариантов лечения.

Исследования in vitro показали, что тизоксанид (TIZ) может ингибировать репликацию in vitro собачьего коронавируса S-378 in vitro в инфицированных клетках A72 (сообщаемая половина максимальной ингибирующей концентрации, IC 50 , составляет 1 мкг / мл [ 9]). Cao et al. сообщили, что NTZ может эффективно ингибировать коронавирус крупного рогатого скота (L9), мышиный коронавирус, вирус гепатита мышей (A59) и кишечный коронавирус человека (4408), культивируемые в клеточных линиях астроцитомы (DBT) и фибробластов (17Cl-1) мыши в IC 50 из примерно 0.3 мкг / мл; этот эффект включал подавление экспрессии вирусного белка N [12]. Примечательно, что как NTZ, так и его активный метаболит (TIZ) обычно демонстрируют сравнимое ингибирующее действие in vitro на вирусы; они ингибируют БВРС-КоВ, выращенный в клеточных линиях LLC-MK2 (сообщенное значение IC 50 = 0,92 и 0,83 мкг / мл соответственно).

В 2020 году, после вспышки COVID-19, Wang et al. сообщили, что NTZ может ингибировать SARS-CoV-2 в клетках Vero E6 (ATCC-1586) после заражения SARS-CoV-2 / Wuhan / WIV04 / 20192 при низкой микромолярной концентрации (половина максимальной концентрации ингибирования 2.12 мкМ) [1]. Недавно Келлени предложил использовать NTZ с азитромицином в качестве протокола для ранних случаев COVID-19 [26]. Кроме того, Pepperrell et al. проанализировали опубликованные клинические исследования NTZ, чтобы определить безопасность препарата, и рассчитали минимальную стоимость производства препарата для ожидаемого потенциального использования при лечении COVID-19 [27]. В настоящее время проводится 14 клинических испытаний использования NTZ отдельно или в сочетании с другими лекарствами (ивермектин или гидроксихлорохин) для лечения пациентов с COVID-19; среди них 7 исследований начали набор пациентов, как показано в таблице 2.В другие клинические испытания пока не набирают пациентов. Страны, которые начали клинические испытания NTZ, - это Египет, США, Бразилия и Мексика [28].

Таблица 2 Текущие клинические испытания по оценке NTZ для лечения COVID-19
Нитазоксанид и вирусы гриппа

NTZ легко подвергается гидролизу и превращается в TIZ в водных буферах в качестве среды для культивирования клеток [28, 29]. Несколько исследований in vitro показали, что TIZ вызывает ингибирование репликации шестнадцати различных штаммов вирусов гриппа A (IAV) [A / Puerto Rico / 8/34 (h2N1, A / h2N1-PR8), A / Wisconsin / 33 ( h2N1), A / Parma / 24/09 (h2N1, устойчивость к осельтамивиру), A / Goose / Italy / 29624603 (h2N1), A / California / 04 / p2009 (h2N1), A / Ohio / 88/2012 (h4N2v) , A / Ohio / 83/2012 (h4N2v), A / Washington / 01/2007 (h4N2), A / Texas / 12/2007 (h4N2), A / Firenze / 7/03 (h4N2), A / Parma / 6 / 07 (h4N2, устойчивость к амантадину), A / Canine / Colorado-1/224986/06 (h4N8), A / Canine / Colorado-3/3/06 (h4N8), A / Canine / Colorado-4/2025974 / 07 (h4N8), A / Chicken / Italy / 9097/97 (H5N9, A / H5N9) и A / Turkey / Italy / RA5563 / 99 (H7N1)] и один вирус гриппа B (IBV) [Influenza B / Parma / 3/04].Полумаксимальная ингибирующая концентрация ТИЗ против вирусов гриппа составляла от 0,2 до 1,5 мкг / мл [9]. Также сообщалось, что IAV вряд ли разовьет устойчивость к TIZ, поскольку тиазолиды не имеют прямого действия против вирусной РНК или белка [30], и сообщается, что развитие вирусной устойчивости к противовирусным препаратам, которые нацелены на клетку-хозяин, менее ожидаемо по сравнению с вирус-специфическими ингибиторами [31]. Более того, синергетический противовирусный эффект наблюдался при сочетании NTZ с осельтамивиром или занамивиром против гриппа A / h2N1-PR8 и птичьего A / H5N9 [32].

Tilmanis et al. сообщили о мощном противовирусном эффекте TIZ против 210 вирусов сезонного гриппа, а также вирусов, проявляющих устойчивость к ингибиторам нейраминидазы, включая осельтамивир, занамивир, перамивир и ланинамивир [33].

В клиническом испытании на людях с участием 257 пациентов NTZ может эффективно сократить продолжительность симптомов гриппа у пациентов, получавших пероральные дозы 600 мг два раза в день по сравнению с плацебо. Кроме того, в этой группе пациентов наблюдалось значительное снижение вирусных титров по сравнению с пациентами, получавшими плацебо ( p = 0.0006). Интересно, что среди леченных вирусов гриппа не было зарегистрировано наблюдаемой устойчивости к противовирусным препаратам против NTZ, а также не сообщалось о побочных эффектах гуморального иммунного ответа у пациентов, принимавших лекарства [34].

Нитазоксанид и ротавирус

Вирусный гастроэнтерит, поражающий детей, в основном является самоограничивающейся инфекцией, и использование противомикробных препаратов может не потребоваться; однако использование противомикробных препаратов может быть разумным, поскольку диарейные заболевания являются причиной более одного миллиона случаев детской смертности ежегодно в развивающихся странах [35].В развивающихся странах заболевание гастроэнтеритом в педиатрической популяции в основном вызывается ротавирусом. Более того, это может приводить к 500 000 смертей ежегодно среди детей в возрасте до 5 лет [36]. Сообщалось, что TIZ препятствует репликации двух штаммов ротавируса: человеческого Wa-G1P (8) и обезьяньего SA11-G3P (2) при IC 50 1 и 0,5 мкг / мл соответственно [9].

Несколько клинических испытаний показали потенциальные преимущества использования NTZ против ротавируса, вызывающего гастроэнтерит.Преимущества включают сокращение продолжительности ротавирусной болезни в госпитализированной детской популяции по сравнению с плацебо, что означает, что NTZ является жизненно важным вариантом лечения диареи, вызванной ротавирусом [37, 38].

Нитазоксанид и норовирус

Норовирус постепенно признается основной причиной вирусного гастроэнтерита у пациентов с ослабленным иммунитетом [39]. В 2011 году оценочное число детских смертей во всем мире в результате норовирусных инфекций составило 71 000 [40].Половинная максимальная ингибирующая концентрация TIZ составляла 0,5 мкг / мл в системе анализа репликона норовируса G1 с использованием клеток HG-23. Кроме того, сообщалось, что NTZ лечит норовирусный гастроэнтерит у 43-летнего пациента, у которого был диагностирован лейкоз и который подвергался химиотерапии в дополнение к трансплантации гемопоэтических стволовых клеток; у пациента наблюдалось улучшение через 24 часа после лечения [13].

Результаты рандомизированного двухэтапного двойного слепого клинического исследования, в котором участвовали 200 субъектов (включая 50 взрослых и 150 детей в возрасте от 2 месяцев до 11 лет) с вирусным гастроэнтеритом, вызванным инфекцией норовирусом или ротавирусом, показали, что способность NTZ к значительному сокращению продолжительности симптомов заболевания по сравнению с плацебо ( p = 0.0295) [41]. Моррис и Моррис сообщили об уменьшении диареи, тошноты и боли в животе после 2 дней терапии NTZ в клиническом исследовании с участием 14 пациентов с диагнозом вирусного гастроэнтерита из-за норовируса [42].

Dang et al. сообщили о синергическом ингибирующем эффекте репликации норовируса человека и полном истощении репликонов из клеток-хозяев после введения комбинированной терапии рибавирином и TIZ. Вкратце, их результаты показали, что TIZ ингибирует репликацию вирусов за счет стимуляции клеточного противовирусного ответа, в частности, за счет экспрессии фактора регуляции интерферона 1.Лечение NTZ отдельно или в комбинации с рибавирином представляет собой многообещающую стратегию борьбы с гастроэнтеритом, вызванным норовирусом, главным образом у пациентов с ослабленным иммунитетом [14].

Нитазоксанид и астровирус

Известно, что астровирус человека вызывает от 2 до 9% случаев острой небактериальной диареи у детей во всем мире. Астровирусные инфекции человека могут быть фатальными, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом, поскольку инфекция может быть связана с некротическим энтероколитом и тяжелой диареей, а также с другими смертельными заболеваниями, такими как респираторные заболевания [43], энцефалит и менингит [44].Несмотря на высокую распространенность астровируса и риск связанных с ним тяжелых заболеваний, в настоящее время не существует вакцины или лекарственной терапии для борьбы с этим вирусом. Hargest et al. недавно сообщили о первых доказательствах того, что NTZ может вызывать in vitro, ингибирование репликации нескольких штаммов астровирусов, а также снижение in vivo выделения вируса и диареи на модели домашней птицы индейки, инфицированной астровирусом [43]. Их результаты показали, что NTZ превосходил рибавирин, фоскарнет и ацикловир, поскольку они не подавляли репликацию астровируса человека даже при повышенных концентрациях (250 мкМ).С другой стороны, NTZ может эффективно ингибировать репликацию вируса пропорционально концентрации с IC 50 1,47 мкМ.

Нитазоксанид и аденовирус

Аденовирусы человека представляют собой двухцепочечные ДНК-вирусы без оболочки с икосаэдрическими капсидами. Инфекция аденовирусом человека обычно приводит к тяжелому опасному для жизни заболеванию, особенно у субъектов с ослабленным иммунитетом. В настоящее время отсутствуют доступные специфические противовирусные препараты против аденовирусных инфекций [6].Garrigos et al. сообщили о клинической эффективности NTZ против аденовирусного энтерита у госпитализированного пациента с ослабленным иммунитетом в возрасте 61 года; авторы обнаружили быстрое выздоровление от диареи и виремии вместе с отрицательным результатом ПЦР через 2 недели после начала терапии NTZ в режиме дозирования 500 мг два раза в день. Интересно, что пациент избавился от диареи через 48 часов лечения. Примечательно, что ограниченная токсичность и вирусная резистентность NTZ, а также небольшое количество лекарственных взаимодействий делают его многообещающим вариантом лечения таких инфекций [15].

Нитазоксанид и парамиксовирус

Парамиксовирусы - это группа вирусов, переносимых по воздуху, которые вызывают некоторые респираторные заболевания. К ним относятся возбудители кори, эпидемического паротита, респираторно-синцитиального вируса, болезни Ньюкасла у домашней птицы и парагриппа у человека. Эти вирусы характеризуются одноцепочечным геномом РНК и полимеразой. Они имеют диаметр оболочки от 150 до 300 нм. Вирусы были зарегистрированы у некоторых видов змей, которые передаются человеку [45].Это очень заразные вирусы, которые вызывают у человека инфекцию, связанную с респираторными симптомами, и передаются через респираторные выделения [46].

Piacentini et al. выявили в своем исследовании антипарамиксовирусный эффект NTZ; они обнаружили, что NTZ останавливает доставку F в плазму, воздействуя на вирус Сендай и агрегат F-белка RSV вирусной клетки. Они также обнаружили, что NTZ действует как неконкурентный блокатор ERp57; считается, что сайт связывания NTZ расположен на границе некаталитического домена ERp57-b / b '[16].

Нитазоксанид и вирус Эбола

Вирус Эбола представляет собой оболочечный вирус с отрицательной одноцепочечной РНК. Вирус Эбола передается человеку через диких животных и может в дальнейшем распространяться от человека к человеку. Инфекция, вызванная вирусом Эбола, определяется как геморрагическая лихорадка Эбола; он показал высокий уровень смертности (от 25 до 90% в предыдущих вспышках) [6]. Ясеноски и его коллеги недавно сообщили, что NTZ может эффективно усиливать врожденный иммунный ответ хозяина и подавлять репликацию вируса Эбола.Сообщаемый механизм действия включает усиление рецептора, индуцируемого ретиноевой кислотой, подобного белку I, а также митохондриального антивирусного сигнального белка. Более того, NTZ стимулирует экспрессию регуляторного фактора 3 интерферона и вызывает транскрипцию антивирусной фосфатазы GADD34, что представляет собой многообещающий подход в качестве терапии предрасположенного к вирусу Эбола заболевания [17].

Нитазоксанид и вирус гепатита С

HCV представляет собой оболочечный одноцепочечный РНК-вирус с положительным смыслом, принадлежащий к семейству Flaviviridae.Вирус может передаваться главным образом через кровь и вызывать острый или хронический гепатит. HCV считается основной причиной рака печени [6]. Активность TIZ против HCV в первую очередь исследовали в генотипе 1a в системе клеточной культуры репликона HCV, выращенной в клетках AVA5, и генотипе 1b в репликоне HCV, реплицированном в клеточных линиях Huh7.5. TIZ IC 50 для генотипа 1a составлял 0,09 мкг / мл, а для генотипа 1b - 0,06 мкг / мл. Сообщалось также о синергизме при сочетании ТИЗ с интерфероном α или 2'С метилцитидином [18].Следует отметить, что HCV не показал снижения чувствительности к TIZ. Более того, при секвенировании вирусного генома не было выявлено мутаций, приводящих к развитию устойчивости. Таким образом, был предложен механизм действия, нацеленный на хозяина [47].

Клинические испытания были проведены для оценки эффективности NTZ против HCV с многообещающими результатами, поскольку пациенты достигли устойчивого вирусологического ответа без прослеживаемой вирусной РНК в сыворотке после терапии NTZ [11, 48]. Несмотря на то, что улучшенные результаты были достигнуты при введении NTZ в сочетании с пегинтерфероном (PegIFN) в качестве двойной терапии хронического гепатита C, разработка была прекращена в результате открытия новых противовирусных соединений прямого действия.Оценка комбинаций NTZ с противовирусными агентами, действующими непосредственно для борьбы с хроническим ВГС, у пациентов, коинфицированных ВИЧ, может быть интересной областью исследований для будущего прогресса.

Нитазоксанид и вирус гепатита В

ВГВ является источником значительного прогрессирующего заболевания печени; По оценкам, в мире с ВГВ живет около двух миллиардов человек, из которых около 360 миллионов человек инфицированы хронически [49]. Корба и др. показали, как NTZ и его метаболит, TIZ, ингибируют ДНК HBV и его коровой антиген.Антигены бывают двух типов, HBeAg и HBsAg, и они ингибируются в приготовленных культурах клеток. Обе молекулы оказались более эффективными, чем другие противовирусные препараты, такие как ламивудин (LMV) и адефовир дипивоксил (ADV), поскольку они проявляли активность против шести мутантов HBV, устойчивых к LMV и ADV [18]. В недавнем исследовании Секиба и другие исследовали ингибирующее действие NTZ не только на ДНК, но и на РНК вируса HBV. Они показали, что NTZ нацелена на взаимодействие с ДНК-связывающим белком 1 (DDB1), специфичным для повреждения HBx, тем самым подавляя экспрессию cccDNA HBV и транскрипцию РНК [50].Недавнее исследование in vitro показало, что NTZ ведет к потере HBsAg, сдерживая ДНК HBV в сыворотке. NTZ демонстрирует оригинальный механизм противовирусных препаратов с ингибированием окислительного фосфорилирования в митохондриях [51]. Кроме того, клинические испытания с применением 500 мг NTZ ежедневно в течение 12 месяцев подряд 12 взрослым пациентам с гепатитом B показали его влияние на HBV. Результаты показали, что у 4 пациентов из 12 был обнаружен HBeAg-положительный результат, а у 8 пациентов - отрицательный результат HBeAg.Это происходило в среднем за 3 месяца. Это ясно показывает терапевтический потенциал NTZ у пациентов с HBV [11].

Нитазоксанид и вирус чикунгуньи

Вирус чикунгуньи представляет собой вирус с одноцепочечной РНК с положительным смыслом. Вирус чикунгунья вызывает заболевание чикунгунья, которое проявляется лихорадкой, конъюнктивитом, артритом и тяжелой артралгией. Инфекция передается самками комаров, инфицированными вирусом. В 2005 г. вспышка болезни произошла во Франции, а затем инфекция распространилась на многие другие страны, приведя к сотням смертей и более миллиона инфицированных [52].Вирус чикунгунья определен как возбудитель группы риска-3 [53]. Эта группа патогенов может проникать в клетки посредством рецептор-зависимого эндоцитоза. Во время входа происходят конформационные изменения гликопротеинов E1 и E2 вирусной оболочки [54], которые приводят к образованию тримеров с последующим слиянием между вирусной и эндосомной мембранами [55] и высвобождением вирусного генома в цитозоль. В настоящее время не существует эффективных одобренных противовирусных препаратов для лечения инфекции чикунгунья [6]. Недавнее исследование показало, что NTZ может ограничивать как проникновение, так и высвобождение вируса, а также передачу от клетки к клетке.Кроме того, препарат проявлял широкую противовирусную активность против двух клинических изолятов вируса чикунгунья в дополнение к двум типам альфавирусов, а именно вирусу Синдбис и вирусу леса Семлики [19].

Нитазоксанид и вирус краснухи

Вирус краснухи характеризуется как одноцепочечный геном с положительной РНК. Он маленький и обволакивающий [56]. Болезнь, вызываемая вирусом краснухи, заразна, характеризуется высыпаниями, и ее можно предотвратить с помощью вакцин. Это вызывает стойкое инфицирование плода во время беременности, что приводит к врожденным дефектам.NTZ оказывает значительное влияние на вирус краснухи, ингибируя его репликацию в первичной культуре эндотелиальных клеток пупочной вены человека в зависимости от концентрации с IC 50 0,35 мкг / мл [20].

Нитазоксанид и вирус осповакцины

Вирус осповакцины используется в качестве вектора для доставки других антигенов [57]. Тем не менее, вирус способен вызывать тяжелое заболевание у субъектов с ослабленным иммунитетом, а также у пациентов, страдающих экземой.Hickson et al. исследовали потенциальный противовирусный эффект NTZ против вируса коровьей оспы. Их исследование продемонстрировало, что NTZ может ингибировать репликацию вируса осповакцины с IC 50 2 мкМ [21].

Нитазоксанид и вирус иммунодефицита человека

ВИЧ-инфекция губительна для людей как минимум 30 лет. С тех пор ВИЧ заразил 60 миллионов человек и стал причиной более 25 миллионов смертей. Доступна высокоактивная антиретровирусная терапия и эффективная стратегия лечения пациентов с приобретенным иммунодефицитом; эта стратегия обычно включает комбинацию трех препаратов из двух или более классов.Например, два препарата, принадлежащих к классу нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы, комбинируются с третьим лекарственным средством из этих классов: ингибиторы интегразы, ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы или ингибиторы протеаз. Из-за высокой стоимости доступных в настоящее время лекарств и потенциальных серьезных побочных эффектов необходима разработка новых противовирусных препаратов [58]. Tan et al. обнаружили, что как NTZ, так и метаболит TIZ могут эффективно ингибировать репликацию ВИЧ (IC 50 было около 0.5 мкг / мл). Кроме того, NTZ проявлял синергетический противовирусный эффект в сочетании с некоторыми препаратами против ВИЧ, включая ингибиторы интегразы (ралтегравир), нуклеозидную и ненуклеозидную обратную транскрипцию, а именно азидотимидин и эфавиренц, соответственно [22].

Нитазоксанид и цитомегаловирус человека

Более 60% населения во всем мире восприимчиво к цитомегаловирусным инфекциям человека. В группу высокого риска входят пациенты с приобретенным иммунодефицитом и пациенты с ослабленным иммунитетом, поскольку цитомегаловирусные инфекции могут вызывать тяжелые и опасные для жизни осложнения [59].Mercorelli et al. недавно сообщили, что NTZ специфически воздействует на функции вирусного фактора транскрипции IE2, таким образом блокируя репликацию вируса с IC 50 , равным 3,2 мкМ. Эти данные свидетельствуют о многообещающем противовирусном эффекте NTZ, необходимом для лечения врожденных инфекций и развития штаммов, которые могут противостоять существующим соединениям анти-ДНК-полимеразы [23].

Нитазоксанид и другие вирусы

TIZ может эффективно ингибировать репликацию как денге-2, так и желтой лихорадки в клеточных линиях Vero с половинными максимальными ингибирующими концентрациями, равными 0.1 и 0,06 мкг / мл соответственно [24]. Другое исследование показало активность NTZ в ингибировании репликации вируса японского энцефалита в клетках BHK-21 с IC 50 0,12 мкг / мл; In vivo активность NTZ также изучалась на мышах, инфицированных смертельной дозой вируса японского энцефалита, и результаты показали, что инфицированные мыши могут выжить после того, как они получили NTZ перорально в течение 25 дней. С другой стороны, все нелеченые мыши погибли на девятый день эксперимента.Выживаемость мышей была пропорциональна введенным дозам, поскольку наблюдаемая выживаемость составляла 30%, 70% и 90% для доз NTZ 50, 75 и 100 мг / кг / день соответственно [25].

Нитазоксанид и провоспалительные медиаторы

Помимо противовирусной активности NTZ, способность NTZ ингибировать выработку провоспалительных цитокинов, включая TNFα, интерлейкин (IL) -2, IL-4, I-5, IL-6, Сообщалось также о IL-8 и IL-10 в PBMC (мононуклеарных клетках периферической крови) [60]. Другие исследования подтверждают эти результаты, сообщающие о том, что пероральная доза NTZ 100 мг / кг при введении мышам за 2 часа до 1 мл 4% тиогликоллата, вводимого внутрибрюшинно, снижает уровни ИЛ-6 в плазме на 90% по сравнению с носителем [61].Полученные данные свидетельствуют о том, что NTZ может улучшить цитокиновый шторм, который может возникнуть у пациентов с тяжелой формой COVID-19 [62], путем подавления перепроизводства провоспалительных цитокинов.

Нитазоксанид и бронходилатация

В недавнем исследовании Майнер и его коллеги сообщили, что NTZ является мощным антагонистом канала Cl -, активированного Ca +2 (TMEM16A), который вызывает блокаду сокращения и деполяризации гладких дыхательных путей. мышцы. Они оценили эффективность NTZ в суровых условиях с использованием сильно сокращенных дыхательных путей или дыхательных путей, которые были подвергнуты цитокиновому коктейлю, и результаты показали, что препарат может неожиданно расширять бронходилатирование дыхательных путей.Их результаты предполагают потенциальную пользу использования NTZ у пациентов с COVID-19, поскольку это может помочь облегчить симптомы, связанные с заболеванием [63].

Пилотные проекты

Пилотные проекты

Определение новых противовирусных мишеней для подавления репликации флавивирусов с помощью CRISPR.

Доктор Дана Ванландингем, Колледж ветеринарной медицины

Флавивирусы, передаваемые комарами, вызывают значительную заболеваемость и смертность во многих странах мира, включая вирусы денге (DEN), японского энцефалита (JE), Западного Нила (WN), желтой лихорадки (YF) и Zika (ZIK).Хотя существуют лицензированные вакцины против DEN, JE и YF, лицензированных противовирусных препаратов от какой-либо флавивирусной инфекции нет, что представляет собой серьезный пробел в лечении флавивирусных инфекций. Традиционные подходы к разработке терапевтических средств с использованием ингибиторов репликации вируса не привели к эффективному лечению, поскольку варианты лечения показали неприемлемую токсичность на животных моделях и / или клинических испытаниях. Это предложение направлено на использование технологий редактирования генома Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) -Cas9 для определения факторов хозяина, необходимых для внутриклеточного жизненного цикла вируса японского энцефалита (JEV).Центральная гипотеза состоит в том, что новые и известные факторы хозяина способствуют проникновению и репликации JEV, которые оба влияют на выживаемость клеток. Предлагаемое исследование будет использовать JEV в качестве модели для энцефалитных флавивирусов, чтобы идентифицировать гены-кандидаты-хозяева и пути, которые участвуют в различных стадиях вирусной инфекции.

Эти новые факторы хозяина могут быть использованы для новых фармакологических и иммуномодулирующих вмешательств против флавивирусных инфекций. Обоснование этого предложения состоит в том, что путем систематического скрининга факторов хозяина, основанного на выживаемости клеток, будут идентифицированы гены хозяина, которые участвуют в различных стадиях процесса флавивирусной инфекции, и это понимание может позволить разработать противовирусные методы лечения.

Конечная цель исследования - создать платформу для разработки терапевтических средств против появляющихся РНК-вирусов. Четкое понимание взаимодействия вируса с хозяином обеспечит цели для разработки фармакологических вмешательств против флавивирусных инфекций. Мутагенез связывающих мотивов в вирусных белках, которые способствуют взаимодействиям вирус-хозяин, обнаруженный в этом исследовании, также может быть использован в качестве стратегии не только для разработки лекарств, но и для будущих вакцин.В совокупности результаты этого проекта выполнят миссию Национальных институтов здравоохранения.

Молекулярные механизмы заражения клещевым возбудителем в клещевом векторе.

Доктор Кэтрин Рейф, Колледж ветеринарной медицины

Клещевые болезни являются наиболее распространенными трансмиссивными болезнями человека в Соединенных Штатах Америки, где ежегодно регистрируется около 600 000 случаев, что примерно на 200% больше, чем в предыдущие два десятилетия. Одна из стратегий снижения заболеваемости клещевыми заболеваниями - предотвратить передачу клещами патогенов восприимчивым хозяевам, включая людей.

Клещевые патогены поддерживаются в природе за счет циклической смены позвоночных-хозяев и клещей-переносчиков, причем клещ часто служит источником инфекции в окружающей среде. Находясь в клещевом векторе, большинство внутриклеточных клещевых бактериальных патогенов колонизируют как эпителий средней кишки, так и ацинусы слюнных желез, ткани, необходимые для последующей передачи патогенов. Поскольку эти ткани необходимы для внутриклеточной передачи клещевых бактериальных патогенов, возможно, что эти патогены имеют общие консервативные основные механизмы для выживания и репликации в этих общих клеточных нишах внутри клещевого вектора.Выявление и вмешательство в общие механизмы, с помощью которых эти патогены проникают или получают доступ к клеточным ресурсам в этих клетках клещей, может стать мишенью для новых широко действующих стратегий блокирования передачи против внутриклеточных бактериальных патогенов, переносимых клещами.

Однако существует значительный пробел в знаниях о том, как клещевые патогены проникают в клетки клещей и колонизируют их. Таким образом, в этом пилотном проекте в качестве модели для идентификации генов патогенов, рецепторов клещевых клеток и стратегий проникновения в клетки, важных для F.novicida и колонизация клещевых клеток. Наличие надежной библиотеки транспозонов для этого патогена позволяет беспрецедентно оценить функциональные последствия почти каждого гена, кодирующего белок в геноме этого патогена, - ресурс, недоступный для других внутриклеточных бактериальных патогенов, переносимых клещами.

Гипотеза состоит в том, что F. novicida использует предпочтительные и отдельные гены, рецепторы и механизмы проникновения для заражения и колонизации клещевых клеток; и что прерывание этих генов / рецепторов / механизмов проникновения предотвратит инфицирование клещей F.novicida. Что касается гипотезы, то конкретными целями этого исследования являются: i) идентификация генов F. novicida и путей, важных для колонизации векторных клеток клещей; и, ii) определить первичные и альтернативные механизмы инвазии проникновения F. novicida в клетки клеща. Выявление внутриклеточных детерминант передаваемых клещами бактериальных возбудителей инфекции в клещевом переносчике поможет выявить новые цели для вмешательств по блокированию передачи, направленных на общее смягчение передачи клещевых болезней.

Создание рационально разработанной универсальной платформы обратной генетики ротавирусов.

Доктор Рэйчел Палински, Колледж ветеринарной медицины

Несмотря на внедрение ротавирусных (РВ) вакцин несколько десятилетий назад, ротавирус ежегодно приписывают более 200000 человеческих смертей, особенно среди детей до 5 лет. К видам, восприимчивым к РВ-инфекции, относятся люди, телята, свиньи, овцы, жеребята, собаки, кошки и т. Д. олени, кролики, мыши, куры и индейки. Клинические признаки, включая диарею и гастроэнтерит, неотличимы от других кишечных патогенов и в основном контролируются поддерживающим лечением.Инфекции RV ежегодно вызывают значительные экономические последствия, особенно в животноводстве и свиноводстве.

Доступны эффективные вакцины против ротавируса A (RVA), однако широко распространенная и быстро развивающаяся природа ротавирусов привела к более частым вспышкам новых или необычных штаммов RV. Новые вспышки включают случаи межвидовой передачи от традиционных линий крупного рогатого скота, свиней и птиц. Несмотря на то, что успешная изоляция RV затруднена, на стадии разработки находится несколько вакцин-кандидатов, которые охватывали бы виды, не относящиеся к RVA.

Целью данного предложения является разработка рационально спроектированной и универсальной системы обратной генетики ротавируса для улучшения неэффективных в настоящее время методов изоляции. Полученный в результате конвейер будет использован для создания инфекционных клонов ротавирусов B и C для изучения молекулярных механизмов, патогенеза и вакцин. В этом предложении используется ротавирус свиньи A (PRVA) для подтверждения концепции исследования из-за наличия образцов, влияния на промышленность и потенциально зоонозного характера.

Конкретная цель 1 - разработать методику прогнозирования для выявления рецепторов связывания, сайтов нейтрализации и популяционных паттернов, влияющих на репликацию in vitro.С этой целью будет создана библиотека мотивов PRVA, которые могут влиять на правильное взаимодействие с клеткой-хозяином, тем самым предотвращая инфицирование, репликацию и изоляцию. PI будет использовать банк образцов ротавируса, доступный в Государственной ветеринарной диагностической лаборатории Канзаса, для характеристики существующих изолятов RVA / RVB / RVC в полевых условиях, моделирования белковых полиморфизмов во влиянии последовательности на структуру, выбора типа клеток для попытки выделения и их использования. изоляты для оценки изменений вирусной популяции и хозяина.

В Конкретной цели 2 будут выбраны текущие последовательности PRVA для разработки системы обратной генетики для создания инфекционных клонов ротавируса. Каждый вирусный сегмент будет кодироваться на отдельной плазмиде с промотором или терминатором T7, трансфицироваться в модифицированные клетки BHK и совместно культивироваться с предполагаемыми компетентными клетками (идентифицированными в конкретной цели 1). Результаты этого исследования будут пытаться заполнить ключевые пробелы в знаниях, связанных с в настоящее время неэффективными методами изоляции, тем самым обеспечивая платформу для оценки вирусного патогенеза, разработки вакцины и эволюционных механизмов.

Ротавирус ~ ViralZone

ВИРИОН

Схемы созревания вириона

Безоболочечный икосаэдрический вирион без турели со структурой тройного капсида, диаметром около 80 нм. Промежуточный капсид имеет икосаэдрическую симметрию Т = 13, внутренний капсид - икосаэдрическую симметрию Т = 2 *.

GENOME

Сегментированный линейный геном дцРНК. Содержит 11 сегментов, кодирующих 12 белков. Размер сегментов варьируется от 667 до 3302nt (SiRV-A / SA11).Общий размер генома составляет 18 550 п.н. (SiRV-A / SA11). Вирусные мРНК содержат 5'-метилированные кэп-структуры, но лишены полиА-хвоста. Вместо этого мРНК ротавируса имеют на своем 3'-конце консенсусную последовательность (UGACC), которая консервативна во всех 11 вирусных генах.
Совместное инфицирование клеток разными штаммами ротавирусов, принадлежащих к одной и той же серогруппе A, B или C, подвергается смешению сегментов генома (генетическая реассортация).

ВЫРАЖЕНИЕ ГЕНА

Геном дцРНК никогда не бывает полностью без покрытия, чтобы предотвратить активацию антивирусного состояния клеткой в ​​ответ на дцРНК.Вирусная полимераза VP1 синтезирует кэпированную мРНК из каждого сегмента дцРНК. Эта кэпированная мРНК перемещается в цитоплазму клетки, где она транслируется. NSP3 может действовать как усилитель трансляции для экспрессии вирусных генов.
Большинство сегментов обычно моноцистронные. Однако некоторые сегменты кодируют более одного белка:
Сегмент 11 ротавирусов A (но не ротавирусов C) кодирует второй белок NSP6 вне кадра с помощью сканирования с утечкой. Ротавирусы C NSP3, по-видимому, продуцируют два белка путем пропуска рибосом.Сегмент 5 ротавирусов B содержит по крайней мере две потенциальных ORF. Сегмент 5 нового вируса диареи взрослых, ADRV-N (не группы A, B, C), может быть расщеплен на два продукта.

РЕПЛИКАЦИЯ

ЦИТОПЛАЗМИЧЕСКИЙ

  1. Присоединение вирусного белка VP4 к рецепторам хозяина опосредует клатрин-опосредованный эндоцитоз вируса в клетку-хозяин.
  2. Частицы частично не покрыты оболочкой в ​​эндолизосомах (потеря самого внешнего слоя VP4-VP7) и проникают в цитоплазму через проницаемость эндосомальной мембраны хозяина.
  3. Ранняя транскрипция генома дцРНК вирусной полимеразой происходит внутри этих теперь двухслойных частиц (DLP), так что дцРНК никогда не попадает в цитоплазму. Возникающие (+) РНК вытесняются в цитоплазму и служат матрицей для синтеза вирусных белков.
  4. ядер потомства с репликазной активностью производятся на фабриках цитоплазматических вирусов (также называемых вироплазмами). Это подразумевает синтез комплементарной (-) РНК и начальные этапы морфогенеза вируса.
  5. Поздняя транскрипция происходит в этих ядрах потомства.
  6. На периферии вирусных фабрик эти ядра покрыты VP6, образуя незрелые DLP, которые зарождаются через мембрану эндоплазматического ретикулума, приобретая временную липидную мембрану, которая модифицируется резидентными вирусными гликопротеинами ER NSP4 и VP7; эти частицы в оболочке также содержат VP4.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *